專利名稱：一種殺蟲脒分子印跡固相萃取柱的制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及材料制備及農(nóng)藥分析領(lǐng)域，具體地說是涉及一種殺蟲脒分子印跡固相萃取(MISPE)柱及制備方法，并主要用于蜂蜜樣品中殺蟲脒的選擇性分離。
背景技術(shù)：
殺蟲脒(chlordimeform)，化學名為N-(4-氯-鄰甲苯基)-N'，N' -二甲基甲脒，別名N' -(2-甲基-4-氯苯基)-N，N-二甲基甲脒，殺螨脒，氯苯脒，克死螨，用于蜜蜂峰螨的防治，是劇毒品。由于實際樣品中各種各樣的基質(zhì)成分和共存物的存在，農(nóng)藥殘留又具有痕量特征，如果不對樣品進行凈化和富集，將會影響其檢測的準確度和檢出水平。目前液液萃取 (LLE)和固相萃取(SPE)是樣品處理中最常用的樣品處理方法，較之LLE，SPE耗時短，節(jié)約試劑，對操作人員的傷害較小，因而其應(yīng)用也越來越廣泛。但是眾所周知，SPE的填料通常都是一些非選擇性的吸附材料，在實際應(yīng)用時，往往容易同時提取出其它的干擾物質(zhì)，影響檢測結(jié)果。因此，發(fā)展快速、高效、高選擇性的樣品前處理技術(shù)非常重要。分子印跡聚合物 (MIP)是為模板分子量身定做的高分子聚合物，具有預(yù)定性、實用性和識別性等特點，由于模板選擇的多樣性，使得MIP能廣泛應(yīng)用于物質(zhì)的分離與分析過程，它對目標分子的高度選擇性也是普通SPE填料所不能比擬的。目前關(guān)于殺蟲脒MISPE柱的制備未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種殺蟲脒MISPE柱及制備方法， 并加以應(yīng)用，以高效地選擇性分離蜂蜜樣品中的殺蟲脒，結(jié)合光度法即可實現(xiàn)蜂蜜樣品中殺蟲脒的快速分析。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明以殺蟲脒為模板，甲基丙烯酸為功能單體，乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑，偶氮二異丁腈為引發(fā)劑，進行聚合制備出MIP，將其填充在固相萃取柱內(nèi)得到殺蟲脒MISPE柱。本發(fā)明中殺蟲脒分子印跡固相萃取小柱的制備方法，按照下述步驟進行
(1)將殺蟲脒、甲基丙烯酸按照摩爾比1:2 8的混合溶解于乙腈中，超聲30min，使其分散于乙腈溶液中，于振蕩器中25°C振蕩他；然后按照甲基丙烯酸與乙二醇二甲基丙烯酸酯摩爾比為1:5的比例將乙二醇二甲基丙烯酸酯和偶氮二異丁腈加入到溶液中超聲振蕩 30min，其中所述的偶氮二異丁腈與殺蟲脒的質(zhì)量比為10 :4 ；向裝有溶液的圓底試管通入氮氣5min，密封后放入55°C恒溫水浴中，反應(yīng)Mh，制得塊狀聚合物；將得到的塊狀聚合物用研缽磨碎，過篩得到殺蟲脒的分子印跡聚合物(MIP)。(2)將上述含有殺蟲脒的MIP的顆粒，用索式提取器以含甲醇乙酸=9:1(V/V)的混合溶劑洗去模板分子。取出洗去模板分子的聚合物，加入甲醇浸泡過夜，以清洗去除分子印跡聚合物中殘留的乙酸，干燥至恒重。(3)稱取IOOmg上述殺蟲脒分子印跡聚合物(MIP)顆粒，填充至空的固相萃取柱中，敲實壓緊，制得殺蟲脒分子印跡固相萃取(MISPE)柱。
上述殺蟲脒分子印跡固相萃取柱的應(yīng)用，可以應(yīng)用于蜂蜜樣品殺蟲脒殘留的選擇性分離。本發(fā)明與以往的普通萃取法等相關(guān)技術(shù)相比，富集、凈化效率高，并且殺蟲脒分子印跡固相萃取小柱可以重復使用，成本低，可望成為蜂蜜樣品中殺蟲脒殘留前處理的必備的手段。


附圖1為上述殺蟲脒、甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯按1:4:20的摩爾比條件合成的MIP對殺蟲脒乙腈溶液的吸附量與非印跡聚合物(NIP)對同樣溶液的吸附量隨溶液濃度變化的曲線。
具體實施例方式
實施例1
一殺蟲脒分子印跡固相萃取小柱制備
A將殺蟲脒(0.0393g)、甲基丙烯酸按照摩爾比為1:4的比例混合溶解于乙腈中，超聲 30min，使其分散于乙腈溶液中，置于振蕩器中25°C震蕩他。然后按照甲基丙烯酸與乙二醇二甲基丙烯酸酯摩爾比為1:5的比例將乙二醇二甲基丙烯酸酯和0. Ig偶氮二異丁腈加入到溶液中超聲振蕩30min。向裝有溶液的圓底試管通入氮氣5min，密封后放入55°C恒溫水浴中，反應(yīng)Mh，制得塊狀聚合物。將得到的塊狀聚合物用研缽磨碎，過篩得到殺蟲脒的 MIP。B將上述含有殺蟲脒的MIP的顆粒，用索式提取器以含甲醇乙酸=9:1(V/V)的混合溶劑洗去模板分子。取出洗去模板分子的聚合物，加入甲醇浸泡過夜，以清洗去除分子印跡聚合物中殘留的乙酸，干燥至恒重。C稱取IOOmg上述殺蟲脒MIP顆粒，填充至空的固相萃取柱中，敲實壓緊，制得殺蟲脒MISPE柱。二殺蟲脒分子印跡固相萃取小柱應(yīng)用于蜂蜜樣品殺蟲脒殘留的選擇性分離
A取4. OOg均勻樣品于離心管中，加入4mL 5. Omol/L的氫氧化鈉和4mL石油醚，快速混勻3min,在離心機上3000r/min離心2min。棄去水相，加入2mL 1. Omol/L鹽酸，快速混勻，以2000r/min離心lmin。棄石油醚層，加入5. Omol/L的氫氧化鈉ImL和石油醚2mL，混勻，以2000r/min離心lmin。將石油醚相取出，于水浴(低于60°C )上揮發(fā)至干，用乙腈定容，作為蜂蜜樣品提取液。B將上述殺蟲脒分子印跡固相萃取小柱用2mL乙腈活化。C將制備的樣品溶液加入到柱中，在重力作用下流過固相萃取小柱。D用5mL乙腈丙酮=1:2 (V/V)的混合溶劑在重力作用下淋洗固相小柱。E用5mL甲醇乙酸=9:1 (V/V)的混合溶劑在重力作用下進行洗脫，收集洗脫液。F將洗脫液用氮氣吹干溶劑，用乙腈定容至0. 5mL后用分光光度計檢測殺蟲脒的含量。所制得的固相萃取小柱對蜂蜜中的殺蟲脒具有專一性的選擇，對蜂蜜樣品提取液加標20 mg/L殺蟲脒，殺蟲脒的回收率為92. 60%。實施例2
一殺蟲脒分子印跡固相萃取小柱制備
A將殺蟲脒(0.0393g)、甲基丙烯酸按照摩爾比為1:4的比例混合溶解于乙腈中，超聲 30min，使其分散于乙腈溶液中，置于振蕩器中25°C震蕩他。然后按照甲基丙烯酸與乙二醇二甲基丙烯酸酯摩爾比為1:5的比例將乙二醇二甲基丙烯酸酯和0. Ig偶氮二異丁腈加入到溶液中超聲振蕩30min。向裝有溶液的圓底試管通入氮氣5min，密封后放入55°C恒溫水浴中，反應(yīng)Mh，制得塊狀聚合物。將得到的塊狀聚合物用研缽磨碎，過篩得到殺蟲脒的 MIP。B將上述含有殺蟲脒的MIP的顆粒，用索式提取器以含甲醇乙酸=9:1(V/V)的混合溶劑洗去模板分子。取出洗去模板分子的聚合物，加入甲醇浸泡過夜，以清洗去除分子印跡聚合物中殘留的乙酸，干燥至恒重。C稱取IOOmg上述殺蟲脒MIP顆粒，填充至空的固相萃取柱中，敲實壓緊，制得殺蟲脒MISPE柱。二殺蟲脒分子印跡固相萃取小柱應(yīng)用于蜂蜜樣品殺蟲脒殘留的選擇性分離
A取4. OOg均勻樣品于離心管中，加入4mL 5. Omol/L的氫氧化鈉和4mL石油醚，快速混勻3min,在離心機上3000r/min離心2min。棄去水相，加入2mL 1. Omol/L鹽酸，快速混勻，以2000r/min離心lmin。棄石油醚層，加入5. Omol/L的氫氧化鈉ImL和石油醚2mL，混勻，以2000r/min離心lmin。將石油醚相取出，于水浴(低于60°C )上揮發(fā)至干，用乙腈定容，作為蜂蜜樣品提取液。B將上述殺蟲脒分子印跡固相萃取小柱用2mL乙腈活化。C將制備的樣品溶液加入到柱中，在重力作用下流過固相萃取小柱。D用5mL乙腈丙酮=1:2 (V/V)的混合溶劑在重力作用下淋洗固相小柱。E用7. 5mL甲醇乙酸=9:1 (V/V)的混合溶劑在重力作用下進行洗脫，收集洗脫液。F將洗脫液用氮氣吹干溶劑，用乙腈定容至0. 5mL后用分光光度計檢測殺蟲脒的含量。所制得的固相萃取小柱對蜂蜜中的殺蟲脒具有專一性的選擇，對蜂蜜樣品提取液加標20 mg/L殺蟲脒，殺蟲脒的回收率為91. 06%。實施例3
一殺蟲脒分子印跡固相萃取小柱制備
A將殺蟲脒(0.0393g)、甲基丙烯酸按照摩爾比為1:6的比例混合溶解于乙腈中，超聲 30min，使其分散于乙腈溶液中，置于振蕩器中25°C震蕩他。然后按照甲基丙烯酸與乙二醇二甲基丙烯酸酯摩爾比為1:5的比例將乙二醇二甲基丙烯酸酯和0. Ig偶氮二異丁腈加入到溶液中超聲振蕩30min。向裝有溶液的圓底試管通入氮氣5min，密封后放入55°C恒溫水浴中，反應(yīng)Mh，制得塊狀聚合物。將得到的塊狀聚合物用研缽磨碎，過篩得到殺蟲脒的 MIP。B將上述含有殺蟲脒的MIP的顆粒，用索式提取器以含甲醇乙酸=9:1(V/V)的混合溶劑洗去模板分子。取出洗去模板分子的聚合物，加入甲醇浸泡過夜，以清洗去除分子印跡聚合物中殘留的乙酸，干燥至恒重。C稱取IOOmg上述殺蟲脒MIP顆粒，填充至空的固相萃取柱中，敲實壓緊，制得殺蟲脒MISPE柱。二殺蟲脒分子印跡固相萃取小柱應(yīng)用于蜂蜜樣品殺蟲脒殘留的選擇性分離
A取4. OOg均勻樣品于離心管中，加入4mL 5. Omol/L的氫氧化鈉和4mL石油醚，快速混勻3min,在離心機上3000r/min離心2min。棄去水相，加入2mL 1. Omol/L鹽酸，快速混勻，以2000r/min離心lmin。棄石油醚層，加入5. Omol/L的氫氧化鈉ImL和石油醚2mL，混勻，以2000r/min離心lmin。將石油醚相取出，于水浴(低于60°C )上揮發(fā)至干，用乙腈定容，作為蜂蜜樣品提取液。B將上述殺蟲脒分子印跡固相萃取小柱用2mL乙腈活化。C將制備的樣品溶液加入到柱中，在重力作用下流過固相萃取小柱。D用5mL乙腈丙酮=1:2 (V/V)的混合溶劑在重力作用下淋洗固相小柱。E用5mL甲醇乙酸=9 1(V/V)的混合溶劑在重力作用下進行洗脫，收集洗脫液。F將洗脫液用氮氣吹干溶劑，用乙腈定容至0. 5mL后用分光光度計檢測殺蟲脒的含量。所制得的固相萃取小柱對蜂蜜中的殺蟲脒具有專一性的選擇，對蜂蜜樣品提取液加標20 mg/L殺蟲脒，殺蟲脒的回收率為89. 35%。實施例4
一殺蟲脒分子印跡固相萃取小柱制備
A將殺蟲脒(0.0393g)、甲基丙烯酸按照摩爾比為1:6的比例混合溶解于乙腈中，超聲 30min，使其分散于乙腈溶液中，置于振蕩器中25°C震蕩他。然后按照甲基丙烯酸與乙二醇二甲基丙烯酸酯摩爾比為1:5的比例將乙二醇二甲基丙烯酸酯和0. Ig偶氮二異丁腈加入到溶液中超聲振蕩30min。向裝有溶液的圓底試管通入氮氣5min，密封后放入55°C恒溫水浴中，反應(yīng)Mh，制得塊狀聚合物。將得到的塊狀聚合物用研缽磨碎，過篩得到殺蟲脒的 MIP。B將上述含有殺蟲脒的MIP的顆粒，用索式提取器以含甲醇乙酸=9:1(V/V)的混合溶劑洗去模板分子。取出洗去模板分子的聚合物，加入甲醇浸泡過夜，以清洗去除分子印跡聚合物中殘留的乙酸，干燥至恒重。C稱取IOOmg上述殺蟲脒MIP顆粒，填充至空的固相萃取柱中，敲實壓緊，制得殺蟲脒MISPE柱。二殺蟲脒分子印跡固相萃取小柱應(yīng)用于蜂蜜樣品殺蟲脒殘留的選擇性分離
A取4. OOg均勻樣品于離心管中，加入4mL 5. Omol/L的氫氧化鈉和4mL石油醚，快速混勻3min,在離心機上3000r/min離心2min。棄去水相，加入2mL 1. 0mol/L鹽酸，快速混勻，以2000r/min離心lmin。棄石油醚層，加入5. 0mol/L的氫氧化鈉ImL和石油醚2mL，混勻，以2000r/min離心lmin。將石油醚相取出，于水浴(低于60°C )上揮發(fā)至干，用乙腈定容，作為蜂蜜樣品提取液。B將上述殺蟲脒分子印跡固相萃取小柱用2mL乙腈活化。C將制備的樣品溶液加入到柱中，在重力作用下流過固相萃取小柱。D用5mL乙腈丙酮=1:2 (V/V)的混合溶劑在重力作用下淋洗固相小柱。
E用7. 5mL甲醇乙酸=9:1 (V/V)的混合溶劑在重力作用下進行洗脫，收集洗脫液。F將洗脫液用氮氣吹干溶劑，用乙腈定容至0. 5mL后用分光光度計檢測殺蟲脒的含量。所制得的固相萃取小柱對蜂蜜中的殺蟲脒具有專一性的選擇，對蜂蜜樣品提取液加標20 mg/L殺蟲脒，殺蟲脒的回收率為89. 35%。
權(quán)利要求
1.殺蟲脒分子印跡固相萃取小柱的制備方法，其特征在于按照下述步驟進行(1)將殺蟲脒、甲基丙烯酸按照摩爾比1:2 8的混合溶解于乙腈中，超聲30min，使其分散于乙腈溶液中，于振蕩器中25°C振蕩他；然后按照甲基丙烯酸與乙二醇二甲基丙烯酸酯摩爾比為1:5的比例將乙二醇二甲基丙烯酸酯和偶氮二異丁腈加入到溶液中超聲振蕩 30min，其中所述的偶氮二異丁腈與殺蟲脒的質(zhì)量比為10 :4 ；向裝有溶液的圓底試管通入氮氣5min，密封后放入55°C恒溫水浴中，反應(yīng)Mh，制得塊狀聚合物；將得到的塊狀聚合物用研缽磨碎，過篩得到殺蟲脒的分子印跡聚合物；(2)將上述含有殺蟲脒的MIP的顆粒，用索式提取器以含甲醇乙酸=9:1的混合溶劑洗去模板分子；取出洗去模板分子的聚合物，加入甲醇浸泡過夜，以清洗去除分子印跡聚合物中殘留的乙酸，干燥至恒重；(3)稱取IOOmg上述殺蟲脒分子印跡聚合物顆粒，填充至空的固相萃取柱中，敲實壓緊，制得殺蟲脒分子印跡固相萃取柱。
2.權(quán)利要求1所述的殺蟲脒分子印跡固相萃取柱的應(yīng)用，其特征在于可以應(yīng)用于蜂蜜樣品殺蟲脒殘留的選擇性分離。
全文摘要
本發(fā)明一種殺蟲脒分子印跡固相萃取柱的制備方法和應(yīng)用，涉及材料制備及農(nóng)藥分析領(lǐng)域。以殺蟲脒為模板，甲基丙烯酸為功能單體，乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑，偶氮二異丁腈為引發(fā)劑，乙腈為致孔劑，采用本體聚合法合成分子印跡聚合物。將分子印跡聚合物顆粒均勻填充于固相萃取柱內(nèi)，得到殺蟲脒分子印跡固相萃取柱；以乙腈為上樣溶劑、乙腈-丙酮為淋洗溶劑、甲醇-乙酸為洗脫溶劑，實現(xiàn)了蜂蜜樣品中殺蟲脒的分離、富集。與以往的普通萃取法等相關(guān)技術(shù)相比，富集、凈化效率高，并且殺蟲脒分子印跡固相萃取小柱可以重復使用，成本低，可望成為蜂蜜樣品中殺蟲脒殘留前處理的必備的手段。
文檔編號B01D15/08GK102228825SQ20111017726
公開日2011年11月2日 申請日期2011年6月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月28日
發(fā)明者代永佳, 吳嫻, 王坤, 石杰, 童明珠, 陳冠華 申請人:江蘇大學