本發(fā)明涉及分析檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑及化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)：

化學(xué)發(fā)光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay，CLIA)是將化學(xué)發(fā)光或生物發(fā)光體系與免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于檢測(cè)微量抗原或抗體的一種新型標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析是目前世界范圍內(nèi)最主流的免疫檢測(cè)技術(shù)，具有靈敏度高、檢測(cè)范圍寬、反應(yīng)時(shí)間短、全自動(dòng)操作、重現(xiàn)性好、無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)，是繼放免技術(shù)、酶免技術(shù)、熒光免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種超高靈敏度的微量檢測(cè)技術(shù)。化學(xué)發(fā)光的原理是當(dāng)基態(tài)分子吸收化學(xué)反應(yīng)中釋放的能量躍遷到激發(fā)態(tài)，處于激發(fā)態(tài)的分子以光輻射的形式返回到基態(tài)時(shí)產(chǎn)生的光?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析將化學(xué)發(fā)光與免疫分析方法相結(jié)合，綜合了化學(xué)發(fā)光的高靈敏度和免疫分析的高選擇性。

在化學(xué)發(fā)光免疫分析中，常用的發(fā)光物質(zhì)包括魯米諾、異魯米諾、3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧環(huán)乙烷二鈉鹽(縮寫(xiě)為AMPPD)、三聯(lián)吡啶釕和吖啶類(lèi)發(fā)光物質(zhì)。其中，異魯米諾、三聯(lián)吡啶釕和吖啶類(lèi)發(fā)光物質(zhì)可作為示蹤分子直接標(biāo)記，屬于閃光型化學(xué)發(fā)光物質(zhì)。魯米諾和AMPPD分別依靠過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶作為示蹤分子標(biāo)記，屬于酶促發(fā)光型化學(xué)發(fā)光物質(zhì)。吖啶類(lèi)類(lèi)發(fā)光物質(zhì)的發(fā)光反應(yīng)具有不需催化劑，只要堿性環(huán)境中就可以進(jìn)行，并且發(fā)光反應(yīng)迅速，背景發(fā)光低，信噪比高。發(fā)光反應(yīng)干擾因素少，試劑穩(wěn)定性好，化學(xué)發(fā)光體系簡(jiǎn)單，激發(fā)液成本低等優(yōu)點(diǎn)，是理想的化學(xué)發(fā)光物質(zhì)。

傳統(tǒng)的吖啶類(lèi)全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)主要使用過(guò)氧化氫與酸性溶液以及堿性溶液配合作為發(fā)光啟動(dòng)試劑，有些在發(fā)光啟動(dòng)試劑中加入增強(qiáng)劑聚乙二醇辛基 苯基醚(Triton X-100)和吐溫-20(Tween 20)以增強(qiáng)發(fā)光，但是傳統(tǒng)的增強(qiáng)劑加入后增強(qiáng)發(fā)光的效果并不明顯。綜上所述，傳統(tǒng)的吖啶類(lèi)發(fā)光物質(zhì)的發(fā)光強(qiáng)度較弱。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

基于此，有必要提供一種可以增強(qiáng)吖啶類(lèi)發(fā)光物質(zhì)的發(fā)光強(qiáng)度的化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑及化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒。

一種化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑，用于增強(qiáng)吖啶類(lèi)發(fā)光物質(zhì)的發(fā)光強(qiáng)度，所述化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑包括甜菜堿類(lèi)化合物。

在一個(gè)實(shí)施方式中，所述甜菜堿類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu)式為：

其中，R^-為陰離子基團(tuán)，R₁為C₅～C₂₀的烷基酰胺基、C₅～C₂₀的烷基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₂為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₃為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基。

在一個(gè)實(shí)施方式中，所述甜菜堿類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu)式為：

其中，R₁為C₅～C₂₀的烷基酰胺基、C₅～C₂₀的烷基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₂為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₃為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基。

在一個(gè)實(shí)施方式中，所述甜菜堿類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu)式為：

其中，R₁為C₅～C₂₀的烷基酰胺基、C₅～C₂₀的烷基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₂為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₃為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基。

在一個(gè)實(shí)施方式中，所述甜菜堿類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu)式為：

其中，R₁為C₅～C₂₀的烷基酰胺基、C₅～C₂₀的烷基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₂為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₃為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基。

在一個(gè)實(shí)施方式中，所述甜菜堿類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu)式為：

其中，R₁為C₅～C₂₀的烷基酰胺基、C₅～C₂₀的烷基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₂為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₃為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基。

在一個(gè)實(shí)施方式中，所述甜菜堿類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu)式為：

其中，R₁為C₅～C₂₀的烷基酰胺基、C₅～C₂₀的烷基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₂為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₃為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基。

一種化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，包括上述任一項(xiàng)所述的化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑和 吖啶類(lèi)發(fā)光物質(zhì)。

在一個(gè)實(shí)施方式中，所述吖啶類(lèi)發(fā)光物質(zhì)為吖啶酯或吖啶鹽。

在一個(gè)實(shí)施方式中，還包括化學(xué)發(fā)光預(yù)激發(fā)液和激發(fā)液，所述化學(xué)發(fā)光預(yù)激發(fā)液包括HNO₃和H₂O₂溶液，激發(fā)液包括NaOH溶液。

甜菜堿類(lèi)化合物為具有季銨內(nèi)鹽結(jié)構(gòu)或稱(chēng)作銨鎓結(jié)構(gòu)的化合物，常用作滲透壓調(diào)節(jié)劑、清潔劑或殺菌劑等。發(fā)明人意外發(fā)現(xiàn)甜菜堿類(lèi)化合物具有增強(qiáng)吖啶類(lèi)發(fā)光物質(zhì)的發(fā)光強(qiáng)度的作用，可用于制備化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑。實(shí)驗(yàn)表明，該甜菜堿類(lèi)化合物可明顯增強(qiáng)吖啶類(lèi)發(fā)光物質(zhì)的發(fā)光強(qiáng)度，并且增強(qiáng)的倍數(shù)高于傳統(tǒng)的增強(qiáng)劑Triton X-100和Tween 20。

附圖說(shuō)明

圖1為采用iFlash 3000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定加入含有十四烷酰胺丙基羥丙基磺基甜菜堿的化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑后吖啶酯的發(fā)光強(qiáng)度曲線圖；

圖2為采用采用iFlash 3000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定在無(wú)增強(qiáng)劑和分別加入化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑以及Architect Trigger Solution(Abbott)商品發(fā)光液條件下吖啶鹽的發(fā)光強(qiáng)度曲線圖。

具體實(shí)施方式

為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式做詳細(xì)的說(shuō)明。在下面的描述中闡述了很多具體細(xì)節(jié)以便于充分理解本發(fā)明。但是本發(fā)明能夠以很多不同于在此描述的其它方式來(lái)實(shí)施，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不違背本發(fā)明內(nèi)涵的情況下做類(lèi)似改進(jìn)，因此本發(fā)明不受下面公開(kāi)的具體實(shí)施的限制。

一實(shí)施方式的化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑，該化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑包括甜菜堿類(lèi)化合物，該化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑可用于增強(qiáng)吖啶類(lèi)發(fā)光物質(zhì)的發(fā)光強(qiáng)度。當(dāng)然，化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑還可以包括溶解甜菜堿類(lèi)化合物的溶劑或可接受的雜質(zhì)等。

甜菜堿類(lèi)化合物為具有季銨內(nèi)鹽結(jié)構(gòu)或稱(chēng)作銨鎓結(jié)構(gòu)的化合物。吖啶類(lèi)發(fā)光物質(zhì)是一類(lèi)可用作化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物的化學(xué)物質(zhì)，例如吖啶酯或吖啶鹽等。

具體的，甜菜堿類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu)式為：

其中，R^-為陰離子基團(tuán)，R₁為C₅～C₂₀的烷基酰胺基、C₅～C₂₀的烷基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₂為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₃為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基。

R^-為陰離子基團(tuán)，與季銨內(nèi)鹽結(jié)構(gòu)配合形成甜菜堿類(lèi)化合物。

在一個(gè)實(shí)施方式中，甜菜堿類(lèi)化合物為化合物Ⅰ,化合物Ⅰ的結(jié)構(gòu)式為：

其中，R₁為C₅～C₂₀的烷基酰胺基、C₅～C₂₀的烷基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₂為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₃為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基。即本實(shí)施方式中，-R^-為-COO^-。

另一實(shí)施方式中，甜菜堿類(lèi)化合物為化合物Ⅱ,化合物Ⅱ的結(jié)構(gòu)式為：

其中，R₁為C₅～C₂₀的烷基酰胺基、C₅～C₂₀的烷基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₂為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₃為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基。即本實(shí)施方式中，-R^-為

另一實(shí)施方式中，甜菜堿類(lèi)化合物為化合物Ⅲ,化合物Ⅲ的結(jié)構(gòu)式為：

其中，R₁為C₅～C₂₀的烷基酰胺基、C₅～C₂₀的烷基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₂為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₃為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基。即本實(shí)施方式中，-R^-為-CH₂-SO₃^-。

再一實(shí)施方式中，甜菜堿類(lèi)化合物為化合物Ⅳ,化合物Ⅳ的結(jié)構(gòu)式為：

其中，R₁為C₅～C₂₀的烷基酰胺基、C₅～C₂₀的烷基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₂為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₃為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基。即本實(shí)施方式中，-R^-為-CH₂-CH₂-SO₃^-。

再一實(shí)施方式中，甜菜堿類(lèi)化合物為化合物Ⅴ,化合物Ⅴ的結(jié)構(gòu)式為：

其中，R₁為C₅～C₂₀的烷基酰胺基、C₅～C₂₀的烷基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₂為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₃為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基。即本實(shí)施方式中，-R^-為-CH(OH)-CH₂-SO₃^-。

在本文中，為特別說(shuō)明，各結(jié)構(gòu)式中的C₅～C₂₀的烷基可以為直鏈烷基或支鏈烷基。C₂～C₁₀的烯基可以為直鏈烯基或支鏈烯基。C₂～C₁₀的炔基可以為直鏈炔基或支鏈炔基。C₁～C₁₀的烷基可以為直鏈烷基或支鏈烷基。C₁～C₁₀的烷氧基可以為直鏈烷基或支鏈烷基。

進(jìn)一步的，R₁為C₅～C₂₀的烷基酰胺基、C₁₀～C₂₀的烷基，R₂為C₁～C₅的烷基、C₁～C₅的烷氧基、C₂～C₅的烯基或C₂～C₅的炔基。R₃為C₁～C₅的烷基、C₁～C₅的烷氧基、C₂～C₅的烯基或C₂～C₅的炔基。

具體的，烷基酰胺基是指烷基與酰胺基連接的基團(tuán)，其結(jié)構(gòu)式例如可以為C₅H₁₁-CONH-、C₁₁H₂₄-CONH-、C₁₃H₂₇-CONH-或C₂₀H₂₇-CONH-等。更進(jìn)一步的，烷基酰胺基上的酰胺基還可以連接C₁～C₁₀的烷基，其結(jié)構(gòu)式例如可以為C₁₃H₂₇-CONH-(CH₂)₃-或C₁₁H₂₄-CONH-(CH₂)₁₀-等。

具體的，R₁可以為C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀、C₁₁、C₁₂、C₁₃、C₁₄、C₁₅、C₁₆、C₁₇、C₁₈、C₁₉或C₂₀的烷基。R₁還可以為C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉或C₁₀的烯基?；蛘?，R₁還可以為C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉或C₁₀的炔基。

具體的，R₂可以為C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉或C₁₀的烷基。R₂可以為C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉或C₁₀的烷氧基。R₂還可以為C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀的烯基。或者，R₂還可以為C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉或C₁₀的炔基。

具體的，R₃可以為C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉或C₁₀的烷基。R₃可以為C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉或C₁₀的烷氧基。R₃還可以為C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀的烯基?；蛘?，R₃還可以為C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉或C₁₀的炔基。

進(jìn)一步的，R₁、R₂和R₃可以相同也可以不同。當(dāng)R₁、R₂及R₃分別選自烯基或炔基時(shí)，烯基或炔基可以在相應(yīng)的基團(tuán)中的任意位置。

發(fā)明人意外發(fā)現(xiàn)甜菜堿類(lèi)化合物具有增強(qiáng)吖啶類(lèi)發(fā)光物質(zhì)的發(fā)光強(qiáng)度的作用，可用于制備化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑。甜菜堿類(lèi)化合物具有兩性表面活性劑的性質(zhì)，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、成分單一，批間差非常容易控制，有效減少了由于批次差異帶來(lái)的化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)效果的不同的影響。通過(guò)該化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑，可有效增強(qiáng)吖啶類(lèi)發(fā)光物質(zhì)的發(fā)光強(qiáng)度，發(fā)光信號(hào)明顯增強(qiáng)，而且重現(xiàn)性好，可廣泛應(yīng)用于臨床診斷、科學(xué)研究、環(huán)境衛(wèi)生檢測(cè)等領(lǐng)域。進(jìn)一步的，具有上述通式結(jié)構(gòu)的化合物可以將吖啶類(lèi)發(fā)光物質(zhì)的發(fā)光強(qiáng)度增強(qiáng)至少兩倍以上，增強(qiáng)的倍數(shù)高于傳統(tǒng) 的增強(qiáng)劑Triton X-100和Tween 20。

一種化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，包括上述化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑和吖啶類(lèi)發(fā)光物質(zhì)。

一般的，可將甜菜堿類(lèi)化合物溶解在溶劑中制成化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑。溶劑可以為水、酸性溶液或堿性溶液等。本實(shí)施方式中，將甜菜堿類(lèi)化合物溶解在水中制成化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑。

具體的，吖啶類(lèi)發(fā)光物質(zhì)可以為吖啶酯。例如NSP-DMAE-NHS吖啶酯、NSP-DMAE-HEG-NHS吖啶酯等。

一實(shí)施方式的吖啶類(lèi)發(fā)光物質(zhì)的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)流程式如下所示：

其中，式1所示結(jié)構(gòu)表示的吖啶類(lèi)化合物，式1～式6中的R可以為H、烷 基或烷基磺基等，Ar可以為含有苯基的基團(tuán)。具體發(fā)光過(guò)程為：式1所示的吖啶類(lèi)化合物在酸性條件下通過(guò)過(guò)氧化氫加成吖啶環(huán)的9位碳原子，得到式2所示的化合物，然后在堿性條件下生成過(guò)氧負(fù)離子，得到式3所示的化合物。之后通過(guò)分子內(nèi)進(jìn)攻羰基，離去基團(tuán)離去，生成不穩(wěn)定中間體1，2-二氧雜環(huán)丁烷酮(式6所示的化合物)，然后1,2-二氧雜環(huán)丁烷酮開(kāi)環(huán)生成吖啶酮，同時(shí)釋放光子。

一般的，在化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒中，化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑和吖啶類(lèi)發(fā)光物質(zhì)是分開(kāi)放置的，使用時(shí)再混合。

本實(shí)施方式中，化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒還包括化學(xué)發(fā)光預(yù)激發(fā)液和激發(fā)液，化學(xué)發(fā)光預(yù)激發(fā)液包括HNO₃和H₂O₂溶液，激發(fā)液為NaOH溶液。

具體的，HNO₃溶液的濃度為0.05mol/L～0.3mol/L，H₂O₂溶液的體積百分含量為0.1％～1％。NaOH溶液的濃度為0.05mol/L～0.5mol/L。

本實(shí)施方式中，HNO₃溶液的濃度為0.1mol/L，H₂O₂溶液的體積百分含量為0.5％。NaOH溶液的濃度為0.25mol/L。

化學(xué)發(fā)光預(yù)激發(fā)液和基礎(chǔ)激發(fā)液作為發(fā)光的啟動(dòng)試劑，與化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑配合，進(jìn)一步提高啶類(lèi)發(fā)光物質(zhì)的發(fā)光強(qiáng)度。

具體的，可將化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑加入基礎(chǔ)激發(fā)液中制得化學(xué)激發(fā)液，從而提高啶類(lèi)發(fā)光物質(zhì)的發(fā)光強(qiáng)度。

上述化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，包括化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑和吖啶類(lèi)發(fā)光物質(zhì)。將甜菜堿類(lèi)化合物作為化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑，可有效增強(qiáng)吖啶類(lèi)發(fā)光物質(zhì)的發(fā)光強(qiáng)度，增強(qiáng)的倍數(shù)高于傳統(tǒng)的增強(qiáng)劑Triton X-100和Tween 20，而且重現(xiàn)性好。并且甜菜堿類(lèi)化合物具有兩性表面活性劑的性質(zhì)，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、成分單一，批間差非常容易控制，有效減少了由于批次差異帶來(lái)的化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)效果的不同的影響，提高化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒檢測(cè)靈敏度，該試劑盒可廣泛應(yīng)用于臨床診斷、科學(xué)研究、環(huán)境衛(wèi)生檢測(cè)等領(lǐng)域。

以下為實(shí)施例部分。

以下實(shí)施例中，如無(wú)特別說(shuō)明，未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常 規(guī)條件，所用實(shí)驗(yàn)材料甜菜堿類(lèi)化合物購(gòu)于河南省道純化工技術(shù)有限公司。Tween20(sigma公司，貨號(hào)V900548)和Triton X-100(sigma公司，貨號(hào)V900502)。吖啶酯(NSP-DMAE-NHS)和吖啶鹽(NSP-SA-NHS)采購(gòu)于上海邁拓崴化工。檢測(cè)化學(xué)發(fā)光的儀器為iFlash 3000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀。

實(shí)施例1～實(shí)施例13

甜菜堿類(lèi)化合物對(duì)吖啶類(lèi)發(fā)光物質(zhì)的發(fā)光強(qiáng)度的影響

1)配置預(yù)激發(fā)液

用超純水配置含有HNO₃和H₂O₂的預(yù)激發(fā)液，其中HNO₃在預(yù)激發(fā)液中的終濃度為0.1mol/L，H₂O₂溶液在預(yù)激發(fā)液中的體積百分含量為0.5％。

2)配置基礎(chǔ)激發(fā)液

用超純水配置含有NaOH的基礎(chǔ)激發(fā)液，NaOH在基礎(chǔ)激發(fā)液中的終濃度為0.25mol/L。

3)配置化學(xué)激發(fā)液

向基礎(chǔ)激發(fā)液中分別加入化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑，化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑分別包括甜菜堿類(lèi)化合物Z1～Z13，得到化學(xué)激發(fā)液?；瘜W(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑的中各甜菜堿類(lèi)化合物Z1～Z13的原濃度均為10g/L，化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑加入量為2μL～30μL。本實(shí)施例中分別加入10μL的分別含有Z1～Z13的化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑到基礎(chǔ)激發(fā)液中得到化學(xué)激發(fā)液。化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑包括的甜菜堿類(lèi)化合物Z1～Z13的結(jié)構(gòu)式如下：

其中，R^-為陰離子基團(tuán)，具體有以下Y1～Y5四類(lèi)，Y1～Y5具體結(jié)構(gòu)如下：

R₁為C₅～C₂₀的烷基酰胺基、C₅～C₂₀的烷基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₂為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基，R₃為C₁～C₁₀的烷基、C₁～C₁₀的烷氧基、C₂～C₁₀的烯基或C₂～C₁₀的炔基。甜菜堿類(lèi)化合物Z1～Z13對(duì)應(yīng)的具體的結(jié)構(gòu)如表1所示。

表1：甜菜堿類(lèi)化合物Z1～Z13的名稱(chēng)和結(jié)構(gòu)式

4)化學(xué)發(fā)光信號(hào)的測(cè)定

以10μL、濃度為1pg/mL的吖啶溶液為樣品，本實(shí)施例中吖啶溶液為NSP-DMAE-HEG-NHS吖啶酯，其結(jié)構(gòu)式如下：

向樣品中加入100μL預(yù)激發(fā)液，再分別加入100μL各化學(xué)激發(fā)液?；瘜W(xué)激發(fā)液中分別含有基礎(chǔ)激發(fā)液中以及甜菜堿類(lèi)化合物Z1～Z13。在化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀上測(cè)量化學(xué)發(fā)光信號(hào)，并計(jì)算各發(fā)光液信號(hào)值與基礎(chǔ)發(fā)光液信號(hào)值的增強(qiáng)倍數(shù)。實(shí)施例5對(duì)應(yīng)的發(fā)光曲線如圖1所示。實(shí)施例1～13的發(fā)光強(qiáng)度結(jié)果如表2所示。

表2：實(shí)驗(yàn)對(duì)照組以及實(shí)施例1～13的發(fā)光強(qiáng)度

其中，實(shí)驗(yàn)對(duì)照組除了不加化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑，其余與實(shí)施例1～13相同。從表2可以看出，加入含有甜菜堿類(lèi)化合物Z1～Z13的化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑可以有效的增強(qiáng)吖啶酯的發(fā)光強(qiáng)度。增強(qiáng)倍數(shù)在4倍以上。

對(duì)比例1～對(duì)比例2

為進(jìn)一步驗(yàn)證甜菜堿類(lèi)化合物對(duì)吖啶酯的發(fā)光強(qiáng)度的影響。采用Tween 20和Triton X-100作為對(duì)比例。對(duì)比例中配置預(yù)激發(fā)液和配置基礎(chǔ)激發(fā)液的步驟與實(shí)施例1～13相同。不同的是配置化學(xué)激發(fā)液時(shí)，采用分別將10μL的原濃度為10g/L的Tween 20和Triton X-100加入基礎(chǔ)激發(fā)液中得到對(duì)比例的化學(xué)激發(fā)液。采用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀上測(cè)量對(duì)比例的化學(xué)發(fā)光信號(hào)，并計(jì)算各發(fā)光液信號(hào)值與基礎(chǔ)發(fā)光液信號(hào)值的增強(qiáng)倍數(shù)，結(jié)果如表3所示。

表3：實(shí)驗(yàn)對(duì)照組以及對(duì)比例1和2的發(fā)光強(qiáng)度

對(duì)比表2和表3的結(jié)果可知，使用甜菜堿類(lèi)化合物能起到增強(qiáng)吖啶類(lèi)化合物化學(xué)發(fā)光作用，且增強(qiáng)效果優(yōu)于Tween 20和Triton X-100。并且本實(shí)施例1～13的化學(xué)發(fā)光也發(fā)光信號(hào)穩(wěn)定，發(fā)光效率高。

實(shí)施例14

為進(jìn)一步比較甜菜堿類(lèi)化合物對(duì)吖啶類(lèi)化合物化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)作用，選用Architect Trigger Solution(Abbott公司，貨號(hào)：6C55-60)商品發(fā)光液作為對(duì)照。本實(shí)施例的樣品液為10μL濃度為1pg/mL的吖啶鹽(NSP-SA-NHS)溶液。預(yù)激發(fā)液和基礎(chǔ)激發(fā)液與實(shí)施例1～13相同。將10μL的含有Z5的化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑加到基礎(chǔ)激發(fā)液中得到化學(xué)激發(fā)液。向樣品中加入100μL預(yù)激發(fā)液，再分別加入100μL的含有增強(qiáng)劑Z5對(duì)應(yīng)的化學(xué)激發(fā)液或100μL的Architect Trigger Solution(Abbott)商品發(fā)光液。分別測(cè)定在無(wú)增強(qiáng)劑、有含有Z5的化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑以及Architect Trigger Solution(Abbott)商品發(fā)光液條件下吖啶鹽的發(fā)光強(qiáng)度。結(jié)果如圖2所示，與商品發(fā)光液Architect Trigger Solution(Abbott)發(fā)光信號(hào)進(jìn)行對(duì)比。在本發(fā)明增強(qiáng)劑作用下，吖啶的發(fā)光信號(hào)大大增強(qiáng)，增強(qiáng)發(fā)光液性能接近Architect Trigger Solution(Abbott)。

從實(shí)施例1～14以及對(duì)比1的結(jié)果可知，甜菜堿類(lèi)化合物對(duì)吖啶類(lèi)化合物有很好的增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光的效果，可提高診斷試劑盒的檢測(cè)靈敏度。

本文中的所有數(shù)據(jù)、圖像、儀器、試劑和步驟應(yīng)理解為說(shuō)明性而非限制性的。雖然已結(jié)合上述具體實(shí)施方案描述了本發(fā)明，許多修改和其它變化對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的。所有這種修改和其它變化也落入本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)。

以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)本發(fā)明專(zhuān)利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專(zhuān)利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。