專利名稱：除去脂溶性靶分子的方法，純化血液的透析裝置及洗滌溶液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于純化血液，特別是患有急性和/或慢性腎衰竭的病人的血液的高效、快速方法，更全面地說涉及用于純化具有類似全血或血漿的理化特性的膠體溶液的方法。
對于患有器官衰竭的病人，血液逐漸保留了無窮量的通常稱為“毒素”的各種物質(zhì)，對于健康人，相關(guān)的器官通常能夠從血流中去除這些物質(zhì)。所述毒素的積累最終導(dǎo)致通常稱為器官衰竭的疾病，如果不治療，則導(dǎo)致產(chǎn)生各種類型的損害并且最終導(dǎo)致死亡。用于抗擊所述癥狀最常使用的系統(tǒng)是通過將它們吸附到固體基質(zhì)(血和血漿灌注)上或通過用合適的半滲透膜超濾血液或血漿，或通過在壓力梯度(TMP)的幫助下傳遞過該膜(血和血漿過濾)，或通過將待純化的血液或血漿與膜的一側(cè)接觸，經(jīng)適當(dāng)調(diào)配的洗滌溶液與另一側(cè)接觸進(jìn)行擴(kuò)散(血透析)從而純化血液的毒素。
但是所有上述系統(tǒng)存在缺陷。血灌注是將血液直接滲透過一個吸附物質(zhì)的濾膜，因此該濾膜必須具有高度的生物相容性。通常通過用合適的物質(zhì)覆蓋吸附劑顆粒可達(dá)到該目的，但是這將嚴(yán)重的損害該顆粒的保留毒素能力。在血漿灌注時，首先將血液過濾以便分離血漿，然后將其滲透過吸附劑物質(zhì)。盡管在某種程度上這將解決了灌注期間生物相容性問題，但是過濾期間血液粘度的增加將會導(dǎo)致透過該膜后產(chǎn)生許多凝塊，以致于在許多情況下，必須用抗凝聚劑(肝素)處理血液。
另一方面，血和血漿過濾僅去除高分子量的毒素，并且產(chǎn)生大量的重量損失，必須通過給病人的血液供給灌注溶液進(jìn)行補(bǔ)償。根據(jù)意大利專利申請No.67168-A/90(1990年3月9日申請)，通過使超濾液再生，通過吸附其中的介質(zhì)高分子量毒素，通過將它用空的活性碳成份的血灌注藥液筒(例如由SORIN BIOMEDICA of Saluggia，Italy生產(chǎn)DETOXIL2)過濾，從而可將再生的超濾液用作為灌注溶液可解決上述問題。
血液透析法，特別是如果與上述一種或多種方法結(jié)合使用是最有效的，但是純化時間相對較長，因此在急性狀態(tài)不能完全除去毒性。但是由于只能極少地去除某些疏水物質(zhì)例如血小板激活因子(PAF)、內(nèi)毒素、膽紅素、馬尿酸鹽、蛋白質(zhì)結(jié)合的毒素例如吲哚酚硫酸和游離的分子氧基，最終只能延遲目前的器官衰竭而不能完全阻止。
本發(fā)明的一個目的通過提供從血液、更常規(guī)的是從膠體溶液中快束、有效的去除任何和所有毒素，特別是水溶性的和脂溶性的毒素，克服上面提到的缺陷。
根據(jù)本發(fā)明，提供了從膠體溶液中快速去除脂溶性靶分子的方法，特別是從全血或從全血的超濾液或血漿過濾液中去除毒素和游離基團(tuán)，從而將純化溶液與預(yù)定孔徑的半滲透膜的一側(cè)接觸，并且通過將預(yù)定組分的洗滌溶液與該膜的另一側(cè)接觸而用該膜透析，特征在于在洗滌溶液中加入預(yù)定濃度的通常大于半滲透膜的孔徑的脂質(zhì)體。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了用于純化血液特別是患有器官衰竭的病人的血液的透析裝置，該裝置包括其中流過來自于病人血流的用于純化溶液的第一液動循環(huán)回路；和其中流過洗滌溶液的第二液動循環(huán)回路；以及依次包括預(yù)定孔徑的半滲透膜的濾膜，借助于該膜第一液動循環(huán)回路與第二液動循環(huán)回路進(jìn)行液動相連以便使用于純化的溶液中的毒素?cái)U(kuò)散到洗滌溶液，其特征在于第二液動循環(huán)回路包括給所述第二液動循環(huán)回路供給脂質(zhì)體的裝置。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了用于血液滲透裝置的洗滌溶液，特征在于它含有水基溶劑，其中脂質(zhì)體分散于懸液中。因此該發(fā)明還涉及用于加強(qiáng)透析裝置的性能的含有脂質(zhì)體的洗滌溶液的使用。
借助于實(shí)施例，參照附圖將描述許多非限制性實(shí)施例，其中附
圖1圖解顯示了本發(fā)明透析方法的操作原理；附圖2和3圖解顯示了本發(fā)明的一個試驗(yàn)透析回路的兩個實(shí)例；附圖4圖解顯示了本發(fā)明方法的改進(jìn)形式的基本原理；附圖5顯示本發(fā)明的透析裝置圖；附圖6和7表示附圖2和3試驗(yàn)的檢測結(jié)果。
附圖8圖解顯示現(xiàn)有透析方法的操作原理。
參見附圖8，用于治療患有器官衰竭患者的已知裝置基于已知的透析方法，簡單地說，該透析方法是通過擴(kuò)散經(jīng)過半滲透膜A而去除包含(到膜A的右邊)于血液(或血漿)中的水溶性分子(由黑圈顯示)，并且將其轉(zhuǎn)移到含有合適水溶液的滲透液流(到膜A的左邊)。但是，膜A右邊的有害的脂溶性分子以及血流中的蛋白質(zhì)結(jié)合的分子遺留于患者的血液中。
參見附圖1，本發(fā)明的透析方法類似于已知方法將用于純化的膠體溶液流2(由箭頭顯示)(例如全血或全血的超濾液或血漿濾液)與半滲透膜1的一側(cè)4相接觸，該膜上存在給定大小和排列的許多孔5；以及將含有給定組分的已知水洗液的透析液流3(由箭頭顯示)與膜1的另一相對側(cè)6接觸，較好的是沿相反途徑流向溶液流2，以便膠體溶液2中的水溶性靶分子8例如低分子量毒素穿過膜1的孔5(它們組成了兩個接觸相之間的界面)并且從溶液2擴(kuò)散到透析液3。
根據(jù)本發(fā)明的方法，將通常大于膜1的孔5的預(yù)定濃度的脂質(zhì)體10供給到洗滌溶液3中。根據(jù)本發(fā)明，透析是按常規(guī)方法進(jìn)行的，但是利用了含有一種洗滌溶液的透析液，所述洗滌溶液含有水基溶劑(含有或不含有適當(dāng)?shù)娜苜|(zhì))，其中脂質(zhì)體10分散于懸浮液中，優(yōu)選地，相對于膜1其濃度為1-20g/l。本發(fā)明中使用的脂質(zhì)體10含有直徑為100nm-200nm之間的圓形泡，并且定義為磷脂膜，例如帶有卵磷脂堿或其等同物(磷脂酰絲氨酸，二棕櫚磷脂酰膽堿等)。
如在附圖1中顯示的，透析液3的脂質(zhì)體10的存在不僅可從溶液中去除水溶性分子8，而且可將血流中存在的通常與相應(yīng)蛋白質(zhì)12結(jié)合的許多脂溶液靶分子(毒素)例如毒素11(例如吲哚硫酸)，以及中低分子量的血透析物質(zhì)13(膽紅素、馬尿酸鹽、PAF、可能存在的內(nèi)毒素、過劑量的脂溶液藥物)和游離基因。事實(shí)上，與膜1接觸，與孔5相應(yīng)的脂質(zhì)體10(由于太大不能透過溶液流2)提高了在溶液流3一側(cè)的膜1的疏水性。
因此脂質(zhì)體10可以安全地在其脂膜中整個或部分地捕獲和摻入接近孔5的任何分子13，并且可將它們從液流2中抽到透析液流3中。類似地，基于膜1的疏水性增加，將蛋白質(zhì)12與膜密切接觸，因此可使結(jié)合到蛋白質(zhì)上的脂溶性分子11接近孔5，在此它們被脂質(zhì)體10捕獲(圖1的頂部)并且從液流2中被抽出。類似的操作原理也應(yīng)用到液流2的游離基團(tuán)中。
為了更有效地從液流2中去除游離基團(tuán)，或者至少完全將它們中和，根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案，也可以以已知的方式將一種或多種抗氧化劑，特別是維生素E或輔酶Q/ubiquinol或者單一形式或者混合形式摻入到脂質(zhì)體10中。對于即使不能將游離基團(tuán)進(jìn)入液流3的情況，也可通過接觸透過膜1的孔5的脂質(zhì)體10，可將它們被例如磷脂膜的脂質(zhì)體的抗氧化劑或者本身內(nèi)部的抗氧化劑所中和，可能中和為捕集于由磷脂膜限定的氣泡內(nèi)的水相溶液形式。
根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案，與含有膠體溶液2的進(jìn)入液流相反方向加到膜1上的洗滌溶液3隨后可通過高滲透中空纖維的濾膜20進(jìn)行過濾(附圖4)，所述中氣纖維中在毛細(xì)管外側(cè)填充了吸附物質(zhì)，該濾膜中藏于一個筒21中，其中根據(jù)本發(fā)明用組分類似于或相同于脂質(zhì)體10的磷脂膜覆蓋吸附物質(zhì)。
優(yōu)選地，吸附物質(zhì)含有完全被連續(xù)的磷脂膜23覆蓋的活性碳顆粒22(或微球狀的合成塑料樹脂)。因此將攜帶捕獲的靶分子(毒素)的脂質(zhì)體10與濾膜20密切接觸，其中也是由于顆粒/微粒球體22的吸附能力，將由脂質(zhì)體捕獲的脂溶性物質(zhì)轉(zhuǎn)移到磷脂膜23上并收集于濾膜20的內(nèi)部，而從保留的分子中釋放的脂質(zhì)體10具有“再生性”并且用于形成“清潔”液流3，用于在膜1上再循環(huán)。
附圖2和3圖解顯示用于實(shí)施的兩種裝置，并且可用作為本發(fā)明方法的“體外”試驗(yàn)檢測。更具體地說，附圖2裝置含有用于純化溶液的第一液動循環(huán)回路30；用于洗滌溶液的第二液動循環(huán)回路；和一個濾器32，試驗(yàn)器32含有一個套管33和與膜1相同的預(yù)定孔徑的藏于套管33中的半滲透膜(未顯示)，通過該回路30由液動循環(huán)作用而與回路31相通，以使用于純化溶液中預(yù)定的靶分子(例如毒素)擴(kuò)散到洗滌溶液中。在顯示的實(shí)施例中。如所述的該實(shí)施例是一種“體外”試驗(yàn)裝置，回路30和31是閉合回路，各種具有相應(yīng)的泵34；回路30提供用于待純化溶液例如人或動物血漿或血液的罐35；回路31帶有向回路31中的洗滌溶液提供脂質(zhì)體的裝置，并且在所示實(shí)施例中含有優(yōu)選已含有所需濃度的懸浮于水溶液中的脂質(zhì)體的罐36。因此，在這種情況下，給回路31提供脂質(zhì)體的裝置同時也可給洗滌溶液提供脂質(zhì)體，因此包含有分散于起始點(diǎn)右側(cè)的懸液中的脂質(zhì)體。換一種方法，灌36僅含有脂質(zhì)體(或其在懸浮液中的濃度非常高)，并且裝備了用于控制脂質(zhì)體釋放到回路31中的未顯示的已知裝置(例如電子控制計(jì)量閥和/或泵)。
更具體地說，濾器32含有已知量的高滲透性中空纖維，在內(nèi)部它們與回路30為液動循環(huán)連接并且藏于筒33內(nèi)部，以便洗滌溶液在筒33內(nèi)、中空纖維外循環(huán)，而待純化溶液在中空纖維內(nèi)循環(huán)以按照附圖1的方式再生，其中半滲透膜含有中空纖維的側(cè)壁。
為了按照附圖4的方案進(jìn)行操作，回路31與灌注筒38串聯(lián)安裝，筒38內(nèi)藏有吸附材料的濾膜20；或者濾膜20直接插入到筒33內(nèi)(以便形成合適的筒)并且與形成半滲透膜1的中空纖維鄰接。對于另一種情況，回路31不可變化地是一種閉合回路，回路30顯然可以是由人體閉合的“開放”回路，以便帶有上述變異的附圖2不僅可“體外”操作，而且可“體內(nèi)”操作，在這種情況下可直接將待純化溶液從患者血流中取出并且當(dāng)被純化后即從濾膜32流回到患者體內(nèi)。
附圖3的裝置，指出了類似或相同于描述內(nèi)容的詳細(xì)情況，為了簡便用相同的編號系統(tǒng)，該裝置與附圖2不相同，它能提供與直接的透析相反的雙過濾(diafiltration)。就是說，附圖2裝置的回路30、31這樣的大小可以使相同體積的兩種溶液(被純化溶液和洗滌溶液)循環(huán)，例如100、200ml/分，以便膜1的兩側(cè)沒有壓差，附圖3裝置的回路30a和31a這樣的大小可以使不同體積的兩種溶液，例如在30a中300ml的待純化溶液，和在31a中200ml的脂質(zhì)體洗滌溶液，進(jìn)行循環(huán)。
因此，在濾器32的膜上，形成壓力梯度(TMP)，這種梯度不僅可以通過膜擴(kuò)散而且可以對流，并且回路30a中的溶液由于其溶質(zhì)(和溶劑的一部分)轉(zhuǎn)移到洗滌溶液而損失重量。與回路31不同，回路31a與第二濾器40串聯(lián)相連，所述濾器40的特征是類似于膜1的半滲透膜，其孔小于洗滌溶液中的脂質(zhì)體，并且從該回路延伸出在濾器32的下游與回路30a緊密相接的支路41。這樣，由于壓力梯度流到回路31a中的部分純化溶液在濾器32上回收，純化并且在濾器40中去除脂質(zhì)體，并且沿著支路41流回到回路30a作為再灌注溶液，以便完全彌補(bǔ)重量損失。在這種情況下，回路31a還提供了用于再生脂質(zhì)體的筒38，或者如前描述的吸附物質(zhì)的濾器20藏于濾器32的筒內(nèi)。
附圖5圖解顯示用于純化血液、特別是患有器官衰竭的患者的血液的透析裝置100的主要部分，其中含有一個開放回路，該回路含有位于用于將該裝置與已知回路(未顯示)連接的輸入導(dǎo)管104和輸出導(dǎo)管105之間的液動地互相串聯(lián)(串聯(lián)連接)的血過濾元件101和血透析元件103，所述已知回路從患者體內(nèi)吸取血液并且將純化血液回到患者體內(nèi)。在意大利實(shí)用新型專利No.198528和意大利專利申請No.67168-A/90中詳細(xì)描述了元件101、103和下文中指出的其它結(jié)構(gòu)，按照需要將這兩篇文獻(xiàn)引入本文作參考。
待純化血液沿回路104流動，流過串聯(lián)元件101和103，并且沿導(dǎo)管105流出、純化，在元件101中形成的血液透析產(chǎn)物(超濾液)沿輸出導(dǎo)管107流出；導(dǎo)管108可將再灌注溶液供給將血滲透元件103與元件101連接的導(dǎo)管106，以部分或全部補(bǔ)償在元件101中超濾溶液的溶液(血液)過程中產(chǎn)生的重量損失。更具體地說，通過將所提取的超濾液沿導(dǎo)管107再生而形成再灌注液，為此，裝置100含有與連接導(dǎo)管107、108串聯(lián)的再生裝置110，并且包含有空的血液灌注碳筒，例如由SorinBiomedica S.P.A.of Saluggia，Italy生產(chǎn)的商標(biāo)為Detoxil2筒(在意大利專利申請No.67168-A/90描述的)，或含有相同于附圖2或3的裝置B，不同的只是它是閉合型的，相應(yīng)的回路30或30a是開放的，例如灌35被去除，回路的另外末端分別與回路107和108連接。
根據(jù)裝置100的變化形式，可將點(diǎn)劃線矩形內(nèi)的元件方框120用附圖3的點(diǎn)劃線矩形內(nèi)的方框121替代，以便零件101用濾器32替代，其輸入和輸出分別與導(dǎo)管107和108連接。
血液透析元件103與由虛線形成的方框指示的洗滌溶液回路120相連接。根據(jù)另一種變化形式，常規(guī)回路120可以被附圖2的脂質(zhì)體回路31替代，或者被附圖3的回路31a替代，與回路41形成完整回路，在這種情況下元件101和111明顯地應(yīng)用于元件103的上游。
因此，裝置100總是含有至少由透析或血透析濾器(101，32和103)分隔開的兩個液動循環(huán)回路；第一個回路含有從患者血流中回收的純化溶液(直接或間接地通過另一回路與一個連接濾器例如101相連接)；第二個回路含有帶有脂質(zhì)體10懸液的洗滌溶液。與回路31a相似，也可以給第二回路串聯(lián)地裝備裝置40、41，用于從洗滌液中分離出大量不含脂質(zhì)體或毒素的超濾液，以及用于將其加入到濾器下游的第一回路。
依次，第一回路含有位于透析(或雙過濾)濾器上游的血液器，例如101，用于將大量的超濾液從患者血流中分離出來，也可以從血液濾器的下游接出一個分路，連接到用于供應(yīng)再灌注溶液的裝置上。該裝置可以含有連接到血液濾器上的裝置，以便用于回收超濾液和將其連續(xù)地通過一個活性碳血灌注筒例如111加料，然后將其加回到第一回路，作為再灌注溶液。另一種方法，血液灌注筒111可以串聯(lián)地聯(lián)接到第一回路上。借助于實(shí)施例將描述本發(fā)明的許多實(shí)施方案。
實(shí)施例1-脂質(zhì)體制備用下述材料制備脂質(zhì)體-從雞蛋清和大豆獲得的100％的純度為99％以上的L-α-磷脂酰膽堿(PC)。采用GMP獲得所使用的磷脂，該磷脂為藥用級，用分光光度計(jì)分析結(jié)果顯示不含有溶血磷脂、過氧化氫、氫氧化物和脂肪酸，并且由Avanti Polar Lipids(Alabama，USA)供應(yīng)。
-由Avanti Polar Lipids(Alabama，USA)制造和供應(yīng)的合成的輔酶Q/Ubiquinol抗氧化劑。
將磷脂和以占總重量0.5％的量摻入到磷脂中的抗氧化劑溶解于燒瓶中的乙醇中，用一個罩子蓋住使溶劑蒸發(fā)；在溶劑完全蒸發(fā)之前，將燒瓶接觸氮?dú)饬饕詭椭軇┱舭l(fā)并且保證磷脂和抗氧化劑不被氧化；蒸發(fā)之后，在燒瓶底部磷脂和抗氧化劑形成一薄層，對其進(jìn)行檢測看是否存在氣泡或其他溶劑殘基；檢測時加入甲醇或乙醇或氯仿重新使薄層溶解，重復(fù)蒸發(fā)過程直到形成良好的薄層，然后將該薄層加到幾毫升的經(jīng)改良的磷酸緩沖鹽水(PBS)中，該緩沖鹽水含有磷酸鈉0.008M、磷酸鉀0.002M、氯化鈉0.14M和7.4pH氯化鉀0.01M(從Pierce，Rockford Illinois，USA購買)-通常幾毫升足于將磷脂水合并且溶解薄層；一旦薄層溶解，在不變的氮?dú)饬髦胁僮?，密封燒瓶，使其中保留氮?dú)?，激烈地?cái)嚢?0分鐘，檢查，如果仍顯示微量的薄層或磷脂“團(tuán)”再進(jìn)行攪拌，然后加入PBS獲得濃度為每ml PBS中含有3-10mg的磷脂濃度；并且用多薄層泡囊(MLV)收集磷脂。
然后通過一個10ml容量的脂質(zhì)體擠壓機(jī)(LIPEX BiomembranesInc.，Vancouver，British Columbia，Canada)加入MLV溶液，所述擠壓機(jī)裝備了兩個孔徑為100或200nm的可隨意使用的25mm聚碳酸鹽濾器。所供給的MLV溶液通過擠壓機(jī)擠壓10次以便確保均勻的脂質(zhì)體形成，所形成的是直徑類似于濾器孔徑(100或200nm)的單片薄層。
-包覆的碳制備將約50gr的XEN546(Supelco)置于250ml的燒瓶中；將溶于100％氯仿中的10克卵磷脂加入燒瓶中，在氮?dú)饬髦芯徛財(cái)嚢枞芤?；?dāng)干燥時，將碳置于含有K2SO4溶液的干燥器中，從而將磷脂收集成雙片層；然后向200ml的PBS中加入碳并通過一臺聚礬HFT-02濾器(BELLCO)抽吸；在濾器充滿之后，去除過量的PBS。
實(shí)施例II將母牛的血與PBS中的脂質(zhì)體或僅PBS溶液一起保溫，如表1所示A1ml脂質(zhì)體+1ml血液B0.5ml脂質(zhì)體+1ml血液+O.5ml PBSC1ml血液+1ml PBSD1ml脂質(zhì)體+1ml血液+2μl氯仿E1ml脂質(zhì)體+1ml血液+5μl氯仿F1ml脂質(zhì)體+1ml血液+10μl氯仿G1ml血液+1ml PBS+2μl甲醇H1ml脂質(zhì)體+1ml血液+5μl甲醇I1ml脂質(zhì)體+1ml血液+10μl甲醇J1ml脂質(zhì)體+1ml血液+2μl乙醇K1ml脂質(zhì)體+1ml血液+5μl乙醇L1ml脂質(zhì)體+1ml血液+10μl乙醇M1ml PBS+1ml血液+2μl氯仿N1ml PBS+1ml血液+2μl甲醇O1ml PBS+1ml血液+2μl乙醇在10ml聚丙烯管中室溫下以2,500rpm將血漿離心15分鐘；利用BECKMAN7400二極介質(zhì)分光光計(jì)計(jì)分析血漿組分的光譜(200-800nm)；并且在O、5、15、30分鐘和1、6、24小時取樣。在含有脂質(zhì)體的樣品(A和B)中，在234nm波長(指示磷脂過氧化)中沒有觀察到血液溶解或吸光值增加，而含有氯仿的所有樣品顯示充分的血液溶解。
實(shí)施例III利用如附圖2所示回路進(jìn)行回路透析檢測試驗(yàn)，并且在回路30(血液測)將下列物質(zhì)循環(huán)A牛血液B母牛血漿CPBS+4克/升白蛋白從屠宰場獲得新鮮血液，置于含有500ml肝素化的普通鹽水溶液的5升袋中，所述鹽水溶液是通過在10ml肝素鈉原液(每ml雙去離子水的5,000U肝素)中加入45克NaCl調(diào)至終體積為5升雙去離子水而制備的；用多孔纖維膜(預(yù)先用肝素化的普通鹽水溶液飽和)過濾血液；通過將濾過的血液轉(zhuǎn)移到預(yù)先浸于肝素化鹽水溶液中的50ml離心管中而制備血漿，并且以2,700rpm離心15分鐘；然后將血漿轉(zhuǎn)移到另一個50ml離心管中并且或者新鮮使用或者貯存于-20℃。通過每100mlPBS加入4克V型白蛋白(SIGMA，Milan，Italy)而制備溶液C，然后緩慢攪拌以防止泡沫形成或蛋白質(zhì)變性。
向上述溶液中加入各種濃度的下列毒素PAF(20ng/ml)；膽紅素(10ng/ml)向起始物質(zhì)中加入該毒素，將整個物質(zhì)分為樣品以在回路31中檢測下列洗滌溶液-對照溶液(僅PBS)；-脂質(zhì)體溶液；-筒38的脂質(zhì)體溶液，所述筒裝備了磷脂包覆的活性碳濾器。這樣可確保在所有試驗(yàn)中毒素濃度相同。
回路30和31的試驗(yàn)按如下方法進(jìn)行所使用的濾器(32)是BELLCO HFT-02高流速聚礬0.44m2濾器；將回路浸于2升的普通鹽水溶液中，之后，在透析液側(cè)(回路31)填裝滿300ml的透析液(PBS)或300ml的脂質(zhì)體溶液(600mg脂質(zhì)體溶于300ml的PBS中)，并且血液側(cè)(回路30)填裝滿等體積的物質(zhì)A(血液)、B(血漿)和C(PBS+白蛋白溶液)。僅用C溶液進(jìn)行PAF試驗(yàn)，其中血漿和血液都含有能降解任何加入的血小板激活因子的酸(乙酸水解酶)。利用血液、血漿和溶解C進(jìn)行膽紅素試驗(yàn)，得到類似結(jié)果。
在該回路中，在血液側(cè)以75ml/分鐘循環(huán)(回路30)，并且在透析液側(cè)(回路31)以135ml/分種循環(huán)；在試驗(yàn)結(jié)束時將脂質(zhì)體灌置于分析天平上以檢查沒有發(fā)生超濾反應(yīng)。
在預(yù)透析期之后1、10和30分鐘，以及1、3、4、6和24小時從兩個回路30，31中取樣。
然后將樣品進(jìn)行分析以測定_血小板激活因子通過制備下列物質(zhì)分析PAF含量_PH6.5(利用HCl1M調(diào)低PH值)的明膠緩沖液(沒有Ca+)；_PH7.2的EDTA0.2M。
在含有1.3ml的EDTA的50ml試管中制備50ml試管中制備50ml的兔血液(由2.5kg免獲取)的血小板懸液，通過加入250ml的明膠緩沖液、20ml的血小板懸液和10-30ml的試驗(yàn)樣品檢測血小板激活因子(PAF)。對照包括僅含有脂質(zhì)體溶液(濃度為0.1-1mg/ml)、僅透析液(PBS)、和標(biāo)準(zhǔn)PAF樣品(2-20ng/ml)。
利用ELVI(Midan Italy)檢測器監(jiān)測血小板凝聚反應(yīng)；根據(jù)血小板形狀的改變，利用由TETTA等人描述的方法測定量檢測血小板激活因子(C.Tetta，G.Segoloni，A.Pacitti，G.Regis，M.Salomone，E.Turello，G.Camussi，A.Vercellone，“The production of platelet activating factorduring hemodialysis.”Int.J.Artif.Organs12766-772，1989，Milan)。
_膽紅素檢測根據(jù)制造商的說明，利用商品SIGMA Chemicals550-A檢測膽紅素。
試驗(yàn)結(jié)果顯示于圖6和7中。正如所看到的，單獨(dú)或與磷脂包覆的碳再生濾器(筒38)結(jié)合使用脂質(zhì)體不論從絕對量和速度來說，可以有效地改善控制毒素的去除。
權(quán)利要求
1.一種從膠體溶液中快速除去脂溶性靶分子、特別是從全血或從全血的超濾液或血漿濾液中去除毒素和游離殘基的方法，其中將待純化溶液與預(yù)定孔徑的半滲透膜的一側(cè)接觸，并且通過將預(yù)定組分的洗滌溶液和膜的另一側(cè)接觸而用所述膜透析；其特征在于向洗滌溶液中加入預(yù)定濃度的脂質(zhì)體，通常大于半滲透膜的孔徑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于所述脂質(zhì)體含有直徑為100nm-200nm的圓形泡并且定義為磷脂膜。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述方法，其特征在于向所述脂質(zhì)體中摻入至少一種抗氧化劑物質(zhì)，優(yōu)選地選自于由維生素E和輔酶Q/ubiquinol組。
4.根據(jù)前面任一權(quán)利要求所述方法，其特征在于，洗滌溶液中所述脂質(zhì)體濃度為1-20g/l范圍。
5.根據(jù)前述任一權(quán)利要求所述方法，其特征在于含有所述脂質(zhì)體的所述洗滌溶液用于形成一洗滌流，以與含有待純化膠體溶液的流入流相反的方向?qū)⒃撓礈炝骷拥剿瞿ど?；隨后將所述洗滌流通過一個吸附物質(zhì)的濾器過濾，所述吸附物質(zhì)覆蓋了磷脂膜。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述方法，其特征在于所述吸附物質(zhì)是覆蓋了組分相同或相似于脂質(zhì)體膜的磷脂膜的活性碳。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述方法，其特征在于所述吸附物質(zhì)含有合成樹脂，所述合成樹脂覆蓋了組分相同或相似于脂質(zhì)體膜的磷脂膜。
8.用于純化血液、特別是患有器官衰竭病人的血液透析的裝置，該裝置含有第一液動循環(huán)回路，來源于患者血流的待純化溶液在其中流過；和使洗滌溶液在其中流過的第二液動循環(huán)回路；以及一個濾器，該濾器含有預(yù)定孔徑的半滲透膜，借助該濾器，第一回路與第二回路用液動法相通，以便使用于純化的溶液中的毒素?cái)U(kuò)散到洗滌溶液中，其特征在于第二回路包含用于向所述第二回路供給脂質(zhì)體的裝置。
9.如權(quán)利要求8所述透析裝置，其特征在于用于向第二回路供給脂質(zhì)體的裝置可以同時給所述洗滌溶液供給所述脂質(zhì)體，以便將脂質(zhì)體懸浮分散于洗滌液中。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的透析裝置，其特征在于第二回路與一個灌注筒液動地串聯(lián)連接，所述筒含有由所限定的脂質(zhì)體相容的磷脂膜覆蓋的吸附物質(zhì)的濾器；所述洗滌溶液和所述脂質(zhì)體懸浮分散于流過所述濾器的所述洗滌液中。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的透析裝置，其特征在于所述灌注筒含有由連續(xù)的磷脂膜覆蓋的活性碳顆粒濾器，所述磷脂膜含有一種常用于所述脂質(zhì)體的磷脂膜中的成分。
12.根據(jù)權(quán)利要求8-11任一項(xiàng)所述透析裝置，其特征在于所述第二回路提供有用于從所述洗滌溶液中分離的沒有所述脂質(zhì)體和所述毒素的第一超濾液；以及用于將所述第一超濾液供應(yīng)給所述濾器的下游的第一回路的一系列裝置。
13.根據(jù)權(quán)利要求8-12任一項(xiàng)所述的透析裝置，其特征在于所述第一回路串聯(lián)地包括一個血液灌注筒。
14.根據(jù)權(quán)利要求8-13任一項(xiàng)所述的透析裝置，其特征在于所述第一回路含有用于從患者血流中分離大量二次超濾液的血液濾器，并且在血液濾器的下游連出支路與用于供給再灌注溶液的裝置相連。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的透析裝置，其特征在于用于供給所述再灌注溶液的所述裝置與血液濾器相連接，并且可以接收所述第二超濾液，以及通過一個空的活性碳血液灌注筒連續(xù)供給該濾液，然后回到第一回路作為再灌注溶液。
16.用于血液透析裝置的洗滌溶液，其特征在于包含有水基溶劑，其中脂質(zhì)體分散于懸液。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的洗滌溶液，其特征在于它提供的脂質(zhì)體含量為1-20克/升。
18.根據(jù)權(quán)利要求16或17所述的洗滌溶液，其特征在于包含有大小為100-200nm的脂質(zhì)體。
19.根據(jù)權(quán)利要求16-18所述的洗滌溶液，其特征在于脂質(zhì)體中至少摻入一種抗氧化劑物質(zhì)，并優(yōu)選于維生素E和輔酶Q/ubiquinol組。
20.含有脂質(zhì)體的洗滌溶液用于提高透析裝置的透析性能。
全文摘要
通過用合適的半滲透膜進(jìn)行透析從膠體溶液中純化去除毒素，所述膜的相對側(cè)面分別被待純化溶液和被洗滌溶液接觸，所述洗滌溶液含有預(yù)定濃度的脂質(zhì)體；該透析裝置提供了大量從內(nèi)部連接到含有待純化溶液的第一回路上的中空纖維，這些纖維浸于含有脂質(zhì)體的洗滌溶液的逆流中；該洗滌溶液在給用于該洗滌溶液提供脂質(zhì)體的裝置的第二回路中循環(huán)，并且第二回路與一個灌注筒串聯(lián)連接，洗滌溶液由一個被連續(xù)的磷脂膜覆蓋的活性炭或合成樹脂粒的濾器過濾。
文檔編號B01D65/06GK1160585SQ9611425
公開日1997年10月1日 申請日期1996年12月20日 優(yōu)先權(quán)日1996年12月20日
發(fā)明者瑪麗·盧·拉騰, 奇羅·特塔 申請人:貝爾科公開有限公司