專(zhuān)利名稱(chēng):與補(bǔ)體蛋白質(zhì)結(jié)合的雙特異性抗體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的領(lǐng)域是醫(yī)學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)和蛋白化學(xué)。
背景技術(shù)：
補(bǔ)體系統(tǒng)與身體的其它免疫系統(tǒng)聯(lián)合地起作用，以防御細(xì)胞和病毒病原體的侵入。至少有25種補(bǔ)體蛋白被發(fā)現(xiàn)是血漿蛋白和膜輔因子的復(fù)合物集合。血漿蛋白占脊椎動(dòng)物血清中的球蛋白的約10%。通過(guò)在一系列復(fù)雜但精確的酶促切割和膜結(jié)合事件中相互作用，補(bǔ)體成分實(shí)現(xiàn)它們的免疫防御功能。所產(chǎn)生的補(bǔ)體級(jí)聯(lián)系統(tǒng)導(dǎo)致產(chǎn)生具有調(diào)理、免疫調(diào)節(jié)和裂解功能的產(chǎn)物。例如,在The Merck Manual第16版中提供了與補(bǔ)體活化相關(guān)的生物學(xué)活性的簡(jiǎn)要概述。
補(bǔ)體級(jí)聯(lián)系統(tǒng)可以通過(guò)經(jīng)典途徑(CP)、凝集素途徑或旁路途徑(AP)進(jìn)行。凝集素途徑一般通過(guò)甘露糖-結(jié)合凝集素(MBL)與高甘露糖底物的結(jié)合來(lái)啟動(dòng)。AP可以是獨(dú)立于抗體的，且可以被病原體表面上的某些分子啟動(dòng)。CP —般被靶細(xì)胞上的抗原位點(diǎn)的抗體識(shí)別和與其結(jié)合來(lái)啟動(dòng)。這些途徑會(huì)聚于C3轉(zhuǎn)化酶——在該點(diǎn)，補(bǔ)體成分C3被有活性的蛋白酶切割，以生成C3a和C3b。
通過(guò)在血液的血漿級(jí)分中富含的補(bǔ)體成分C3的自發(fā)水解，啟動(dòng)AP C3轉(zhuǎn)化酶。該過(guò)程(也稱(chēng)作“空轉(zhuǎn)(tickover) ”)通過(guò)C3中的硫酯鍵的自發(fā)切割而發(fā)生，以形成C3i或C3 (H20)。表面的存在促進(jìn)空轉(zhuǎn)，所述表面支持活化的C3的結(jié)合，和/或具有中性或正電荷特征(例如，細(xì)菌細(xì)胞表面)。C3 (H2O)的這種形成允許血漿蛋白因子B的結(jié)合，這又允許因子 D把因子B切割成Ba和Bb。Bb片段保持結(jié)合C3，以形成含有C3 (H2O)Bb的復(fù)合物—— “流體相”或“啟動(dòng)” C3轉(zhuǎn)化酶。盡管僅以小量產(chǎn)生，流體相C3轉(zhuǎn)化酶可以將多種C3蛋白切割成C3a和C3b，并導(dǎo)致C3b的產(chǎn)生和它隨后與表面的共價(jià)結(jié)合(例如，細(xì)菌表面)。結(jié)合到表面-結(jié)合的C3b上的因子B被因子D切割，從而形成表面-結(jié)合的含有C3b、Bb的AP C3 轉(zhuǎn)化酶復(fù)合物(參見(jiàn)，例如，Miiller-Eberhard (1988)4/ / Rev Biochem'ol: 321-347.)。
在將第二種C3b單體添加到AP C3轉(zhuǎn)化酶時(shí)，形成AP C5轉(zhuǎn)化酶-(C3b)2，Bb (參見(jiàn)，例如，Medicus 等人(1976)// MecIlAA: 1076-1093 和 Fearon 等人(1975)// 142:856-863.)。第二種C3b分子的作用是結(jié)合C5，并呈遞它用于被Bb切割(參見(jiàn)，例如， Isenman等人(1980)/ Immuno1326-331.)。通過(guò)添加三聚蛋白備解素來(lái)穩(wěn)定AP C3和C5轉(zhuǎn)化酶，所述備解素描述在，例如，Medicus等人(1976)，同上。但是，形成功能性旁路途徑C3或C5轉(zhuǎn)化酶不需要備解素結(jié)合(參見(jiàn),例如,Schreiber等人(1978)/ -% Natl Acad Sci USAlJi :3948-3952 和 Sissons 等人(1980)/￥oc Natl AcacI Sci USAJJ_ :559-562.)。
在補(bǔ)體成分Cl (它是Clq、Clr和Cls的復(fù)合物)與抗體相互作用時(shí)，形成CP C3 轉(zhuǎn)化酶，所述抗體結(jié)合在靶抗原(例如，微生物抗原)上。Cl的Clq部分與抗體-抗原復(fù)合物的結(jié)合造成Cl的構(gòu)象變化，其活化Clr。有活性的Clr然后切割Cl-相關(guān)的Cls，由此產(chǎn)生有活性的絲氨酸蛋白酶。有活性的Cls把補(bǔ)體成分C4切割成C4b和C4a。象C3b—樣， 新產(chǎn)生的C4b片段含有高度反應(yīng)性的硫醇，其容易地與靶表面(例如，微生物細(xì)胞表面)上的合適分子形成酰胺或酯鍵。Cls也把補(bǔ)體成分C2切割成C2b和C2a。由C4b和C2a形成的復(fù)合物是CP C3轉(zhuǎn)化酶，其能把C3加工成C3a和C3b。在將C3b單體添加到CP C3轉(zhuǎn)化酶時(shí)，形成 CP C5 轉(zhuǎn)化酶-C4b，C2a，C3b (參見(jiàn)，例如，Miiller-Eberhard (1988)，同上和 Cooper 等人(1970)/#漢/132:775-793.)。
除了它在C3和C5轉(zhuǎn)化酶中的作用以外，C3b還起調(diào)理素的作用，這通過(guò)它與在抗原呈遞細(xì)胞(諸如巨噬細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞)的表面上存在的補(bǔ)體受體的相互作用來(lái)實(shí)現(xiàn)。通常認(rèn)為C3b的調(diào)理功能是補(bǔ)體系統(tǒng)的最重要的抗感染功能之一。具有阻斷C3b功能的遺傳損害的患者傾向于被多種病原性生物感染，而具有在補(bǔ)體級(jí)聯(lián)系統(tǒng)序列后期的損害的患者 (即，具有阻斷C5功能的損害的患者)被發(fā)現(xiàn)僅更傾向于奈瑟氏球菌屬{Neisseria、感染， 然后僅稍微更有傾向性。
AP和CP C5轉(zhuǎn)化酶將C5切割成C5a和C5b。C5的切割釋放C5a，即一種有效的過(guò)敏毒素和趨化因子，和C5b，其允許裂解末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9的形成。C5b與C6、C7和C8 組合，以在靶細(xì)胞表面處形成C5b-8復(fù)合物。在與幾個(gè)C9分子結(jié)合時(shí)，形成膜攻擊復(fù)合物 (MAC、C5b-9、末端補(bǔ)體復(fù)合物一 TCC)。當(dāng)足夠數(shù)目的MACs插入靶細(xì)胞膜中時(shí)，它們產(chǎn)生的開(kāi)口(MAC孔)介導(dǎo)靶細(xì)胞的快速滲透裂解。
盡管正確地起作用的補(bǔ)體系統(tǒng)提供對(duì)抗感染微生物的穩(wěn)健防御，補(bǔ)體途徑的不正確調(diào)節(jié)或活化已經(jīng)牽涉于多種障礙的發(fā)病機(jī)理，所述障礙包括，例如，類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 (RA);狼瘡腎炎；哮喘；缺血再灌注損傷；非典型溶血性尿毒性綜合征(aHUS);致密沉積物病(DDD);陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿(PNH);黃斑變性(例如，年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD))； 溶血、肝酶升高和低血小板(HELLP)綜合征；血栓形成性血小板減少性紫癜(TTP);自發(fā)性胎兒丟失；微量免疫血管炎；大皰性表皮松解癥；復(fù)發(fā)性胎兒丟失；多發(fā)性硬化(MS);外傷性腦損傷；和由心肌梗死、心肺轉(zhuǎn)流術(shù)和血液透析導(dǎo)致的損傷(參見(jiàn)，例如，Holers等人 (2008)Iwmunological Reviews 223 :300_316)。補(bǔ)體活化的下調(diào)已證實(shí)在治療多種動(dòng)物模型中的幾種疾病適應(yīng)癥中是有效的。參見(jiàn)，例如，Rother等人(2007 )Na ture Bio technology 25 (11):1256-1264 ;Wang 等人(1996)/￥oc. Natl. Acad. Sci. USA 93:8563-8568 ；ffang 等人(1995)/￥oc. Natl. Acad. Sci. "5 盟:8955-8959 ;Rinder 等人(1995)7； Clin. Invest. 96:1564-1572 ；Kroshus 等)Transplantation 60:1194-1202 ；Homeister 等人(1993)7； Immunol. 150:1055-1064 ffeisman 等人(1990)249:146-151 ； Amsterdam 等人(1995)J. Physiol. 268:H448_H457 ；和 Rabinovici 等人(1992)/ Immunol 149:1744 1750。
發(fā)明概述本公開(kāi)內(nèi)容涉及結(jié)合人補(bǔ)體成分蛋白質(zhì)的雙特異性抗體。本文所述的雙特異性抗體可以結(jié)合2個(gè)或更多個(gè)(例如2、3、4、5或6個(gè)或更多個(gè))不同表位。例如，本文所述的雙特異性抗體可以結(jié)合2種或更多種(例如2、3、4、5或6種或更多種)不同蛋白質(zhì)，其中蛋白質(zhì)中的至少2種選自C5a，C5b，關(guān)于C5a的細(xì)胞受體(例如C5aRl或C5L2)，和末端補(bǔ)體復(fù)合物的組分或中間體例如C5b-6、C5b-7、C5b-8或C5b_9。例如，在一些實(shí)施方案中，雙特異性抗體可以結(jié)合選自C5a、C5aR、C5b、C5L2、C5b-6、C5b-7、C5b-8和C5b-9的2種不同蛋白質(zhì)。雙特異性抗體用于抑制末端補(bǔ)體(例如C5b-9 TCC的裝配和/或活性)和/或C5a過(guò)敏毒素介導(dǎo)的炎癥。因此，雙特異性抗體可以在用于治療多種補(bǔ)體途徑相關(guān)障礙的方法中使用，例如但不限于非典型溶血性尿毒性綜合征(aHUS);血栓形成性血小板減少性紫癜(TTP);致密沉積物病(DDD);類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA);溶血、肝酶升高和低血小板(HELLP);年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD);重癥肌無(wú)力(MG)、冷凝集素疾病(CAD)、皮肌炎、Graves氏病、Hashimoto氏甲狀腺炎、I型糖尿病、銀屑病、天皰瘡、自身免疫性溶血性貧血(AIHA)、原發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)、或本文描述和/或本領(lǐng)域已知的任何其它補(bǔ)體相關(guān)障礙。
本文所述的雙特異性抗體特征在于許多優(yōu)點(diǎn)，例如超過(guò)結(jié)合全長(zhǎng)或成熟C5且抑制全長(zhǎng)或成熟C5的切割的抗體的優(yōu)點(diǎn)。如同此種抗C5抗體，本文所述的雙特異性抗體能夠抑制C5活化的一個(gè)或兩個(gè)臂的下游效應(yīng)。即，在一些實(shí)施方案中，本文所述的雙特異性抗體可以抑制C5a介導(dǎo)的炎癥應(yīng)答和起因于C5切割的C5b (MAC)依賴(lài)性細(xì)胞裂解。然而，因?yàn)槿搜獦S■中 C5 的濃度是約 O. 37 μ M (Rawal 和 Pangburn (2001)^/ Immunol 166
(4):2635-2642),所以經(jīng)常必須使用抗C5抗體的高濃度和/或頻繁施用，以有效抑制人中的C5。與C5不同，片段C5a和C5b以低得多的濃度存在于血液中，且經(jīng)常局限于局部補(bǔ)體活化的特定區(qū)域，例如哮喘患者中的肺、RA患者的關(guān)節(jié)、或具有AMD的患者的眼中的玻璃疣。
此外，工作實(shí)例實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中所示的公開(kāi)內(nèi)容證明雖然抗C5抗體在體外和體內(nèi)抑制補(bǔ)體方面高度有效(參見(jiàn)，例如，Hillmen等人(2004)#份^7 J Med 350 (6) :552),佰該抗體對(duì)靶介導(dǎo)的清除特別易感，這是由于血液中C5的高濃度。這個(gè)發(fā)現(xiàn)指出與抗C5抗體相比較，雙特異性抗體(例如結(jié)合C5a和MAC的組分例如C5b的雙特異性抗體)非?？赡茉谘褐芯哂懈L(zhǎng)的半衰期，這是由于抗原介導(dǎo)的抗體清除的貢獻(xiàn)減少。如上所述，片段C5a 和C5b各自以比C5低得多的濃度存在，并且經(jīng)常在補(bǔ)體活化的特定區(qū)域產(chǎn)生。因此，考慮到其更長(zhǎng)的半衰期，本文所述的雙特異性抗體可以以比抗C5抗體低得多的劑量和/或更不頻繁地施用于人，并且有效提供在人中C5的相同或更大抑制。與抗C5抗體的劑量相比較， 施用更低劑量的雙特異性抗體的能力也允許另外的遞送途徑，例如皮下施用、肌內(nèi)施用、肺內(nèi)遞送和經(jīng)由使用生物可降解的小球體的施用。
本文所述的雙特異性抗體還提供了超過(guò)使用2種不同抗體組合的許多優(yōu)點(diǎn)。例如，與需要產(chǎn)生分開(kāi)的抗C5a抗體和抗C5b抗體的2個(gè)不同過(guò)程相比較，結(jié)合C5a和C5b的雙特異性抗體是一個(gè)分子，僅需要一個(gè)過(guò)程開(kāi)發(fā)。此外，2種不同抗體(例如抗C5a抗體和抗C5b抗體)的混合物(cocktail)的施用還將可能需要明顯更復(fù)雜的臨床評(píng)價(jià)。例如,將需要評(píng)價(jià)用于每種分開(kāi)抗體的安全研究和藥物代謝動(dòng)力學(xué)(PK)和藥物動(dòng)力學(xué)(PD)參數(shù)， 以不僅確保2種抗體之間的等價(jià)，還確保2種抗體的預(yù)期靶(例如C5a和C5b)的中和隨著時(shí)間過(guò)去得到維持。另外，僅靶向活性C5片段(C5a和C5b)或其受體意指雙特異性抗體的清除不太可能受天然、高度豐富的血漿C5蛋白質(zhì)的正常清除或周轉(zhuǎn)顯著影響。[0016]在一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容的特征在于結(jié)合下述中的至少2種的雙特異性抗體 C5a，C5b，關(guān)于C5a的細(xì)胞受體(例如C5aRl或C5L2)，TCC的組分或中間體；或TCC (C5b_9) 自身。TCC的組分可以是例如C5b、C6、C7、C8、C9或其生物學(xué)活性片段。TCC的中間體可以是例如C5b-6、C5b-7或C5b-8。在一些實(shí)施方案中，抗體結(jié)合C5b_9。
在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容的特征在于結(jié)合下述的雙特異性抗體(a) C5a和 C5aRl ； (b) C5a 和 C5b ；(c) C5b 和 C5aRl ；(d) C5a 和 C5L2 ；(e) C5b 和 C5L2 ；(f) C5aRl 和 C5L2 ；(g)C5b-6 和 C5a ;(h)C5b_6 和 C5b ;(i)C5b_6 和 C5aRl ;*(j)C5b_6 和 C5L2。
在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容的特征在于含有至少2個(gè)不同抗原結(jié)合部位(或由2個(gè)不同抗原結(jié)合部位組成)的雙特異性抗體，其中至少一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合C5a，并且至少一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合C5b或C5aR。本公開(kāi)內(nèi)容的特征還在于含有至少2個(gè)不同抗原結(jié)合部位(或由2個(gè)不同抗原結(jié)合部位組成)的抗體，其中至少一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合C5b，并且至少一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合C5aR。本公開(kāi)內(nèi)容的進(jìn)一步特征在于含有至少2個(gè)不同抗原結(jié)合部位的抗體，其中(i)至少一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合C5a或C5b ;和(ii )至少一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合關(guān)于C5a的細(xì)胞受體例如C5aRl或C5L2。本公開(kāi)內(nèi)容的特征還在于含有至少2個(gè)不同抗原結(jié)合部位(或由2個(gè)不同抗原結(jié)合部位組成)的抗體，其中(i)至少一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合C5a、C5b或關(guān)于C5a的細(xì)胞受體；和(ii )至少一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合C5b_6。在一些實(shí)施方案中，這些抗體中的任何一種可以含有2個(gè)或超過(guò)2個(gè)(例如3、4、5、6、7、8、9或 10個(gè)或更多個(gè))抗原結(jié)合部位。
在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容的特征在于對(duì)于下述中的至少2種具有結(jié)合特異性的雙特異性抗體:C5a、C5aRl、C5b、C5L2、C6、C7、C8、C9、C5b-6、C5b-7、C5b-8 和 C5b_9。在一些實(shí)施方案中，抗體對(duì)于C5a、C5b、C5aRl和C5b_6中的至少2種具有結(jié)合特異性。
在本文所述的任何抗體的一些實(shí)施方案中，抗體不結(jié)合全長(zhǎng)或成熟C5。在一些實(shí)施方案中，抗體不結(jié)合非復(fù)合的C5b、C6、C7、C8或C9。
在另外一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容的特征在于含有下述或由下述組成的雙特異性抗體(i)結(jié)合C5a的第一個(gè)抗原結(jié)合部位jP(ii)結(jié)合關(guān)于C5a的細(xì)胞受體的第二個(gè)抗原結(jié)合部位。第一個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合脫精氨酸的(desarginated)C5a。第一個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合哺乳動(dòng)物C5a (例如人C5a)。第一個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合含有氨基酸序列或由氨基酸序列組成的人C5a蛋白質(zhì)，所述氨基酸序列與SEQ ID NO. I中所示的氨基酸序列至少 70 (例如至少 71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、
90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或甚至100) %等同。第一個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合含有SEQ ID NOs:2-14中任一個(gè)所示的氨基酸序列或由SEQ ID NOs: 2_14中任一個(gè)所示的氨基酸序列組成的人C5a蛋白質(zhì)的片段。第一個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合表位，所述表位包含 SEQ ID NOs :1-14 中任一個(gè)所示的至少 4 個(gè)(例如至少 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、
17、18、19、20、21、22、23、24或25個(gè)或更多個(gè))連續(xù)氨基酸。在一些實(shí)施方案中，關(guān)于C5a 的細(xì)胞受體是C5aRl。C5aRl可以是哺乳動(dòng)物(例如人)形式的C5aRl。第二個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合包含氨基酸序列的人C5aRl蛋白質(zhì)，所述氨基酸序列與SEQ ID NO: 17中所示的氨基酸序列至少 70 (例如至少 71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、
88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或甚至100) %等同。第二個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合包含SEQ ID NOs: 18-22中任一個(gè)所示的氨基酸序列的人C5aRl蛋白質(zhì)的片段。第二
10個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合表位，所述表位包含SEQ ID NOs :17-22中任一個(gè)所示的至少4個(gè) (例如至少 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24 或 25 個(gè)或更多個(gè))連續(xù)氨基酸。在一些實(shí)施方案中，關(guān)于C5a的細(xì)胞受體是C5L2。C5L2可以是哺乳動(dòng)物 (例如人)形式的C5L2。第二個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合包含氨基酸序列的人C5L2蛋白質(zhì)，所述氨基酸序列與SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列至少70 (例如至少71、72、73、74、75、
76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99 或甚至 100) %等同。在一些實(shí)施方案中，第二個(gè)抗原結(jié)合部位可以在表位處結(jié)合人C5L2的片段， 所述表位含有SEQ ID N0:23 的至少4個(gè)(例如至少 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、
18、19、20、21、22、23、24或25個(gè)或更多個(gè))連續(xù)氨基酸。第二個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合包含SEQ ID N0s:24-27中任一個(gè)所示的氨基酸序列的人C5L2蛋白質(zhì)的片段。第二個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合表位，所述表位包含SEQ ID NOs :24-27中任一個(gè)所示的至少4個(gè)(例如至少 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24 或 25 個(gè)或更多個(gè))連續(xù)氨基酸。在一些實(shí)施方案中，抗體不結(jié)合全長(zhǎng)或成熟C5。
在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容的特征在于含有下述或由下述組成的雙特異性抗體
(i)結(jié)合C5a的第一個(gè)抗原結(jié)合部位；和(ii)結(jié)合C5b的第二個(gè)抗原結(jié)合部位。第一個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合脫精氨酸的C5a。第一個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合哺乳動(dòng)物C5a (例如人C5a)。第一個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合含有氨基酸序列或由氨基酸序列組成的人C5a蛋白質(zhì)，所述氨基酸序列與SEQ ID NO. I中所示的氨基酸序列至少70 (例如至少71、72、73、
74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99 或甚至100) %等同。第一個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合含有SEQ ID NOs:2-14中任一個(gè)所示的氨基酸序列或由SEQ ID N0s:2-14中任一個(gè)所示的氨基酸序列組成的人C5a蛋白質(zhì)的片段。第一個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合表位，所述表位包含SEQ ID NOs: 1-14中任一個(gè)所示的至少 4 個(gè)(例如至少 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24 或 25 個(gè)或更多個(gè))連續(xù)氨基酸。在一些實(shí)施方案中，第二個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合哺乳動(dòng)物(例如人) 形式的C5b。人C5b可以含有氨基酸序列或由氨基酸序列組成，所述氨基酸序列與SEQ ID NO: 15或16中所示的氨基酸序列至少70(例如至少71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、
82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99 或甚至 100) %等同。第二個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合表位，所述表位包含SEQ ID NO: 15或16中所示的至少4個(gè)(例如至少 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24 或 25 個(gè)或更多個(gè))連續(xù)氨基酸，或由SEQ ID NO: 15或16中所示的至少4個(gè)(例如至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、 14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25個(gè)或更多個(gè))連續(xù)氨基酸組成。在一些實(shí)施方案中，抗體不結(jié)合全長(zhǎng)或成熟C5。
在另外一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容的特征在于含有下述或由下述組成的雙特異性抗體(i)結(jié)合C5b的第一個(gè)抗原結(jié)合部位jP(ii)結(jié)合關(guān)于C5a的細(xì)胞受體的第二個(gè)抗原結(jié)合部位。在一些實(shí)施方案中，第二個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合哺乳動(dòng)物(例如人)形式的C5b。人 C5b可以含有氨基酸序列或由氨基酸序列組成，所述氨基酸序列與SEQ ID NO: 15或16中所示的氨基酸序列至少 70 (例如至少 71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、
86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99 或甚至 100) %等同。第一個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合表位，所述表位包含SEQ ID NO: 15或16中任一個(gè)所示的至少4個(gè)(例如至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24 或 25 個(gè)或更多個(gè))連續(xù)氨基酸，或由SEQ ID NO: 15或16中任一個(gè)所示的至少4個(gè)(例如至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、
14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25個(gè)或更多個(gè))連續(xù)氨基酸組成。在一些實(shí)施方案中，抗體不結(jié)合全長(zhǎng)或成熟C5。在一些實(shí)施方案中，關(guān)于C5a的細(xì)胞受體是C5aRl。C5aRl 可以是哺乳動(dòng)物(例如人)形式的C5aRl。第二個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合包含氨基酸序列的人C5aRl蛋白質(zhì)，所述氨基酸序列與SEQ ID NO: 17中所示的氨基酸序列至少70 (例如至少 71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、 96、97、98、99或甚至100) %等同。第二個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合包含SEQ ID NOs:18-22 中任一個(gè)所示的氨基酸序列的人C5aRl蛋白質(zhì)的片段。第二個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合表位，所述表位包含SEQ ID NOs: 17-22中任一個(gè)所示的至少4個(gè)(例如至少5、6、7、8、9、10、
11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或 25 個(gè)或更多個(gè))連續(xù)氨基酸。在一些實(shí)施方案中，關(guān)于C5a的細(xì)胞受體是C5L2。C5L2可以是哺乳動(dòng)物(例如人)形式的C5L2。第二個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合包含氨基酸序列的人C5L2蛋白質(zhì)，所述氨基酸序列與SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列至少70 (例如至少71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、
83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99 或甚至 100) % 等同。在一些實(shí)施方案中，第二個(gè)抗原結(jié)合部位可以在表位處結(jié)合人C5L2的片段，所述表位含有SEQ ID NO:23 的至少 4 個(gè)(例如至少 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、 24或25個(gè)或更多個(gè))連續(xù)氨基酸。第二個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合包含SEQ ID NOs:24-27 中任一個(gè)所示的氨基酸序列的人C5L2蛋白質(zhì)的片段。第二個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合表位， 所述表位包含SEQ ID NOs :24-27中任一個(gè)所示的至少4個(gè)(例如至少5、6、7、8、9、10、11、
12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或 25 個(gè)或更多個(gè))連續(xù)氨基酸。
在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供了含有下述或由下述組成的雙特異性抗體(i) 結(jié)合C5a、C5b或關(guān)于C5a的細(xì)胞受體的第一個(gè)抗原結(jié)合部位jP(ii)結(jié)合TCC的組分、TCC 的中間體或C5b-9的第二個(gè)抗原結(jié)合部位。第一個(gè)或第二個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合的TCC 組分、TCC中間體和合適表位在本文中描述。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)?shù)谝粋€(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合C5b時(shí)，第二個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合的TCC的組分不是C5b。在一些實(shí)施方案中，第一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合C5b的第一個(gè)表位，并且第二個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合C5b的第二個(gè)表位，其中所述第一個(gè)和第二個(gè)表位不是等同的。例如，C5b的第一個(gè)和第二個(gè)表位可以是非重疊的或可以由2個(gè)不同氨基酸序列組成。
在一些實(shí)施方案中，本文所述的雙特異性抗體可以含有各自結(jié)合相同靶(例如 C5a、C5b、C5aRl、C5L2、C5b_6、C5b_7、C5b_8、C5b_9、C6、C7、C8 或 C9)的第一個(gè)和第二個(gè)抗原結(jié)合部位，其中每個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合靶的不同表位。例如，在一些實(shí)施方案中，本文所述的雙特異性抗體可以含有結(jié)合C5a的第一個(gè)抗原結(jié)合部位，和在這樣的表位處結(jié)合C5a 的第二個(gè)抗原結(jié)合部位，所述表位與第一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合的表位不等同或重疊。
在一些實(shí)施方案中，本文所述的雙特異性抗體結(jié)合關(guān)于C5a的細(xì)胞受體的細(xì)胞外部分。例如，本文所述的雙特異性抗體可以結(jié)合C5aRl和/或C5L2的細(xì)胞外區(qū)域。
在一些實(shí)施方案中，本文所述的雙特異性抗體可以抑制C5a和關(guān)于C5a的細(xì)胞受體(例如C5aRl或C5L2)之間的相互作用。在一些實(shí)施方案中，本文所述的雙特異性抗體可以抑制TCC的裝配或活性。在一些實(shí)施方案中，本文所述的雙特異性抗體可以抑制表達(dá)關(guān)于C5a的受體的細(xì)胞的C5a依賴(lài)性趨化性。在一些實(shí)施方案中，本文所述的雙特異性抗體可以抑制C5b和C6 ；C5b-6和C7 ;C5b_7和C8 ;或C5b_8和C9之間的相互作用。在一些實(shí)施方案中，本文所述的雙特異性抗體可以抑制在體外的補(bǔ)體依賴(lài)性的細(xì)胞裂解。
在一些實(shí)施方案中，本文所述的雙特異性抗體可以以至少108(例如，至少I(mǎi)O9UOki 或io11)]^1的Ka結(jié)合關(guān)連抗原。例如，本文所述的雙特異性抗體可以以至少I(mǎi)O8 Μ—1的&結(jié)合C5a。在另一個(gè)例子中，雙特異性抗體可以以至少I(mǎi)O8 M—1的&結(jié)合C5aRl或C5L2。在另外一個(gè)例子中，本文所述的雙特異性抗體可以以至少I(mǎi)O8 IT1的&結(jié)合C5b。在另外一個(gè)例子中，本文所述的雙特異性抗體可以以至少I(mǎi)O8 Μ—1的Ka結(jié)合C5b-6。
在一些實(shí)施方案中，本文所述的雙特異性抗體可以進(jìn)一步含有第三個(gè)抗原結(jié)合部位，其結(jié)合選自C6、C7、C8、C9的末端補(bǔ)體蛋白質(zhì)中存在的抗原。在一些實(shí)施方案中，雙特異性抗體可以含有結(jié)合全長(zhǎng)或成熟C5的抗原結(jié)合部位。
在一些實(shí)施方案中，本文所述的雙特異性抗體可以是單克隆、單鏈、人源化、重組、 嵌合、嵌合化、去免疫化(deimmunized)、全人、雙抗體、胞內(nèi)抗體(intrabody)或F (ab’ ) 2 片段。雙特異性抗體可以是單鏈雙抗體、串聯(lián)單鏈Fv片段、串聯(lián)單鏈雙抗體、或包含單鏈雙抗體和至少部分免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)的融合蛋白。雙特異性抗體可以是雙重可變結(jié)構(gòu)域免疫球蛋白(DVD-Ig)分子。雙特異性抗體可以含有或可以是彼此結(jié)合的(例如共價(jià)或非共價(jià)連接在一起的)2種不同的單特異性抗體。
在一些實(shí)施方案中，本文所述的任何雙特異性抗體可以含有異源部分，例如糖(例如抗體是糖基化的)或可檢測(cè)標(biāo)記?？蓹z測(cè)標(biāo)記包括例如突光標(biāo)記、發(fā)光標(biāo)記、重金屬標(biāo)記、 放射性標(biāo)記和酶促標(biāo)記。熒光標(biāo)記可以例如選自熒光素、異硫氰酸熒光素(FITC)、綠色熒光蛋白(GFP)、DyLight 488、藻紅蛋白(PE)、碘化丙啶(PI)、PerCP、PE-Alexa Fluor 700、 Cy5、別藻藍(lán)蛋白和Cy7。酶促標(biāo)記可以是例如辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶或螢光素酶。放射性標(biāo)記可以是例如選自32P、33P、14C、125I、131I、35S和3H的一種。
在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容的特征在于包含本文所述的任何雙特異性抗體和藥學(xué)可接受的載體、賦形劑或稀釋劑的藥物組合物。
在另外一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容的特征在于用于抑制或預(yù)防受試者中的末端補(bǔ)體的方法。該方法包括給有此需要的受試者施用有效抑制受試者中的末端補(bǔ)體的量的抗體的步驟，其中所述抗體是能夠抑制末端補(bǔ)體的本文所述的任何雙特異性抗體。例如，雙特異性抗體可以是結(jié)合TCC的組分(例如，C5b、C6、C7、C8或C9)、TCC的中間體(例如C5b_6、C5b_7 或C5b-8)或C5b-9的那種。
在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容的特征在于用于抑制或預(yù)防受試者中的C5a依賴(lài)性趨化性的方法。該方法包括給有此需要的受試者施用有效抑制受試者中的C5a依賴(lài)性趨化性的量的抗體的步驟?？贵w可以是能夠抑制C5a依賴(lài)性趨化性的本文所述的任何雙特異性抗體。例如，雙特異性抗體可以是結(jié)合C5a或C5aRl的那種?？贵w可以作為藥物組合物施用。
在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供了用于治療或預(yù)防受試者中的補(bǔ)體相關(guān)障礙的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用有效治療受試者中的補(bǔ)體相關(guān)障礙的量的抗體?？贵w可以是例如本文所述的雙特異性抗體。例如，抗體可以是結(jié)合下述的那種(i)C5a 和C5b ；(ii) C5b和關(guān)于C5a的受體；(iii) C5a和TCC的組分或中間體(或C5b_9) ; (iv) 關(guān)于C5a的受體和TCC的組分或中間體(或C5b-9);或(￥) C5b和TCC的組分或中間體(或C5b_9)。抗體可以作為藥物組合物施用。
在本文所述的任何方法的一些實(shí)施方案中，受試者可以是具有補(bǔ)體相關(guān)障礙、懷疑具有補(bǔ)體相關(guān)障礙、或處于發(fā)展補(bǔ)體相關(guān)障礙危險(xiǎn)中的那種。補(bǔ)體相關(guān)障礙可以是例如旁路補(bǔ)體途徑相關(guān)障礙，例如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、缺血再灌注損傷、非典型溶血性尿毒性綜合征、血栓形成性血小板減少性紫癜、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿、致密沉積物病、年齡相關(guān)性黃斑變性、自發(fā)性胎兒丟失、微量免疫血管炎、大皰性表皮松解癥、復(fù)發(fā)性胎兒丟失、 多發(fā)性硬化、外傷性腦損傷、或本文描述或本領(lǐng)域已知的任何其它AP相關(guān)障礙。
在一些實(shí)施方案中，受試者具有經(jīng)典補(bǔ)體途徑相關(guān)障礙、懷疑具有經(jīng)典補(bǔ)體途徑相關(guān)障礙、或處于發(fā)展經(jīng)典補(bǔ)體途徑相關(guān)障礙危險(xiǎn)中，例如重癥肌無(wú)力、冷凝集素疾病、皮肌炎、Graves氏病、Hashimoto氏甲狀腺炎、I型糖尿病、銀屑病、天皰瘡、自身免疫性溶血性貧血、特發(fā)性血小板減少性紫癜、Goodpasture綜合征、抗磷脂綜合征、災(zāi)變性抗磷脂綜合征、或本文描述或醫(yī)學(xué)領(lǐng)域已知的任何其它CP相關(guān)障礙。
本文所述的任何方法可以進(jìn)一步包括將受試者鑒定為具有補(bǔ)體相關(guān)障礙、懷疑具有補(bǔ)體相關(guān)障礙、或處于發(fā)展具有補(bǔ)體相關(guān)障礙危險(xiǎn)中的步驟。任何方法可以包括在施用抗體后，就補(bǔ)體相關(guān)障礙的一種或多種癥狀中的改善監(jiān)控受試者。
在本文所述的方法的一些實(shí)施方案中，抗體可以靜脈內(nèi)施用于受試者。在一些實(shí)施方案中(例如在其中待治療呼吸狀況的實(shí)施方案中)，抗體可以通過(guò)肺施用于受試者。在一些實(shí)施方案中，抗體可以皮下或肌內(nèi)施用。
在本文所述的方法的一些實(shí)施方案中，受試者是哺乳動(dòng)物。在一些實(shí)施方案中，受試者是人。
在另外一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容的特征還在于用于產(chǎn)生本文所述的任何雙特異性抗體的方法。該方法可以包括例如在允許抗體由細(xì)胞表達(dá)的條件下，培養(yǎng)表達(dá)雙特異性抗體的細(xì)胞。該方法還可以包括從細(xì)胞中或從細(xì)胞在其中培養(yǎng)的培養(yǎng)基中分離雙特異性抗體。 培養(yǎng)的細(xì)胞可以含有核酸表達(dá)載體，其含有編碼雙特異性抗體的核苷酸序列。載體可以整合到細(xì)胞基因組內(nèi)或可以是附加型的。細(xì)胞可以是例如細(xì)菌細(xì)胞、真菌細(xì)胞(例如酵母細(xì)胞)、昆蟲(chóng)細(xì)胞或哺乳動(dòng)物細(xì)胞。細(xì)胞可以是人細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，用于產(chǎn)生本文所述的雙特異性抗體的方法涉及化學(xué)合成抗體。
在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容的特征在于培養(yǎng)的細(xì)胞群體，其中多數(shù)表達(dá)本文所述的雙特異性抗體。群體可以包括細(xì)胞中的2個(gè)或更多個(gè)較大數(shù)(plurality),每個(gè)較大數(shù)包括表達(dá)不同雙特異性抗體的細(xì)胞。
如本文使用的，在2個(gè)或更多個(gè)原子或分子單位之間(例如在2個(gè)不同的單特異性抗體或單特異性抗體的抗原結(jié)合片段之間)的相互作用的背景中的“與之結(jié)合”，包括2個(gè)或更多個(gè)原子或分子單位的任何共價(jià)或非共價(jià)鍵合或物理混合物。共價(jià)鍵(共享一對(duì)或多對(duì)價(jià)電子的2個(gè)原子)的化學(xué)性質(zhì)是本領(lǐng)域已知的，并且包括例如二硫鍵或肽鍵。非共價(jià)鍵是在不涉及價(jià)電子對(duì)共享的原子或分子之間的化學(xué)鍵。例如，非共價(jià)相互作用包括例如疏水作用、氫鍵合相互作用、離子鍵合、范德瓦爾斯鍵合(Van der Waals bonding)或偶極-偶極相互作用。此種非共價(jià)相互作用的例子包括例如結(jié)合對(duì)相互作用(結(jié)合對(duì)的第一個(gè)和第二個(gè)成員的相互作用，例如鏈霉抗生物素蛋白和生物素之間的相互作用)。例如，雙特異性抗體可以含有或是通過(guò)抗生物素蛋白/鏈霉抗生物素蛋白結(jié)合對(duì)非共價(jià)連接在一起的第一種單特異性抗體和第二種單特異性抗體。
除非另有定義，在本文中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本公開(kāi)內(nèi)容所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解相同的含義。在沖突的情況下，以本說(shuō)明書(shū)(包括定義)為準(zhǔn)。在下文描述了優(yōu)選的方法和材料，盡管與本文所述的那些相似或等價(jià)的方法和材料也可以用于實(shí)踐或測(cè)試本文公開(kāi)的方法和組合物。在本文中提及的所有出版物、專(zhuān)利申請(qǐng)、專(zhuān)利和其它參考文獻(xiàn)整體引入作為參考。
從下文的描述、實(shí)施例和權(quán)利要求
書(shū)中，將明白本公開(kāi)內(nèi)容的其它特征和優(yōu)點(diǎn)，例如，用于治療受試者中的補(bǔ)體相關(guān)障礙的方法。

附圖簡(jiǎn)沭
圖I是描述在人新生Fe受體(FcRn)小鼠模型中人源化抗人C5抗體的時(shí)間依賴(lài)性β 期清除的線圖。Y軸代表在小鼠的血清中保留的人源化抗體的最初施用量的百分比。X軸代表以天表示的時(shí)間。
圖2是描述關(guān)于人源化抗人C5抗體及其靶抗原C5在患者中的清除的基本途徑的示意圖。游離抗體“Α”指游離(非復(fù)合的)抗體，并且“C”指非復(fù)合的或游離C5?？贵wC5 復(fù)合物由“CA”表示。關(guān)于抗體和C5結(jié)合的速率常數(shù)由“左3”表示，并且關(guān)于復(fù)合物解離的速率常數(shù)由“左4”表示?？贵wC5復(fù)合物可以通過(guò)具有由16”表示的速率常數(shù)的免疫復(fù)合物清除來(lái)消除。游離抗體也如由不同速率常數(shù)“左5”表示的那樣消除。C5由速率常數(shù)左1組成型表達(dá)，并且它由“於”的速率常數(shù)消除。
圖3是描述關(guān)于患者中人源化抗人C5抗體的清除的簡(jiǎn)化系列途徑的示意圖。 “mAb”指人源化抗體?！癈”指游離C5。在這個(gè)簡(jiǎn)化途徑中，免疫復(fù)合物清除具有“A7”的速率常數(shù)。游離抗體清除由一階方程A = A0 X e(_i8t)(等式2;參見(jiàn)下文)決定，其中“t”表示時(shí)間，并且18”是速率常數(shù)。免疫復(fù)合物清除由零階方程式A = A0發(fā)明詳述
本公開(kāi)內(nèi)容提供了對(duì)于抑制末端補(bǔ)體中(例如C5b-9 TCC的裝配和/或活性)和C5a過(guò)敏毒素介導(dǎo)的炎癥的一種或兩種有用的雙特異性抗體。雖然決不預(yù)期是限制性的，但在下文詳細(xì)闡述且在工作實(shí)施例中例示了示例性雙特異性抗體、綴合物、藥物組合物和制劑、和關(guān)于使用前述任何一種的方法。
抗體
本文所述的雙特異性抗體分子是結(jié)合2個(gè)或更多個(gè)(例如2、3、4、5或6個(gè)或更多個(gè))不同表位的那種。例如，雙特異性抗體可以結(jié)合2種或更多種(例如2、3、4、5或6種或更多種) 不同蛋白質(zhì)，其中蛋白質(zhì)中的至少2種選自C5a，C5b，關(guān)于C5a的受體(例如C5aRl或C5L2 )， 和TCC的組分或中間體例如C5b-6、C5b-7、C5b-8或C5b_9。例如，雙特異性抗體可以是結(jié)合C5a和C5b的那種。雙特異性抗體可以是結(jié)合C5aR和C5a的那種。在另一個(gè)例子中，雙特異性抗體可以是結(jié)合C5aRl和C5b的那種。在一些實(shí)施方案中，本文所述的雙特異性抗體結(jié)合選自 C5a、C5aRl、C5L2、C5b、C5b-6、C5b-7、C5b-8 和 C5b_9 的 2 種不同蛋白質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，雙特異性抗體不結(jié)合全長(zhǎng)或成熟C5。
本文所述的抗體可以用于許多診斷和/或治療應(yīng)用中。例如，結(jié)合C5b、C5b_6、C5b-7、C5b-8和/或C5b-9的本文所述的雙特異性抗體對(duì)于在體外或在體內(nèi)抑制末端補(bǔ)體有用。在一些實(shí)施方案中，結(jié)合C5a和C5aRl中的一種或兩種的抗體對(duì)于抑制C5a過(guò)敏毒素相關(guān)的炎癥應(yīng)答有用。因此，本文所述的抗體對(duì)于預(yù)防、治療或改善受試者中的多種補(bǔ)體相關(guān)狀況的一種或多種癥狀有用，例如但決不限于PNH、溶血性尿毒性綜合征(HUS)、AMD、 哮喘和膿毒病。
在一些實(shí)施方案中，本文所述的雙特異性抗體的至少一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合C5a， 但不結(jié)合全長(zhǎng)、天然C5。全長(zhǎng)C5 (例如C5的氨基酸序列)在例如Haviland等人(1991)/ Immunol 146 O) :362-8 中描述。(還參見(jiàn) Genbank 登記號(hào) AAA51925。)。C5 原是 1676 個(gè)氨基酸殘基的前體蛋白。前18肽(編號(hào)-18至-I)構(gòu)成從前體蛋白切割的信號(hào)肽。剩余的 1658個(gè)氨基酸的蛋白在2個(gè)位置被切割，以形成α和β鏈。第一個(gè)切割事件發(fā)生在氨基酸殘基655和656之間。第二個(gè)切割發(fā)生在氨基酸殘基659至660之間。2個(gè)切割事件導(dǎo)致3個(gè)不同的多肽片段的形成(i)包含氨基酸1-655的片段，它被稱(chēng)作β鏈；(ii)包含氨基酸660-1658的片段，它被稱(chēng)作α鏈；和(iii )由氨基酸656-659組成的四肽片段。α 鏈和β鏈多肽片段經(jīng)由二硫鍵彼此相連，并構(gòu)成成熟的C5蛋白。通過(guò)在殘基733和734 之間切割α鏈，這導(dǎo)致C5a片段(氨基酸660-733)的釋放，CP或AP C5轉(zhuǎn)化酶活化成熟的C5。成熟的C5的剩余部分是片段C5b，其含有與β鏈二硫鍵連接的α鏈的殘基734 -1658。
在體內(nèi)，C5a被血清酶(羧肽酶B)快速地代謝成73氨基酸形式，稱(chēng)作“C5a des-Arg”，其已經(jīng)喪失羧基端精氨酸殘基。因此，在一些實(shí)施方案中，結(jié)合C5a的抗原結(jié)合部位也結(jié)合脫精氨酸的C5a。在一些實(shí)施方案中，結(jié)合C5a的抗原結(jié)合部位不結(jié)合脫精氨酸的 C5a。
在一些實(shí)施方案中，本文所述的雙特異性抗體的至少一個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合在C5a中存在的新表位(neoepitope)，即在從成熟C5的α鏈片段釋放出C5a時(shí)變得暴露的表位。結(jié)合C5a (例如，在C5a中存在的新表位)的抗體是本領(lǐng)域已知的，生成這樣的抗體的方法也是本領(lǐng)域已知的。例如，結(jié)合C5a的抗體可以具有在下述任一篇參考文獻(xiàn)中所述的 C5a新表位特異性抗體的結(jié)合特異性例如，PCT公開(kāi)號(hào)WO 01/15731 ；Ames等人(1994)/ ImmunoIIM31 ■ 4572-4581 ；InoueC I^mXomplement Inflamm 6(3):219-222 ;和美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6，866，845。在另一個(gè)實(shí)例中，結(jié)合C5a的雙特異性抗體可以具有商業(yè)的C5a新表位-特異性抗體的結(jié)合特異性，所述抗體例如，但不限于，sc-52633 (Santa Cruz Biotechnology, Inc. , Santa Cruz, California)、152-1486 (BD Pharmingen/BD Biosciences)、abll877 (Abeam,Cambridge,Massachusetts)和 HM2079 (克隆 2952 ；HyCuIt Biotechnology,荷蘭)。 在一些實(shí)施方案中，結(jié)合C5a的雙特異性抗體可以交叉阻斷(crossblock)任一種前述C5a 新表位-特異性抗體的結(jié)合。
如本文使用的，術(shù)語(yǔ)“交叉阻斷抗體”指相對(duì)于在不存在主題抗體的情況下參考抗體與表位的結(jié)合量，降低參考抗體與表位的結(jié)合量的主題雙特異性抗體。用于測(cè)定主題雙特異性抗體是否交叉阻斷參考抗體與表位的結(jié)合的合適方法是本領(lǐng)域已知的。
在一些實(shí)施方案中，本文所述的雙特異性抗體的至少一個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合哺乳動(dòng)物(例如，人)形式的C5a。例如，抗原結(jié)合部位可以結(jié)合具有下述氨基酸序列的人C5a 蛋白TLQKKIEEIAAKYKHSVVKKCCYDGACVNNDETCEQRAARISLGPRCIKAFTECCVVASQLRANISHK DMQLGR (SEQ ID N0:1)?？乖Y(jié)合部位可以在下述氨基酸序列內(nèi)的或與其重疊的表位處結(jié)合人 C5a :CCYDGACVNNDETCEQRAAR (SEQ ID NO:2) ；KCCYDGACVNNDETCEQR (SEQ ID NO:3) ；VNNDETCEQR (SEQ ID NO:4) ；VNNDET (SEQ ID NO:5) ；AARISLGPR (SEQ ID NO:6) ；CCYDGACVNNDETCEQRAA (SEQ ID NO:7) ；CCYDGACVNNDETCEQRA (SEQ ID N0:8)； CCYDGACVNNDETCEQR (SEQ ID NO:9)；CCYDGACVNNDETCEQ (SEQ ID NO: 10)；CCYDGACVNNDETCE (SEQ ID NO:11) ；CYDGACVNNDETCEQRAAR (SEQ ID NO:12) ；YDGACVNNDETCEQRAAR (SEQ ID N0:13);或CYDGACVNNDETCEQRAAR (SEQ ID N0:14)。在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合部位可以結(jié)合含有這樣的氨基酸序列的人C5a蛋白或其片段，所述氨基酸序列含有在SEQ ID NO: 1-14 中任一個(gè)所述的至少 4 個(gè)(例如，至少 4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16 或 17 或更多個(gè))連續(xù)氨基酸，或由其組成。本文所述的抗體可以結(jié)合的其它C5a蛋白片段和用于生成合適的C5a-特異性的抗原結(jié)合部位的方法闡述在例如美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4，686，100中，其公開(kāi)內(nèi)容整體引入本文作為參考。
如本文使用的，抗體的“抗原結(jié)合部位”指與抗原做出特異性、物理接觸的抗體分子的表面?？乖Y(jié)合部位一般由在免疫球蛋白的高變區(qū)內(nèi)的6個(gè)高變環(huán)或互補(bǔ)性決定區(qū) (CDRs)組成，3個(gè)⑶Rs來(lái)自免疫球蛋白分子的輕鏈，并且3個(gè)⑶Rs來(lái)自免疫球蛋白分子的重鏈。在輕和重鏈多肽的高變區(qū)內(nèi)CDRs的確切邊界已根據(jù)不同方法進(jìn)行不同定義。在一些實(shí)施方案中，在輕或重鏈可變結(jié)構(gòu)域內(nèi)⑶Rs的位置可以如由Kabat等人(1991)“Sequences of Proteins of Immunological Interest. ” NIH 公開(kāi)號(hào) 91-3242, U. S. Department of Health and Human Services, Bethesda, MD 定義的。在此種情況下，CDRs 可以稱(chēng)為“Kabat ⑶Rs (例如，“Kabat IXDR2”或“Kabat HCDR1”)。在一些實(shí)施方案中，輕或重鏈可變區(qū)的 ⑶Rs的位置可以如由Chothia等人(1989)艙tore 877-883定義的。因此，這些區(qū)域可以分別稱(chēng)為 “Chothia CDRs，，(例如，“Chothia LCDR2” 或 “Chothia HCDR3”)。
在一些實(shí)施方案中，雙特異性抗體與C5a的結(jié)合可以抑制C5a的生物活性。用于測(cè)量C5a活性的方法包括，例如，趨化性測(cè)定、RIAs或ELISAs (參見(jiàn)，例如，Ward和Zvaifler (1971)/ Clin InvesfoQ (3) :606-16 和 Wurzner 等Cotnplenient Inflamm 士 328-340)。在一些實(shí)施方案中，抗體與C5a的結(jié)合可以抑制C5a和C5aRl之間的相互作用。適用于檢測(cè)和/或測(cè)量C5a和C5aRl之間的相互作用(在有和沒(méi)有抗體存在下)的方法是本領(lǐng)域已知的，且描述在例如 Mary 和 Boulay (1993)J Haematol^l (5) : 282-287 ； Kaneko 等)Immunology 86 (I): 149-154 :Giannini 等人(1995)/ChenfH
(32): 19166-19172和美國(guó)專(zhuān)利號(hào)20060160726中。例如，在有和沒(méi)有抗體存在下，可以評(píng)價(jià)可檢測(cè)地標(biāo)記的(例如，放射性標(biāo)記的)C5a與表達(dá)C5aRl的外周血單核細(xì)胞的結(jié)合。與在沒(méi)有抗體存在下結(jié)合的量相比，在有抗體存在下結(jié)合C5aRl的可檢測(cè)地標(biāo)記的C5a的量的減少指示所述抗體抑制C5a和C5aRl之間的相互作用。在一些實(shí)施方案中，抗體與C5a的結(jié)合可以抑制C5a和C5L2之間的相互作用(參見(jiàn)下文)。用于檢測(cè)和/或測(cè)量C5a和C5L2之間的相互作用的方法是本領(lǐng)域已知的，且描述在例如Ward mmJ Mol MedSl (4):375-378 和 Chen 等人(2007)艙tore446 (7132) :203-207 (參見(jiàn)下文)中。
在一些實(shí)施方案中，本文所述的雙特異性抗體的至少一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合C5b， 但是不結(jié)合全長(zhǎng)、天然C5。C5b的結(jié)構(gòu)如上所述,且也詳述在例如，Miiller-Eberhard( 1985)Biochem Soc SvmphQ: 235-246 ;Yamamoto 和 Gewurz (1978)/ Immuno112Q (6): 2008-2015 ； 和Haviland等人(1991)，同上。C5b與C6、C7和C8組合，以在靶細(xì)胞表面處形成C5b_8 復(fù)合物。在系列組合過(guò)程中形成的蛋白復(fù)合物中間體包括C5b-6 (包括C5b和C6)、C5b-7 (包括C5b、C6和C7)和C5b-8 (包括C5b、C6、C7和C8)。在結(jié)合幾個(gè)C9分子時(shí)，形成膜攻擊復(fù)合物(MAC、C5b-9末端補(bǔ)體復(fù)合物(TCC))。當(dāng)足夠數(shù)目的MACs插入靶細(xì)胞膜中時(shí)，它們產(chǎn)生的開(kāi)口(MAC孔)介導(dǎo)靶細(xì)胞的快速滲透裂解。
在一些實(shí)施方案中，本文所述的雙特異性抗體與C5b的結(jié)合可以抑制C5b和C6之間的相互作用。在一些實(shí)施方案中，抗體與C5b的結(jié)合可以抑制C5b-9 MAC-TCC的裝配或活性。在一些實(shí)施方案中，雙特異性抗體與C5b的結(jié)合可以抑制補(bǔ)體-依賴(lài)性的細(xì)胞裂解 (例如，體外和/或體內(nèi))。適用于評(píng)價(jià)抗體是否抑制補(bǔ)體-依賴(lài)性的裂解的方法包括，例如，溶血測(cè)定或用于檢測(cè)可溶性C5b_9的活性的其它功能測(cè)定。例如,通過(guò)Kabat和Mayer (編)，“Experimental Immunochemistry,第 2 版，，，135-240, Springfield, IL, CC Thomas (1961)，第135-139頁(yè)所述的溶血測(cè)定，或該測(cè)定的常規(guī)變體，諸如在例如Hillmen等人 mm N Engl T Med^ (6) :552中所述的雞紅細(xì)胞溶血方法，可以測(cè)量在有抗體存在下補(bǔ)體的細(xì)胞裂解能力的降低。
結(jié)合C5b的抗體以及制備這樣的抗體的方法是本領(lǐng)域已知的。參見(jiàn)，例如，美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6，355，245。可商業(yè)得到的抗_C5b抗體可從許多銷(xiāo)售商得到，包括，例如，Hycult Biotechnology (目錄號(hào)HM2080 ;克隆 568)和 Abeam (ab46151 或 ab46168)。
在一些實(shí)施方案中，本文所述的雙特異性抗體的至少一個(gè)抗原結(jié)合部位可以結(jié)合哺乳動(dòng)物(例如，人)形式的C5b。例如，抗原結(jié)合部位可以結(jié)合具有下述氨基酸序列的人C5b 蛋白的一部分
權(quán)利要求
1.一種雙特異性抗體，其結(jié)合(a) C5a和C5aRl ； (b) C5a和C5b ；(c) C5b和C5aRl ； (d)C5a 和 C5L2 ;(e)C5b 和 C5L2 ；(f)C5aRl 和 C5L2 ;(g)C5b_6 和 C5a ;(h)C5b_6 和 C5b ；(i)C5b-6 和 C5aRl ;或(j) C5b_6 和 C5L2。
2.一種包含至少2個(gè)不同抗原結(jié)合部位的雙特異性抗體，其中至少一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合C5a，并且至少一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合C5b或C5aR。
3.—種包含至少2個(gè)不同抗原結(jié)合部位的雙特異性抗體，其中至少一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合C5b，并且至少一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合C5aR。
4.一種包含至少2個(gè)不同抗原結(jié)合部位的雙特異性抗體，其中(i )至少一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合C5a或C5b ;和(ii)至少一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合關(guān)于C5a的細(xì)胞受體。
5.—種包含至少2個(gè)不同抗原結(jié)合部位的雙特異性抗體，其中(i)至少一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合C5a、C5b或關(guān)于C5a的細(xì)胞受體；和(ii)至少一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合C5b-6。
6.權(quán)利要求
4或5的雙特異性抗體，其中所述細(xì)胞受體是C5aRl。
7.權(quán)利要求
4或5的雙特異性抗體，其中所述細(xì)胞受體是C5L2。
8.一種對(duì)于下述中的至少2種具有結(jié)合特異性的雙特異性抗體C5a、C5aRl、C5b、 C5L2、C5b-6、C5b_7、C5b_8 和 C5b_9。
9.權(quán)利要求
1-8中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述抗體不結(jié)合全長(zhǎng)C5。
10.權(quán)利要求
I或5-9中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述抗體不結(jié)合非復(fù)合的C5b或非復(fù)合的C6。
11.一種雙特異性抗體，其包含(i )結(jié)合C5a的第一個(gè)抗原結(jié)合部位；和(ii)結(jié)合關(guān)于C5a的細(xì)胞受體的第二個(gè)抗原結(jié)合部位。
12.權(quán)利要求
11的雙特異性抗體，其中所述第一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合脫精氨酸的C5a。
13.權(quán)利要求
11或12的雙特異性抗體，其中所述第一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合哺乳動(dòng)物C5a0
14.權(quán)利要求
13的雙特異性抗體，其中所述哺乳動(dòng)物C5a是人C5a。
15.權(quán)利要求
11的雙特異性抗體，其中所述第一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合具有這樣的氨基酸序列的C5a蛋白質(zhì)，所述氨基酸序列與SEQ ID NO: I中所示的氨基酸序列至少90%等同。
16.權(quán)利要求
11的雙特異性抗體，其中所述第一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合包含SEQID NOs:2-14中任一個(gè)所示的氨基酸序列的人C5a蛋白質(zhì)的片段。
17.權(quán)利 要求11的雙特異性抗體，其中所述第一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合表位，所述表位包含SEQ ID NOs :1-14中任一個(gè)所示的至少4個(gè)連續(xù)氨基酸。
18.權(quán)利要求
11-17中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述細(xì)胞受體是C5aRl。
19.權(quán)利要求
18的雙特異性抗體，其中C5aRl是哺乳動(dòng)物C5aRl。
20.權(quán)利要求
19的雙特異性抗體，其中所述哺乳動(dòng)物C5aRl是人C5aRl。
21.權(quán)利要求
18的雙特異性抗體，其中所述第二個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合包含這樣的氨基酸序列的C5aRl蛋白質(zhì)，所述氨基酸序列與SEQ ID NO: 17中所示的氨基酸序列至少90%等同。
22.權(quán)利要求
18的雙特異性抗體，其中所述第二個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合包含SEQID NOs :18-22中任一個(gè)所示的氨基酸序列的人C5aRl蛋白質(zhì)的片段。
23.權(quán)利要求
18的雙特異性抗體，其中所述第二個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合表位，所述表位包含SEQ ID NOs: 17-22中任一個(gè)所示的至少4個(gè)連續(xù)氨基酸。
24.權(quán)利要求
11-17中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述細(xì)胞受體是C5L2。
25.權(quán)利要求
24中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中C5L2是哺乳動(dòng)物C5L2。
26.權(quán)利要求
25的雙特異性抗體，其中所述哺乳動(dòng)物C5L2是人C5L2。
27.權(quán)利要求
24的雙特異性抗體，其中所述第二個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合包含這樣的氨基酸序列的C5L2蛋白質(zhì)，所述氨基酸序列與SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列至少90%等同。
28.—種雙特異性抗體，其包含(i )結(jié)合C5a的第一個(gè)抗原結(jié)合部位；和(ii)結(jié)合C5b的第二個(gè)抗原結(jié)合部位。
29.權(quán)利要求
28的雙特異性抗體，其中所述第一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合脫精氨酸的C5a。
30.權(quán)利要求
28或29的雙特異性抗體，其中所述第一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合哺乳動(dòng)物C5a0
31.權(quán)利要求
30的雙特異性抗體，其中所述哺乳動(dòng)物C5a是人C5a。
32.權(quán)利要求
28的雙特異性抗體，其中所述第一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合包含這樣的氨基酸序列的C5a蛋白質(zhì)，所述氨基酸序列與SEQ ID NO: I中所示的氨基酸序列至少90%等同。
33.權(quán)利要求
28的雙特異性抗體，其中所述第一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合包含SEQID NOs :2-14中任一個(gè)所示的氨基酸序列的人C5a蛋白質(zhì)的片段。
34.權(quán)利要求
28的雙特異性抗體，其中所述第一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合表位，所述表位包含SEQ ID NOs:1-14中任一個(gè)所示的至少4個(gè)連續(xù)氨基酸。
35.權(quán)利要求
28-34中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述第二個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合哺乳動(dòng)物C5b。
36.權(quán)利要求
35的雙特異性抗體，其中所述哺乳動(dòng)物C5b是人C5b。
37.權(quán)利要求
28的雙特異性抗體，其中所述第二個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合包含這樣的氨基酸序列的C5b蛋白質(zhì)，所述氨基酸序列與SEQ ID NO: 15或16中所示的氨基酸序列至少90%等同。
38.權(quán)利要求
28的雙特異性抗體，其中所述第二個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合包含SEQID NO: 15或16中所示的至少4個(gè)連續(xù)氨基酸的表位。
39.權(quán)利要求
28-38中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述抗體不結(jié)合全長(zhǎng)C5。
40.一種雙特異性抗體，其包含(i )結(jié)合C5b的第一個(gè)抗原結(jié)合部位；和(ii)結(jié)合關(guān)于C5a的細(xì)胞受體的第二個(gè)抗原結(jié)合部位。
41.權(quán)利要求
40的雙特異性抗體，其中所述第一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合哺乳動(dòng)物C5b。
42.權(quán)利要求
41的雙特異性抗體，其中所述哺乳動(dòng)物C5b是人C5b。
43.權(quán)利要求
40的雙特異性抗體，其中所述第一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合與SEQID NO: 15 或16中所示的氨基酸序列至少90%等同的氨基酸序列。
44.權(quán)利要求
40的雙特異性抗體，其中所述第一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合包含SEQID NO: 15或16中所示的至少4個(gè)連續(xù)氨基酸的表位。
45.權(quán)利要求
40-44中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述細(xì)胞受體是C5aRl。
46.權(quán)利要求
45的雙特異性抗體，其中所述C5aRl是哺乳動(dòng)物C5aRl。
47.權(quán)利要求
46的雙特異性抗體，其中所述哺乳動(dòng)物C5aRl是人C5aRl。
48.權(quán)利要求
40的雙特異性抗體，其中所述第二個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合與SEQID NO: 17 中所示的氨基酸序列至少90%等同的氨基酸序列。
49.權(quán)利要求
40的雙特異性抗體，其中所述第二個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合包含SEQID NOs :18-22中任一個(gè)所示的氨基酸序列的人C5aRl蛋白質(zhì)的片段。
50.權(quán)利要求
40的雙特異性抗體，其中所述第二個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合表位，所述表位包含SEQ ID NOs: 17-22中任一個(gè)所示的至少4個(gè)連續(xù)氨基酸。
51.權(quán)利要求
40-44中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述細(xì)胞受體是C5L2。
52.權(quán)利要求
51中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中C5L2是哺乳動(dòng)物C5L2。
53.權(quán)利要求
52的雙特異性抗體，其中所述哺乳動(dòng)物C5L2是人C5L2。
54.權(quán)利要求
40的雙特異性抗體，其中所述第二個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合與SEQID NO: 23 中所示的氨基酸序列至少90%等同的氨基酸序列。
55.權(quán)利要求
40的雙特異性抗體，其中所述第二個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合包含SEQID NO: 23的至少4個(gè)連續(xù)氨基酸的表位。
56.權(quán)利要求
1-55中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述抗體抑制C5a和關(guān)于C5a的細(xì)胞受體之間的相互作用。
57.權(quán)利要求
1-10或28-55中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述抗體抑制C5b_9復(fù)合物的裝配或活性。
58.權(quán)利要求
1-57中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述抗體抑制C5a依賴(lài)性趨化性。
59.權(quán)利要求
1-10或28-57中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述抗體抑制C5b和C6之間的相互作用。
60.權(quán)利要求
1-10或28-59中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述抗體抑制在體外的補(bǔ)體依賴(lài)性裂解。
61.權(quán)利要求
1-39中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述抗體以至少I(mǎi)O8Μ—1的Ka結(jié)合C5a0
62.權(quán)利要求
1-6、8、18-23或45-50中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述抗體以至少 IO8 IT1 的1 結(jié)合 C5aRl。
63.權(quán)利要求
1-10或28-56中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述抗體以至少I(mǎi)O8IT1的 Ka結(jié)合C5b。
64.權(quán)利要求
1-63中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其進(jìn)一步含有第三個(gè)抗原結(jié)合部位，其結(jié)合全長(zhǎng)C5或選自C6、C7、C8和C9的末端補(bǔ)體蛋白質(zhì)中存在的抗原。
65.權(quán)利要求
1-64中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述抗體是單克隆抗體。
66.權(quán)利要求
1-64中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述抗體是單鏈抗體。
67.權(quán)利要求
1-66中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述抗體是人源化抗體。
68.權(quán)利要求
1-64中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述抗體包含彼此結(jié)合的2種不同單特異性抗體。
69.權(quán)利要求
1-64中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述抗體選自重組抗體、雙抗體、胞內(nèi)抗體、嵌合化或嵌合抗體、去免疫化人抗體、全人抗體和F (ab’ ) 2片段。
70.權(quán)利要求
1-64中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述抗體是單鏈雙抗體、串聯(lián)單鏈 Fv片段、串聯(lián)單鏈雙抗體、或包含單鏈雙抗體和至少部分免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)的融合蛋白。
71.權(quán)利要求
1-64中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述抗體是雙重可變結(jié)構(gòu)域免疫球蛋白。
72.權(quán)利要求
1-64中任一項(xiàng)的雙特異性抗體，其中所述抗體含有異源部分。
73.權(quán)利要求
72的雙特異性抗體，其中所述異源部分是糖。
74.權(quán)利要求
73的雙特異性抗體，其中所述抗體是糖基化的。
75.權(quán)利要求
74的雙特異性抗體，其中所述異源部分是可檢測(cè)標(biāo)記。
76.權(quán)利要求
75的雙特異性抗體，其中所述可檢測(cè)標(biāo)記是熒光標(biāo)記、發(fā)光標(biāo)記、重金屬標(biāo)記、放射性標(biāo)記或酶促標(biāo)記。
77.權(quán)利要求
76的雙特異性抗體，其中所述熒光標(biāo)記選自熒光素、異硫氰酸熒光素(FITC)、綠色熒光蛋白(GFP)、DyLight 488、藻紅蛋白(PE)、碘化丙啶(PI)、PerCP、 PE-Alexa Fluor 700、Cy5、別藻藍(lán)蛋白和 Cy7。
78.權(quán)利要求
76的雙特異性抗體，其中所述酶促標(biāo)記是辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶或螢光素酶。
79.權(quán)利要求
76的雙特異性抗體，其中所述放射性標(biāo)記選自32P、33P、14C、125I、131I、35S和3H。 體。
80.一種組合物，其包含權(quán)利要求
1-79中任一項(xiàng)的雙特異性抗體和藥學(xué)可接受的載
81.權(quán)利要求
80的組合物，其中所述組合物包含權(quán)利要求
11的雙特異性抗體。
82.權(quán)利要求
80的組合物，其中所述組合物包含權(quán)利要求
28的雙特異性抗體。
83.權(quán)利要求
80的組合物，其中所述組合物包含權(quán)利要求
40的雙特異性抗體。
84.一種用于抑制受試者中的末端補(bǔ)體的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用有效抑制所述受試者中的末端補(bǔ)體的量的抗體，其中所述抗體是權(quán)利要求
1、3、4、5、8-10 或28-79中任一項(xiàng)的雙特異性抗體。
85.一種用于治療受試者中的補(bǔ)體相關(guān)障礙的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用有效治療所述受試者中的補(bǔ)體相關(guān)障礙的量的抗體，其中所述抗體是權(quán)利要求
1-79 中任一項(xiàng)的雙特異性抗體。
86.權(quán)利要求
85的方法，其中所述補(bǔ)體相關(guān)障礙是旁路補(bǔ)體途徑相關(guān)障礙。
87.權(quán)利要求
86的方法，其中所述旁路補(bǔ)體途徑相關(guān)障礙選自類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、 缺血再灌注損傷、非典型溶血性尿毒性綜合征、血栓形成性血小板減少性紫癜、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿、致密沉積物病、年齡相關(guān)性黃斑變性、自發(fā)性胎兒丟失、微量免疫血管炎、大皰性表皮松解癥、復(fù)發(fā)性胎兒丟失、多發(fā)性硬化和外傷性腦損傷。
88.權(quán)利要求
85的方法，其中所述補(bǔ)體相關(guān)障礙是經(jīng)典補(bǔ)體途徑相關(guān)障礙。
89.權(quán)利要求
88的方法，其中所述經(jīng)典補(bǔ)體途徑相關(guān)障礙選自重癥肌無(wú)力、冷凝集素疾病、皮肌炎、Graves氏病、Hashimoto氏甲狀腺炎、I型糖尿病、銀屑病、天皰瘡、自身免疫性溶血性貧血、特發(fā)性血小板減少性紫癜、Goodpasture綜合征、抗磷脂綜合征和災(zāi)變性抗磷脂綜合征。
90.權(quán)利要求
85-89中任一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步包括將所述受試者鑒定為具有補(bǔ)體相關(guān)障礙、懷疑具有補(bǔ)體相關(guān)障礙、或處于發(fā)展補(bǔ)體相關(guān)障礙的危險(xiǎn)中。
91.權(quán)利要求
85-90中任一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步包括在所述施用后就所述補(bǔ)體相關(guān)障礙的一種或多種癥狀中的改善監(jiān)控所述受試者。
92.權(quán)利要求
84-91中任一項(xiàng)的方法，其中所述抗體靜脈內(nèi)施用于所述受試者。
93.權(quán)利要求
84-91中任一項(xiàng)的方法，其中所述受試者是哺乳動(dòng)物。
94.權(quán)利要求
93的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人。
專(zhuān)利摘要
本公開(kāi)內(nèi)容涉及可以結(jié)合2個(gè)或更多個(gè)不同表位的雙特異性抗體。例如，本文所述的雙特異性抗體可以結(jié)合2種或更多種不同蛋白質(zhì)，其中蛋白質(zhì)中的至少2種選自C5a，C5b，關(guān)于C5a的細(xì)胞受體(例如C5aR1或C5L2)，C5b-9復(fù)合物，和末端補(bǔ)體的組分或中間體例如C5b-6、C5b-7或C5b-8。本文所述的雙特異性抗體用于例如抑制末端補(bǔ)體(例如C5b-9復(fù)合物的裝配和/或活性)和/或C5a過(guò)敏毒素介導(dǎo)的炎癥(例如C5a介導(dǎo)的炎癥免疫細(xì)胞的趨化性)。因此，雙特異性抗體可以在用于治療多種補(bǔ)體途徑相關(guān)障礙的方法中使用。
文檔編號(hào)A61P31/00GKCN102597005SQ201080037352
公開(kāi)日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2010年6月22日
發(fā)明者P.P.坦布里尼 申請(qǐng)人:阿雷克森制藥公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan