一種時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的熒光檢測方法及其裝置的制造方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的熒光檢測方法及其裝置，將待檢測樣本溶液分成等量的若干份，分批次進(jìn)行熒光標(biāo)記物的檢測得到多次檢測的統(tǒng)計(jì)結(jié)果，從而完成對整個(gè)樣本溶液中熒光標(biāo)記物的含量檢測，所述待檢測樣本溶液中含包被了時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的磁微球。提高了反應(yīng)池的檢測準(zhǔn)確性，減少系統(tǒng)檢測波動。
【專利說明】
一種時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的熒光檢測方法及其裝置
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的熒光檢測方 法及其裝置。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著臨床醫(yī)學(xué)和科技進(jìn)步，熒光免疫技術(shù)發(fā)展出多種實(shí)用檢測技術(shù)，如電化學(xué)熒 光免疫分析(ECLI)、化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA)、時(shí)間分辨熒光免疫分析(TRFIA)等熒光免疫 分析技術(shù)。這些技術(shù)均通過對標(biāo)記物(示蹤探針)檢測來確定被檢測物，標(biāo)記物通過免疫反 應(yīng)法、化學(xué)反應(yīng)法、生化反應(yīng)法、鏈霉親和素和生物素等包被技術(shù)，制作成具有較高特異性 的探針，探針通過相應(yīng)的反應(yīng)與目標(biāo)檢測物質(zhì)結(jié)合;再通過熒光儀對示蹤探針進(jìn)行檢測，獲 得目標(biāo)物質(zhì)的濃度等相關(guān)信息。另一方面包被技術(shù)也在發(fā)展，除傳統(tǒng)的96微孔板包被外，還 采用磁微球作為免疫反應(yīng)的載體，通過控制磁場抓取磁微球，可大大提高包被物的量，增加 檢測靈敏度，減少反應(yīng)時(shí)間，方便反應(yīng)過程中的清洗，實(shí)驗(yàn)自動化操作，提高系統(tǒng)靈活性和 工作效率，如目前比較流行的化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。
[0003]針對磁微球作為免疫反應(yīng)載體的設(shè)備，如：免疫熒光分析儀、化學(xué)發(fā)光熒光分析 儀，由于反應(yīng)過程中需要進(jìn)行若干次的清洗，最后對反應(yīng)池進(jìn)行整杯液體的熒光標(biāo)記物含 量，以獲得反應(yīng)池檢測目標(biāo)物的濃度值。以上這些常規(guī)的熒光標(biāo)記檢測技術(shù)，都存在一個(gè)無 法克服的問題就是：由于反應(yīng)過程經(jīng)過了清洗步驟，無法保證每次試驗(yàn)時(shí)反應(yīng)池內(nèi)的磁微 球的剩余數(shù)量保持一致。存在兩大缺陷： 1、 檢測磁微球以低濃度分布在樣本溶液中，容易因?yàn)榇盼⑶蚍植疾痪鶆蚧蚯逑床粡氐?造成檢測結(jié)果偏差； 2、 雖然磁微球取樣精確，但經(jīng)過多次清洗之后，反應(yīng)池中磁微球的剩余數(shù)量卻不能確 定。
[0004] 時(shí)間分辨熒光分析是以稀土離子標(biāo)記抗原或抗體、核酸探針和細(xì)胞等為特征的超 靈敏度檢測技術(shù)，它克服了酶標(biāo)記物的不穩(wěn)定、化學(xué)發(fā)光僅能一次發(fā)光且易受環(huán)境干擾、電 化學(xué)發(fā)光的非直接標(biāo)記等缺點(diǎn)。使非特異性信號降低到可以忽略的程度，達(dá)到了極高的信 噪比，從而大大地超過了放射性同位素所能達(dá)到的靈敏度，且還具有標(biāo)記物制備簡便、儲存 時(shí)間長、無放射性污染、檢測重復(fù)性好、操作流程短、標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍寬、不受樣品自然熒光干 擾和應(yīng)用范圍十分廣泛等優(yōu)點(diǎn)，成為繼放射免疫分析之后標(biāo)記物發(fā)展的一個(gè)新里程碑。
[0005] 隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，對微量、超微量的測定會越來越多，時(shí)間分辨熒光分析法 (TRFIA)具有越來越大的應(yīng)用空間，但是目前市場上還沒有時(shí)間分辨熒光分析法全自動檢 測系統(tǒng)（即隨機(jī)系統(tǒng)）。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的熒光檢測方法 及其裝置。將樣品池中的磁微球分成等量的若干份，并對磁微球進(jìn)行匯集后再完成熒光標(biāo) 記物檢測。
[0007] 本發(fā)明為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，采用如下技術(shù)方案： 一種時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的熒光檢測方法，待檢測樣本溶液中含包被了時(shí)間分辨熒光 標(biāo)記物的磁微球，將待檢測樣本溶液分成等量的若干份，分批次匯聚磁微球并進(jìn)行熒光標(biāo) 記物時(shí)間分辨熒光的檢測，得到多次檢測的統(tǒng)計(jì)結(jié)果，從而完成對整個(gè)樣本溶液中熒光標(biāo) 記物的含量檢測;單次時(shí)間分辨熒光檢測的步驟如下： 1) 在兩端開口的石英管中持續(xù)通入樣本溶液，同時(shí)啟動激發(fā)光光源，石英管的一側(cè)設(shè) 置電磁鐵，在電磁鐵的磁場作用下，使流動溶液中的磁微球駐留在電磁鐵的前端，隨著液體 的流動，石英管內(nèi)的磁微球匯集數(shù)量不斷增加，形成匯集點(diǎn)； 2) 停止通入樣本溶液，光線通過激發(fā)光路聚焦在匯集點(diǎn)的磁微球上，經(jīng)至少10微秒后 關(guān)閉激發(fā)光光源;再經(jīng)10-2000微秒的設(shè)定時(shí)間后，收集磁微球結(jié)合的焚光標(biāo)記物的時(shí)間分 辨熒光信號，并轉(zhuǎn)換為電信號，進(jìn)行時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的含量檢測。
[0008] 本發(fā)明的熒光檢測方法通過電磁鐵對磁微球的磁力作用，將磁微球聚集在石英管 的檢測區(qū)域，使磁微球在局部區(qū)域的濃度提高了成千倍，熒光標(biāo)記物的熒光強(qiáng)度則可提高 上萬倍，而背景干擾熒光沒有相應(yīng)的提高，從而提高系統(tǒng)的抗干擾能力和靈敏度高。
[0009] 優(yōu)選地，待磁微球匯集0.1秒至10秒后，停止通入樣本溶液?？刂拼盼⑶虻膮R集時(shí) 間從而使每次熒光檢測時(shí)，磁微球的匯集數(shù)量都相同。
[0010]進(jìn)一步優(yōu)選地，所述電磁鐵的磁力恒定為1~2000mg，保證磁微球聚集穩(wěn)定。
[0011] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述液體在石英管中的流速恒定為0.1~100厘米/秒，此流速下的 磁微球能快速聚集。
[0012] 本發(fā)明所述石英管為中空透明管，其內(nèi)徑為0.1-10mm，能夠限制磁微球向外延聚 集，使有限的空間內(nèi)磁微球分布均勻且數(shù)量穩(wěn)定，并且確保在磁微球匯集點(diǎn)處，獲得更高的 磁微球總數(shù)與液體容積的占比，這樣可大大提高時(shí)間分辨熒光強(qiáng)度，提高系統(tǒng)信噪比。
[0013] 優(yōu)選地，所述石英管的內(nèi)徑和外徑均為方形。
[0014] 本發(fā)明所述石英管磁微球匯集點(diǎn)處的一側(cè)設(shè)置散射光收集光路，收集磁微球在光 照射時(shí)產(chǎn)生的散射光，樣本溶液通入石英管時(shí)，實(shí)時(shí)監(jiān)測匯集點(diǎn)處磁微球的匯聚數(shù)量。確保 每次標(biāo)記物熒光的檢測都是基于相同的磁微球條件下，從而提高熒光標(biāo)記物檢測結(jié)果的穩(wěn) 定性，且實(shí)驗(yàn)可控性更強(qiáng)。
[0015] 本發(fā)明的磁微球中加入了與焚光標(biāo)記物波長不同的焚光物質(zhì)，在激發(fā)光照射下的 磁微球自帶熒光，所述石英管的一側(cè)設(shè)置有自帶熒光收集光路，樣本溶液通入石英管時(shí)，實(shí) 時(shí)監(jiān)測匯集點(diǎn)處磁微球的匯聚數(shù)量。確保每次標(biāo)記物熒光的檢測都是基于相同的磁微球條 件下，從而提高熒光標(biāo)記物檢測結(jié)果的穩(wěn)定性，且實(shí)驗(yàn)可控性更強(qiáng)。
[0016] 本發(fā)明所述的作為反應(yīng)實(shí)驗(yàn)載體的磁微球中加入了特殊的熒光物質(zhì)，如熒光染料 或稀土螯合物等，其熒光波長與熒光標(biāo)記物熒光波長不同；所述電磁鐵設(shè)置在石英管中部， 電磁鐵受電后將流動液體中熒光磁微球駐留在石英管內(nèi)，形成匯集點(diǎn)，隨著液體的流動，熒 光磁微球的數(shù)量不斷增加;在所述的激發(fā)光光源照射下，熒光磁微球激發(fā)自帶的特殊波長 熒光，磁微球自帶熒光收集光路設(shè)立在石英管匯集點(diǎn)側(cè)面，并通過光電轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)換成電信 號，信號高低反映了磁微球的數(shù)量。
[0017]優(yōu)選地，當(dāng)磁微球在匯集點(diǎn)聚集的數(shù)量達(dá)到1~100000粒之間的設(shè)定值時(shí)，停止通 入樣本溶液。
[0018] 本發(fā)明提供了時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的熒光檢測方法的裝置，包括樣本抽取機(jī)構(gòu)、 磁微球匯集機(jī)構(gòu)和時(shí)間分辨熒光檢測機(jī)構(gòu);所述的樣本抽取機(jī)構(gòu)包括吸液針頭、石英管和 吸液栗，所述吸液針頭連接石英管，石英管連接吸液栗;所述的磁微球匯集機(jī)構(gòu)為恒流源供 電線圈纏繞的電磁鐵，所述電磁鐵的一端朝向石英管;所述的時(shí)間分辨焚光檢測機(jī)構(gòu)包括 激發(fā)光光源、第一光電轉(zhuǎn)換器、激發(fā)光路和時(shí)間分辨熒光收集光路;所述激發(fā)光光源的光線 通過激發(fā)光路聚焦在石英管上，且該匯集點(diǎn)與電磁鐵朝向石英管的位置相同，所述的時(shí)間 分辨熒光收集光路對應(yīng)該匯集點(diǎn)的位置設(shè)置，所述的第一光電轉(zhuǎn)換器對應(yīng)時(shí)間分辨熒光收 集光路。
[0019] 本發(fā)明還提供了時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的熒光檢測方法的另一可選裝置，包括樣本 抽取機(jī)構(gòu)、磁微球匯集機(jī)構(gòu)、磁微球數(shù)量監(jiān)測機(jī)構(gòu)和時(shí)間分辨焚光檢測機(jī)構(gòu);所述的樣本抽 取機(jī)構(gòu)包括吸液針頭、石英管和吸液栗，所述吸液針頭連接石英管，石英管連接吸液栗;所 述的磁微球匯集機(jī)構(gòu)為恒流源供電線圈纏繞的電磁鐵，所述電磁鐵的一端朝向石英管;所 述的時(shí)間分辨熒光檢測機(jī)構(gòu)包括激發(fā)光光源、第一光電轉(zhuǎn)換器、激發(fā)光路和時(shí)間分辨熒光 收集光路;所述激發(fā)光光源的光線通過激發(fā)光路聚焦在石英管上，且該匯集點(diǎn)與電磁鐵朝 向石英管的位置相同，所述的時(shí)間分辨熒光收集光路對應(yīng)該匯集點(diǎn)的位置設(shè)置，所述的第 一光電轉(zhuǎn)換器對應(yīng)時(shí)間分辨熒光收集光路;所述的磁微球數(shù)量監(jiān)測機(jī)構(gòu)包括散射光收集光 路和第二光電轉(zhuǎn)換器，所述散射光收集光路對應(yīng)所述匯聚點(diǎn)的位置設(shè)置，所述的第二光電 轉(zhuǎn)換器對應(yīng)散射光收集光路。
[0020] 本發(fā)明還提供了時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的熒光檢測方法的另一可選裝置，包括樣本 抽取機(jī)構(gòu)、磁微球匯集機(jī)構(gòu)、磁微球數(shù)量監(jiān)測機(jī)構(gòu)和時(shí)間分辨焚光檢測機(jī)構(gòu);所述的樣本抽 取機(jī)構(gòu)包括吸液針頭、石英管和吸液栗，所述吸液針頭連接石英管，石英管連接吸液栗;所 述的磁微球匯集機(jī)構(gòu)為恒流源供電線圈纏繞的電磁鐵，所述電磁鐵的一端朝向石英管;所 述的時(shí)間分辨熒光檢測機(jī)構(gòu)包括激發(fā)光光源、第一光電轉(zhuǎn)換器、激發(fā)光路和時(shí)間分辨熒光 收集光路;所述激發(fā)光光源的光線通過激發(fā)光路聚焦在石英管上，且該匯集點(diǎn)與電磁鐵朝 向石英管的位置相同，所述的時(shí)間分辨熒光收集光路對應(yīng)該匯集點(diǎn)的位置設(shè)置，所述的第 一光電轉(zhuǎn)換器對應(yīng)時(shí)間分辨熒光收集光路;所述的磁微球數(shù)量監(jiān)測機(jī)構(gòu)包括磁微球自帶熒 光收集光路和第三光電轉(zhuǎn)換器，所述磁微球自帶熒光收集光路對應(yīng)所述匯聚點(diǎn)的位置設(shè) 置，所述的第三光電轉(zhuǎn)換器對應(yīng)磁微球自帶熒光收集光路。
[0021] 優(yōu)選地，所述的吸液栗為蠕動栗或空氣噴射栗，對液體流動石英管產(chǎn)生壓差，促使 液體從反應(yīng)池中流過石英管，并且流速可控。
[0022] 本發(fā)明的激發(fā)光路、時(shí)間分辨熒光收集光路、散射光收集光路和磁微球自帶熒光 收集光路均由聚集透鏡和濾光片構(gòu)成。
[0023]本發(fā)明所述磁微球的粒徑在0 ? lum-20um之間，作為時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的載體。
[0024] 熒光標(biāo)記物為反應(yīng)試驗(yàn)的示蹤物質(zhì)，包被有能與檢測目標(biāo)物相結(jié)合的物質(zhì)，熒光 標(biāo)記物具有在特定波長激發(fā)光照射下激發(fā)出長壽命熒光的特異性。
[0025] 本發(fā)明磁微球數(shù)量監(jiān)測機(jī)構(gòu)所用光源可與時(shí)間分辨熒光檢測機(jī)構(gòu)共用同一光源， 或者另外設(shè)置散射光光源或熒光磁微球激發(fā)光源，可以與時(shí)間分辨熒光檢測機(jī)構(gòu)的激發(fā)光 源共用一種波長，也可以是兩種不同波長。
[0026]磁微球數(shù)量監(jiān)測機(jī)構(gòu)，還可以利用設(shè)定合適的聚集時(shí)間，使匯集點(diǎn)的微球數(shù)量區(qū) 域飽和，達(dá)到監(jiān)測磁微球數(shù)量的目的。
[0027]本發(fā)明的有益效果在于： 1、通過電磁鐵將磁微球聚集在檢測區(qū)域，使磁微球在檢測區(qū)域的濃度提高成千倍，熒 光標(biāo)記物的熒光強(qiáng)度則可提高上萬倍，而溶液中的雜質(zhì)所產(chǎn)生的背景干擾信號不會被增 強(qiáng)，有效消減由于清洗不徹底對檢測結(jié)果帶來的干擾。
[0028] 2、通過設(shè)置磁微球數(shù)量監(jiān)測裝置來監(jiān)測磁微球聚集的數(shù)量，確保每次標(biāo)記物熒光 的檢測都是基于相同的磁微球條件下，從而提高熒光標(biāo)記物檢測結(jié)果的穩(wěn)定性。
[0029] 3、常規(guī)反應(yīng)試驗(yàn)清洗的目的是減少雜質(zhì)，提高熒光標(biāo)記物與背景信號占比；本發(fā) 明的檢測方法，通過提高磁微球密度，提高熒光標(biāo)記物與背景信號占比，來提高實(shí)驗(yàn)精度， 特別適用于免清洗的反應(yīng)體系檢測熒光標(biāo)記物含量。
[0030] 4、本發(fā)明檢測方法將反應(yīng)池的液體樣本分成若干份，分別依次進(jìn)行熒光標(biāo)記物檢 測，用多次的檢測結(jié)果的統(tǒng)計(jì)值，代替對反應(yīng)池中熒光標(biāo)記物進(jìn)行一次檢測的常規(guī)方法，提 高了反應(yīng)池的檢測準(zhǔn)確性，減少系統(tǒng)檢測波動。
【附圖說明】
[0031] 圖1是本發(fā)明實(shí)施例10的熒光檢測裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0032] 圖2是本發(fā)明實(shí)施例10的熒光檢測裝置在匯集點(diǎn)處垂直液體流動方向的剖面圖。
[0033] 圖3是本發(fā)明實(shí)施例11的熒光檢測裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0034] 圖4是本發(fā)明實(shí)施例11的熒光檢測裝置在匯集點(diǎn)處垂直液體流動方向的剖面圖。
[0035] 圖5是本發(fā)明實(shí)施例12的熒光檢測裝置在匯集點(diǎn)處垂直液體流動方向的剖面圖。
[0036] 圖6是實(shí)施例14中磁微球在不同時(shí)刻匯集數(shù)量的曲線圖。
[0037] 附圖標(biāo)記：1、石英管，2、磁微球，3、激發(fā)光光源，4、第二光電轉(zhuǎn)換器，5、第一光電轉(zhuǎn) 換器，6、電磁鐵恒流源，7、匯集點(diǎn)，8、電磁鐵，9、激發(fā)光路，10、時(shí)間分辨收集光路，11、散射 光收集光路，12、反應(yīng)池，13、吸液針頭，14、吸液栗，15、第三光電轉(zhuǎn)換器，16、磁微球自帶熒 光收集光路。
【具體實(shí)施方式】
[0038]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容作進(jìn)一步詳細(xì)的描述。
[0039] 實(shí)施例1 一種時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的熒光檢測方法，待檢測樣本溶液中含包被了時(shí)間分辨熒光 標(biāo)記物的磁微球，將待檢測樣本溶液分成等量的若干份，分批次匯聚磁微球并進(jìn)行熒光標(biāo) 記物時(shí)間分辨熒光的檢測，得到多次檢測的統(tǒng)計(jì)結(jié)果，從而完成對整個(gè)樣本溶液中熒光標(biāo) 記物的含量檢測;單次時(shí)間分辨熒光檢測的步驟如下： 1) 在兩端開口的石英管中持續(xù)通入樣本溶液，同時(shí)啟動激發(fā)光光源，石英管的一側(cè)設(shè) 置電磁鐵，在電磁鐵的磁場作用下，使流動溶液中的磁微球駐留在電磁鐵的前端，隨著液體 的流動，石英管內(nèi)的磁微球匯集數(shù)量不斷增加，形成匯集點(diǎn)； 2) 停止通入樣本溶液，光線通過激發(fā)光路聚焦在匯集點(diǎn)的磁微球上，經(jīng)至少10微秒后 關(guān)閉激發(fā)光光源;再經(jīng)10微秒的設(shè)定時(shí)間后，收集磁微球結(jié)合的熒光標(biāo)記物的時(shí)間分辨熒 光信號，并轉(zhuǎn)換為電信號，進(jìn)行時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的含量檢測。
[0040] 實(shí)施例2 一種時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的熒光檢測方法，待檢測樣本溶液中含包被了時(shí)間分辨熒光 標(biāo)記物的磁微球，將待檢測樣本溶液分成等量的若干份，分批次匯聚磁微球并進(jìn)行熒光標(biāo) 記物時(shí)間分辨熒光的檢測，得到多次檢測的統(tǒng)計(jì)結(jié)果，從而完成對整個(gè)樣本溶液中熒光標(biāo) 記物的含量檢測;單次時(shí)間分辨熒光檢測的步驟如下： 1) 在兩端開口的石英管中持續(xù)通入樣本溶液，同時(shí)啟動激發(fā)光光源，石英管的一側(cè)設(shè) 置電磁鐵，在電磁鐵的磁場作用下，使流動溶液中的磁微球駐留在電磁鐵的前端，隨著液體 的流動，石英管內(nèi)的磁微球匯集數(shù)量不斷增加，形成匯集點(diǎn)； 2) 停止通入樣本溶液，光線通過激發(fā)光路聚焦在匯集點(diǎn)的磁微球上，經(jīng)至少10微秒后 關(guān)閉激發(fā)光光源;再經(jīng)2000微秒的設(shè)定時(shí)間后，收集磁微球結(jié)合的熒光標(biāo)記物的時(shí)間分辨 熒光信號，并轉(zhuǎn)換為電信號，進(jìn)行時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的含量檢測。
[0041 ] 實(shí)施例3 一種時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的熒光檢測方法，待檢測樣本溶液中含包被了時(shí)間分辨熒光 標(biāo)記物的磁微球，將待檢測樣本溶液分成等量的若干份，分批次匯聚磁微球并進(jìn)行熒光標(biāo) 記物時(shí)間分辨熒光的檢測，得到多次檢測的統(tǒng)計(jì)結(jié)果，從而完成對整個(gè)樣本溶液中熒光標(biāo) 記物的含量檢測;單次時(shí)間分辨熒光檢測的步驟如下： 1) 在兩端開口的石英管中持續(xù)通入樣本溶液，同時(shí)啟動激發(fā)光光源，石英管的一側(cè)設(shè) 置電磁鐵，在電磁鐵的磁場作用下，使流動溶液中的磁微球駐留在電磁鐵的前端，隨著液體 的流動，石英管內(nèi)的磁微球匯集數(shù)量不斷增加，形成匯集點(diǎn)； 2) 停止通入樣本溶液，光線通過激發(fā)光路聚焦在匯集點(diǎn)的磁微球上，經(jīng)至少10微秒后 關(guān)閉激發(fā)光光源;再經(jīng)1000微秒的設(shè)定時(shí)間后，收集磁微球結(jié)合的熒光標(biāo)記物的時(shí)間分辨 熒光信號，并轉(zhuǎn)換為電信號，進(jìn)行時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的含量檢測。
[0042] 實(shí)施例4 本實(shí)施例在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上： 待磁微球匯集0.1秒，停止通入樣本溶液。
[0043] 所述石英管為中空透明管，其內(nèi)徑為5_。
[0044] 實(shí)施例5 本實(shí)施例在實(shí)施例2的基礎(chǔ)上： 待磁微球匯集10秒，停止通入樣本溶液。
[0045]電磁鐵的磁力恒定為2000mg。
[0046] 所述石英管為中空透明管，其內(nèi)徑為0.1mm。
[0047] 所述石英管的內(nèi)徑和外徑均為方形。
[0048] 實(shí)施例6 本實(shí)施例在實(shí)施例3的基礎(chǔ)上： 待磁微球匯集10秒，停止通入樣本溶液。
[0049]電磁鐵的磁力恒定為lmg。
[0050]溶液樣本在石英管中的流速恒定為100厘米/秒。
[0051]所述石英管為中空透明管，其內(nèi)徑為10_。
[0052] 所述石英管的內(nèi)徑和外徑均為方形。
[0053] 實(shí)施例7 本實(shí)施例在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上： 所述石英管磁微球匯集點(diǎn)處的一側(cè)設(shè)置散射光收集光路，收集磁微球在光照射時(shí)產(chǎn)生 的散射光，樣本溶液通入石英管時(shí)，實(shí)時(shí)監(jiān)測匯集點(diǎn)處磁微球的匯聚數(shù)量；當(dāng)磁微球在匯集 點(diǎn)聚集的數(shù)量達(dá)到1粒時(shí)，停止通入樣本溶液。
[0054] 實(shí)施例8 本實(shí)施例在實(shí)施例2的基礎(chǔ)上： 磁微球中加入了與熒光標(biāo)記物波長不同的熒光物質(zhì)，在激發(fā)光照射下的磁微球自帶熒 光，所述石英管的一側(cè)設(shè)置有自帶熒光收集光路，樣本溶液通入石英管時(shí)，實(shí)時(shí)監(jiān)測匯集點(diǎn) 處磁微球的匯聚數(shù)量;當(dāng)磁微球在匯集點(diǎn)聚集的數(shù)量達(dá)到100000粒時(shí)，停止通入樣本溶液。
[0055] 實(shí)施例9 本實(shí)施例在實(shí)施例3的基礎(chǔ)上： 電磁鐵的磁力恒定為1500mg。
[0056] 溶液樣本在石英管中的流速恒定為60厘米/秒。
[0057] 磁微球中加入了與焚光標(biāo)記物波長不同的焚光物質(zhì)，在激發(fā)光照射下的磁微球自 帶熒光，所述石英管的一側(cè)設(shè)置有自帶熒光收集光路，樣本溶液通入石英管時(shí)，實(shí)時(shí)監(jiān)測匯 集點(diǎn)處磁微球的匯聚數(shù)量;當(dāng)磁微球在匯集點(diǎn)聚集的數(shù)量達(dá)到10000粒時(shí)，停止通入樣本溶 液。
[0058] 實(shí)施例10 本實(shí)施例為實(shí)施例4-6所述時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的熒光檢測方法的裝置。
[0059] 如圖1和圖2所示，包括樣本抽取機(jī)構(gòu)、磁微球匯集機(jī)構(gòu)和時(shí)間分辨熒光檢測機(jī)構(gòu)； 所述的樣本抽取機(jī)構(gòu)包括吸液針頭13、石英管1和吸液栗14,所述吸液針頭13連接石英管1， 石英管1連接吸液栗14;所述的磁微球匯集機(jī)構(gòu)為恒流源6供電線圈纏繞的電磁鐵8,所述電 磁鐵8的一端朝向石英管1;所述的時(shí)間分辨熒光檢測機(jī)構(gòu)包括激發(fā)光光源3、第一光電轉(zhuǎn)換 器5、激發(fā)光路9和時(shí)間分辨收集光路10,所述激發(fā)光光源3的光線通過激發(fā)光路9聚焦在石 英管1上，且該匯集點(diǎn)7與電磁鐵朝向石英管的位置相同，所述的時(shí)間分辨收集光路10對應(yīng) 該匯集點(diǎn)7的位置設(shè)置，所述的第一光電轉(zhuǎn)換器5對應(yīng)時(shí)間分辨收集光路10。
[0060] 實(shí)施例11 本實(shí)施例為實(shí)施例7所述時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的熒光檢測方法的裝置。
[0061] 如圖3和圖4所示，包括樣本抽取機(jī)構(gòu)、磁微球匯集機(jī)構(gòu)、磁微球數(shù)量監(jiān)測機(jī)構(gòu)和時(shí) 間分辨熒光檢測機(jī)構(gòu);所述的樣本抽取機(jī)構(gòu)包括吸液針頭13、石英管1和吸液栗14,所述吸 液針頭13連接石英管1，石英管1連接吸液栗14;所述的磁微球匯集機(jī)構(gòu)為恒流源6供電線圈 纏繞的電磁鐵8,所述電磁鐵8的一端朝向石英管1;所述的時(shí)間分辨熒光檢測機(jī)構(gòu)包括激發(fā) 光光源3、第一光電轉(zhuǎn)換器5、激發(fā)光路9和時(shí)間分辨收集光路10,所述激發(fā)光光源3的光線通 過激發(fā)光路9聚焦在石英管1上，且該匯集點(diǎn)7與電磁鐵朝向石英管的位置相同，所述的時(shí)間 分辨收集光路10對應(yīng)該匯集點(diǎn)7的位置設(shè)置，所述的第一光電轉(zhuǎn)換器5對應(yīng)時(shí)間分辨收集光 路10;所述的磁微球數(shù)量監(jiān)測機(jī)構(gòu)包括散射光收集光路11和第二光電轉(zhuǎn)換器4;所述散射光 收集光路11對應(yīng)所述匯聚點(diǎn)7的位置設(shè)置，所述的第二光電轉(zhuǎn)換器4對應(yīng)散射光收集光路 llo
[0062] 實(shí)施例12 本實(shí)施例為實(shí)施例8-9所述時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的熒光檢測方法的裝置。
[0063] 包括樣本抽取機(jī)構(gòu)、磁微球匯集機(jī)構(gòu)、磁微球數(shù)量監(jiān)測機(jī)構(gòu)和時(shí)間分辨焚光檢測 機(jī)構(gòu);所述的樣本抽取機(jī)構(gòu)包括吸液針頭13、石英管1和吸液栗14,所述吸液針頭13連接石 英管1，石英管1連接吸液栗14;所述的磁微球匯集機(jī)構(gòu)為恒流源6供電線圈纏繞的電磁鐵8， 所述電磁鐵8的一端朝向石英管1;所述的時(shí)間分辨熒光檢測機(jī)構(gòu)包括激發(fā)光光源3、第一光 電轉(zhuǎn)換器5、激發(fā)光路9和時(shí)間分辨收集光路10,所述激發(fā)光光源3的光線通過激發(fā)光路9聚 焦在石英管1上，且該匯集點(diǎn)7與電磁鐵朝向石英管的位置相同，所述的時(shí)間分辨收集光路 10對應(yīng)該匯集點(diǎn)7的位置設(shè)置，所述的第一光電轉(zhuǎn)換器5對應(yīng)時(shí)間分辨收集光路10;所述的 磁微球數(shù)量監(jiān)測機(jī)構(gòu)包括磁微球自帶熒光收集光路16和第三光電轉(zhuǎn)換器15;所述磁微球自 帶熒光收集光路16對應(yīng)所述匯聚點(diǎn)7的位置設(shè)置，所述的第三光電轉(zhuǎn)換器15對應(yīng)磁微球自 帶熒光收集光路16。
[0064] 實(shí)施例13 如圖3和圖4所不，時(shí)間分辨焚光標(biāo)記物的焚光檢測方法，包括樣本抽取機(jī)構(gòu)、磁微球數(shù) 量監(jiān)測機(jī)構(gòu)和標(biāo)記物熒光檢測機(jī)構(gòu)，其中： 樣本抽取系統(tǒng)包括吸液針頭13、石英管1、吸液栗14;所述吸液針頭13下端浸入反應(yīng)池 12中待檢測樣本溶液液面以下，上端經(jīng)過軟管，連接石英管1，石英管下端連接吸液栗14,吸 液栗14為蠕動栗或空氣噴射栗，對液體流動管路產(chǎn)生壓差，促使液體從反應(yīng)池12中流過石 英管1，并且流速可控，吸液栗14出口連接廢液收集瓶，廢液瓶和連接軟管，未在視圖中畫 出； 磁微球定量控制系統(tǒng)包括電磁鐵8、散射光收集光路11及光電轉(zhuǎn)換器4;所述石英管1中 部設(shè)有電磁鐵8，電磁鐵8上纏繞線圈，打開恒流源6使電磁鐵8受電產(chǎn)生磁力;石英管1內(nèi)流 動的液體中的磁微球2在電磁鐵8磁力作用下，漸漸匯集在石英管1內(nèi)壁，越積越多并形成匯 集點(diǎn)7。如圖2所示，匯集點(diǎn)7上方設(shè)有激發(fā)光源3,通過激發(fā)光路9將光源的光線聚焦在匯集 點(diǎn)7的微球2上，匯集點(diǎn)7側(cè)面設(shè)有散射光收集光路，即收集光路二11及光電轉(zhuǎn)換器二4,用來 檢測磁微球2在光源3照射時(shí)的散射光波長的光線強(qiáng)度;匯集點(diǎn)7處的磁微球匯集數(shù)量越多， 檢測到的散射光也越強(qiáng)，通過光電轉(zhuǎn)換器4轉(zhuǎn)換成電信號，當(dāng)電信號達(dá)到設(shè)定值時(shí)，啟動一 次熒光檢測。
[0065] 熒光檢測機(jī)構(gòu)包括熒光標(biāo)記物熒光光路，即時(shí)間分辨收集光路10和光電轉(zhuǎn)換器一 5,所述時(shí)間分辨收集光路10包括聚焦光路和只有特異性熒光波長可通過的濾光片，設(shè)立在 磁微球2的匯集點(diǎn)7側(cè)面用于收集熒光標(biāo)記物熒光；當(dāng)熒光標(biāo)記物受到激發(fā)光光源3的照射 時(shí)，被激發(fā)出特異性波長的熒光，并通過時(shí)間分辨收集光路10聚焦，將特定波長的熒光光線 送人光電轉(zhuǎn)換器一 5轉(zhuǎn)換為電信號;在光電轉(zhuǎn)換器二4輸出的散射光光強(qiáng)信號到達(dá)設(shè)定值時(shí) 亥IJ，熒光檢測系統(tǒng)記錄光電轉(zhuǎn)換器一 5輸出的熒光光強(qiáng)信號;并通過更換和重新匯集磁微球 2,實(shí)現(xiàn)多次的熒光標(biāo)記物熒光光強(qiáng)檢測，獲得平均光強(qiáng)值，完成對反應(yīng)池12中的目標(biāo)物的 檢測。
[0066] 通過以下實(shí)施例，對應(yīng)用上述熒光檢測系統(tǒng)定量測定樣品溶液中目標(biāo)檢測物含量的方 法進(jìn)行詳細(xì)的說明。
[0067] 實(shí)施例14 雙抗體夾心法定量檢測TSH(促甲狀腺激素)的檢測 1、把抗人TSH的亞單元單克隆抗體包被磁珠上 將20mg粒徑5圓表面帶羧基的磁微粒(購自Thermo Scientific公司）用磁鐵分離上清 液，然后把上清液移走，除去緩沖液中的疊氮鈉3次，用0.1MMES緩沖液(pH6.8~7.2)懸浮， 稀釋到5ml;在攪拌下加入5mg碳二亞胺(EDC)和5mg N-羥基琥I自酰亞胺磺酸鈉鹽，攪拌溶 解，室溫反應(yīng)25分鐘;把活化后的磁珠用磁鐵分離上清液，然后把上清液移走，除去多余的 EDC和N-羥基琥珀酰亞胺磺酸鈉鹽。用50mM硼酸緩沖液(pH8.2~9)清洗，之后用硼酸緩沖液 懸浮到3毫升。
[0068] 加入lmg用50mM硼酸緩沖液(pH8.2~9)透析過的抗人TSH的亞單元單克隆抗體， 攪拌均勻，室溫反應(yīng)16到24小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后用磁鐵分離上清液，把上清液移走，加封閉液 (含有5g/L的BSA(牛血清白蛋白）、50mM pH8.5的Tris(三羥甲基氨基甲烷醋酸鹽)緩沖液封 閉8小時(shí)左右，用磁鐵分離上清液，把上清液移走，然后用稀釋液(含有5g/L的BSA、5g/L的 PVP(聚乙烯吡咯烷酮）、0.2%疊氮鈉的pH8.0的Tris緩沖液50mM)溶解沉淀，制成標(biāo)識微球試 劑。4°C冷藏保存。
[0069] 2、把在抗人-TSH的a-亞單元單克隆抗體標(biāo)記在熒光標(biāo)記物上 將20mg粒徑1 OOnm表面帶羧基的焚光納米微粒離心除去緩沖液中的疊氮鈉，用前述步 驟1制備包被磁微球的方法(備注:分離熒光微粒方式改為高速離心，其余同步驟1)，將另一 株抗人-TSH的a-亞單元單克隆抗體標(biāo)記到納米焚光微粒上，用稀釋液(含有5g/L的BSA、5g/ L的PVP、0.2%疊氮鈉的pH8.0的Tris緩沖液50mM)溶解沉淀，制備得到熒光標(biāo)記試劑，4°C冷 藏保存。該焚光標(biāo)記物能在390nm波長光源的激發(fā)下，發(fā)出610nm焚光。
[0070] 3、免疫反應(yīng)樣品制備 取TSH濃度為0.09IU/ml的標(biāo)準(zhǔn)樣品3份各50yl，分別加入3個(gè)塑料管式樣品反應(yīng)池12 中，并標(biāo)記物A、B和C。
[0071] 向上述3個(gè)樣品池中分別加入取步驟1制備的磁微球試劑20yl (固含量為萬分之 二），利用電磁場振蕩，樣品中的TSH抗原與磁微球的包被抗人TSH的亞單元單克隆抗體免 疫反應(yīng)，并附著在磁微球表面，樣品溶液中的抗原越多，則在標(biāo)識微球表面聚集得越多。反 應(yīng)30分鐘后，利用磁場進(jìn)行分離，移去上清液多余的樣本，再加入200yl清洗液，磁場分散， 再利用磁場進(jìn)行分離，反復(fù)清洗5次，最后加入稀釋液。
[0072] 按上述步驟分別對樣品池B和C進(jìn)行重復(fù)清洗6次、7次。
[0073]向上述3個(gè)樣品池中分別加入步驟2制備的標(biāo)記物試劑50yl，熒光標(biāo)記物會通過標(biāo) 記的抗人-TSH的a-亞單元單克隆抗體與附著在磁微球上的TSH抗原結(jié)合，形成磁微球-目標(biāo) 物-標(biāo)記物的復(fù)合物，約30分鐘后，利用磁場進(jìn)行分離，移去上清液多余的熒光標(biāo)記物，再加 入200iU清洗液，磁場分散，再利用磁場進(jìn)行分離，反復(fù)清洗5次，最后加入稀釋液。
[0074]按上述步驟分別對樣品池B和C進(jìn)行重復(fù)清洗6次、7次。
[0075]理論上清洗次數(shù)越多溶液中的雜質(zhì)越少，背景干擾越低，但導(dǎo)致磁微球數(shù)量丟失 的可能性越大。
[0076] 4、標(biāo)記物熒光檢測 如圖3和圖4所示，裝置中激發(fā)光光源3為390nm光電二極管，其供電電流為80mA，從上方 照射，并將焦距對準(zhǔn)反應(yīng)池12中心，熒光光路10的濾光片為610nm光窄帶通過，光電轉(zhuǎn)換器5 為濱松公司光電倍增管R4220P，轉(zhuǎn)換的電信號經(jīng)過放大和濾波后，并進(jìn)入模數(shù)轉(zhuǎn)換為數(shù)字 信號。
[0077] 首先取完成上述4個(gè)步驟的樣品反應(yīng)池A，將吸液針頭13下端浸入反應(yīng)池12中液面 以下，開啟吸液栗14,使液體流動管路產(chǎn)生壓差，促使液體從反應(yīng)池12中樣品液體不斷流過 石英管1，并且流速穩(wěn)定可控，吸液栗14出口連接廢液收集瓶，廢液瓶和連接軟管，未在視圖 中畫出； 打開恒流源6,使石英管1中部電磁鐵8受電產(chǎn)生磁力，石英管1內(nèi)流動的液體中的磁微 球2在電磁鐵8磁力作用下，漸漸匯集在石英管1內(nèi)壁，越積越多并形成匯集點(diǎn)7; 如圖3，開啟匯集點(diǎn)7上方激發(fā)光源3，激發(fā)光光源為390nm波長的發(fā)光二極管，并一直以 80mA恒流源供電；通過光路9將光源的光線聚焦在匯集點(diǎn)7的微球2上，匯集點(diǎn)7右側(cè)側(cè)面設(shè) 有散射光收集光路11及光電轉(zhuǎn)換器4,光路11的濾光片為390nm光窄帶通過，光電轉(zhuǎn)換器4為 光電池，將磁微球2的散射光波長的光線強(qiáng)度轉(zhuǎn)換成電信號；匯集點(diǎn)7處的磁微球匯集數(shù)量 越多，光電轉(zhuǎn)換器4轉(zhuǎn)換成電信號將約高。
[0078]熒光檢測裝置設(shè)置在匯集點(diǎn)7的左側(cè)，當(dāng)磁微球2結(jié)合的熒光標(biāo)記物在390nm波長 的激發(fā)光光源3的照射時(shí)，將被激發(fā)出特異性610nm波長的熒光，熒光光路10將熒光聚焦后 經(jīng)過610nm波長可通過的濾光片后，進(jìn)入光電轉(zhuǎn)換器5轉(zhuǎn)換為電信號;監(jiān)測光電轉(zhuǎn)換器4輸出 的散射光光強(qiáng)信號到達(dá)設(shè)定值時(shí)，記錄熒光標(biāo)記物的熒光光強(qiáng)電信號。
[0079] 完成一次檢測后，關(guān)閉電磁鐵8,磁微球隨液體流走，然后再次開啟，按上述步驟進(jìn) 行熒光標(biāo)記物檢測，并重復(fù)30次后將檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，最后獲得平均熒光標(biāo)記物含量結(jié) 果，達(dá)到檢測目標(biāo)物的目的。
[0080] 至此，完成了對樣品A的檢測后，對吸液針頭13進(jìn)行清洗，防止交叉污染。按上述同 樣方法依次對樣品B和C進(jìn)行檢測，得到檢測結(jié)果如下。
[0081 ]表1 TSH定量微球檢測熒光結(jié)果
5、使用常規(guī)檢測儀進(jìn)行熒光檢測 進(jìn)行上述1-3步操作，最后把反應(yīng)物移入酶標(biāo)板內(nèi)，對整個(gè)反應(yīng)池檢測熒光，使用ro Victor3 V1420-040檢測儀，檢測A、B和C反應(yīng)池的熒光信號，結(jié)果如下： 表2 TSH反應(yīng)池檢測熒光結(jié)果
本實(shí)施例的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)說明，通過監(jiān)測磁微球在匯集點(diǎn)的數(shù)量，使熒光標(biāo)記物檢測結(jié)果 減少了清洗過程中磁微球丟失造成的誤差;而且通過磁力使磁微球駐留在石英管內(nèi)匯集點(diǎn) 的密度，比反應(yīng)池中的密度要高10至10000倍，減少了由于清洗不徹底引入的背景干擾，更 適合應(yīng)用于全自動、快速、高靈敏度、高精度和高通量檢測。
[0082] 在常規(guī)反應(yīng)試驗(yàn)中，清洗的目的是減少雜質(zhì)，提高熒光標(biāo)記物與背景信號占比，本 發(fā)明給出的方法，可以通過提高磁微球密度，提高熒光標(biāo)記物與背景信號占比，本實(shí)施例說 明本發(fā)明適用于免清洗的反應(yīng)體系檢測熒光標(biāo)記物含量。
[0083] 實(shí)施例15 熒光磁微球自帶熒光檢測的方法 使用含有時(shí)間分辨熒光物質(zhì)的磁微球作為反應(yīng)載體，磁微球在激發(fā)光照射下能夠被激 發(fā)出特異性熒光。
[0084] 本實(shí)施例中的這種熒光磁微球通過染色加入Sm3+螯合物，制備工藝概述如下：用丙 酮溶解萘甲酰三氟丙酮和三正辛氧膦，再把Sm 3+加入形成螯合物，再把Sm3+螯合物放入容 器浸泡磁微球10小時(shí)，然后用磁場進(jìn)行分離，反復(fù)清液沒有進(jìn)入磁微球內(nèi)部的Sm 3+螯和物， 該焚光磁微球能夠在340nm光的激發(fā)下，發(fā)射出波長為644nm的焚光。
[0085]而作為時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的物質(zhì)為Eu3+螯合物，熒光標(biāo)記物能夠在340nm光的照 射下，發(fā)射出波長為61 Onm焚光。
[0086]焚光微球和焚光標(biāo)記物可以共用一個(gè)激發(fā)光源，激發(fā)焚光波長分別為644nm和 610nm〇
[0087] 具體步驟如下： 免疫反應(yīng)試驗(yàn)步驟同實(shí)施例14,光源3為氙燈，并使用340nm帶通濾光片的激發(fā)光路9， 將光斑聚焦在石英管1的磁微球2的匯集點(diǎn)7;石英管1匯集點(diǎn)7側(cè)面設(shè)有熒光標(biāo)記物熒光收 集電路10,通過610nm波長透過的窄帶濾光片光路10聚焦在光電傳感器5并轉(zhuǎn)換為電信號； 石英管1匯集點(diǎn)7側(cè)面還設(shè)有熒光磁微球熒光收集光路18,通過644nm波長帶通濾光片光路 16聚焦在電轉(zhuǎn)換器15并轉(zhuǎn)換為電信號。
[0088] 參考圖5,首先開啟吸液栗電源15,并維持電壓恒定不變，吸入如實(shí)施例1所示完成 免疫反應(yīng)并清洗過的待檢測樣品A的液體，勻速流過石英管1。開啟電磁鐵8的恒流源6，并維 持電流不變，磁微球2在電磁鐵8產(chǎn)生磁力作用下在匯集點(diǎn)7上數(shù)量逐漸增加;打開光源3，監(jiān) 測熒光磁微球熒光轉(zhuǎn)換器15的輸出信號，強(qiáng)度越高反應(yīng)了磁微球2匯集的數(shù)量越多，當(dāng)轉(zhuǎn)換 器輸出值達(dá)到設(shè)定范圍時(shí)，記錄在光源3照射下，激發(fā)出的熒光標(biāo)記物熒光強(qiáng)度，即轉(zhuǎn)換器5 輸出的電壓值，得到一次熒光標(biāo)記物檢測結(jié)果。
[0089] 按上述檢測熒光標(biāo)記物熒光的方法，分批次吸取反應(yīng)池中的磁微球，進(jìn)行多次的 檢測，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)得到平均值，達(dá)到檢測樣品池中的熒光標(biāo)記物含量的目的。
[0090] 實(shí)施例16 時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物檢測 用本發(fā)明裝置對樣品進(jìn)行檢測，如圖1，裝置中激發(fā)光光源3為390nm光電二極管，其供 電電流為80mA，從上方照射，并將焦距對準(zhǔn)反應(yīng)池12中心，時(shí)間分辨熒光光路10的濾光片為 610nm光窄帶通過，光電轉(zhuǎn)換器5為濱松公司光電倍增管R4220P，轉(zhuǎn)換的電信號經(jīng)過發(fā)大和 濾波后，并進(jìn)入模數(shù)轉(zhuǎn)換為數(shù)字信號。
[0091]熒光標(biāo)記物采用Eu3+螯合物，具有時(shí)間分辨特異性，在390nm光的照射下后，激發(fā)出 波長為610nm熒光，熒光壽命大于5mS〇
[0092] 如圖1，首先取上述A樣品反應(yīng)池，將吸液針頭13下端浸入反應(yīng)池12中液面以下，開 啟吸液栗14,使液體流動管路產(chǎn)生壓差，促使液體從反應(yīng)池12中樣品液體不斷流過石英管 1，并且流速穩(wěn)定可控，吸液栗14出口連接廢液收集瓶，廢液瓶和連接軟管，未在視圖中畫 出。打開恒流源6，使電磁鐵8受電產(chǎn)生磁力，石英管1內(nèi)流動的液體中的磁微球2在電磁鐵8 磁力作用下，漸漸匯集在石英管1內(nèi)壁，越積越多并形成匯集點(diǎn)7,經(jīng)過設(shè)定的15秒后，匯集 點(diǎn)7聚集的磁微球2達(dá)到穩(wěn)定的數(shù)量，關(guān)閉吸液栗14,開啟匯集點(diǎn)7上方激發(fā)光源3,經(jīng)過50微 秒時(shí)間的照射后關(guān)閉，經(jīng)過200微秒延時(shí)時(shí)間后，開啟并記錄光電轉(zhuǎn)換器5連續(xù)檢測600微秒 時(shí)間分辨熒光信號，獲得時(shí)間分辨熒光檢測結(jié)果。
[0093]完成一次檢測后，關(guān)閉電磁鐵8，磁微球隨液體流走，然后再次開啟，重復(fù)30次上述 匯集磁微球2，檢測記錄熒光強(qiáng)度過程，最后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)獲得平均光強(qiáng)值，完成對樣本A中的目 標(biāo)物的檢測。
[0094]清洗吸液針頭13和液路管道內(nèi)壁，防止交叉污染。按上述同樣方法依次對樣品B和 C進(jìn)行檢測，得到檢測結(jié)果如下。
[0095]表3 TSH定量微球檢測熒光結(jié)果
時(shí)間分辨熒光標(biāo)記相比瞬時(shí)熒光標(biāo)記物，具有更高的特異性，更具有抗背景干擾的特 征。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種時(shí)間分辨焚光標(biāo)記物的焚光檢測方法，其特征在于:待檢測樣本溶液中含包被 了時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的磁微球，將待檢測樣本溶液分成等量的若干份，分批次匯聚磁微 球并進(jìn)行熒光標(biāo)記物時(shí)間分辨熒光的檢測，得到多次檢測的統(tǒng)計(jì)結(jié)果，從而完成對整個(gè)樣 本溶液中熒光標(biāo)記物的含量檢測;單次時(shí)間分辨熒光檢測的步驟如下： 1) 在兩端開口的石英管中持續(xù)通入樣本溶液，同時(shí)啟動激發(fā)光光源，石英管的一側(cè)設(shè) 置電磁鐵，在電磁鐵的磁場作用下，使流動溶液中的磁微球駐留在電磁鐵的前端，隨著液體 的流動，石英管內(nèi)的磁微球匯集數(shù)量不斷增加，形成匯集點(diǎn)； 2) 停止通入樣本溶液，光線通過激發(fā)光路聚焦在匯集點(diǎn)的磁微球上，經(jīng)至少10微秒后 關(guān)閉激發(fā)光光源;再經(jīng)10-2000微秒的設(shè)定時(shí)間后，收集磁微球結(jié)合的焚光標(biāo)記物的時(shí)間分 辨熒光信號，并轉(zhuǎn)換為電信號，進(jìn)行時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的含量檢測。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的熒光檢測方法，其特征在于:待磁 微球匯集0.1秒至10秒后，停止通入樣本溶液。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的熒光檢測方法，其特征在于:所述 石英管為中空透明管，其內(nèi)徑為〇.1-1〇_。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的熒光檢測方法，其特征在于:所述 石英管的內(nèi)徑和外徑均為方形。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種時(shí)間分辨焚光標(biāo)記物的焚光檢測方法，其特征在于：電磁 鐵的磁力恒定為1~2000mg。6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種時(shí)間分辨焚光標(biāo)記物的焚光檢測方法，其特征在于:溶液 樣本在石英管中的流速恒定為〇. 1~100厘米/秒。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的熒光檢測方法，其特征在于:所述 石英管磁微球匯集點(diǎn)處的一側(cè)設(shè)置散射光收集光路，收集磁微球在光照射時(shí)產(chǎn)生的散射 光，樣本溶液通入石英管時(shí)，實(shí)時(shí)監(jiān)測匯集點(diǎn)處磁微球的匯聚數(shù)量。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種時(shí)間分辨焚光標(biāo)記物的焚光檢測方法，其特征在于:磁微 球中加入了與熒光標(biāo)記物波長不同的熒光物質(zhì)，在激發(fā)光照射下的磁微球自帶熒光，所述 石英管的一側(cè)設(shè)置有自帶熒光收集光路，樣本溶液通入石英管時(shí)，實(shí)時(shí)監(jiān)測匯集點(diǎn)處磁微 球的匯聚數(shù)量。9. 根據(jù)權(quán)利要求7或者8所述的一種時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的熒光檢測方法，其特征在 于:當(dāng)磁微球在匯集點(diǎn)聚集的數(shù)量達(dá)到1~100000粒之間的設(shè)定值時(shí)，停止通入樣本溶液。10. 權(quán)利要求1所述時(shí)間分辨的磁微球熒光檢測方法的裝置，其特征在于:包括樣本抽 取機(jī)構(gòu)、磁微球匯集機(jī)構(gòu)和時(shí)間分辨焚光檢測機(jī)構(gòu);所述的樣本抽取機(jī)構(gòu)包括吸液針頭、石 英管和吸液栗，所述吸液針頭連接石英管，石英管連接吸液栗;所述的磁微球匯集機(jī)構(gòu)為恒 流源供電線圈纏繞的電磁鐵，所述電磁鐵的一端朝向石英管;所述的時(shí)間分辨熒光檢測機(jī) 構(gòu)包括激發(fā)光光源、第一光電轉(zhuǎn)換器、激發(fā)光路和時(shí)間分辨收集光路;所述激發(fā)光光源的光 線通過激發(fā)光路聚焦在石英管上，且該匯集點(diǎn)與電磁鐵朝向石英管的位置相同，所述的時(shí) 間分辨收集光路對應(yīng)該匯集點(diǎn)的位置設(shè)置，所述的第一光電轉(zhuǎn)換器對應(yīng)時(shí)間分辨收集光 路。11. 權(quán)利要求7所述時(shí)間分辨的磁微球熒光檢測方法的裝置，其特征在于:包括樣本抽 取機(jī)構(gòu)、磁微球匯集機(jī)構(gòu)、磁微球數(shù)量監(jiān)測機(jī)構(gòu)和時(shí)間分辨焚光檢測機(jī)構(gòu);所述的樣本抽取 機(jī)構(gòu)包括吸液針頭、石英管和吸液栗，所述吸液針頭連接石英管，石英管連接吸液栗;所述 的磁微球匯集機(jī)構(gòu)為恒流源供電線圈纏繞的電磁鐵，所述電磁鐵的一端朝向石英管;所述 的時(shí)間分辨熒光檢測機(jī)構(gòu)包括激發(fā)光光源、第一光電轉(zhuǎn)換器、激發(fā)光路和時(shí)間分辨收集光 路;所述激發(fā)光光源的光線通過激發(fā)光路聚焦在石英管上，且該匯集點(diǎn)與電磁鐵朝向石英 管的位置相同，所述的時(shí)間分辨收集光路對應(yīng)該匯集點(diǎn)的位置設(shè)置，所述的第一光電轉(zhuǎn)換 器對應(yīng)時(shí)間分辨收集光路;所述的磁微球數(shù)量監(jiān)測機(jī)構(gòu)包括散射光收集光路和第二光電轉(zhuǎn) 換器，所述散射光收集光路對應(yīng)所述匯聚點(diǎn)的位置設(shè)置，所述的第二光電轉(zhuǎn)換器對應(yīng)散射 光收集光路。12.權(quán)利要求8所述時(shí)間分辨的磁微球熒光檢測方法的裝置，其特征在于:包括樣本抽 取機(jī)構(gòu)、磁微球匯集機(jī)構(gòu)、磁微球數(shù)量監(jiān)測機(jī)構(gòu)和時(shí)間分辨焚光檢測機(jī)構(gòu);所述的樣本抽取 機(jī)構(gòu)包括吸液針頭、石英管和吸液栗，所述吸液針頭連接石英管，石英管連接吸液栗;所述 的磁微球匯集機(jī)構(gòu)為恒流源供電線圈纏繞的電磁鐵，所述電磁鐵的一端朝向石英管;所述 的時(shí)間分辨熒光檢測機(jī)構(gòu)包括激發(fā)光光源、第一光電轉(zhuǎn)換器、激發(fā)光路和時(shí)間分辨熒光收 集光路;所述激發(fā)光光源的光線通過激發(fā)光路聚焦在石英管上，且該匯集點(diǎn)與電磁鐵朝向 石英管的位置相同，所述的時(shí)間分辨熒光收集光路對應(yīng)該匯集點(diǎn)的位置設(shè)置，所述的第一 光電轉(zhuǎn)換器對應(yīng)時(shí)間分辨熒光收集光路;所述的磁微球數(shù)量監(jiān)測機(jī)構(gòu)包括磁微球自帶熒光 收集光路和第三光電轉(zhuǎn)換器，所述磁微球自帶熒光收集光路對應(yīng)所述匯聚點(diǎn)的位置設(shè)置， 所述的第三光電轉(zhuǎn)換器對應(yīng)磁微球自帶熒光收集光路。
【文檔編號】G01N33/543GK106053786SQ201610379775
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月1日
【發(fā)明人】吳俊清, 章健, 吳冠英
【申請人】章健, 吳俊清, 吳冠英