專利名稱：鋸葉棕果提取物中β－谷甾醇的定性及其定量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥品用的植物提取物的定性和定量檢測方法，特別是一種鋸葉棕果提取物中β-谷甾醇的定性及其定量檢測方法。
背景技術(shù)：
在現(xiàn)有技術(shù)中，鋸葉棕果提取物中β-谷甾醇的定性及其定量檢測方法是用毛細(xì)管氣相色譜儀(CGC)來進(jìn)行的，該方法所使用的儀器較為昂貴，并且操作復(fù)雜繁瑣，操作的精度要求高，因此不適合中小型企業(yè)采用，影響了中小型企業(yè)的生產(chǎn)發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種改進(jìn)的鋸葉棕果提取物中β-谷甾醇的定性及其定量檢測方法，該方法所需設(shè)備簡單、操作方便、分離速度快、靈敏度高，而且樣品的預(yù)處理比較簡單，適合中小型企業(yè)采用。
本發(fā)明提供的鋸葉棕果提取物中β-谷甾醇的定性及其定量檢測方法包括下述順序的步驟(1)取鋸葉棕果提取物100～300毫克，精密稱量，加入甲醇制氫氧化鉀溶液20～40毫升，置水浴中回流2～4小時(shí)，取出后放冷；(2)將溶液轉(zhuǎn)移至125毫升的分液漏斗中，用水2040毫升洗滌回流瓶合并洗液，再用乙醚提取2～5次，每次20～40毫升；(3)將合并提取液用水洗2～4次，每次20～40毫升，再用乙醚提取蒸干，其殘?jiān)哟姿嵋阴ナ怪芙?，然后移?毫升的量瓶中加醋酸乙酯至刻度作為供試品溶液；(4)另取β-谷甾醇對照品加至醋酸乙酯中制成每毫升含β-谷甾醇對照品0.10～0.20毫克的溶液作對照品溶液；(5)分別精密吸收供試溶液2微升，對照品溶液1微升和2微升，以點(diǎn)狀方式交叉點(diǎn)樣于同一以氫氧化鈉乙醇溶液浸漬過的硅膠預(yù)制板上，以甲醇-甲酸乙酯為展開劑上行展開約8厘米；(6)取出涼干，并噴以硫酸-乙醇溶液，在60～100℃加熱6～10分鐘；(7)取出硅膠預(yù)制板放在紫外光燈下檢視，供試品的色譜應(yīng)與對照提取物色譜一致，在與β-谷甾醇對照品相應(yīng)的位置上標(biāo)準(zhǔn)比移值(RF)為0.52處顯示相同顏色(紫色)的熒光斑點(diǎn)即可定性。
依照本發(fā)明上述的定性方法，本發(fā)明提供的鋸葉棕果提取物中β-谷甾醇的含量測定方法是將制備好的含有β-谷甾醇的硅膠預(yù)制板取出按照薄層掃描法試驗(yàn)，以熒光方式進(jìn)行掃描，激發(fā)波長為λVa＝366納米，或以可見光方式進(jìn)行掃描，波長為λ＝545納米，用外標(biāo)兩點(diǎn)法回歸計(jì)算，即可取得含量值。
在本發(fā)明的定性鑒別方法中所述的甲醇制氫氧化鉀溶液為含5～40％氫氧化鉀的甲醇溶液。
在本發(fā)明的定性鑒別方法中所述的氫氧化鈉乙醇溶液為含0.1％氫氧化鈉的乙醇溶液。
在本發(fā)明的定性鑒別方法中所述用的硅膠預(yù)制板為硅膠60F254板。
在本發(fā)明的定性鑒別方法中所述用的甲醇-甲酸乙酯的配比為3～5∶1(重量比)。
在本發(fā)明的定性鑒別方法中所述用的硫酸-乙醇溶液為含8～30％硫酸的乙醇溶液。
由于本發(fā)明采用的是薄層掃描法，可以通過選用恰當(dāng)?shù)恼归_劑進(jìn)行折開，既可以使同類總有效成分集中于一點(diǎn)，又能與其他干擾成分分離，從而準(zhǔn)確地測定出有效成分的含量。此外，在薄層掃描測定中，即使被測定的斑點(diǎn)有時(shí)未能與某干擾成分完全分開，通過雙波長掃描測定，也能獲得很好的效果。因此本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比不但具有方法簡單易行、手段先進(jìn)、分離速度快、準(zhǔn)確性高、重現(xiàn)性好以及檢測費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)。適合中小企業(yè)采用。
具體實(shí)施例方式
通過如下的具體實(shí)施例可進(jìn)一步了解內(nèi)容。
實(shí)施例1取鋸葉棕果提取物300毫克，加入40％甲醇制氫氧化鉀溶液40毫升，置水浴中回流3小時(shí)，取出后放冷，將溶液轉(zhuǎn)移至125毫升分液漏斗中，用水40毫升洗滌回流瓶，合并洗液；用乙醚提取4次，每次40毫升。將合并提取液，用水洗4次，每次30-40毫升，用乙醚將提取液蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴ナ谷芙?，然后移?毫升量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，作為供試品溶液。另取β-谷甾醇對照品適量加醋酸乙酯制成每毫升含0.16毫克β-谷甾醇對照品的溶液5毫升，作為對照品溶液。分別精密吸收供試品溶液2微升，對照品溶液1微升、2微升，以點(diǎn)狀方式交叉點(diǎn)樣于同一以氫氧化鈉乙醇溶液浸漬的硅膠預(yù)制板上；以甲醇-甲酸乙酯(5∶1)為展開劑，上行展開約8厘米。取出，晾干，噴以硫酸-乙醇溶液，在80℃溫度下加熱10分鐘。
步驟二把硅膠板取出放在紫外光燈下檢視，供試品色譜應(yīng)與對照提取物色譜一致，在與β-谷甾醇對照品相應(yīng)的位置上標(biāo)準(zhǔn)比移值(Rf)為0.52處顯示相同顏色(紫色)的熒光斑點(diǎn)。
含量測定按照步驟一做好后取出照薄層掃描法試驗(yàn)，以熒光方式進(jìn)行掃描，激發(fā)波長為λVa＝366納米，或以可見光方式進(jìn)行掃描，波長為λ＝545納米，用外標(biāo)兩點(diǎn)法回歸計(jì)算，即可取得含量值。
實(shí)施例2取鋸葉棕果提取物100毫克，精密稱定，加13％甲醇制氫氧化鉀溶液20毫升，置水浴中回流2小時(shí)；取出，放冷。溶液轉(zhuǎn)移至125毫升分液漏斗中，用水30毫升洗滌回流瓶，合并洗液；用乙醚提取3次，每次30毫升。合并提取液，用水洗3次，每次30毫升；用乙醚將提取液蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴ナ谷芙?，然后移?毫升量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，作為供試品溶液。另取β-谷甾醇對照品適量，加醋酸乙酯制成每毫升含0.1毫克β-谷甾醇對照品的溶液5毫升，作為對照品溶液。分別精密吸收供試品溶液2微升，對照品溶液1微升、2微升，以點(diǎn)狀方式交叉點(diǎn)樣于同一以氫氧化鈉乙醇溶液浸漬的硅膠預(yù)制板上；以甲醇-甲酸乙酯(4∶1)為展開劑，上行展開約8厘米。取出，晾干，噴以硫酸-乙醇溶液，在60℃溫度下，加熱6分鐘。
其含量測定方法與實(shí)施例1相同。
實(shí)施例3基本上按照實(shí)施例1所述方法進(jìn)行，但采取如下參數(shù)可達(dá)到比較好的檢測結(jié)果鋸葉棕果提取物稱取200毫克；13％甲醇制氫氧化鉀溶液20毫升；硫酸-乙醇溶液的濃度為10％。
加熱方式在100℃中加熱8分鐘。
權(quán)利要求
1.一種鋸葉棕果提取物中β-谷甾醇的定性方法，其特征是該方法包括下述順序的步驟(1)取鋸葉棕果提取物100～300毫克，精密稱量，加入甲醇制氫氧化鉀溶液20～40毫升，置水浴中回流2～4小時(shí)，取出后放冷；(2)將溶液轉(zhuǎn)移至125毫升的分液漏斗中，用水20～40毫升洗滌回流瓶合并洗液，再用乙醚提取2～5次，每次20～40毫升；(3)將合并提取液用水洗2～4次，每次20～40毫升，再用乙醚提取蒸干，其殘?jiān)蚣哟姿嵋阴ナ怪芙?，然后移?毫升的量瓶中加醋酸乙酯至刻度作為供試品溶液；(4)另取β-谷甾醇對照品加至醋酸乙酯中制成每毫升含0.01～0.20毫克的溶液作為對照品溶液；(5)分別精密吸收供試溶液2微升，對照品溶液1微升和2微升，以點(diǎn)狀方式交叉點(diǎn)樣于同一以氫氧化鈉乙醇溶液浸漬過的硅膠預(yù)制板上，以甲醇-甲酸乙酯為展開劑上行展開約8厘米；(6)取出涼干，并噴以硫酸-乙醇溶液，在60～100℃加熱6～10分鐘；(7)取出硅膠預(yù)制板放在紫外光燈下檢視，供試品的色譜應(yīng)與對照提取物色譜一致，在與β-谷甾醇對照品相應(yīng)的位置上標(biāo)準(zhǔn)比移值(RF)為0.52處顯示相同顏色(紫色)的熒光斑點(diǎn)即可定性。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定性方法進(jìn)行的定量檢測方法，其特征是將制備好的含有β-谷甾醇的硅膠預(yù)制板取出按照薄層掃描法試驗(yàn)，以熒光方式進(jìn)行掃描，激發(fā)波長為λVa＝366納米，或以可見光方式進(jìn)行掃描，波長為λ＝545納米，用外標(biāo)兩點(diǎn)法回歸計(jì)算，即可取得含量值。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定性方法，其特征是所述的甲醇制氫氧化鉀溶液為含5～40％氫氧化鉀的甲醇溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定性方法，其特征是所述的氫氧化鈉乙醇溶液為含0.1％氫氧化鈉的乙醇溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定性方法，其特征是所述的硅膠預(yù)制板為硅膠60F254板。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定性方法，其特征是所述的甲醇-甲酸乙酯的配比為3～5∶1(重量比)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定性方法，其特征是所述的硫酸-乙醇溶液為含8～30％硫酸的乙醇溶液。
全文摘要
本發(fā)明提供一種鋸葉棕果提取物中β－谷甾醇的定性及其定量檢測方法。本發(fā)明用的是薄層掃描法，其特征是通過對鋸葉棕果提取物進(jìn)行稱量、溶解、回流、提取、蒸干溶解等工序制得供試品溶液和對照品溶液，以展開劑在預(yù)制硅膠板上進(jìn)行層折開，經(jīng)晾干和加熱后放在紫外光燈下檢視進(jìn)行定性。接著以熒光或可見光方式掃描，可取得其含量值。本發(fā)明不但方法簡單易行，而且手段先進(jìn)、分離速度快、準(zhǔn)確性高、重現(xiàn)性以及檢測費(fèi)用低，適合中小企業(yè)采用。
文檔編號G01N30/00GK1560630SQ20041001536
公開日2005年1月5日 申請日期2004年2月17日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月17日
發(fā)明者方芳, 方 芳 申請人:方芳, 方 芳