專利名稱：一種金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白g抗體偶聯(lián)物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗病毒天然藥物，具體地，涉及一種金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物。
背景技術(shù)：
金絲桃素(Hypericin, HY)是從藤黃科(Clusiaceae)植物貫葉連翅(Hypericum perforatum Linn.)中提取的萘駢二蒽酮化合物，具有光敏活性和光動(dòng)作用，可應(yīng)用于腫瘤的光化學(xué)診斷和治療。但是由于金絲桃素對(duì)光、熱不穩(wěn)定性，目前市場(chǎng)上金絲桃素有效成分含量極低，遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到終端產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的要求。納米藥物是指以納米級(jí)高分子納米粒 (nanoparticles, NP)、納米球(nanospheres, NS)、納米囊(nanocapsules, NC)等為載體， 與藥物以一定方式結(jié)合在一起后制成的藥物，其粒徑可能超過(guò)100 nm,但通常應(yīng)小于500 nm，納米藥物也可以是直接將原料藥物加工制成的納米粒。白蛋白不僅具備以上特點(diǎn)，它還具有免疫原性低的特點(diǎn)。另外，白蛋白中的氨基酸以肽鍵相連接，且扭曲成團(tuán)狀，具網(wǎng)狀空隙，為鑲嵌攜帶藥物創(chuàng)造了有利條件，與脂質(zhì)體和乳劑相比，白蛋白納米粒的體內(nèi)和貯存穩(wěn)定性較好。因此，以牛血清白蛋白作為載體材料包封天然抗病毒藥物有效成分金絲桃素，得到金絲桃素白蛋白納米粒是一種較好的解決辦法，它不僅提高了金絲桃素的有效含量，同時(shí)改善了其對(duì)光、熱的不穩(wěn)定性，為金絲桃素及類(lèi)似的植物有效成分的產(chǎn)品開(kāi)發(fā)提供了一種途徑，另外，由于金絲桃素白蛋白納米粒粒徑小，易于通過(guò)機(jī)體屏障，還具有免疫系統(tǒng)被動(dòng)靶向作用，易于藥物在免疫系統(tǒng)的聚集，這代表了藥物有效成分的一個(gè)發(fā)展趨勢(shì)。以上只是在一定程度上提高了金絲桃素的有效含量，但是，如果進(jìn)一步增強(qiáng)金絲桃素的有效利用率，現(xiàn)有技術(shù)沒(méi)有相關(guān)的記載。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有的缺陷，提供了一種金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物，由于納米制劑本身具有被動(dòng)靶向作用，同時(shí)，免疫球蛋白G 抗體具有主動(dòng)靶向作用，可以和機(jī)體的抗原產(chǎn)生抗原抗體反應(yīng)，將藥物帶到機(jī)體特定部位， 兩者結(jié)合后大大增強(qiáng)了藥物的靶向性，提高了金絲桃素的藥效，同時(shí)，該制備工藝可在室溫下進(jìn)行，工藝簡(jiǎn)單，易于操作，特別適于工業(yè)化生產(chǎn)。為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案
一種金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物，通過(guò)以下步驟制備完成
(1)將金絲桃素白蛋白納米粒與免疫球蛋白G抗體溶于PBS緩沖液；
(2)在步驟(I)所得溶液中加入戊二醛，制得金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物。具體地,步驟(I)所述金絲桃素白蛋白納米粒的粒徑為60 nm-150 nm ;所述免疫球蛋白G抗體為分子量為150 kDa的牛免疫球蛋白G抗體。具體地，步驟(I)所述的免疫球蛋白G抗體和金絲桃素白蛋白納米粒質(zhì)量比為 1:1-1:15。具體地，步驟(I)所述PBS緩沖液的PH為7. 2 ;步驟(2)所述戊二醛為質(zhì)量濃度I %-10%的新鮮戊二醛。具體地，步驟(2)所述戍二醒的加入條件為400rpm/min-1000 rpm/min攪拌、-10-30°C下緩慢滴加。本發(fā)明所述金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物的制備方法，包括以下步驟
(1)將金絲桃素白蛋白納米粒與免疫球蛋白G抗體溶于PBS緩沖液；
(2)在步驟(I)所得溶液中加入戊二醛，制得金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物。具體地,步驟(I)所述金絲桃素白蛋白納米粒的粒徑為60 nm-150 nm ;所述免疫球蛋白G抗體為分子量為150 k Da的牛免疫球蛋白G抗體。具體地，步驟(I)所述的金絲桃素白蛋白納米粒與免疫球蛋白G抗體的質(zhì)量比為 1:1-1:15。具體地，步驟(I)所述PBS緩沖液的PH為7.2 ;步驟(2)所述戊二醛為質(zhì)量濃度I %-10%的新鮮戊二醛。具體地，步驟(2)所述戍二醒的加入條件為400rpm/min-1000 rpm/min攪拌、-10-30°C下緩慢滴加。所述金絲桃素白蛋白納米粒制備工藝如下
精確稱取牛血清白蛋白2.0 g溶于98 ml蒸餾水中制成載體溶液，稱取金絲桃素(HY) 4. Og溶96ml無(wú)水乙醇中制成油相,在室溫-ICTC 30°C,攪拌條件下(400 rpm/min 1000 rpm/min)，將油相5ml滴加到50 ml載體溶液中，調(diào)充分乳化并調(diào)節(jié)PH為9，繼續(xù)以O(shè). 5 ml/ min滴加20ml無(wú)水乙醇,充分?jǐn)?h,戍二醒固化24h, 15000rpm/min高速離心15min,洗漆 3次，冷凍干燥，收集，得到乳白色金絲桃素白蛋白納米粒，平均粒徑為120 nm，載藥量4. 12 %，包封率71. 43 %。本發(fā)明具有以下有益效果
1、本發(fā)明是將金絲桃素白蛋白納米粒與免疫球蛋白G抗體相偶聯(lián)，是兩種蛋白質(zhì)之間的偶聯(lián)，而非中藥有效成分直接與蛋白相偶聯(lián)。納米藥物由于其較小的粒徑和親水表面使其在體內(nèi)不易被巨噬細(xì)胞吞噬，它對(duì)特定器官具有強(qiáng)的親和力，因而具有被動(dòng)靶向作用，另外，納米粒同抗體偶聯(lián)，借助機(jī)體的抗原抗體反應(yīng)，將藥物帶入特定部位，使其具有主動(dòng)靶向性，因此兩者結(jié)合后大大增強(qiáng)了藥物的靶向性，提高了金絲桃素的藥效；
2、本發(fā)明的金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物為乳白色的固體粉末狀，粒徑范圍為210nnT300nm，穩(wěn)定性好，易于保存，易于機(jī)體對(duì)藥物的吸收、利用，減少副作用，提聞藥效；
3、本發(fā)明的金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物制備的方法簡(jiǎn)單、耗能低、不需要特殊的設(shè)備就能大量生產(chǎn)。


附圖用來(lái)提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說(shuō)明書(shū)的一部分，與本發(fā)明的實(shí)施例一起用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。在附圖中
圖I是本發(fā)明實(shí)施例一制備的金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物的 SDS-PAGE電泳圖。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行說(shuō)明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的優(yōu)選實(shí)施例僅用于說(shuō)明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。實(shí)施例I
將200 μ L免疫球蛋白G抗體和200 μ L金絲桃素白蛋白納米粒(質(zhì)量比為I :1)溶于 4 ml PBS緩沖液,室溫下,攪拌條件為400 rpm/min;以O(shè). 5 ml/min緩慢滴加新鮮戍二醒 IOOyL (所謂新鮮戊二醛是指用時(shí)現(xiàn)配的)，充分?jǐn)嚢? h使金絲桃素白蛋白納米粒與免疫球蛋白G抗體交聯(lián)，冷凍干燥，得到金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物。以普通金絲桃素，金絲桃素白蛋白納米粒和金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋 G抗體偶聯(lián)物對(duì)免疫抑制小鼠灌胃，測(cè)定免疫器官指數(shù)(包括脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù))。從脾臟指數(shù)的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可看出空白對(duì)照組的脾臟指數(shù)為(3.60±0.89 mg/g)，免疫抑制模型組的脾臟指數(shù)為(2. 16±0.45 mg/g)，普通金絲桃素組的脾臟指數(shù)為(2.26±0.37mg/ g)，與模型相比，無(wú)顯著差異，說(shuō)明普通金絲桃素不能將免疫抑制小鼠的脾臟指數(shù)恢復(fù)到正常水平。金絲桃素白蛋白納米粒組的脾臟指數(shù)為(4. 14±0. 37 mg/g)，與空白對(duì)照組和免疫抑制模型組相比，有顯著差異(P < O. 05)，說(shuō)明金絲桃素白蛋白納米粒能顯著提高免疫抑制小鼠的脾臟指數(shù)。金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物的脾臟指數(shù)為 (4.46±0.81 mg/g)，與空白對(duì)照組和免疫抑制模型組相比，有極顯著差異(P < O. 01)，表明它能極顯著提高免疫抑制小鼠的脾臟指數(shù)。從胸腺指數(shù)的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可看出空白對(duì)照組的胸腺指數(shù)為(3. 99±0. 84 mg/g)，免疫抑制模型組的胸腺指數(shù)為(2. 32±0. 34 mg/ g)，普通金絲桃素組的胸腺指數(shù)為(2. 32±0.21mg/g)，與模型相比，無(wú)顯著差異，說(shuō)明普通金絲桃素不能將免疫抑制小鼠的胸腺指數(shù)恢復(fù)到正常水平。金絲桃素白蛋白納米粒組的胸腺指數(shù)為(2.34±0.46 mg/g)，與空白對(duì)照組和免疫抑制模型組相比，無(wú)有顯著差異，說(shuō)明金絲桃素白蛋白納米粒對(duì)胸腺指數(shù)無(wú)影響。金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物的胸腺指數(shù)(4. 32±0. 63 mg/g)，與空白對(duì)照組和免疫抑制模型組相比，有極顯著差異 (P < O. 01)，表明它能極顯著提高免疫抑制小鼠的胸腺指數(shù)。如圖I所示，免疫球蛋白G抗體在13(Tl50KDa處有一條帶，金絲桃素白蛋白在43 66. 2KDa處有一條帶，金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物在2IOKDa處有一條帶。實(shí)施例2
將150 μ L免疫球蛋白G抗體和300 μ L金絲桃素白蛋白納米粒(質(zhì)量比為I :2)溶于 4.5ml PBS緩沖液，緩沖液PH為7. 2。在_10°C、攪拌條件為400 rpm/min，以O(shè). 5 ml/min 緩慢滴加新鮮戊二醛75 μ L，充分?jǐn)嚢? h使金絲桃素白蛋白納米粒與免疫球蛋白G抗體交聯(lián)，冷凍干燥，制得金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物。以普通金絲桃素， 金絲桃素白蛋白納米粒和金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋G抗體偶聯(lián)物對(duì)免疫抑制小鼠灌胃，測(cè)定免疫器官指數(shù)(包括脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù))。從脾臟指數(shù)的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可看出 空白對(duì)照組的脾臟指數(shù)為(3. 60±0. 89 mg/g)，免疫抑制模型組的脾臟指數(shù)為(2. 16±0. 45 mg/g)，普通金絲桃素組的脾臟指數(shù)為(2. 26±0. 37mg/g),與模型相比，無(wú)顯著差異，說(shuō)明普通金絲桃素不能將免疫抑制小鼠的脾臟指數(shù)恢復(fù)到正常水平。金絲桃素白蛋白納米粒組的脾臟指數(shù)為(4. 14±0.37 mg/g)，與空白對(duì)照組和免疫抑制模型組相比，有顯著差異 (P < O. 05)，說(shuō)明金絲桃素白蛋白納米粒能顯著提高免疫抑制小鼠的脾臟指數(shù)。金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物的脾臟指數(shù)為(4. 45±0. 31 mg/g)，與空白對(duì)照組和免疫抑制模型組相比，有極顯著差異(P < O. 01)，表明它能極顯著提高免疫抑制小鼠的脾臟指數(shù)。從胸腺指數(shù)的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可看出空白對(duì)照組的胸腺指數(shù)為(3.99±0.84 mg/g)，免疫抑制模型組的胸腺指數(shù)為(2. 32±0. 34 mg/g)，普通金絲桃素組的胸腺指數(shù)為 (2. 32±0. 21mg/g)，與模型相比，無(wú)顯著差異，說(shuō)明普通金絲桃素不能將免疫抑制小鼠的胸腺指數(shù)恢復(fù)到正常水平。金絲桃素白蛋白納米粒組的胸腺指數(shù)為(2. 34±0.46 mg/g)，與空白對(duì)照組和免疫抑制模型組相比，無(wú)有顯著差異，說(shuō)明金絲桃素白蛋白納米粒對(duì)胸腺指數(shù)無(wú)影響。金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物的胸腺指數(shù)(4. 20±0.45mg/ g)，與空白對(duì)照組和免疫抑制模型組相比，有極顯著差異(P < O. 01)，表明它能極顯著提高免疫抑制小鼠的胸腺指數(shù)。實(shí)施例3
將100 μ L免疫球蛋白G抗體和300 μ L金絲桃素白蛋白納米粒(質(zhì)量比為I :3)溶于 4ml PBS緩沖液，在10°C、攪拌條件為700 rpm/min下，以O(shè). 5 ml/min緩慢滴加新鮮戊二醛50yL (所謂新鮮戊二醛是指用時(shí)現(xiàn)配的)，充分?jǐn)嚢? h使金絲桃素白蛋白納米粒與免疫球蛋白G抗體交聯(lián)，冷凍干燥，制得金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物。 以普通金絲桃素，金絲桃素白蛋白納米粒和金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋G抗體偶聯(lián)物對(duì)免疫抑制小鼠灌胃，測(cè)定免疫器官指數(shù)(包括脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù))。從脾臟指數(shù)的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可看出空白對(duì)照組的脾臟指數(shù)為(3.60±0.89 mg/g)，免疫抑制模型組的脾臟指數(shù)為(2. 16 + 0. 45 mg/g),普通金絲桃素組的脾臟指數(shù)為(2. 26 + 0. 37mg/g),與模型相比，無(wú)顯著差異，說(shuō)明普通金絲桃素不能將免疫抑制小鼠的脾臟指數(shù)恢復(fù)到正常水平。金絲桃素白蛋白納米粒組的脾臟指數(shù)為(4. 14±0. 37 mg/g)，與空白對(duì)照組和免疫抑制模型組相比，有顯著差異(P < O. 05)，說(shuō)明金絲桃素白蛋白納米粒能顯著提高免疫抑制小鼠的脾臟指數(shù)。金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物的脾臟指數(shù)為(4. 31 ± O. 27 mg/g)，與空白對(duì)照組和免疫抑制模型組相比，有極顯著差異(P < 0.01)，表明它能極顯著提高免疫抑制小鼠的脾臟指數(shù)。從胸腺指數(shù)的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可看出空白對(duì)照組的胸腺指數(shù)為(3.99±0.84 mg/g)，免疫抑制模型組的胸腺指數(shù)為(2. 32±0. 34 mg/g)，普通金絲桃素組的胸腺指數(shù)為(2. 32±0.21mg/g)，與模型相比，無(wú)顯著差異，說(shuō)明普通金絲桃素不能將免疫抑制小鼠的胸腺指數(shù)恢復(fù)到正常水平。金絲桃素白蛋白納米粒組的胸腺指數(shù)為 (2.34±0.46 mg/g)，與空白對(duì)照組和免疫抑制模型組相比，無(wú)有顯著差異，說(shuō)明金絲桃素白蛋白納米粒對(duì)胸腺指數(shù)無(wú)影響。金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物的胸腺指數(shù)(4. 16±0. 18 mg/g)，與空白對(duì)照組和免疫抑制模型組相比，有極顯著差異(P < O. 01)，表明它能極顯著提高免疫抑制小鼠的胸腺指數(shù)。實(shí)施例4將100 μ L免疫球蛋白G抗體和700 μ L金絲桃素白蛋白納米粒(質(zhì)量比為I :7)溶于 8ml PBS緩沖液，在30°C、攪拌條件為1000 rpm/min下，以O(shè). 5 ml/min緩慢滴加新鮮戊二醛50 μ L，充分?jǐn)嚢? h使金絲桃素白蛋白納米粒與免疫球蛋白G抗體交聯(lián)，冷凍干燥，制得金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物。以普通金絲桃素，金絲桃素白蛋白納米粒和金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋 G抗體偶聯(lián)物對(duì)免疫抑制小鼠灌胃，測(cè)定免疫器官指數(shù)(包括脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù))。從脾臟指數(shù)的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可看出空白對(duì)照組的脾臟指數(shù)為(3.60±0.89 mg/g)，免疫抑制模型組的脾臟指數(shù)為(2. 16±0.45 mg/g)，普通金絲桃素組的脾臟指數(shù)為(2.26±0.37mg/ g)，與模型相比，無(wú)顯著差異，說(shuō)明普通金絲桃素不能將免疫抑制小鼠的脾臟指數(shù)恢復(fù)到正常水平。金絲桃素白蛋白納米粒組的脾臟指數(shù)為(4. 14±0. 37 mg/g)，與空白對(duì)照組和免疫抑制模型組相比，有顯著差異(P < O. 05)，說(shuō)明金絲桃素白蛋白納米粒能顯著提高免疫抑制小鼠的脾臟指數(shù)。金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物的脾臟指數(shù)為 (4. 31 ±0.38 mg/g)，與空白對(duì)照組和免疫抑制模型組相比，有極顯著差異(P < O. 01)，表明它能極顯著提高免疫抑制小鼠的脾臟指數(shù)。從胸腺指數(shù)的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可看出空白對(duì)照組的胸腺指數(shù)為(3. 99±0. 84 mg/g)，免疫抑制模型組的胸腺指數(shù)為(2. 32±0. 34 mg/ g)，普通金絲桃素組的胸腺指數(shù)為(2. 32±0.21mg/g)，與模型相比，無(wú)顯著差異，說(shuō)明普通金絲桃素不能將免疫抑制小鼠的胸腺指數(shù)恢復(fù)到正常水平。金絲桃素白蛋白納米粒組的胸腺指數(shù)為(2.34±0.46 mg/g)，與空白對(duì)照組和免疫抑制模型組相比，無(wú)有顯著差異，說(shuō)明金絲桃素白蛋白納米粒對(duì)胸腺指數(shù)無(wú)影響。金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物的胸腺指數(shù)(4. 19±0.44 mg/g)，與空白對(duì)照組和免疫抑制模型組相比，有極顯著差異 (P < O. 01)，表明它能極顯著提高免疫抑制小鼠的胸腺指數(shù)。實(shí)施例5
將100 μ L免疫球蛋白G抗體和1500 μ L金絲桃素白蛋白納米粒(質(zhì)量比為I :15)溶于 16mlPBS緩沖液,在室溫20°C、攪拌條件為600 rpm/min下，以O(shè). 5 ml/min緩慢滴加新鮮戍二醛50 μ L，充分?jǐn)嚢? h使金絲桃素白蛋白納米粒與免疫球蛋白G抗體交聯(lián)，冷凍干燥，制得金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物。以普通金絲桃素，金絲桃素白蛋白納米粒和金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋 G抗體偶聯(lián)物對(duì)免疫抑制小鼠灌胃，測(cè)定免疫器官指數(shù)(包括脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù))。從脾臟指數(shù)的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可看出空白對(duì)照組的脾臟指數(shù)為(3.60±0.89 mg/g)，免疫抑制模型組的脾臟指數(shù)為(2. 16±0.45 mg/g)，普通金絲桃素組的脾臟指數(shù)為(2.26±0.37mg/ g)，與模型相比，無(wú)顯著差異，說(shuō)明普通金絲桃素不能將免疫抑制小鼠的脾臟指數(shù)恢復(fù)到正常水平。金絲桃素白蛋白納米粒組的脾臟指數(shù)為(4. 14±0. 37 mg/g)，與空白對(duì)照組和免疫抑制模型組相比，有顯著差異(P < O. 05)，說(shuō)明金絲桃素白蛋白納米粒能顯著提高免疫抑制小鼠的脾臟指數(shù)。金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物的脾臟指數(shù)為 (4.47±0. 26 mg/g)，與空白對(duì)照組和免疫抑制模型組相比，有極顯著差異(P < O. 01)，表明它能極顯著提高免疫抑制小鼠的脾臟指數(shù)。從胸腺指數(shù)的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可看出空白對(duì)照組的胸腺指數(shù)為(3. 99±0. 84 mg/g)，免疫抑制模型組的胸腺指數(shù)為(2. 32±0. 34 mg/ g)，普通金絲桃素組的胸腺指數(shù)為(2. 32±0.21mg/g)，與模型相比，無(wú)顯著差異，說(shuō)明普通金絲桃素不能將免疫抑制小鼠的胸腺指數(shù)恢復(fù)到正常水平。金絲桃素白蛋白納米粒組的胸腺指數(shù)為(2.34±0.46 mg/g)，與空白對(duì)照組和免疫抑制模型組相比，無(wú)有顯著差異，說(shuō)明金絲桃素白蛋白納米粒對(duì)胸腺指數(shù)無(wú)影響。金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物的胸腺指數(shù)(4.22±0. 17 mg/g)，與空白對(duì)照組和免疫抑制模型組相比，有極顯著差異 (P < O. 01)，表明它能極顯著提高免疫抑制小鼠的胸腺指數(shù)。 最后應(yīng)說(shuō)明的是以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明， 盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。 凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物，其特征在于，通過(guò)以下步驟制備完成(1)將金絲桃素白蛋白納米粒與免疫球蛋白G抗體溶于PBS緩沖液；(2)在步驟(I)所得溶液中加入戊二醛，制得金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物，其特征在于，步驟(I)所述金絲桃素白蛋白納米粒的粒徑為60 nm-150 nm ;所述免疫球蛋白G抗體為分子量為150 kDa的牛免疫球蛋白G抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物，其特征在于，步驟(I)所述的免疫球蛋白G抗體和金絲桃素白蛋白納米粒質(zhì)量比為1:1-1:15。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物，其特征在于，步驟(I)所述PBS緩沖液的PH為7. 2 ;步驟(2)所述戊二醛為質(zhì)量濃度I %_10%的新鮮戊二醛。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物，其特征在于，步驟(2)所述戍二醒的加入條件為400rpm/min-1000 rpm/min攪拌、-10-30°C下緩慢滴加。
6.—種金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(1)將金絲桃素白蛋白納米粒與免疫球蛋白G抗體溶于PBS緩沖液；(2)在步驟(I)所得溶液中加入戊二醛，制得金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物的制備方法，其特征在于，步驟(I)所述金絲桃素白蛋白納米粒的粒徑為60 nm-150 nm ;所述免疫球蛋白G抗體為分子量為150 k Da的牛免疫球蛋白G抗體。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物的制備方法，其特征在于，步驟(I)所述的金絲桃素白蛋白納米粒與免疫球蛋白G抗體的質(zhì)量比為 1:1-1:15。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物的制備方法，其特征在于，步驟(I)所述PBS緩沖液的PH為7. 2 ;步驟(2)所述戊二醛為質(zhì)量濃度I%_10%的新鮮戊二醛。
10.根據(jù)權(quán)利要求6-9任意一項(xiàng)所述的金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述戍二醒的加入條件為400rpm/min-1000 rpm/ min攪拌、-10-30°C下緩慢滴加。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物，通過(guò)以下步驟制備完成(1)將金絲桃素白蛋白納米粒與免疫球蛋白G抗體溶于PBS緩沖液；(2)在步驟(1)所得溶液中加入戊二醛，制得金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物。本發(fā)明制得的金絲桃素白蛋白納米粒-免疫球蛋白G抗體偶聯(lián)物具有有效利用率極高的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)，本發(fā)明所提出的制備工藝具有工藝簡(jiǎn)單、易于操作、特別適于工業(yè)化生產(chǎn)的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61P37/04GK102579354SQ201210063589
公開(kāi)日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2012年3月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月12日
發(fā)明者劉宇, 華蘭英, 尚若峰, 梁劍平, 王學(xué)紅, 胡小艷, 赫寶成, 陶蕾 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所