專利名稱：虎尾草提取物藥物制劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到一種由天然植物藥材中提取的有效藥用部位制成的藥物的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
虎尾草提取物藥物制劑為報春花科虎尾草Lysimachia barystachys Bung.或矮桃Lysimachia clethroides Duby.In D.C.的總黃酮提取物。它對治療中風(fēng)及中風(fēng)引起的偏癱、四肢麻木、口眼歪斜、言語不利等癥有較好的療效，虎尾草經(jīng)植化分析，主要含有黃酮類化合物，藥效學(xué)研究表明，該總黃酮提取物對離體的牛腦動脈條具有顯著的舒張作用，顯著增加家兔頸動脈及腦血流量，對花生四烯酸抗血栓所致急性肺栓塞、呼吸窘迫和死亡有明顯保護(hù)作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的旨在提供一種以虎尾草提取物為有效藥用成分制備的治療腦中風(fēng)疾病的虎尾草提取物藥物制劑的質(zhì)量控制方法。
本發(fā)明所述的治療腦中風(fēng)疾病的藥物制劑由以下重量百分比的成分組成虎尾草提取物20-60％和余量的藥用輔料。
本發(fā)明所用的原料藥材為報春花科虎尾草Lysimachia barystachys Bung.或矮桃Lysimachia clethroides Duby.In D.C.的帶根全草，所述的虎尾草提取物為總黃酮百分含量為10％-80％的虎尾草醇提取物或水提取物。所述的藥用輔料是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥用輔料。該藥物為口服制劑，其使用量可根據(jù)用藥途徑、患者的年齡、體重、所治療的疾病的類型和嚴(yán)重程度等變化，其日服劑量可以是20～120mg/人·天。
本發(fā)明所述藥物制劑的制備方法由以下步驟組成一、取虎尾草藥材清潔后進(jìn)行粗粉碎；二、加入4-12倍量的溶劑熱回流提取或煮提，所述溶劑為10-95％的乙醇或水，回流1-3小時，合并提取液回收溶劑；
三、回收溶劑后的浸膏加入藥材量的1-4倍量的水，煮沸后冷至室溫，用膜過濾，濾液按藥材量的1-4倍上大孔吸附樹脂柱，依次用1-20％乙醇溶液、30-100％乙醇溶液洗脫；四、洗脫液回收乙醇后濃縮至比重為60℃時1.30以上后，40℃-90℃真空干燥，粉碎，過篩，即得浸膏粉；五、將浸膏粉與輔料混勻后，制成藥物制劑。
本發(fā)明所述的虎尾草提取物藥物制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于(一)、用虎尾草對照藥材作為對照藥材、金絲桃苷、蘆丁作為對照品來鑒別虎尾草提取物；(二)、檢測虎尾草提取物中大孔吸附樹脂中有機(jī)溶劑殘留物；(三)、用蘆丁作為對照品來測定虎尾草提取物藥物制劑中總黃酮的含量；(四)、用虎尾草提取物藥物制劑中金絲桃苷的含量控制其質(zhì)量。
本發(fā)明所述的更為具體的質(zhì)量控制方法由以下步驟組成(一)、虎尾草鑒別稱取虎尾草對照藥材粗粉0.2-1.0g，加甲醇10-20ml，超聲處理10-20分鐘，濾過，濾液水浴揮去甲醇，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為對照藥材溶液；稱取金絲桃苷、蘆丁對照品各1mg，分別溶于甲醇2ml中，作為對照品溶液；另稱取膠囊內(nèi)容物6mg，加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；照薄層色譜法，分別取供試品溶液、對照品和對照藥材溶液各0.5-1.0ul，點于同一聚酰胺薄膜上，以乙醇-丙酮-水1∶1∶2為展開劑，展開，取出，涼干，噴以1％AlCl3乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點清晰，置紫外燈下檢視，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的黃綠色熒光斑點；(二)、大孔吸附樹脂有機(jī)溶劑殘留物檢測氣相色譜，DB-624石英毛細(xì)管柱，N2為載氣，流速為2.5ml/分鐘；進(jìn)樣口溫度220℃，不分流；檢測器為氫火焰離子檢測器，檢測溫度為250℃，程序升溫柱溫40℃，以14℃/分鐘升溫至200℃保持1分鐘；(三)、總黃酮含量測定對照品溶液的制備精密稱取120℃干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品50mg，置于50ml容量瓶中，加甲醇適量，微熱使其溶解，放冷后用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取20ml，置100ml容量瓶中，用水稀釋到刻度，搖勻，即得；標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0ml置于25ml容量瓶中，各加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻后放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，再放6分鐘，加4％氫氧化鈉10ml，分別加水稀釋至刻度，搖勻，放置15-20分鐘，照分光光度法，用對照品溶液0.0ml樣品作空白，在500nm處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；供試品溶液的制備取裝量差異項下的內(nèi)容物40-150mg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇15ml，稱定重量，充分振搖后，超聲處理15分鐘，冷至室溫后，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；含量測定精密吸取供試品溶液0.5-2ml于25ml容量瓶中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法，自“加5％亞硝酸鈉溶液1ml”起，依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線讀出供試品溶液中蘆丁含量，計算，即得總黃酮含量；(四)、金絲桃苷的含量測定高效液相色譜，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑流動相為乙腈 14體積四氫呋喃 2體積0.1％磷酸水溶液 84體積檢測波長為350nm理論塔板數(shù)按金絲桃苷吸收峰計算應(yīng)不低于3000。
本發(fā)明所述藥物制劑的毒理學(xué)研究毒理學(xué)研究表明，經(jīng)口給予虎尾草提取物的最大耐受劑量分別為大鼠＞7.5g/kg、小鼠＞12.5g/kg.Beale狗按105、210、420mg/kg劑量口服，大鼠按0.35、0.70、1.40g/kg灌胃，連續(xù)6個月，血液學(xué)及生化指標(biāo)未見異常，病理學(xué)檢驗也未見異常，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗，與空白組比較無顯著性差異。
本發(fā)明所述藥物制劑的藥效學(xué)研究1.虎尾草提取物對大鼠局灶性腦缺血的影響用電凝法阻斷大鼠腦中動脈，造成局灶性腦缺血模型，觀察虎尾草提取物對局灶性腦缺血的治療作用。結(jié)果表明，與模型組比較，虎尾草提取物組大鼠十二指腸給藥后梗塞灶明顯縮小，腦梗塞后動物的神經(jīng)行為障礙明顯減輕，血漿ET含量明顯降低。表明虎尾草提取物對大鼠局灶性腦缺血有明顯的治療作用。
2.虎尾草提取物對麻醉犬腦血流量的影響以頸內(nèi)動脈血流量為主要觀測指標(biāo)，觀察虎尾草提取物對動物腦血流量的影響。實驗結(jié)果表明，虎尾草提取物可明顯增加麻醉犬腦血流量(CBF)，降低腦血管阻力(CVR)；對動脈血壓(SP、DP、MAP)、心率(HR)、心電圖(ECG-II)無明顯影響。
3.虎尾草提取物對大鼠腦缺血再灌注損傷的影響用大鼠腦缺血再灌注損傷模型，觀察虎尾草提取物對大鼠腦含水量及腦組織SOD活力、MDA含量的影響。結(jié)果表明，缺血再灌注后腦含水量明顯升高，腦組織SOD活力明顯降低、MDA含量升高，造成腦組織損傷，通透性增強(qiáng)。十二指腸給予虎尾草提取物后，腦含水量明顯降低，組織SOD活力明顯增強(qiáng)、MDA含量明顯降低，與模型組比較差異顯著(P＜0.05)。表明虎尾草提取物對腦缺血再灌注損傷有保護(hù)作用。
4.虎尾草提取物對家兔血小板聚集的影響采用Born氏比濁法，觀察虎尾草提取物對家兔血小板聚集的影響。試驗結(jié)果顯示，家兔連續(xù)7天灌胃給藥，虎尾草提取物明顯降低二磷酸腺苷(ADP)、花生四烯酸(AA)及血小板活化因子(PAF)誘導(dǎo)的家兔血小板聚集率(P＜0.05-0.001)。表明虎尾草提取物具有明顯抑制血小板聚集的作用。
5.虎尾草提取物對大鼠體外血栓形成及血液粘度的影響試驗觀察虎尾草提取物對大鼠體外血栓形成及血液粘度的影響。結(jié)果表明大鼠連續(xù)7天灌胃給藥，虎尾草提取物顯著縮短血栓長度((P＜0.01∽0.001)、減輕血栓濕重和干重(P＜0.01∽0.001)；降低切變率100S-1、30S-1、5S-1下的全血粘度(P＜0.05∽0.001)。表明虎尾草提取物具有抑制血栓形成、降低血液粘度的作用。
6.虎尾草提取物對大鼠軟腦膜微循環(huán)的影響通過注射15％高分子右旋糖酐造成大鼠軟腦膜微循環(huán)障礙，觀察虎尾草提取物十二指腸給藥對大鼠微循環(huán)障礙的影響。結(jié)果表明，虎尾草提取物在所觀察10、20、30min的時段內(nèi)均可明顯增加血液流速，改善血液流態(tài)，與模型組比較均有顯著性差異。表明虎尾草提取物具有改善大鼠軟腦膜微循環(huán)障礙的作用。
本發(fā)明所述藥物制劑的一般藥理學(xué)研究1、小鼠經(jīng)口分別給予虎尾草提取物960、480、240mg/kg劑量，對小鼠的精神神經(jīng)系統(tǒng)無明顯影響，與蒸餾水對照組相似(P＞0.05)，其一般行為，瞳孔、姿勢、步態(tài)、流誕、肌顫、自主活動數(shù)及各項觀察指標(biāo)均無任何明顯影響；與閾下催眠劑量戊巴比妥鈉也無協(xié)同作用，其平均入睡時間和睡眠時間與蒸餾水對照組相同(P＞0.05)。
2、貓分別經(jīng)口給予虎尾草提取物288、144、72mg/kg劑量，對貓的心血管及呼吸系統(tǒng)無明顯影響，其平均動脈壓、呼吸頻率、呼吸幅度及心電圖的心率、P波、R波、T波、QRS波群、S-T位移、P-R間期、Q-T間期等各項指標(biāo)均與蒸餾水對照組相似(P＞0.05)。
本發(fā)明所述的虎尾草提取物藥物制劑可以是由虎尾草提取物制成的口服制劑如片劑、口服液、顆粒劑以及膠囊劑等，本方法控制虎尾草提取物藥物制劑質(zhì)量具有專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，操作方便，可較好地用于控制虎尾草提取物藥物制劑的質(zhì)量，從而保證了每批藥品療效的一致性。
具體實施例方式
實施例虎尾草黃酮膠囊的質(zhì)量控制方法(一)、虎尾草鑒別稱取虎尾草對照藥材粗粉0.5g，加甲醇20ml，超聲處理10分鐘，濾過，濾液水浴揮去甲醇，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為對照藥材溶液；稱取金絲桃苷、蘆丁對照品各1mg，分別溶于甲醇2ml中，作為對照品溶液；另稱取膠囊內(nèi)容物6mg，加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VIB)，分別取供試品溶液、對照品和對照藥材溶液各0.5ul，點于同一聚酰胺薄膜上，以乙醇-丙酮-水(1∶1∶2)為展開劑，展開，取出，涼干，噴以1％AlCl3乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點清晰，置紫外燈(365nm)下檢視，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的黃綠色熒光斑點。
(二)、大孔吸附樹脂有機(jī)溶劑殘留物苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙苯、二乙烯苯、萘、癸烷、十一烷、十二烷檢測。
按氣相色譜法《中國藥典》二部附錄VE測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱DB-624石英毛細(xì)管柱30m×0.32mm×1.8μm，載氣為N2，流速為2.5ml/分鐘；進(jìn)樣口溫度220℃，不分流；檢測器為FID(氫火焰離子檢測器)，檢測溫度為250℃，氫氣30ml/分鐘，空氣300ml/分鐘，尾吹30ml/分鐘；程序升溫柱溫40℃，以14℃/分鐘升溫至200℃保持1分鐘。
對照品溶液的制備精密稱取苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙苯、二乙烯苯、萘、癸烷、十一烷、十二烷對照品適量，加色譜純二氯甲烷制成苯2ppm、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙苯、二乙烯苯、萘、癸烷、十一烷、十二烷10ppm的混合溶液，即得。
供試品溶液的制備精密稱取1.0g樣品，加入5ml色譜純二氯甲烷，稱重，超聲提取10分鐘，再稱重，補(bǔ)足重量減失部分，濾過，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各1μl，注入氣相色譜儀，測定，即得。
本品每克膠囊內(nèi)容物中含苯不得大于2ppm，甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙苯、二乙烯苯、萘、癸烷、十一烷、十二烷不得大于20ppm。
(三)、總黃酮含量測定對照品溶液的制備精密稱取120℃干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品50mg，置于50ml容量瓶中，加甲醇適量，微熱使其溶解，放冷后用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取20ml，置100ml容量瓶中，用水稀釋到刻度，搖勻，即得(每1ml含蘆丁0.2mg)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0ml置于25ml容量瓶中，各加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻后放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，再放6分鐘，加4％氫氧化鈉10ml，分別加水稀釋至刻度，搖勻，放置15-20分鐘，照分光光度法(中國藥典2000版一部附錄V)，用對照品溶液0.0ml樣品作空白，在500nm處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備取裝量差異項下的內(nèi)容物60mg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇15ml，稱定重量，充分振搖后，超聲處理15分鐘，冷至室溫后，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
含量測定精密吸取供試品溶液2ml于25ml容量瓶中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法，自“加5％亞硝酸鈉溶液1ml”起，依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線讀出供試品溶液中蘆丁含量，計算，即得總黃酮含量。
本品每克膠囊內(nèi)容物中含總黃酮以蘆丁(C27H30O16)計每粒不得少于160.0mg。
(四)、金絲桃苷的含量測定照高效液相色譜法(《中國藥典》一部附錄VID)測定。
色譜條件與系統(tǒng)性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-四氫呋喃-0.1％磷酸溶液(14∶2∶84)，檢測波長為350nm，理論塔板數(shù)按金絲桃苷吸收峰計算應(yīng)不低于3000。
對照品溶液的制備精密稱取金絲桃苷10mg，置于50ml容量瓶中，加甲醇適量，微熱使其溶解，放冷后用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml含金絲桃苷0.2mg)。
供試品溶液的制備取本品70mg，精密稱定，用少量甲醇溶解后移至25ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。
測定法精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得。
本品每克膠囊內(nèi)容物中含金絲桃苷(C21H21O12)不得少于9.0mg。
權(quán)利要求
1.一種虎尾草提取物藥物制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于由以下步驟組成(一)、用虎尾草對照藥材作為對照藥材、金絲桃苷、蘆丁作為對照品來鑒別虎尾草提取物；(二)、檢測虎尾草提取物中大孔吸附樹脂中有機(jī)溶劑殘留物；(三)、用蘆丁作為對照品來測定虎尾草提取物藥物制劑中總黃酮的含量；(四)、用虎尾草提取物藥物制劑中金絲桃苷的含量控制其質(zhì)量。
2.如權(quán)利要求1所述的虎尾草提取物藥物制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于由以下步驟組成(一)、虎尾草鑒別稱取虎尾草對照藥材粗粉0.2-1.0g，加甲醇10-20ml，超聲處理10-20分鐘，濾過，濾液水浴揮去甲醇，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為對照藥材溶液；稱取金絲桃苷、蘆丁對照品各1mg，分別溶于甲醇2ml中，作為對照品溶液；另稱取膠囊內(nèi)容物6mg，加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；照薄層色譜法，分別取供試品溶液、對照品和對照藥材溶液各0.5-1.0ul，點于同一聚酰胺薄膜上，以乙醇-丙酮-水1∶1∶2為展開劑，展開，取出，涼干，噴以1％AlCl3乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點清晰，置紫外燈下檢視，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的黃綠色熒光斑點；(二)、大孔吸附樹脂有機(jī)溶劑殘留物檢測氣相色譜，DB-624石英毛細(xì)管柱，N2為載氣，流速為2.5ml/分鐘；進(jìn)樣口溫度220℃，不分流；檢測器為氫火焰離子檢測器，檢測溫度為250℃，程序升溫柱溫40℃，以14℃/分鐘升溫至200℃保持1分鐘；(三)、總黃酮含量測定對照品溶液的制備精密稱取120℃干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品50mg，置于50ml容量瓶中，加甲醇適量，微熱使其溶解，放冷后用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取20ml，置100ml容量瓶中，用水稀釋到刻度，搖勻，即得；標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0ml置于25ml容量瓶中，各加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻后放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，再放6分鐘，加4％氫氧化鈉10ml，分別加水稀釋至刻度，搖勻，放置15-20分鐘，照分光光度法，用對照品溶液0.0ml樣品作空白，在500nm處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；供試品溶液的制備取裝量差異項下的內(nèi)容物40-150mg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇15ml，稱定重量，充分振搖后，超聲處理15分鐘，冷至室溫后，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；含量測定精密吸取供試品溶液0.5-2ml于25ml容量瓶中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法，自“加5％亞硝酸鈉溶液1ml”起，依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線讀出供試品溶液中蘆丁含量，計算，即得總黃酮含量；(四)、金絲桃苷的含量測定高效液相色譜，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑流動相為乙腈 14體積四氫呋喃 2體積0.1％磷酸水溶液 84體積檢測波長為350nm理論塔板數(shù)按金絲桃苷吸收峰計算應(yīng)不低于3000。
全文摘要
本發(fā)明涉及到一種由天然植物藥材中提取的有效藥用部位制成的藥物的質(zhì)量控制方法。本質(zhì)量控制方法，由以下步驟組成(一)用虎尾草對照藥材作為對照藥材、金絲桃苷、蘆丁作為對照品來鑒別虎尾草提取物；(二)檢測虎尾草提取物中大孔吸附樹脂中有機(jī)溶劑殘留物；(三)用蘆丁作為對照品來測定虎尾草提取物藥物制劑中總黃酮的含量；(四)用虎尾草提取物藥物制劑中金絲桃苷的含量控制其質(zhì)量。本方法控制虎尾草提取物藥物制劑質(zhì)量具有專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，操作方便，可較好地用于控制虎尾草提取物藥物制劑的質(zhì)量，從而保證了每批藥品療效的一致性。
文檔編號G01N33/15GK1768770SQ20051001107
公開日2006年5月10日 申請日期2005年10月21日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月21日
發(fā)明者萬近福, 傅悅, 高崇昆 申請人:云南白藥集團(tuán)股份有限公司