本發(fā)明屬于半制備HPLC分離純化技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鱗翅目環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體的分離制備方法。

背景技術(shù)：

昆蟲性信息素，又稱性外激素，是由同種昆蟲的某一性別個(gè)體的特殊分泌器官分泌于體外，能被同種異性個(gè)體的感受器所接受，并引起異性個(gè)體產(chǎn)生一定的行為反應(yīng)或生理效應(yīng)（如覓偶、定向求偶、交配等）的微量化學(xué)物質(zhì)。昆蟲性信息素作為上世紀(jì)60年代化學(xué)生態(tài)學(xué)的重要發(fā)現(xiàn)，因其具有高效、環(huán)保、專一性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，受到各國科學(xué)家的肯定，被認(rèn)為是“生物合理農(nóng)藥”。目前報(bào)道已鑒定的600多種鱗翅目昆蟲性信息素根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)基本可歸納為3大類型。類型1的性信息素為C₁₀-C₁₈的不飽和長碳鏈結(jié)構(gòu)，碳鏈末端具有羥基、甲?；?、乙酰基等官能團(tuán)，常見于草螟科、卷蛾科和夜蛾科等蛾類的性信息素成分。類型2的性信息素為C₁₇-C₂₃的烯烴及其環(huán)氧衍生物，此類性信息素化學(xué)結(jié)構(gòu)相對復(fù)雜，多見于尺蠖科、毒蛾科和燈蛾科。類型3的性信息素主要特點(diǎn)是長碳鏈的中間碳位具有甲基等化學(xué)結(jié)構(gòu)，此類化學(xué)結(jié)構(gòu)信息素相對較為少見。

目前鱗翅目類型2性信息素人工合成方法主要以亞麻酸或亞油酸為底物合成相應(yīng)的三烯或雙烯，然后以所得烯烴氧化而來。由于在三烯或雙烯的雙鍵均為隨機(jī)氧化，因此環(huán)氧烯烴產(chǎn)物為等量同分異構(gòu)混合物，如順-3,6,9-十八碳三烯氧化后的產(chǎn)物為等量的順-6,9-環(huán)氧-3,4-十八碳二烯、順-3,9-環(huán)氧-6,7-十八碳二烯和順-3,6-環(huán)氧-9,10-十八碳二烯。在性信息素的應(yīng)用研究中發(fā)現(xiàn)，部分鱗翅目昆蟲的環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體存在抑制性信息素活性的現(xiàn)象，因此迫切需要開發(fā)一種能有效分離制備環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體的方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種鱗翅目環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體的分離制備方法，本發(fā)明可有效分離人工合成的C₁₇-C₂₃的環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)混合物，具有制備量大、純度高的特點(diǎn)。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種鱗翅目環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體的分離制備方法，包括以下步驟：

1）半制備液相色譜的準(zhǔn)備：依次連接四源梯度模塊、自動(dòng)進(jìn)樣器、檢測器和餾分收集器，安裝超純硅膠正相制備色譜柱，所述超純硅膠正相制備色譜柱參數(shù)為：顆粒度粒徑5-10微米、色譜柱直徑10-50毫米、色譜柱柱長50-250毫米；

2）流動(dòng)相的配制：分別量取正己烷50-99體積份和四氫呋喃0.25-20體積份，將四氫呋喃加入正己烷中，混合，置于超聲波器內(nèi)超聲5分鐘；

3）將步驟2）中配制的流動(dòng)相連接入半制備液相色譜，設(shè)定半制備液相色譜檢測器的檢測波長為190-280納米，流動(dòng)相流速為0.5-10升/分鐘；

4）將待分離的鱗翅目環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體混合物樣品置于自動(dòng)進(jìn)樣器內(nèi)，設(shè)置進(jìn)樣量及運(yùn)行時(shí)間，即可在餾分收集器中收集同分異構(gòu)體餾分。

進(jìn)一步的，所述超純硅膠正相制備色譜柱參數(shù)為：顆粒度粒徑10微米、色譜柱直徑30-50毫米和色譜柱柱長100-250毫米；所述流動(dòng)相中正己烷為75-99體積份、四氫呋喃為10-20體積份；所述半制備液相色譜檢測器的檢測波長為235-280納米，流動(dòng)相流速為5-10升/分鐘。

進(jìn)一步的，所述超純硅膠正相制備色譜柱參數(shù)為：顆粒度粒徑5微米、色譜柱直徑10-30毫米和色譜柱柱長50-100毫米；所述流動(dòng)相中正己烷為50-75體積份、四氫呋喃為0.25-10體積份；所述半制備液相色譜檢測器的檢測波長為190-235納米，流動(dòng)相流速為0.5-5升/分鐘。

進(jìn)一步的，所述超純硅膠正相制備色譜柱參數(shù)為：顆粒度粒徑5微米、色譜柱直徑20-40毫米和色譜柱柱長70-150毫米；所述流動(dòng)相中正己烷為60-80體積份、四氫呋喃為5-15體積份；所述半制備液相色譜檢測器的檢測波長為220-250納米，流動(dòng)相流速為2-8升/分鐘。

本發(fā)明有益效果：本發(fā)明可提供一種能有效分離，且具備一定劑量規(guī)模的鱗翅目環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體。本發(fā)明以半制備液相色譜為分離儀器，通過選擇合適的制備柱和流動(dòng)相，在特定的流動(dòng)相流速和波長檢測器下對人工合成的C₁₇-C₂₃的環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)混合物達(dá)到有效分離，相對于以往的其它分離方法，本發(fā)明具有制備量大、純度高的特點(diǎn)。純化后的鱗翅目環(huán)氧烯烴可用于制作性信息素誘芯，應(yīng)用于鱗翅目昆蟲的種群監(jiān)測以及防治，并且無污染、環(huán)境友好。此外，本發(fā)明還可為鱗翅目昆蟲性信息素的產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用提供技術(shù)支持，具有廣闊的應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1為人工合成灰茶尺蠖性信息素環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體混合物分離圖；

圖2為順-6,9-環(huán)氧-3,4-十八碳二烯的質(zhì)譜圖；

圖3為順-3,9-環(huán)氧-6,7-十八碳二烯的質(zhì)譜圖；

圖4為順-3,6-環(huán)氧-9,10-十八碳二烯的質(zhì)譜圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步具體說明。本發(fā)明中所述實(shí)施例僅用于說明解釋本發(fā)明而不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成限制。

實(shí)施例1:

一種鱗翅目環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體的分離制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1）半制備液相色譜的準(zhǔn)備：依次連接四源梯度模塊、自動(dòng)進(jìn)樣器、檢測器和餾分收集器，安裝超純硅膠正相制備色譜柱，所述超純硅膠正相制備色譜柱參數(shù)為：顆粒度粒徑5微米、色譜柱直徑10毫米、色譜柱柱長50毫米；

2）流動(dòng)相的配制：分別量取正己烷50體積份和四氫呋喃0.25體積份，將四氫呋喃加入正己烷中，混合，置于超聲波器內(nèi)超聲5分鐘；

3）將步驟2）中配制的流動(dòng)相連接入半制備液相色譜，設(shè)定半制備液相色譜檢測器的檢測波長為190納米，流動(dòng)相流速為0.5升/分鐘；

4）將待分離的鱗翅目環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體混合物樣品置于自動(dòng)進(jìn)樣器內(nèi)，設(shè)置進(jìn)樣量及運(yùn)行時(shí)間，即可在餾分收集器中收集同分異構(gòu)體餾分。

實(shí)施例2：

一種鱗翅目環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體的分離制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1）半制備液相色譜的準(zhǔn)備：依次連接四源梯度模塊、自動(dòng)進(jìn)樣器、檢測器和餾分收集器，安裝超純硅膠正相制備色譜柱，所述超純硅膠正相制備色譜柱參數(shù)為：顆粒度粒徑5微米、色譜柱直徑19毫米、色譜柱柱長75毫米；

2）流動(dòng)相的配制：分別量取正己烷60體積份和四氫呋喃5體積份，將四氫呋喃加入正己烷中，混合，置于超聲波器內(nèi)超聲5分鐘；

3）將步驟2）中配制的流動(dòng)相連接入半制備液相色譜，設(shè)定半制備液相色譜檢測器的檢測波長為200納米，流動(dòng)相流速為1升/分鐘；

4）將待分離的鱗翅目環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體混合物樣品置于自動(dòng)進(jìn)樣器內(nèi)，設(shè)置進(jìn)樣量及運(yùn)行時(shí)間，即可在餾分收集器中收集同分異構(gòu)體餾分。

實(shí)施例3：

一種鱗翅目環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體的分離制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1）半制備液相色譜的準(zhǔn)備：依次連接四源梯度模塊、自動(dòng)進(jìn)樣器、檢測器和餾分收集器，安裝超純硅膠正相制備色譜柱，所述超純硅膠正相制備色譜柱參數(shù)為：顆粒度粒徑5微米、色譜柱直徑30毫米、色譜柱柱長100毫米；

2）流動(dòng)相的配制：分別量取正己烷75體積份和四氫呋喃10體積份，將四氫呋喃加入正己烷中，混合，置于超聲波器內(nèi)超聲5分鐘；

3）將步驟2）中配制的流動(dòng)相連接入半制備液相色譜，設(shè)定半制備液相色譜檢測器的檢測波長為215納米，流動(dòng)相流速為3升/分鐘；

4）將待分離的鱗翅目環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體混合物樣品置于自動(dòng)進(jìn)樣器內(nèi)，設(shè)置進(jìn)樣量及運(yùn)行時(shí)間，即可在餾分收集器中收集同分異構(gòu)體餾分。

實(shí)施例4

一種鱗翅目環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體的分離制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1）半制備液相色譜的準(zhǔn)備：依次連接四源梯度模塊、自動(dòng)進(jìn)樣器、檢測器和餾分收集器，安裝超純硅膠正相制備色譜柱，所述超純硅膠正相制備色譜柱參數(shù)為：顆粒度粒徑10微米、色譜柱直徑50毫米、色譜柱柱長150毫米；

2）流動(dòng)相的配制：分別量取正己烷75體積份和四氫呋喃10體積份，將四氫呋喃加入正己烷中，混合，置于超聲波器內(nèi)超聲5分鐘；

3）將步驟2）中配制的流動(dòng)相連接入半制備液相色譜，設(shè)定半制備液相色譜檢測器的檢測波長為215納米，流動(dòng)相流速為3升/分鐘；

4）將待分離的鱗翅目環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體混合物樣品置于自動(dòng)進(jìn)樣器內(nèi)，設(shè)置進(jìn)樣量及運(yùn)行時(shí)間，即可在餾分收集器中收集同分異構(gòu)體餾分。

實(shí)施例5

一種鱗翅目環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體的分離制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1）半制備液相色譜的準(zhǔn)備：依次連接四源梯度模塊、自動(dòng)進(jìn)樣器、檢測器和餾分收集器，安裝超純硅膠正相制備色譜柱，所述超純硅膠正相制備色譜柱參數(shù)為：顆粒度粒徑10微米、色譜柱直徑50毫米、色譜柱柱長150毫米；

2）流動(dòng)相的配制：分別量取正己烷85體積份和四氫呋喃15體積份，將四氫呋喃加入正己烷中，混合，置于超聲波器內(nèi)超聲5分鐘；

3）將步驟2）中配制的流動(dòng)相連接入半制備液相色譜，設(shè)定半制備液相色譜檢測器的檢測波長為250納米，流動(dòng)相流速為5升/分鐘；

4）將待分離的鱗翅目環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體混合物樣品置于自動(dòng)進(jìn)樣器內(nèi)，設(shè)置進(jìn)樣量及運(yùn)行時(shí)間，即可在餾分收集器中收集同分異構(gòu)體餾分。

實(shí)施例6

一種鱗翅目環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體的分離制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1）半制備液相色譜的準(zhǔn)備：依次連接四源梯度模塊、自動(dòng)進(jìn)樣器、檢測器和餾分收集器，安裝超純硅膠正相制備色譜柱，所述超純硅膠正相制備色譜柱參數(shù)為：顆粒度粒徑10微米、色譜柱直徑50毫米、色譜柱柱長250毫米；

2）流動(dòng)相的配制：分別量取正己烷75體積份和四氫呋喃10體積份，將四氫呋喃加入正己烷中，混合，置于超聲波器內(nèi)超聲5分鐘；

3）將步驟2）中配制的流動(dòng)相連接入半制備液相色譜，設(shè)定半制備液相色譜檢測器的檢測波長為215納米，流動(dòng)相流速為3升/分鐘；

4）將待分離的鱗翅目環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體混合物樣品置于自動(dòng)進(jìn)樣器內(nèi)，設(shè)置進(jìn)樣量及運(yùn)行時(shí)間，即可在餾分收集器中收集同分異構(gòu)體餾分。

實(shí)施例7

一種鱗翅目環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體的分離制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1）半制備液相色譜的準(zhǔn)備：依次連接四源梯度模塊、自動(dòng)進(jìn)樣器、檢測器和餾分收集器，安裝超純硅膠正相制備色譜柱，所述超純硅膠正相制備色譜柱參數(shù)為：顆粒度粒徑10微米、色譜柱直徑50毫米、色譜柱柱長250毫米；

2）流動(dòng)相的配制：分別量取正己烷99體積份和四氫呋喃20體積份，將四氫呋喃加入正己烷中，混合，置于超聲波器內(nèi)超聲5分鐘；

3）將步驟2）中配制的流動(dòng)相連接入半制備液相色譜，設(shè)定半制備液相色譜檢測器的檢測波長為280納米，流動(dòng)相流速為10升/分鐘；

4）將待分離的鱗翅目環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體混合物樣品置于自動(dòng)進(jìn)樣器內(nèi)，設(shè)置進(jìn)樣量及運(yùn)行時(shí)間，即可在餾分收集器中收集同分異構(gòu)體餾分。

需說明的是，本發(fā)明中進(jìn)樣量及運(yùn)行時(shí)間根據(jù)目標(biāo)化合物的性質(zhì)進(jìn)行設(shè)定，本發(fā)明中未寫出的具體操作及步驟均屬于本領(lǐng)域常規(guī)技術(shù)手段。

試驗(yàn)例：

順-3,9-環(huán)氧-6,7-十八碳二烯為灰茶尺蠖性信息素成分之一，在其人工化學(xué)合成的過程中，以順-3,6,9-十八碳三烯為底物的環(huán)氧化步驟中，產(chǎn)生了等量的順-6,9-環(huán)氧-3,4-十八碳二烯、順-3,9-環(huán)氧-6,7-十八碳二烯和順-3,6-環(huán)氧-9,10-十八碳二烯。本試驗(yàn)例采用本發(fā)明所述方法對上述環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體混合物進(jìn)行分離制備。首先將所得混合物溶于正己烷，配制成10微克/微升的樣品，置于半制備HPLC自動(dòng)進(jìn)樣器內(nèi)。然后按本發(fā)明所述實(shí)施例3步驟分離制備。

從圖1中可以看出，采用本發(fā)明所述方法可以完全將人工合成灰茶尺蠖性信息素的三種環(huán)氧烯烴同分異構(gòu)體完全分離，其中順-6,9-環(huán)氧-3,4-十八碳二烯的出峰時(shí)間為34.0-36.0分鐘，順-3,9-環(huán)氧-6,7-十八碳二烯的出峰時(shí)間為28.5-33.5分鐘，順-3,6-環(huán)氧-9,10-十八碳二烯的出峰時(shí)間為36.5-40.5分鐘，其中順-3,9-環(huán)氧-6,7-十八碳二烯無紫外吸收，因此將餾分通過GC-MS進(jìn)一步驗(yàn)證。圖2、圖3和圖4分別為順-6,9-環(huán)氧-3,4-十八碳二烯、順-3,9-環(huán)氧-6,7-十八碳二烯和順-3,6-環(huán)氧-9,10-十八碳二烯的質(zhì)譜圖。由此可見，本發(fā)明所述制備方法具有良好的分離效果，且所制備的樣品的純度也較高。