抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒及其制備方法和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒及其制備方法和應(yīng)用，抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒包括：抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體和化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體。這種抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒能夠以全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀為檢測(cè)工具，完成抗繆勒氏管激素的檢測(cè)。這種抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)，其檢測(cè)靈敏度達(dá)到0.01ng/mL，相對(duì)于傳統(tǒng)的抗繆勒氏管激素的檢測(cè)方法靈敏度至少提高了10倍，這種抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)精度較高。
【專利說(shuō)明】
抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒及其制備方法和 應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及體外檢測(cè)領(lǐng)域，尤其涉及一種抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑 盒及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 繆勒氏管激素(MIS)，也叫做抗繆勒氏管激素(Anti-Miillerian hormone，AMH)，是 由二硫化物橋連接兩個(gè)72kDa單體組成的140kU的糖蛋白二聚物。MIS/AMH屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng) 因子(TGF-P)家族總科。由Profess Alfred Jost于1947年首先發(fā)現(xiàn)。AMH由睪丸未成熟的 Sertoli細(xì)胞及出生后卵巢生長(zhǎng)卵泡的顆粒細(xì)胞分泌，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞發(fā)育及分化，使雄性胚 胎苗勒氏管退化的作用。在男性，最初表達(dá)在8周胎兒睪丸支持細(xì)胞中，始于胚胎形成，并貫 穿生命始終。在胚胎發(fā)育期間，AMH會(huì)引起繆勒氏管退化，形成正常的男性生殖管道。對(duì)于女 性而言，AMH是在36周胎兒期的卵泡顆粒細(xì)胞生成的，直至女性更年期，AMH逐漸下降至無(wú)法 檢測(cè)的水平。
[0003] 在臨床上可用于真假兩性畸形的診斷，腫瘤的特異性標(biāo)記，精子形成的標(biāo)記等。 AMH已應(yīng)用于主要用于監(jiān)測(cè)卵巢儲(chǔ)備力、預(yù)測(cè)體外受精聯(lián)合胚胎移植技術(shù)(IVF)的卵巢反應(yīng) 性、預(yù)防卵巢過(guò)度刺激綜合征(0HSS)、男性生殖功能的評(píng)估等。在多囊卵巢綜合征(PC0S)的 診斷中也以此來(lái)代替竇卵泡數(shù)(AFC)指標(biāo)。
[0004] 婦女卵巢功能與年齡、基礎(chǔ)卵泡刺激素（FSH)、基礎(chǔ)抑制素B(INHB)、基礎(chǔ)雌二醇 (E2)、氯米芬激發(fā)試驗(yàn)(CCCT)、促性腺激素釋放激素激動(dòng)劑(GnRH-a)激發(fā)試驗(yàn)、竇卵泡數(shù)、 卵巢體積和卵巢血流豐度以及抗苗勒管激素(AMH)水平等多種因素相關(guān)。AMH為其中最敏感 的指標(biāo)。
[0005] 傳統(tǒng)的AMH的檢測(cè)方法主要采用酶聯(lián)免疫吸附法，然而，受限于酶聯(lián)免疫的特點(diǎn)， 傳統(tǒng)的AMH的檢測(cè)方法在檢測(cè)過(guò)程中處于開放的空間，容易引起各種試劑之間的交叉污染， 并且由于檢測(cè)過(guò)程多采用手工操作，試劑或樣本的加量不很精確，操作過(guò)程極為繁瑣和復(fù) 雜，容易發(fā)生操作差錯(cuò)，檢測(cè)精度較差。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 基于此，有必要提供一種檢測(cè)精度較高的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑 盒及其制備方法和應(yīng)用。
[0007] -種抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，包括:抗繆勒氏管激素單克隆抗 體包被的固相載體和化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體。
[0008] 在一個(gè)實(shí)施例中，所述抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體中，所述固相 載體為表面帶有用于蛋白質(zhì)化學(xué)反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微粒。
[0009] 在一個(gè)實(shí)施例中，所述表面帶有用于蛋白質(zhì)化學(xué)反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微粒為表面帶 有氨基、羧基、甲苯磺?；颦h(huán)氧乙烷基的磁微粒。
[0010] 在一個(gè)實(shí)施例中，所述表面帶有用于蛋白質(zhì)化學(xué)反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微粒的粒徑為 0.05M1 ~3mid
[0011] 在一個(gè)實(shí)施例中，所述抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體中，所述固相 載體上偶聯(lián)有鏈霉親和素、親和素或中性親和素，所述抗繆勒氏管激素單克隆抗體上偶聯(lián) 有生物素。
[0012] 在一個(gè)實(shí)施例中，所述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體中，所 述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物為異魯米諾、三聯(lián)吡啶釕、吖啶酯、堿性磷酸酶或辣根過(guò)氧化物酶。
[0013] 在一個(gè)實(shí)施例中，所述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體中，所 述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物上偶聯(lián)有鏈霉親和素、親和素或中性親和素，所述抗繆勒氏管激素單克 隆抗體上偶聯(lián)有生物素。
[0014] 在一個(gè)實(shí)施例中，所述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體中，所 述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物與所述抗繆勒氏管激素單克隆抗體通過(guò)化學(xué)反應(yīng)鍵直接連接或通過(guò)蛋 白交聯(lián)劑連接。
[0015]在一個(gè)實(shí)施例中，所述蛋白交聯(lián)劑選自碳酰二亞胺鹽和琥珀酰亞胺中的至少一 種。
[0016] 在一個(gè)實(shí)施例中，所述蛋白交聯(lián)劑選自1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺、 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺和磺酸化N-羥基琥珀 酰亞胺中的至少一種。
[0017] 在一個(gè)實(shí)施例中，還包括抗繆勒氏管激素定標(biāo)品。
[0018] -種上述的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒的制備方法，包括如下步 驟：
[0019] 將抗繆勒氏管激素單克隆抗體和固相載體混合并充分反應(yīng)，得到抗繆勒氏管激素 單克隆抗體包被的固相載體;以及
[0020] 將化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物和抗繆勒氏管激素單克隆抗體混合并充分反應(yīng)，得到化學(xué)發(fā)光 標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體。
[0021] 在一個(gè)實(shí)施例中，所述抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體中，所述固相 載體為表面帶有用于蛋白質(zhì)化學(xué)反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微粒；
[0022] 所述將抗繆勒氏管激素單克隆抗體和固相載體混合并充分反應(yīng)，得到抗繆勒氏管 激素單克隆抗體包被的固相載體的操作為:取表面帶有用于蛋白質(zhì)化學(xué)反應(yīng)連接基團(tuán)的磁 微粒的懸浮液，磁分離去上清后用緩沖液重懸，接著活化劑活化所述表面帶有用于蛋白質(zhì) 化學(xué)反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微粒的表面連接基團(tuán)，接著加入抗繆勒氏管激素單克隆抗體，室溫 下充分反應(yīng)，磁分離去除上清后重懸，得到抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的表面帶有用 于蛋白質(zhì)化學(xué)反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微粒。
[0023] 在一個(gè)實(shí)施例中，所述抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體中，所述固相 載體上偶聯(lián)有鏈霉親和素、親和素或中性親和素，所述抗繆勒氏管激素單克隆抗體上偶聯(lián) 有生物素；
[0024] 所述將抗繆勒氏管激素單克隆抗體和固相載體混合并充分反應(yīng)，得到抗繆勒氏管 激素單克隆抗體包被的固相載體的操作為:將偶聯(lián)有鏈霉親和素、親和素或中性親和素的 固相載體和偶聯(lián)有生物素的抗繆勒氏管激素單克隆抗體在緩沖液中混合，充分反應(yīng)后得到 抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體。
[0025] 在一個(gè)實(shí)施例中，所述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體中，所 述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物上偶聯(lián)有鏈霉親和素、親和素或中性親和素，所述抗繆勒氏管激素單克 隆抗體上偶聯(lián)有生物素；
[0026] 所述將化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物和抗繆勒氏管激素單克隆抗體混合并充分反應(yīng)，得到化學(xué) 發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體的操作為:將偶聯(lián)有鏈霉親和素、親和素或 中性親和素的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物和偶聯(lián)有生物素的抗繆勒氏管激素單克隆抗體在緩沖液中 混合，充分反應(yīng)后得到化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體。
[0027] 在一個(gè)實(shí)施例中，所述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體中，所 述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物與所述抗繆勒氏管激素單克隆抗體通過(guò)化學(xué)反應(yīng)鍵直接連接；
[0028] 所述將化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物和抗繆勒氏管激素單克隆抗體混合并充分反應(yīng)，得到化學(xué) 發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體的操作為:將抗繆勒氏管激素單克隆抗體和 化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物在緩沖液中混合，充分反應(yīng)后得到化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素 單克隆抗體。
[0029] 在一個(gè)實(shí)施例中，所述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體中，所 述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物與所述抗繆勒氏管激素單克隆抗體通過(guò)蛋白交聯(lián)劑連接；
[0030] 所述將化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物和抗繆勒氏管激素單克隆抗體混合并充分反應(yīng)，得到化學(xué) 發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體的操作為:將抗繆勒氏管激素單克隆抗體、 化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物和蛋白交聯(lián)劑在緩沖液中混合，充分反應(yīng)后得到化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗 繆勒氏管激素單克隆抗體。
[0031] -種抗繆勒氏管激素的濃度的檢測(cè)方法，采用上述抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫 檢測(cè)試劑盒，所述抗繆勒氏管激素的濃度的檢測(cè)方法包括如下步驟：
[0032]使用抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體和化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆 勒氏管激素單克隆抗體對(duì)待測(cè)樣本進(jìn)行夾心免疫試驗(yàn)，所述待測(cè)樣本中的抗繆勒氏管激素 與抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體和化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素 單克隆抗體反應(yīng)，形成夾心復(fù)合物，經(jīng)過(guò)清洗分離后，測(cè)得待測(cè)樣本的發(fā)光強(qiáng)度；
[0033]使用抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體和化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆 勒氏管激素單克隆抗體對(duì)抗繆勒氏管激素定標(biāo)品進(jìn)行夾心免疫試驗(yàn)，所述抗繆勒氏管激素 定標(biāo)品中的抗繆勒氏管激素與抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體和化學(xué)發(fā)光標(biāo) 記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體反應(yīng)，形成夾心復(fù)合物，經(jīng)過(guò)清洗分離后，測(cè)得抗繆 勒氏管激素定標(biāo)品的發(fā)光強(qiáng)度，根據(jù)所述抗繆勒氏管激素定標(biāo)品的發(fā)光強(qiáng)度和所述抗繆勒 氏管激素定標(biāo)品的濃度構(gòu)建橫縱坐標(biāo)分別為濃度和發(fā)光強(qiáng)度的抗繆勒氏管激素的標(biāo)準(zhǔn)曲 線；以及
[0034]將所述待測(cè)樣本的發(fā)光信號(hào)帶入所述抗繆勒氏管激素的標(biāo)準(zhǔn)曲線中，計(jì)算得到所 述待測(cè)樣本中的抗繆勒氏管激素的濃度。
[0035]這種抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒能夠以全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析 儀為檢測(cè)工具，完成抗繆勒氏管激素的檢測(cè)。這種抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑 盒，經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)，其檢測(cè)靈敏度達(dá)到0.0 lng/mL，相對(duì)于傳統(tǒng)的抗繆勒氏管激素的檢測(cè)方法靈 敏度至少提高了 10倍，這種抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)精度較高。
【附圖說(shuō)明】
[0036] 圖1為實(shí)施例3得到的抗繆勒氏管激素的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；
[0037] 圖2為實(shí)施例7得到的抗繆勒氏管激素的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0038] 為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合附圖和具體實(shí) 施例對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】做詳細(xì)的說(shuō)明。在下面的描述中闡述了很多具體細(xì)節(jié)以便于 充分理解本發(fā)明。但是本發(fā)明能夠以很多不同于在此描述的其它方式來(lái)實(shí)施，本領(lǐng)域技術(shù) 人員可以在不違背本發(fā)明內(nèi)涵的情況下做類似改進(jìn)，因此本發(fā)明不受下面公開的具體實(shí)施 的限制。
[0039] -實(shí)施方式的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，包括:抗繆勒氏管激素 單克隆抗體包被的固相載體和化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體。
[0040] 抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體中，抗繆勒氏管激素單克隆抗體可以 為人源、基因工程表達(dá)或動(dòng)物源。
[0041] 化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體中，抗繆勒氏管激素單克隆抗 體可以為人源、基因工程表達(dá)或動(dòng)物源。
[0042] 抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體和化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏 管激素單克隆抗體中，各自使用的抗繆勒氏管激素單克隆抗體可以相同，也可以不相同。
[0043] 在一個(gè)實(shí)施方式中，抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體中，固相載體為 表面帶有用于蛋白質(zhì)化學(xué)反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微粒、表面可進(jìn)行蛋白質(zhì)物理吸附的硅基材料 或經(jīng)過(guò)高分子表面處理的磁微粒。
[0044]固相載體為表面帶有用于蛋白質(zhì)化學(xué)反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微?；蚪?jīng)過(guò)高分子表面 處理的磁微粒時(shí)，優(yōu)選的，抗繆勒氏管激素單克隆抗體與磁微粒的質(zhì)量比為1:20~100。 [0045]表面帶有用于蛋白質(zhì)化學(xué)反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微粒可以為表面帶有氨基、羧基、甲 苯磺酰基或環(huán)氧乙烷基的磁微粒。
[0046]表面帶有用于蛋白質(zhì)化學(xué)反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微粒的粒徑優(yōu)選為0.05M1~3wii。 [0047]以固相載體為表面帶有用于羧基的磁微粒為例，抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被 的固相載體的制備過(guò)程可以為:取羧基化的磁微粒的懸浮液，磁分離去上清后用MES緩沖液 重懸，接著加入EDC水溶液，活化羧基化的磁微粒的表面羧基，接著加入抗繆勒氏管激素單 克隆抗體，室溫下混懸2h~10h，磁分離去除上清后用Tris緩沖液重懸，得到抗繆勒氏管激 素單克隆抗體包被的羧基化的磁微粒。其中，MES (2-(N-嗎啡啉）乙磺酸）緩沖液的濃度為 0.02M，pH為5.5; Tris緩沖液的濃度為0.1M并且含有2 %BSA，pH為8.0 ;EDC( 1-乙基-3-(3-二 甲基氨丙基)_碳化二亞胺)水溶液的濃度為10mg/mL~20mg/mL，EDC與羧基化的磁微粒的比 例為 0.05:0.1 ~1。
[0048] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體中，固相載體 上偶聯(lián)有鏈霉親和素、親和素或中性親和素，抗繆勒氏管激素單克隆抗體上偶聯(lián)有生物素。
[0049] 抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體可以是直接購(gòu)買的商品化親和素固 相載體，也可以是通過(guò)親和素化學(xué)鍵和偶聯(lián)其他固相載體制備的親和素固相載體。
[0050] 化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體中，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物為異魯米 諾、三聯(lián)吡啶釕、吖啶酯、堿性磷酸酶或辣根過(guò)氧化物酶。
[0051] 優(yōu)選的，抑制素單克隆抗體標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物中，抗繆勒氏管激素單克隆抗 體與化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物的比例為50:1~10。
[0052] 在一個(gè)實(shí)施例中，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體中，化學(xué)發(fā) 光標(biāo)記物上偶聯(lián)有鏈霉親和素、親和素或中性親和素，抗繆勒氏管激素單克隆抗體上偶聯(lián) 有生物素。
[0053] 以化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物上偶聯(lián)有鏈霉親和素，抗繆勒氏管激素單克隆抗體上偶聯(lián)有生 物素為例，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物為吖啶酯為例，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆 抗體的制備過(guò)程如下:取抗繆勒氏管激素單克隆抗體溶液，加入500yL pH8.0的磷酸鹽緩沖 液，加入0. lmg生物素琥珀酰亞胺(Biotin-NHS)混合，室溫下避光反應(yīng)，lh~2h后取出，離心 脫鹽柱脫鹽處理，脫鹽過(guò)程中首先分別用純凈水及TBS緩沖液進(jìn)行處理，收集脫鹽管中的液 體保存，得到生物素標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體;取鏈霉親和素溶液，加入0.1M~ 0.2M pH9.0~9.5的碳酸鹽緩沖液，混勻，然后加入吖啶酯混勻，室溫下避光反應(yīng)，1~2h后 取出，用zeba離心脫鹽柱脫鹽處理，脫鹽過(guò)程中首先分別用純凈水及TBS緩沖液進(jìn)行處理， 最后加入得到的吖啶酯標(biāo)記的鏈霉親和素;將生物素標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體和 吖啶酯標(biāo)記的鏈霉親和素混合，得到吖啶酯標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體。
[0054] 在另一實(shí)施例中，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體中，化學(xué)發(fā) 光標(biāo)記物與抗繆勒氏管激素單克隆抗體通過(guò)化學(xué)反應(yīng)鍵直接連接或通過(guò)蛋白交聯(lián)劑連接。
[0055] 蛋白交聯(lián)劑可以為碳酰二亞胺鹽和琥珀酰亞胺中的至少一種。
[0056] 優(yōu)選的，蛋白交聯(lián)劑選自1-乙基_(3_二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺、1-乙基_(3_二 甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺和磺酸化N-羥基琥珀酰亞胺中的至 少一種。
[0057]以化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物為吖啶酯為例，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物與抗繆勒氏管激素單克隆抗體 通過(guò)化學(xué)反應(yīng)鍵直接連接制得化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體的過(guò)程 如下:取抗繆勒氏管激素單克隆抗體，加入碳酸鹽緩沖液，混勻，然后加入吖啶酯混勻，室溫 下避光反應(yīng)，lh~2h后取出，離心脫鹽柱脫鹽處理，脫鹽過(guò)程中首先分別用純凈水及TBS緩 沖液進(jìn)行處理，得到吖啶酯標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體。
[0058]以化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物為堿性磷酸酶，蛋白交聯(lián)劑為1-乙基_(3_二甲基氨基丙基)碳 酰二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺為例，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物與抗繆勒氏管激素單克隆抗體 通過(guò)蛋白交聯(lián)劑連接制得化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體的過(guò)程如下： 取lmg抗繆勒氏管激素單克隆抗體溶液、lmg堿性磷酸酶，加入500此pH5.5的2-(N-嗎啡啉） 乙磺酸(MES)緩沖液，加入lmgl-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽和lmg N-羥 基琥珀酰亞胺混合，室溫下避光反應(yīng)，lh~2h后取出，離心脫鹽柱脫鹽處理，脫鹽過(guò)程中首 先分別用純凈水及TBS緩沖液進(jìn)行處理，收集脫鹽管中的液體保存，得到堿性磷酸酶標(biāo)記的 抗繆勒氏管激素單克隆抗體。
[0059]在其他的實(shí)施例中，上述抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒還包括化學(xué)發(fā) 光底物液。
[0060] 化學(xué)發(fā)光底物液包括A液和B液。A液可以為H2〇2溶液，B液可以為NaOH溶液。
[0061 ] 本實(shí)施例中，A液為濃度為0. lmol/L的H2〇2溶液，B液為濃度為0.25mol/L的NaOH溶 液。
[0062] 在其他的實(shí)施例中，上述抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒還包括抗繆勒 氏管激素定標(biāo)品。
[0063] 抗繆勒氏管激素定標(biāo)品的制備過(guò)程如下:采用定標(biāo)品緩沖液將抗繆勒氏管激素配 制成濃度分別為〇~30ng/mL的抗繆勒氏管激素的溶液。
[0064]具體的，抗繆勒氏管激素定標(biāo)品為濃度分別為0ng/mL、0 ? 7ng/mL、2 ? 5ng/mL、 4 ? 65ng/mL、13 ? 58ng/mL和28 ? 56ng/mL的抗繆勒氏管激素的溶液。
[0065] 這種抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒能夠以全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析 儀為檢測(cè)工具，完成抗繆勒氏管激素的檢測(cè)。這種抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑 盒，經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)，其檢測(cè)靈敏度達(dá)到0.0 lng/mL，相對(duì)于傳統(tǒng)的抗繆勒氏管激素的檢測(cè)方法靈 敏度至少提高了 10倍，這種抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)精度較高。
[0066] 這種抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒使用時(shí)先利用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免 疫分析儀對(duì)抗繆勒氏管激素定標(biāo)品進(jìn)行檢測(cè)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，內(nèi)置于電腦軟件，測(cè)試實(shí)際樣 本，根據(jù)樣本發(fā)光值計(jì)算樣本濃度，最后對(duì)抗繆勒氏管激素全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng) 進(jìn)行性能(靈敏度、線性、精密度、干擾性)的評(píng)價(jià)。
[0067]這種抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，具有以下優(yōu)點(diǎn)：
[0068] 1、選擇吖啶酯作為標(biāo)記材料，并應(yīng)用于化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)，該發(fā)光體系為直 接化學(xué)發(fā)光，與傳統(tǒng)的酶促化學(xué)發(fā)光相比，該反應(yīng)不需要酶的參與，更加節(jié)約成本；
[0069] 2、選用的吖啶酯或堿性磷酸酶化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)檢測(cè)靈敏度高，能夠達(dá)到 0.0 lng/mL，相比其它的檢測(cè)方法靈敏度至少提高了 10倍；
[0070] 3、選用吖啶酯的化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)線性范圍寬，能達(dá)到25ng/mL以上；
[0071] 4、吖啶酯化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)重復(fù)性高，批內(nèi)及批間差均在5%以內(nèi)，這是其它 化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)難以達(dá)到的；
[0072] 5、化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)已實(shí)現(xiàn)樣本的定量，通過(guò)內(nèi)置標(biāo)準(zhǔn)曲線到測(cè)試軟件，只 需測(cè)試樣本就可直接得到樣本的濃度值；
[0073] 6、化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)可以實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)化，試劑及樣本的添加全有儀器完成， 操作更加簡(jiǎn)便，減少了人為的誤差。
[0074]綜上所述，這種抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒檢測(cè)成本低、靈敏度高、 檢測(cè)線性范圍廣、重現(xiàn)性高、可以定量、操作簡(jiǎn)單。
[0075]此外，使用這種抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，通過(guò)測(cè)定特定人群的 AMH濃度水平或分布，受試者AMH濃度與之比較，若偏離標(biāo)定人群的AMH濃度水平，則提示受 試者為非健康或功能弱。也可以對(duì)同一受試者，進(jìn)行連續(xù)AMH水平監(jiān)測(cè)，以評(píng)估生殖相關(guān)功 能?？捎糜谳o助診斷或預(yù)測(cè)疾病，監(jiān)控及預(yù)測(cè)健康狀態(tài):診斷顆粒細(xì)胞瘤、診斷性發(fā)育異常、 診斷多囊卵巢綜合征、監(jiān)測(cè)卵巢儲(chǔ)備力、預(yù)測(cè)體外受精聯(lián)合胚胎移植技術(shù)(IVF)的卵巢反應(yīng) 性、預(yù)防卵巢過(guò)度刺激綜合征(0HSS)、評(píng)估男性生殖功能等。
[0076] 本發(fā)明還公開了一種上述的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒的制備方 法，包括如下步驟：
[0077] S110、將抗繆勒氏管激素單克隆抗體和固相載體混合并充分反應(yīng)，得到抗繆勒氏 管激素單克隆抗體包被的固相載體。
[0078] 抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體中，抗繆勒氏管激素單克隆抗體可以 為人源、基因工程表達(dá)或動(dòng)物源。
[0079] 在一個(gè)實(shí)施方式中，抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體中，固相載體為 表面帶有用于蛋白質(zhì)化學(xué)反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微粒、表面可進(jìn)行蛋白質(zhì)物理吸附的硅基材料 或經(jīng)過(guò)高分子表面處理的磁微粒。
[0080] 固相載體為表面帶有用于蛋白質(zhì)化學(xué)反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微粒或經(jīng)過(guò)高分子表面 處理的磁微粒時(shí)，優(yōu)選的，抗繆勒氏管激素單克隆抗體與磁微粒的質(zhì)量比為1:20~100。
[0081] 表面帶有用于蛋白質(zhì)化學(xué)反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微?？梢詾楸砻鎺в邪被?、羧基、甲 苯磺?；颦h(huán)氧乙烷基的磁微粒。
[0082]表面帶有用于蛋白質(zhì)化學(xué)反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微粒的粒徑優(yōu)選為0.05WI1~3WI1。
[0083] 當(dāng)抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體中，固相載體為表面帶有用于蛋白 質(zhì)化學(xué)反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微粒時(shí)，S110為:取表面帶有用于蛋白質(zhì)化學(xué)反應(yīng)連接基團(tuán)的磁 微粒的懸浮液，磁分離去上清后用緩沖液重懸，接著活化劑活化表面帶有用于蛋白質(zhì)化學(xué) 反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微粒的表面連接基團(tuán)，接著加入抗繆勒氏管激素單克隆抗體，室溫下充 分反應(yīng)，磁分離去除上清后重懸，得到抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的表面帶有用于蛋 白質(zhì)化學(xué)反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微粒。
[0084] 以固相載體為表面帶有用于羧基的磁微粒為例，抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被 的固相載體的制備過(guò)程可以為:取羧基化的磁微粒的懸浮液，磁分離去上清后用MES緩沖液 重懸，接著加入EDC水溶液，活化羧基化的磁微粒的表面羧基，接著加入抗繆勒氏管激素單 克隆抗體，室溫下混懸2h~10h，磁分離去除上清后用Tris緩沖液重懸，得到抗繆勒氏管激 素單克隆抗體包被的羧基化的磁微粒。其中，MES (2-(N-嗎啡啉）乙磺酸）緩沖液的濃度為 0.02M，pH為5.5; Tris緩沖液的濃度為0.1M并且含有2 %BSA，pH為8.0 ;EDC( 1-乙基-3-(3-二 甲基氨丙基)_碳化二亞胺)水溶液的濃度為10mg/mL~20mg/mL，EDC與羧基化的磁微粒的比 例為 0.05:0.1 ~1。
[0085] 在另一個(gè)實(shí)施方式中，抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體中，固相載體 上偶聯(lián)有鏈霉親和素、親和素或中性親和素，抗繆勒氏管激素單克隆抗體上偶聯(lián)有生物素。
[0086] 抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體可以是直接購(gòu)買的商品化親和素固 相載體，也可以是通過(guò)親和素化學(xué)鍵和偶聯(lián)其他固相載體制備的親和素固相載體。
[0087] 抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體中，固相載體上偶聯(lián)有鏈霉親和素、 親和素或中性親和素，抗繆勒氏管激素單克隆抗體上偶聯(lián)有生物素時(shí)，S110為:將偶聯(lián)有鏈 霉親和素、親和素或中性親和素的固相載體和偶聯(lián)有生物素的抗繆勒氏管激素單克隆抗體 在緩沖液中混合，充分反應(yīng)后得到抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體。
[0088] S120、將化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物和抗繆勒氏管激素單克隆抗體混合并充分反應(yīng)，得到化 學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體。
[0089] S110和S120的次序可以替換，不影響本方法。
[0090] 化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體中，抗繆勒氏管激素單克隆抗 體可以為人源、基因工程表達(dá)或動(dòng)物源。
[0091] 抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體和化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏 管激素單克隆抗體中，各自使用的抗繆勒氏管激素單克隆抗體可以相同，也可以不相同。
[0092]化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體中，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物為異魯米 諾、三聯(lián)吡啶釕、吖啶酯、堿性磷酸酶或辣根過(guò)氧化物酶。
[0093]優(yōu)選的，抑制素單克隆抗體標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物中，抗繆勒氏管激素單克隆抗 體與化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物的比例為50:1~10。
[0094] 在一個(gè)實(shí)施例中，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體中，化學(xué)發(fā) 光標(biāo)記物上偶聯(lián)有鏈霉親和素、親和素或中性親和素，抗繆勒氏管激素單克隆抗體上偶聯(lián) 有生物素。
[0095] 化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體中，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物上偶聯(lián)有 鏈霉親和素、親和素或中性親和素，抗繆勒氏管激素單克隆抗體上偶聯(lián)有生物素時(shí)，S120 為:將偶聯(lián)有鏈霉親和素、親和素或中性親和素的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物和偶聯(lián)有生物素的抗繆 勒氏管激素單克隆抗體在緩沖液中混合，充分反應(yīng)后得到化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏 管激素單克隆抗體。
[0096] 具體的，以化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物上偶聯(lián)有鏈霉親和素，抗繆勒氏管激素單克隆抗體上 偶聯(lián)有生物素為例，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物為吖啶酯為例，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激 素單克隆抗體的制備過(guò)程如下:取抗繆勒氏管激素單克隆抗體溶液，加入500yL pH8.0的磷 酸鹽緩沖液，加入O.lmg生物素琥珀酰亞胺(Biotin-NHS)混合，室溫下避光反應(yīng)，lh~2h后 取出，離心脫鹽柱脫鹽處理，脫鹽過(guò)程中首先分別用純凈水及TBS緩沖液進(jìn)行處理，收集脫 鹽管中的液體保存，得到生物素標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體;取鏈霉親和素溶液，加 入0.1M~0.2M pH 9.0~9.5的碳酸鹽緩沖液，混勻，然后加入吖啶酯混勻，室溫下避光反 應(yīng)，1~2h后取出，用zeba離心脫鹽柱脫鹽處理，脫鹽過(guò)程中首先分別用純凈水及TBS緩沖液 進(jìn)行處理，最后加入得到的吖啶酯標(biāo)記的鏈霉親和素;將生物素標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單 克隆抗體和吖啶酯標(biāo)記的鏈霉親和素混合，得到吖啶酯標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗 體。
[0097] 在另一實(shí)施例中，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體中，化學(xué)發(fā) 光標(biāo)記物與抗繆勒氏管激素單克隆抗體通過(guò)化學(xué)反應(yīng)鍵直接連接或通過(guò)蛋白交聯(lián)劑連接。 [0098]蛋白交聯(lián)劑可以為碳酰二亞胺鹽和琥珀酰亞胺中的至少一種。
[0099] 優(yōu)選的，蛋白交聯(lián)劑選自1-乙基_(3_二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺、1-乙基_(3_二 甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺和磺酸化N-羥基琥珀酰亞胺中的至 少一種。
[0100] 化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體中，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物與抗繆勒 氏管激素單克隆抗體通過(guò)化學(xué)反應(yīng)鍵直接連接時(shí)，S120為:將抗繆勒氏管激素單克隆抗體 和化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物在緩沖液中混合，充分反應(yīng)后得到化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激 素單克隆抗體。
[0101] 具體的，以化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物為吖啶酯為例，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物與抗繆勒氏管激素單 克隆抗體通過(guò)化學(xué)反應(yīng)鍵直接連接制得化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗 體的過(guò)程如下：取抗繆勒氏管激素單克隆抗體，加入碳酸鹽緩沖液，混勻，然后加入吖啶酯 混勻，室溫下避光反應(yīng)，lh~2h后取出，離心脫鹽柱脫鹽處理，脫鹽過(guò)程中首先分別用純凈 水及TBS緩沖液進(jìn)行處理，得到吖啶酯標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體。
[0102] 化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體中，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物與抗繆勒 氏管激素單克隆抗體通過(guò)蛋白交聯(lián)劑連接時(shí)，S120為:將抗繆勒氏管激素單克隆抗體、化學(xué) 發(fā)光標(biāo)記物和蛋白交聯(lián)劑在緩沖液中混合，充分反應(yīng)后得到化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒 氏管激素單克隆抗體。
[0103] 具體的，以化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物為堿性磷酸酶，蛋白交聯(lián)劑為1-乙基-(3-二甲基氨基 丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺為例，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物與抗繆勒氏管激素單 克隆抗體通過(guò)蛋白交聯(lián)劑連接制得化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體的 過(guò)程如下：取lmg抗繆勒氏管激素單克隆抗體溶液、lmg堿性磷酸酶，加入500此pH5.5的2-(N-嗎啡啉）乙磺酸( MES)緩沖液，加入lmgl-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽 和lmg N-羥基琥珀酰亞胺混合，室溫下避光反應(yīng)，lh~2h后取出，離心脫鹽柱脫鹽處理，脫 鹽過(guò)程中首先分別用純凈水及TBS緩沖液進(jìn)行處理，收集脫鹽管中的液體保存，得到堿性磷 酸酶標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體。
[0104]在其他的實(shí)施例中，抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒還包括化學(xué)發(fā)光底 物液。
[0105] 化學(xué)發(fā)光底物液包括A液和B液。A液可以為H2〇2溶液，B液可以為NaOH溶液。
[0106] 本實(shí)施例中，A液為濃度為0. lmol/L的H2〇2溶液，B液為濃度為0.25mol/L的NaOH溶 液。
[0107]在其他的實(shí)施例中，抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒還包括抗繆勒氏管 激素定標(biāo)品。
[0108]抗繆勒氏管激素定標(biāo)品的制備過(guò)程如下:采用定標(biāo)品緩沖液將抗繆勒氏管激素配 制成濃度分別為〇~30ng/mL的抗繆勒氏管激素的溶液。
[0109]具體的，抗繆勒氏管激素定標(biāo)品為濃度分別為0ng/mL、0.7ng/mL、2.5ng/mL、 4 ? 65ng/mL、13 ? 58ng/mL和28 ? 56ng/mL的抗繆勒氏管激素的溶液。
[0110]本發(fā)明還公開了用上述抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒的抗繆勒氏管 激素的濃度的檢測(cè)方法，包括如下步驟：
[0111] S210、使用抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體和化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的 抗繆勒氏管激素單克隆抗體對(duì)待測(cè)樣本進(jìn)行夾心免疫試驗(yàn)，待測(cè)樣本中的抗繆勒氏管激素 與抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體和化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素 單克隆抗體反應(yīng)，形成夾心復(fù)合物，經(jīng)過(guò)清洗分離后，測(cè)得待測(cè)樣本的發(fā)光信號(hào)。
[0112] S220、使用抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體和化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的 抗繆勒氏管激素單克隆抗體對(duì)抗繆勒氏管激素定標(biāo)品進(jìn)行夾心免疫試驗(yàn)，抗繆勒氏管激素 定標(biāo)品中的抗繆勒氏管激素與抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體和化學(xué)發(fā)光標(biāo) 記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體反應(yīng)，形成夾心復(fù)合物，經(jīng)過(guò)清洗分離后，測(cè)得抗繆 勒氏管激素定標(biāo)品的發(fā)光強(qiáng)度，根據(jù)抗繆勒氏管激素定標(biāo)品的發(fā)光強(qiáng)度和抗繆勒氏管激素 定標(biāo)品的濃度構(gòu)建橫縱坐標(biāo)分別為濃度和發(fā)光強(qiáng)度的抗繆勒氏管激素的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0113] S210和S220的次序可以替換，不影響本方法。
[0114] 抗繆勒氏管激素定標(biāo)品的制備過(guò)程如下:采用定標(biāo)品緩沖液將抗繆勒氏管激素配 制成濃度分別為〇~30ng/mL的抗繆勒氏管激素的溶液。
[0115]具體的，抗繆勒氏管激素定標(biāo)品為濃度分別為0ng/mL、0 ? 7ng/mL、2 ? 5ng/mL、 4 ? 65ng/mL、13 ? 58ng/mL和28 ? 56ng/mL的抗繆勒氏管激素的溶液。
[0116] S230、將S210得到的待測(cè)樣本的發(fā)光信號(hào)帶入S220得到的抗繆勒氏管激素的標(biāo)準(zhǔn) 曲線中，計(jì)算得到待測(cè)樣本中的抗繆勒氏管激素的濃度。
[0117] 以下為具體實(shí)施例。
[0118]實(shí)施例1:抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒的制備
[0119] (1 )AMH單克隆抗體包被的磁顆粒的制備：
[0120] 取50mg粒徑為0.05iim~3ym的羧基化的磁微粒(MagnaBindTM，貨號(hào)21353)懸浮液， 磁分離去上清，用0 ? 02M，pH為5 ? 5的MES緩沖液重懸，加入0 ? 5mL~2mL新配置的10mg/mL的 EDC水溶液，活化磁珠表面羧基，加入lmg~3mg的AMH單克隆抗體(Anshlabs，AA011)，室溫下 混懸2h~10h，磁分離，去除上清，用含2 %BSA的0.1M pH為8.0的Tris緩沖液重懸到lmg/mL， 得到AMH單克隆抗體包被的磁顆粒，每瓶5mL分裝保存于4°C備用。
[0121 ] (2)吖啶酯標(biāo)記的AMH單克隆抗體的制備：
[0122]取 500yL 1.0mg/mL 的 AMH 單克隆標(biāo)記抗體（Anshlabs，AA012)溶液，加入 500yL 0.1-0.211?119.0-9.5的碳酸鹽緩沖液，混勻，然后加入10~20此511^/1^的吖啶酯混勻，室 溫下避光反應(yīng)，1~2h后取出，用2mL的zeba離心脫鹽柱脫鹽處理，脫鹽過(guò)程中首先分別用純 凈水及TBS緩沖液進(jìn)行處理，最后加入得到的吖啶酯標(biāo)記的AMH單克隆抗體溶液，收集離心 管中的液體至保存管得到吖啶酯標(biāo)記的AMH單克隆抗體，每瓶lmL分裝保存于4°C備用。 [0 123] (3)AMH定標(biāo)品的制備：
[0124] 用標(biāo)準(zhǔn)品緩沖液(40mM Tris-HCl，0.5%BSA，l%NaCl，pH 8.0)將人源化AMH蛋白 配置成濃度為〇ng/mL、0 ? 7ng/mL、2 ? 5ng/mL、4 ? 65ng/mL、13 ? 58ng/mL、28 ? 56ng/mL，每瓶 0.5mL分裝，經(jīng)凍干處理后，4 °C保存?zhèn)溆谩?br>[0125] 實(shí)施例2: AMH吖啶酯化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)方法
[0126] 本發(fā)明以全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀和實(shí)施例1制得的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光 免疫檢測(cè)試劑盒為檢測(cè)工具，本發(fā)明的方法學(xué)模式為夾心法，即儀器依次加入50此的樣品、 50yL的AMH單克隆抗體包被的磁顆粒以及50yL的吖啶酯標(biāo)記的AMH單克隆抗體，反應(yīng)lOmin 后，進(jìn)行磁分離，儀器將反應(yīng)混合物送入暗室，依次加入發(fā)光底物A液(含0.1M HN03和0.5 % H2〇2)及B液(含0.25M NaOH)進(jìn)行發(fā)光反應(yīng)，最后記錄發(fā)光強(qiáng)度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出被測(cè)樣品 的AMH含量。
[0127] 實(shí)施例3:實(shí)施例1制得的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒性能評(píng)價(jià)
[0128] 采用實(shí)施例2中的方法對(duì)抗繆勒氏管激素定標(biāo)品進(jìn)行檢測(cè)，得到繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如 圖1所示。
[0129] 靈敏度的檢測(cè)：
[0130] 參照CLSI EP17-A文件推薦實(shí)驗(yàn)方案，計(jì)算AMH化學(xué)發(fā)光免疫試劑盒的靈敏度，求 得的靈敏度為〇. 〇〇6ng/mL。
[0131] 線性的檢測(cè)：
[0132] 對(duì)濃度為0.01ng/mL、0 ? 5ng/mL、2ng/mL、10ng/mL、25ng/mL 標(biāo)準(zhǔn)品做線性分析，計(jì) 算線性相關(guān)系數(shù)，r = 0.9991，另外，該試劑盒對(duì)AMH樣品檢測(cè)的線性范圍為0.01-25ng/mL。
[0133] 精密度測(cè)定：
[0134] 取濃度為0.1 ng/mL及10ng/mL兩個(gè)AMH樣品，每個(gè)樣本每個(gè)濃度各做3個(gè)平行，用三 批試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算試劑盒批內(nèi)及批間差，結(jié)果表明該試劑盒批內(nèi)及批間差均小于 5%〇
[0135] 干擾性實(shí)驗(yàn)：
[0136] 取混合血清分別添加干擾物包括:結(jié)合膽紅素、游離膽紅素、血紅蛋白、抗壞血酸、 甘油酯，添加質(zhì)量比按照1:20進(jìn)行，分別測(cè)定混合血清及添加了各種干擾物后混合血清的 測(cè)值，計(jì)算二者之間的偏差，以±10%為可接受范圍。結(jié)果表明，干擾性均達(dá)到NCCLS的文件 標(biāo)準(zhǔn)，可用于臨床實(shí)驗(yàn)室AMH狀況的準(zhǔn)確評(píng)估。
[0137] 實(shí)施例4、抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒的對(duì)比實(shí)驗(yàn)
[0138] 分別用實(shí)施例2中的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法和傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)濃度為0、 50pg/mL的AMH樣品做檢測(cè)，對(duì)零濃度樣本進(jìn)行20次重復(fù)測(cè)試，計(jì)算零濃度樣本的均值(M)和 SD，將M+2SD的RLU值帶入定標(biāo)方程中，求出對(duì)應(yīng)的濃度值，即為檢測(cè)靈敏度。兩種方法檢測(cè) 靈敏度相比，數(shù)據(jù)如下表所示：
[0140] 由上表可以看出，化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法的靈敏度較酶聯(lián)免疫吸附法提高了約50倍。
[0141] 實(shí)施例5:抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒的制備
[0142] (1 )AMH單克隆抗體包被的磁顆粒的制備：
[0143] 取50mg粒徑為0.05mi~2wii的甲苯磺?；拇盼⒘?Dynal，301100)懸浮液，磁 分離去上清，用PH9.0~11.0的硼酸鹽緩沖液重懸，加入lmg~3mg的AMH單克隆抗體 (Anshlabs，AA011)，加入0.5mL~2mL飽和硫酸銨溶液，37°C下旋轉(zhuǎn)混合反應(yīng)20h~30h，磁分 離，去除上清，用含2%BSA的0.1M pH為8.0的Tris緩沖液重懸到lmg/mL，得到AMH單克隆抗 體包被的磁顆粒，每瓶5mL分裝保存于4°C備用。
[0144] (2)堿性磷酸酶標(biāo)記的AMH單克隆抗體的制備：
[0145] 取500yL 2.0mg/mL的AMH單克隆標(biāo)記抗體(Anshlabs，AA012)，加入500yL pH5.0的 MES酸性緩沖液，加入lmg堿性磷酸酶混勻，然后加入lmg 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰 二亞胺鹽酸鹽(EDC.HCL)交聯(lián)劑或加入lmg 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸 鹽(EDC.HCL)及l(fā)mg N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)混合交聯(lián)劑，室溫下避光反應(yīng)，lh~2h后取出， 離心脫鹽柱脫鹽處理，脫鹽過(guò)程中首先分別用純凈水及TBS緩沖液進(jìn)行處理，收集脫鹽管中 的液體保存。將脫鹽液上AKTA蛋白純化系統(tǒng)進(jìn)行純化，收集得到堿性磷酸酶標(biāo)記的AMH單克 隆抗體，每瓶lmL分裝保存于4°C備用。
[0146] (3)AMH定標(biāo)品的制備：
[0147] 用標(biāo)準(zhǔn)品緩沖液(40mM Tris-HCl，0.5%BSA，l%NaCl，pH 8.0)將人源化AMH蛋白 配置成濃度為〇ng/mL、0 ? 7ng/mL、2 ? 5ng/mL、4 ? 65ng/mL、13 ? 58ng/mL、28 ? 56ng/mL，每瓶 0.5mL分裝，經(jīng)凍干處理后，4 °C保存?zhèn)溆谩?br>[0148] 實(shí)施例6: AMH堿性磷酸酶化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)方法
[0149] 本發(fā)明以全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀和實(shí)施例5制得的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光 免疫檢測(cè)試劑盒為檢測(cè)工具，本發(fā)明的方法學(xué)模式為夾心法，即儀器依次加入20此的樣品、 50yL的AMH單克隆抗體包被的磁顆粒以及50yL的堿性磷酸酶標(biāo)記的AMH抗體，反應(yīng)lOmin后， 進(jìn)行磁分離，儀器將反應(yīng)混合物送入暗室，加入AMPH)發(fā)光底物進(jìn)行發(fā)光反應(yīng)，最后記錄發(fā) 光強(qiáng)度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出被測(cè)樣品的AMH含量。
[0150]實(shí)施例7:實(shí)施例5制得的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒性能評(píng)價(jià)
[0151] 采用實(shí)施例6中的方法對(duì)抗繆勒氏管激素定標(biāo)品進(jìn)行檢測(cè)，得到繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如 圖2所示。
[0152] 靈敏度的檢測(cè)：
[0153] 參照CLSI EP17-A文件推薦實(shí)驗(yàn)方案，計(jì)算AMH化學(xué)發(fā)光免疫試劑盒的靈敏度，求 得的靈敏度為〇.〇6ng/mL。
[0154]實(shí)施例8:抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒的制備
[0155] (1 )AMH單克隆抗體包被的磁顆粒的制備。
[0156] 與實(shí)施例5中（1)一致。
[0157] (2)生物素標(biāo)記AMH單克隆抗體的制備：
[0158] 取500yL 2.0mg/mL的AMH單克隆標(biāo)記抗體，加入500yL pH8.0的磷酸鹽緩沖液，加 入O.lmg生物素琥珀酰亞胺(Biotin-NHS)混合，室溫下避光反應(yīng)，1-2h后取出，離心脫鹽柱 脫鹽處理，脫鹽過(guò)程中首先分別用純凈水及TBS緩沖液進(jìn)行處理，收集脫鹽管中的液體保 存。得到生物素標(biāo)記的AMH單克隆抗體，每瓶lmL分裝保存于4°C備用。
[0159] (3)吖啶酯標(biāo)記的鏈霉親和素的制備：
[0160] 取500此1.011^/1^的鏈霉親和素，加入500此0.1-0.21^119.0-9.5的碳酸鹽緩 沖液，混勻，然后加入10_20yL 5mg/mL的吖啶酯混勻，室溫下避光反應(yīng)，1-2h后取出，用2mL 的zeba離心脫鹽柱脫鹽處理，脫鹽過(guò)程中首先分別用純凈水及TBS緩沖液進(jìn)行處理，最后加 入得到的吖啶酯標(biāo)記的鏈霉親和素，收集離心管中的液體至保存管得到吖啶酯標(biāo)記的鏈霉 親和素，每瓶lmL分裝保存于4°C備用。
[0161 ] (4)吖啶酯標(biāo)記的AMH單克隆抗體的制備:將生物素標(biāo)記AMH單克隆抗體和吖啶酯 標(biāo)記的鏈霉親和素按照4:1比例混合，得到吖啶酯標(biāo)記的AMH單克隆抗體。
[0162] (5)AMH定標(biāo)品的制備：
[0163]用標(biāo)準(zhǔn)品緩沖液(40mM Tris-HCl，0.5%BSA，l%NaCl，pH 8.0)將人源化AMH蛋白 配置成濃度為〇ng/mL、0 ? 7ng/mL、2 ? 5ng/mL、4 ? 65ng/mL、13 ? 58ng/mL、28 ? 56ng/mL，每瓶 0.5mL分裝，經(jīng)凍干處理后，4 °C保存?zhèn)溆谩?br>[0164] 實(shí)施例9:親和素-生物素系統(tǒng)免疫檢測(cè)AMH的方法
[0165] 以全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀和實(shí)施例8制得的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢 測(cè)試劑盒為檢測(cè)工具，即儀器依次加入1〇此的樣品、50此的AMH單克隆抗體包被的磁顆粒以 及50此的生物素標(biāo)記的AMH抗體、50此叮啶酯標(biāo)記的鏈霉親和素，反應(yīng)20min后，進(jìn)行磁分 離，儀器將反應(yīng)混合物送入暗室，依次加入發(fā)光底物A液(含0.1M HN03和0.5%H2〇2)及B液 (含0.25M NaOH)進(jìn)行發(fā)光反應(yīng)，最后記錄發(fā)光強(qiáng)度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出被測(cè)樣品的AMH含 量。
[0166] 實(shí)施例10:實(shí)施例8制得的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒性能評(píng)價(jià)
[0167] 靈敏度的檢測(cè)：
[0168] 參照CLSI EP17-A文件推薦實(shí)驗(yàn)方案，計(jì)算AMH化學(xué)發(fā)光免疫試劑盒的靈敏度，求 得的靈敏度為〇. 〇〇lng/mL。
[0169] 以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并 不能因此而理解為對(duì)本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員 來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保 護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括:抗繆勒氏管激素 單克隆抗體包被的固相載體和化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述 抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體中，所述固相載體為表面帶有用于蛋白質(zhì)化學(xué) 反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微粒。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述 表面帶有用于蛋白質(zhì)化學(xué)反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微粒為表面帶有氨基、羧基、甲苯磺?；颦h(huán) 氧乙烷基的磁微粒。4. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于， 所述表面帶有用于蛋白質(zhì)化學(xué)反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微粒的粒徑為〇. 〇5μηι~3μηι。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述 抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體中，所述固相載體上偶聯(lián)有鏈霉親和素、親和 素或中性親和素，所述抗繆勒氏管激素單克隆抗體上偶聯(lián)有生物素。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述 化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體中，所述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物為異魯米諾、 三聯(lián)吡啶釕、吖啶酯、堿性磷酸酶或辣根過(guò)氧化物酶。7. 根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于， 所述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體中，所述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物上偶聯(lián)有 鏈霉親和素、親和素或中性親和素，所述抗繆勒氏管激素單克隆抗體上偶聯(lián)有生物素。8. 根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于， 所述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體中，所述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物與所述抗 繆勒氏管激素單克隆抗體通過(guò)化學(xué)反應(yīng)鍵直接連接或通過(guò)蛋白交聯(lián)劑連接。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述 蛋白交聯(lián)劑選自碳酰二亞胺鹽和琥珀酰亞胺中的至少一種。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所 述蛋白交聯(lián)劑選自1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基） 碳酰二亞胺鹽酸鹽、Ν-羥基琥珀酰亞胺和磺酸化Ν-羥基琥珀酰亞胺中的至少一種。11. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，還 包括抗繆勒氏管激素定標(biāo)品。12. -種權(quán)利要求1~11中任一項(xiàng)所述的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒的 制備方法，其特征在于，包括如下步驟： 將抗繆勒氏管激素單克隆抗體和固相載體混合并充分反應(yīng)，得到抗繆勒氏管激素單克 隆抗體包被的固相載體;以及 將化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物和抗繆勒氏管激素單克隆抗體混合并充分反應(yīng)，得到化學(xué)發(fā)光標(biāo)記 物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體。13. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所 述抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體中，所述固相載體為表面帶有用于蛋白質(zhì)化 學(xué)反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微粒； 所述將抗繆勒氏管激素單克隆抗體和固相載體混合并充分反應(yīng)，得到抗繆勒氏管激素 單克隆抗體包被的固相載體的操作為:取表面帶有用于蛋白質(zhì)化學(xué)反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微粒 的懸浮液，磁分離去上清后用緩沖液重懸，接著活化劑活化所述表面帶有用于蛋白質(zhì)化學(xué) 反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微粒的表面連接基團(tuán)，接著加入抗繆勒氏管激素單克隆抗體，室溫下充 分反應(yīng)，磁分離去除上清后重懸，得到抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的表面帶有用于蛋 白質(zhì)化學(xué)反應(yīng)連接基團(tuán)的磁微粒。14. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所 述抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體中，所述固相載體上偶聯(lián)有鏈霉親和素、親 和素或中性親和素，所述抗繆勒氏管激素單克隆抗體上偶聯(lián)有生物素； 所述將抗繆勒氏管激素單克隆抗體和固相載體混合并充分反應(yīng)，得到抗繆勒氏管激素 單克隆抗體包被的固相載體的操作為:將偶聯(lián)有鏈霉親和素、親和素或中性親和素的固相 載體和偶聯(lián)有生物素的抗繆勒氏管激素單克隆抗體在緩沖液中混合，充分反應(yīng)后得到抗繆 勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體。15. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所 述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體中，所述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物上偶聯(lián)有鏈 霉親和素、親和素或中性親和素，所述抗繆勒氏管激素單克隆抗體上偶聯(lián)有生物素； 所述將化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物和抗繆勒氏管激素單克隆抗體混合并充分反應(yīng)，得到化學(xué)發(fā)光 標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體的操作為:將偶聯(lián)有鏈霉親和素、親和素或中性 親和素的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物和偶聯(lián)有生物素的抗繆勒氏管激素單克隆抗體在緩沖液中混合， 充分反應(yīng)后得到化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體。16. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所 述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體中，所述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物與所述抗繆 勒氏管激素單克隆抗體通過(guò)化學(xué)反應(yīng)鍵直接連接； 所述將化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物和抗繆勒氏管激素單克隆抗體混合并充分反應(yīng)，得到化學(xué)發(fā)光 標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體的操作為:將抗繆勒氏管激素單克隆抗體和化學(xué) 發(fā)光標(biāo)記物在緩沖液中混合，充分反應(yīng)后得到化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克 隆抗體。17. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的抗繆勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所 述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體中，所述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物與所述抗繆 勒氏管激素單克隆抗體通過(guò)蛋白交聯(lián)劑連接； 所述將化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物和抗繆勒氏管激素單克隆抗體混合并充分反應(yīng)，得到化學(xué)發(fā)光 標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體的操作為:將抗繆勒氏管激素單克隆抗體、化學(xué) 發(fā)光標(biāo)記物和蛋白交聯(lián)劑在緩沖液中混合，充分反應(yīng)后得到化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒 氏管激素單克隆抗體。18. -種抗繆勒氏管激素的濃度的檢測(cè)方法，采用如權(quán)利要求1~11中任一項(xiàng)所述抗繆 勒氏管激素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述抗繆勒氏管激素的濃度的檢測(cè)方 法包括如下步驟： 使用抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體和化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏 管激素單克隆抗體對(duì)待測(cè)樣本進(jìn)行夾心免疫試驗(yàn)，所述待測(cè)樣本中的抗繆勒氏管激素與抗 繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體和化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克 隆抗體反應(yīng)，形成夾心復(fù)合物，經(jīng)過(guò)清洗分離后，測(cè)得待測(cè)樣本的發(fā)光強(qiáng)度； 使用抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體和化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的抗繆勒氏 管激素單克隆抗體對(duì)抗繆勒氏管激素定標(biāo)品進(jìn)行夾心免疫試驗(yàn)，所述抗繆勒氏管激素定標(biāo) 品中的抗繆勒氏管激素與抗繆勒氏管激素單克隆抗體包被的固相載體和化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物 標(biāo)記的抗繆勒氏管激素單克隆抗體反應(yīng)，形成夾心復(fù)合物，經(jīng)過(guò)清洗分離后，測(cè)得抗繆勒氏 管激素定標(biāo)品的發(fā)光強(qiáng)度，根據(jù)所述抗繆勒氏管激素定標(biāo)品的發(fā)光強(qiáng)度和所述抗繆勒氏管 激素定標(biāo)品的濃度構(gòu)建橫縱坐標(biāo)分別為濃度和發(fā)光強(qiáng)度的抗繆勒氏管激素的標(biāo)準(zhǔn)曲線；以 及 將所述待測(cè)樣本的發(fā)光信號(hào)帶入所述抗繆勒氏管激素的標(biāo)準(zhǔn)曲線中，計(jì)算得到所述待 測(cè)樣本中的抗繆勒氏管激素的濃度。
【文檔編號(hào)】G01N33/543GK106053791SQ201610512550
【公開日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年6月30日
【發(fā)明人】夏福臻, 錢純亙, 王剛, 祝亮, 劉美婷
【申請(qǐng)人】深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司