專(zhuān)利名稱(chēng)：四種病原體特異性免疫球蛋白g抗體及其親和指數(shù)檢測(cè)試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)和生物學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及巨細(xì)胞、風(fēng)疹、單純皰疹和弓形蟲(chóng)四種病原體特異性IgG抗體及其親和指數(shù)檢測(cè)試劑盒及其制備方法。
預(yù)防出生缺陷兒的降生，對(duì)中國(guó)具有特殊的重要意義。宮內(nèi)感染是造成出生缺陷兒降生的重要原因之一，近年來(lái)中國(guó)各地區(qū)的計(jì)生系統(tǒng)也已逐步開(kāi)展了預(yù)防宮內(nèi)感染方面的工作，如對(duì)未孕的育齡婦女和已孕的孕婦進(jìn)行有關(guān)可能引起宮內(nèi)感染、造成出生缺陷的一些疾病的檢測(cè)工作，目前主要集中于巨細(xì)胞病毒(CMV)、風(fēng)疹病毒(RV)、單純皰疹病毒(HSV)和弓形蟲(chóng)(Toxo)感染的檢測(cè)，檢測(cè)方法多為檢測(cè)其相應(yīng)的特異性抗體。這些工作的開(kāi)展無(wú)疑是對(duì)預(yù)防和減少出生缺陷兒的降生有重要價(jià)值的，但是我們發(fā)現(xiàn)在這一工作開(kāi)展過(guò)程當(dāng)中尚存在一些嚴(yán)重問(wèn)題，應(yīng)當(dāng)引起重視，特別是以下幾個(gè)問(wèn)題(1)對(duì)預(yù)防工作重視不夠表現(xiàn)在對(duì)已婚未孕的育齡婦女的檢測(cè)不夠重視，而只重視對(duì)孕婦的檢測(cè)，事實(shí)上若在孕前進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果采取一些預(yù)防措施是非常有價(jià)值的。例如時(shí)已婚的育齡婦女于孕前檢測(cè)風(fēng)疹病毒IgG抗體，對(duì)此抗體陰性或低于15IU/ml的婦女進(jìn)行疫苗注射，可有效地預(yù)防孕期風(fēng)疹病毒的感染。
(2)分清檢測(cè)對(duì)象目前國(guó)內(nèi)不少地區(qū)對(duì)未孕的育齡婦女和已孕的孕婦一律單一的檢測(cè)有關(guān)這些病原體的IgM抗體，這樣做顯然是不合理的。應(yīng)該在合理的安排檢測(cè)項(xiàng)目的前提下對(duì)未孕的育齡婦女主要檢測(cè)有關(guān)IgG抗體而不是IgM抗體，因?yàn)闄z測(cè)IgG抗體可以反應(yīng)是否感染過(guò)這種病原體，檢測(cè)IgM是看是否近期有急性感染。對(duì)于未孕的育齡婦女檢測(cè)過(guò)IgG抗體，孕后若發(fā)生急性感染，可根據(jù)孕前IgG檢測(cè)結(jié)果判斷孕后是原發(fā)感染還是再感染，可采取不同的措施；而對(duì)未孕的婦女檢測(cè)有關(guān)IgM抗體則無(wú)必要，因?yàn)槲丛械膵D女即使發(fā)生有關(guān)急性感染，對(duì)一般免疫功能正常的人無(wú)大的影響，也不需治療。而對(duì)已孕的孕婦來(lái)講，如孕前未檢查過(guò)有關(guān)IgG抗體，此時(shí)若單純?cè)俨镮gG抗體已無(wú)意義，應(yīng)該檢查有關(guān)IgM抗體，因?yàn)橹挥性衅诎l(fā)生急性感染才可能對(duì)胎兒有所損害。
(3)孕婦孕期的感染是原發(fā)感染還是繼發(fā)再感染對(duì)引發(fā)宮內(nèi)感染的機(jī)率和對(duì)胎兒造成的損傷程度有很大的不同，原發(fā)感染要比繼發(fā)再感染嚴(yán)重得多，因此區(qū)分孕婦原發(fā)感染和繼發(fā)感染也很重要。如果未孕前檢測(cè)過(guò)有關(guān)IgG抗體則很容易根據(jù)孕后檢測(cè)有關(guān)IgM的結(jié)果進(jìn)行區(qū)分，但我國(guó)的具體情況是絕大多數(shù)未孕的育齡婦女并未檢測(cè)過(guò)有關(guān)IgG抗體，而多數(shù)是孕后才做有關(guān)IgM的檢測(cè)，但是單靠一份血清檢測(cè)IgM陽(yáng)性并不能區(qū)分是原發(fā)還是繼發(fā)再感染，因此還必須對(duì)IgM陽(yáng)性者加試有關(guān)IgG的親和指數(shù)。若IgM陽(yáng)性而其相應(yīng)的IgG親和指數(shù)小于50％則為近期原發(fā)感染，而IgM雖然陽(yáng)性但其相應(yīng)的IgG親和指數(shù)大于60％則多不是近期原發(fā)感染，對(duì)于原發(fā)感染的孕婦必須進(jìn)一步觀察做必要的產(chǎn)前診斷。
本發(fā)明所涉及的四種病原體是可能引發(fā)宮內(nèi)感染最常見(jiàn)的幾種病原體其共同點(diǎn)在于孕婦感染后都可能引起胎兒的感染，對(duì)胎兒造成損害產(chǎn)生出生缺陷，影響中國(guó)人口素質(zhì)，給社會(huì)、個(gè)人及其家庭帶來(lái)難以估計(jì)的損失，尤其是孕婦原發(fā)感染的危害又遠(yuǎn)較繼發(fā)再感染嚴(yán)重。考慮到對(duì)同一患者經(jīng)常要同時(shí)對(duì)此四種病原體的抗體進(jìn)行檢測(cè)，因此這四種檢測(cè)試劑盒同時(shí)制備。
綜上所述，可以清楚的看出制備這四種病原體的IgG特異性抗體及其親和指數(shù)的檢測(cè)試劑盒的必要性和重要性?？陀^要求導(dǎo)致本發(fā)明的產(chǎn)生。
因此，本發(fā)明的目的是提供對(duì)育齡婦女孕前檢測(cè)血清中巨細(xì)胞病毒(CMV)、風(fēng)疹病毒(RV)、單純皰疹病毒(HSV)和弓形蟲(chóng)(Toxo)的特異性IgG抗體分別簡(jiǎn)寫(xiě)成CMV-IgG為巨細(xì)胞病毒特異性免疫球蛋白抗體G、RV-IgG為風(fēng)疹病毒特異性免疫球蛋白抗體G、TOXO-IgG為弓形蟲(chóng)特異性免疫球蛋白的G抗體、HSV1+2-IgG為單純皰疹病毒I型加II型特異性免疫球蛋白抗體G、及對(duì)孕婦檢測(cè)其IgG抗體親和指數(shù)之用的試劑盒。
本發(fā)明的內(nèi)容包括下面的四種病原體特異性免疫球蛋白G抗體及其親和指數(shù)檢測(cè)試劑盒，即1.一種巨細(xì)胞病毒特異性IgG抗體及其親和指數(shù)的檢測(cè)試劑盒，該試劑盒包括a.抗原包被板條以巨細(xì)胞病毒AD169株經(jīng)培養(yǎng)獲取抗原，經(jīng)純化后包被于聚苯乙烯制成的8孔或12孔為一條的ELISA專(zhuān)用板條；b.用辣根過(guò)氧化物酶自行標(biāo)記或以商品形式購(gòu)入的抗人IgG或葡萄球菌A蛋白；c.顯色液A為含H2O2的溶液，顯色液B為3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺；d.其它試劑盒配套試劑包括標(biāo)本稀釋液為含Tween-20的磷酸鹽緩沖液，濃縮清洗液為含Tween-20的磷酸緩沖液，終止液為2N的H2SO4溶液；e.定量標(biāo)準(zhǔn)品為已知CMV-IgG含量為10IU/ml的血清，陽(yáng)性對(duì)照為已知CMV-IgG含量為6.4IU/ml的人血清，陰性對(duì)照為已知CMV-IgG含量小于0.4IU/ml的人血清，臨界值為已知CMV-IgG含量為0.4IU/ml的人血清；f.溫和蛋白變形劑為含8M尿素的磷酸鹽緩沖液或含35mM二乙胺的磷酸鹽緩沖液。
2.一種風(fēng)疹病毒特異性IgG抗體及其親和指數(shù)的檢測(cè)試劑盒，該試劑盒包括a.抗原包被板條以風(fēng)疹病毒Gos株經(jīng)培養(yǎng)獲取抗原，經(jīng)純化后包被于聚苯乙烯制成的8孔或12孔為一條的ELISA專(zhuān)用板條；b.用辣根過(guò)氧化物酶自行標(biāo)記或以商品形式購(gòu)入的抗人IgG或葡萄球菌A蛋白；c.顯色液A為含H2O2的溶液，顯色液B為3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺；d.其它試劑盒配套試劑包括標(biāo)本稀釋液為含Tween-20的磷酸鹽緩沖液，濃縮清洗液為含Tween-20的磷酸緩沖液，終止液為2N的H2SO4溶液；e.定量標(biāo)準(zhǔn)品為已知RV-IgG含量為120IU/ml的血清，陽(yáng)性對(duì)照為已知RV-IgG含量為100IU/ml的人血清，陰性對(duì)照為已知RV-IgG含量小于10IU/ml的人血清，臨界值為已知RV-IgG含量為15IU/ml的人血清；f.溫和蛋白變形劑為含8M尿素的磷酸鹽緩沖液或含35mM二乙胺的磷酸鹽緩沖液。
3.一種單純皰疹病毒特異性IgG抗體及其親和指數(shù)的檢測(cè)試劑盒，該試劑盒包括a.抗原包被板條以單純皰疹病毒I型SM-44株及單純皰疹I(lǐng)I型G株經(jīng)培養(yǎng)獲取抗原，經(jīng)純化后等量混合包被于聚苯乙烯制成的8孔或12孔為一條的ELISA專(zhuān)用板條；b.用辣根過(guò)氧化物酶自行標(biāo)記或以商品形式購(gòu)入的抗人IgG或葡萄球菌A蛋白；c.顯色液A為含H2O2的溶液，顯色液B為3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺；d.其它試劑盒配套試劑包括標(biāo)本稀釋液為含Tween-20的磷酸鹽緩沖液，濃縮清洗液為含Tween-20的磷酸緩沖液，終止液為2N的H2SO4溶液；e.定量標(biāo)準(zhǔn)品為已知HSV1+2-IgG含量為64AU/ml的血清，陽(yáng)性對(duì)照為已知HSV1+2-IgG含量為32AU/ml的人血清，陰性對(duì)照為已知HSV1+2-IgG含量小于4AU/ml的人血清，臨界值為已知HSV1+2-IgG含量為4AU/ml的人血清；f.溫和蛋白變形劑為含8M尿素的磷酸鹽緩沖液或含35mM二乙胺的磷酸鹽緩沖液。
4.一種弓形蟲(chóng)特異性IgG抗體及其親和指數(shù)的檢測(cè)試劑盒，該試劑盒包括a.抗原包被板條以弓形蟲(chóng)RH株經(jīng)培養(yǎng)獲取抗原，經(jīng)純化后包被于聚苯乙烯制成的8孔或12孔為一條的ELISA專(zhuān)用板條；
b.用辣根過(guò)氧化物酶自行標(biāo)記或以商品形式購(gòu)入的抗人IgG或葡萄球菌A蛋白；c.顯色液A為含H2O2的溶液，顯色液B為3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺；d.其它試劑盒配套試劑包括標(biāo)本稀釋液為含Tween-20的磷酸鹽緩沖液，濃縮清洗液為含Tween-20的磷酸緩沖液，終止液為2N的H2SO4溶液；e.定量標(biāo)準(zhǔn)品為已知Toxo-IgG含量為240IU/ml的血清，陽(yáng)性對(duì)照為已知Toxo-IgG含量為120IU/ml的人血清，陰性對(duì)照為已知Toxo-IgG含量小于15IU/ml的人血清，臨界值為已知Toxo-IgG含量為15IU/ml的人血清；f.溫和蛋白變形劑為含8M尿素的磷酸鹽緩沖液或含35mM二乙胺的磷酸鹽緩沖液。
由于間接ELISA方法檢測(cè)特異性抗體具有經(jīng)濟(jì)、快速、簡(jiǎn)便、敏感、特異、可定量、適宜大量標(biāo)本檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，適宜于在各種級(jí)別的醫(yī)院和計(jì)生部門(mén)開(kāi)展，所以我們確定用該方法研制檢測(cè)特異性IgG抗體及其親和指數(shù)的試劑盒。本發(fā)明主要采用了現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)抗原進(jìn)行純化，以減少檢測(cè)過(guò)程中可能出現(xiàn)的非特異性反應(yīng)，用我們自行研制的定量標(biāo)準(zhǔn)品濾紙干燥法、酶標(biāo)記物穩(wěn)定稀釋液和顯色液，制備的試劑盒穩(wěn)定、靈敏、特異、簡(jiǎn)便、重復(fù)性及穩(wěn)定性都較好，與國(guó)外同類(lèi)產(chǎn)品相近，為本發(fā)明的產(chǎn)品商業(yè)化提供了保證。
本發(fā)明的內(nèi)容是采用對(duì)各種病原體敏感的細(xì)胞株接種病原體標(biāo)準(zhǔn)株，經(jīng)增殖后收獲病毒抗原，再經(jīng)不同步驟純化后用標(biāo)準(zhǔn)陰陽(yáng)血清滴定選出適宜的抗原包被濃度，以適當(dāng)條件包被固相載體，經(jīng)穩(wěn)定性處理密封保存，與其相應(yīng)的配套試劑組裝成試劑盆。一種試劑盒為定量檢測(cè)各相應(yīng)特異性IgG抗體，一種是檢測(cè)各相應(yīng)的IgG抗體的親和指數(shù)。
下面用實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明的實(shí)施例是用于說(shuō)明本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的限制。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的簡(jiǎn)單改進(jìn)都屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。除非另有說(shuō)明，本發(fā)明中的百分?jǐn)?shù)是重量百分?jǐn)?shù)。
實(shí)施例1風(fēng)疹病毒特異性IgG抗體檢測(cè)試劑盒及其制備(一)抗原制備1.將Vero細(xì)胞培養(yǎng)至單層，將風(fēng)疹病毒Gos株接種，細(xì)胞生長(zhǎng)液為含10％小牛血清的DMEM培養(yǎng)液，37℃吸附1-2小時(shí)后傾去接種物，加入含1％小牛血清的DMEM維持液，35℃、5％的CO2培養(yǎng)5-7天。
2.收集染毒細(xì)胞，離心取上清加入NaCl和PEG(MW＝6000)。
3.離心取沉淀。
4.經(jīng)4℃、85000g、2h蔗糖密度梯度離心純化。
5.取中間帶經(jīng)透析后測(cè)蛋白，經(jīng)陰陽(yáng)血清滴定確定包被濃度后分裝，貯存于-70℃。
(二)ELISA包被固相載體1.用包被緩沖液將風(fēng)疹抗原稀釋至最佳包被濃度，包被載體，每孔100μl，室溫2h后移入4℃過(guò)夜。
2.用3％BSA+穩(wěn)定劑封閉，每孔120μl，室溫2h后洗兩次，再經(jīng)穩(wěn)定劑處理兩次，晾干后密封，4℃保存。(三)操作流程1.檢測(cè)血清將血清作1∶101稀釋后每孔加入100μl，陰陽(yáng)對(duì)照、臨界值或定量標(biāo)準(zhǔn)品溶化后直接加入各相應(yīng)孔內(nèi)，37℃，60min。
2.洗五次后，加酶標(biāo)記抗人IgG(事先滴定選出最佳稀釋度)，每孔100μl，37℃，60min。
3.洗五次后，加入TMB-H2O2顯色系統(tǒng)，室溫，避光，30min。
4.加入終止液(2M H2SO4)，酶標(biāo)儀450nm測(cè)各孔OD值。
5.計(jì)算，判斷結(jié)果。
(四)試劑盒組成密封包被板條(48孔或96孔)，酶標(biāo)抗人IgG，濃縮清洗液，標(biāo)本稀釋液，顯色液A，顯色液B，終止液，定量標(biāo)準(zhǔn)品(或陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、臨界值)，說(shuō)明書(shū)。
實(shí)施例2風(fēng)疹病毒特異性IgG抗體親和指數(shù)檢測(cè)試劑盒及其制備(一)抗原制備同實(shí)施例1(二)ELISA包被固相載體同實(shí)施例1(三)操作流程1.檢測(cè)血清作1∶101稀釋后，每孔100μl，每份標(biāo)本均作兩孔，37℃，60min。
2.洗液洗兩次后，每份標(biāo)本兩孔中的一孔加入變性劑300μl保持10min，另一孔加入洗液300μl保持10min，然后甩掉，再用洗液各洗兩次。
3.均加入酶標(biāo)記抗人IgG，每孔100μl，37℃，60min。
4.洗五次后，加入TMB-H2O2顯色系統(tǒng)，室溫，避光，3min。
5.加入終止液(2M H2SO4)，酶標(biāo)儀450nm測(cè)各孔OD值。
6.按說(shuō)明書(shū)提供的公式計(jì)算每份標(biāo)本的親和指數(shù)。
(四)試劑盒組成同實(shí)施例1所列，再加一瓶變性劑。
實(shí)施例3巨細(xì)胞病毒特異性IgG抗體檢測(cè)試劑盒及其制備(一)抗原制備1.將人胚肺二倍體細(xì)胞培養(yǎng)至單層，接種CMV-AD169株，細(xì)胞生長(zhǎng)液為含10％小牛血清的DMEM培養(yǎng)液，37℃吸附1-1.5小時(shí)后傾去接種物，加入含1％小牛血清的DMEM維持液，35℃、5％的CO2生長(zhǎng)5-6天，100％病變，胰酶消化。
2.收集染毒細(xì)胞，加入0.05M/L甘氨酸-NaOH、pH9.0的緩沖液懸浮。
3.超聲波處理后離心取上清。
4.測(cè)蛋白，經(jīng)陰陽(yáng)血清棋盤(pán)滴定確定包被濃度后分裝，貯存于-70℃。
(二)ELISA包被固相載體同實(shí)施例1(三)操作流程同實(shí)施例1(四)試劑盒組成同實(shí)施例1實(shí)施例4巨細(xì)胞病毒特異性IgG抗體親和指數(shù)檢測(cè)試劑盒及其制備(一)抗原制備同實(shí)施例3(二)ELISA包被固相載體同實(shí)施例1(三)操作流程同實(shí)施例2(四)試劑組成同實(shí)施例2實(shí)施例5弓形蟲(chóng)特異性IgG抗體檢測(cè)試劑盒及其制備(一)抗原制備1.將Vero細(xì)胞培養(yǎng)至單層，接種弓形蟲(chóng)RH株，培養(yǎng)3-5天。
2.收集大量繁殖滿視野的蟲(chóng)體及細(xì)胞，經(jīng)G3漏斗過(guò)濾。
3.收集濾液1700rpm離心20min。
4.將沉淀懸浮于PBS中，超聲處理。
5.離心處理，1500rpm、30min，取上清。
6.測(cè)蛋白，經(jīng)陰陽(yáng)血清棋盤(pán)滴定確定包被濃度后分裝，貯存于-70℃。
(二)ELISA包被固相載體同實(shí)施例1
(三)操作流程同實(shí)施例1(四)試劑盒組成同實(shí)施例1實(shí)施例6弓形蟲(chóng)特異性IgG抗體親和指數(shù)檢測(cè)試劑盒及其制備(一)抗原制備同實(shí)施例5(二)ELISA包被固相載體同實(shí)施例1(三)操作流程同實(shí)施例2(四)試劑盒組成同實(shí)施例2實(shí)施例7單純皰疹病毒I型II型特異性IgG抗體檢測(cè)試劑盒及其制備(一)抗原制備1.將人胚肺二倍體細(xì)胞培養(yǎng)至單層，分別接種單純皰疹病毒I型SM-44株和單純皰疹病毒II型G株，細(xì)胞生長(zhǎng)液為含10％小牛血清的DMEM培養(yǎng)液，37℃吸附1-1.5小時(shí)后傾去接種物，加入含1％小牛血清的DMEM維持液，35℃、5％的CO2生長(zhǎng)3天，100％病變，胰酶消化。
2.收集染毒細(xì)胞，加入0.05M/L甘氨酸-NaOH、pH9.0的緩沖液懸浮。
3.超聲波處理后離心取上清。
4.測(cè)蛋白，經(jīng)陰陽(yáng)血清棋盤(pán)滴定確定包被濃度混合后分裝，貯存于-70℃。
(二)ELISA包被固相載體同實(shí)施例1(三)操作流程同實(shí)施例1(四)試劑盒組成同實(shí)施例1實(shí)施例8單純皰疹病毒I型II型特異性IgG抗體親和指數(shù)檢測(cè)試劑盒及其制備(一)抗原制備同實(shí)施例7(二)ELISA包被固相載體同實(shí)施例1(三)操作流程同實(shí)施例2(四)試劑盒組成同實(shí)施例權(quán)利要求
1.一種巨細(xì)胞病毒特異性IgG抗體及其親和指數(shù)的檢測(cè)試劑盒，該試劑盒包括a.抗原包被板條以巨細(xì)胞病毒AD169株經(jīng)培養(yǎng)獲取抗原，經(jīng)純化后包被于聚苯乙烯制成的8孔或12孔為一條的ELISA專(zhuān)用板條；b.用辣根過(guò)氧化物酶自行標(biāo)記或以商品形式購(gòu)入的抗人IgG或葡萄球菌A蛋白；c.顯色液A為含H2O2的溶液，顯色液B為3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺；d.其它試劑盒配套試劑包括標(biāo)本稀釋液為含Tween-20的磷酸鹽緩沖液，濃縮清洗液為含Tween-20的磷酸緩沖液，終止液為2N的H2SO4溶液；e.定量標(biāo)準(zhǔn)品為已知CMV-IgG含量為10IU/ml的血清，陽(yáng)性對(duì)照為已知CMV-IgG含量為6.4IU/ml的人血清，陰性對(duì)照為已知CMV-IgG含量小于0.4IU/ml的人血清，臨界值為已知CMV-IgG含量為0.4IU/ml的人血清；f.溫和蛋白變形劑為含8M尿素的磷酸鹽緩沖液或含35mM二乙胺的磷酸鹽緩沖液。
2.一種風(fēng)疹病毒特異性IgG抗體及其親和指數(shù)的檢測(cè)試劑盒，該試劑盒包括a.抗原包被板條以風(fēng)疹病毒Gos株經(jīng)培養(yǎng)獲取抗原，經(jīng)純化后包被于聚苯乙烯制成的8孔或12孔為一條的ELISA專(zhuān)用板條；b.用辣根過(guò)氧化物酶自行標(biāo)記或以商品形式購(gòu)入的抗人IgG或葡萄球菌A蛋白；c.顯色液A為含H2O2的溶液，顯色液B為3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺；d.其它試劑盒配套試劑包括標(biāo)本稀釋液為含Tween-20的磷酸鹽緩沖液，濃縮清洗液為含Tween-20的磷酸緩沖液，終止液為2N的H2SO4溶液；e.定量標(biāo)準(zhǔn)品為已知RV-IgG含量為120IU/ml的血清，陽(yáng)性對(duì)照為已知RV-IgG含量為100IU/ml的人血清，陰性對(duì)照為已知RV-IgG含量小于10IU/ml的人血清，臨界值為已知RV-IgG含量為15IU/ml的人血清；f.溫和蛋白變形劑為含8M尿素的磷酸鹽緩沖液或含35mM二乙胺的磷酸鹽緩沖液。
3.一種單純皰疹病毒特異性IgG抗體及其親和指數(shù)的檢測(cè)試劑盒，該試劑盒包括a.抗原包被板條以單純皰疹病毒I型SM-44林及單純皰疹I(lǐng)I型G林經(jīng)培養(yǎng)獲取抗原，經(jīng)純化后等量混合包被于聚苯乙烯制成的8孔或12孔為一條的ELISA專(zhuān)用板條；b.用辣根過(guò)氧化物酶自行標(biāo)記或以商品形式購(gòu)入的抗人IgG或葡萄球菌A蛋白；c.顯色液A為含H2O2的溶液，顯色液B為3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺；d.其它試劑盒配套試劑包括標(biāo)本稀釋液為含Tween-20的磷酸鹽緩沖液，濃縮清洗液為含Tween-20的磷酸緩沖液，終止液為2N的H2SO4溶液；e.定量標(biāo)準(zhǔn)品為已知HSV1+2-IgG含量為64AU/ml的血清，陽(yáng)性對(duì)照為已知HSV1+2-IgG含量為32AU/ml的人血清，陰性對(duì)照為已知HSV1+2-IgG含量小于4AU/ml的人血清，臨界值為已知HSV1+2-IgG含量為4AU/ml的人血清；f.溫和蛋白變形劑為含8M尿素的磷酸鹽緩沖液或含35mM二乙胺的磷酸鹽緩沖液。
4.一種弓形蟲(chóng)特異性IgG抗體及其親和指數(shù)的檢測(cè)試劑盒，該試劑盒包括a.抗原包被板條以弓形蟲(chóng)RH株經(jīng)培養(yǎng)獲取抗原，經(jīng)純化后包被于聚苯乙烯制成的8孔或12孔為一條的ELISA專(zhuān)用板條；b.用辣根過(guò)氧化物酶自行標(biāo)記或以商品形式購(gòu)入的抗人IgG或葡萄球菌A蛋白；c.顯色液A為含H2O2的溶液，顯色液B為3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺；d.其它試劑盒配套試劑包括標(biāo)本稀釋液為含Tween-20的磷酸鹽緩沖液，濃縮清洗液為含Tween-20的磷酸緩沖液，終止液為2N的H2SO4溶液；e.定量標(biāo)準(zhǔn)品為已知Toxo-IgG含量為240IU/ml的血清，陽(yáng)性對(duì)照為已知Toxo-IgG含量為120IU/ml的人血清，陰性對(duì)照為已知Toxo-IgG含量小于15IU/ml的人血清，臨界值為已知Toxo-IgG含量為15IU/ml的人血清；f.溫和蛋白變形劑為含8M尿素的磷酸鹽緩沖液或含35mM二乙胺的磷酸鹽緩沖液。
全文摘要
本發(fā)明涉及巨細(xì)胞、風(fēng)疹、單純皰疹病毒和弓形蟲(chóng)四種病原體的特異性IgG抗體及其親和指數(shù)檢測(cè)試劑盒，即將巨細(xì)胞病毒AD
文檔編號(hào)G01N33/569GK1553189SQ0313648
公開(kāi)日2004年12月8日 申請(qǐng)日期2003年6月5日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月5日
發(fā)明者馬旭, 侯林浦, 姜英濤, 高英, 馬 旭 申請(qǐng)人:馬旭, 馬 旭