磺胺苯甲醛衍生物制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種抗原材料制備方法，具體為磺胺苯甲醛衍生物制備方法，取磺胺溶于溶劑中，配得溶液1；所述的溶劑為1，4?二氧六環(huán)、DMF或DMA中的一種；選取鄰苯二甲醛、香草醛、對羥基苯甲醛中一種溶解于1，4?二氧六環(huán)中，配得溶液2；溶液2加熱逐滴加入溶液1，保溫?cái)嚢璺磻?yīng)1h；冷卻至室溫析晶、過濾干燥，提純。本發(fā)明提供的磺胺苯甲醛衍生物制備方法，在磺胺的芳氨基鏈接一個側(cè)臂后再制備磺胺抗原課得到高效的免疫原，以制備族特異性抗體。
【專利說明】
橫胺苯甲酵衍生物制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種抗原材料制備方法，具體為橫胺苯甲醒衍生物制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 由于橫胺分子量較小，必須將其與載體偶聯(lián)形成完全抗原后才能制備相應(yīng)抗體， 因此，合成高質(zhì)量的免疫原是小分子物質(zhì)免疫分析的關(guān)鍵。合成免疫原一般采用化學(xué)方法 使半抗原與載體蛋白偶聯(lián)?？贵w通常對遠(yuǎn)離聯(lián)結(jié)位點(diǎn)的半抗原部分具有較好的識別能力， 因此半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)位置最好遠(yuǎn)離重要的抗原決定簇。橫胺半抗原的合成必須從 N端構(gòu)建間隔臂和活性基團(tuán)W連接載體蛋白，從而將它們的共同母核結(jié)構(gòu)暴露出來作為抗 原決定簇。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 針對上述技術(shù)問題本發(fā)明提供一種橫胺苯甲醒衍生物制備方法。
[0004] 橫胺苯甲醒衍生物制備方法，包括W下步驟：
[0005] (1)取橫胺溶于溶劑中，配得溶液1;所述的溶劑為1,4-二氧六環(huán)、DMF或DMA中的一 種；
[0006] (2)選取鄰苯二甲醒、香草醒、對徑基苯甲醒中一種溶解于1，4-二氧六環(huán)中，配得 溶液2;
[0007] (3)溶液巧日熱80°C攬拌，逐滴加入溶液1，保溫?cái)埌璺磻?yīng)化;溶液1中的溶質(zhì)和溶液 2中的溶質(zhì)摩爾量相同。
[000引（4)反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液冷卻至室溫析晶化，過濾干燥，得到橫胺衍生物粗品；
[0009] (5)通過制備液相制得橫胺衍生物純品。
[0010] 本發(fā)明提供的橫胺苯甲醒衍生物制備方法，在橫胺的芳氨基鏈接一個側(cè)臂后再制 備橫胺抗原課得到高效的免疫原，W制備族特異性抗體。
【附圖說明】
[0011] 圖1為實(shí)施例1的橫胺半抗原的ESI-MS質(zhì)譜之一；
[0012] 圖2為實(shí)施例1的橫胺半抗原的ESI-MS質(zhì)譜之二；
[001 ；3 ]圖3為實(shí)施例1的橫胺半抗原的iH-NMR;
[0014] 圖4為實(shí)施例1的橫胺半抗原的"C-NMR。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 結(jié)合【附圖說明】本發(fā)明【具體實(shí)施方式】。
[0016] 實(shí)施例中所用的試劑與藥品：橫胺、鄰二苯甲醒、水溶性碳二亞胺化DC)、戊二醒、 N，N-二甲基甲酯胺(DMF)、1，4-二氧六環(huán)等均購自上海晶純生化科技股份有限公司；牛血清 蛋白（BSA)、雞卵清蛋白（OVA)、牛血清白蛋白（BSA，純度98% )、卵清蛋白（OVA，純度99 % )均 購自Si卵a(bǔ)公司。
[0017] 實(shí)施例中所用的儀器與設(shè)備：IRsolution紅外光譜儀舊本島津公司），AVANCE- 500核磁共振儀(瑞：t化uker公司），高效液相色譜儀（美國安捷倫公司），電噴霧電離質(zhì)譜 (美國安捷倫公司），751GW型紫外分光光度計(jì)（上海分析儀器廠），BS214D型電子天平（陜西 鵬展科技有限公司），各種玻璃儀器(天津玻璃儀器廠），RE-2000E旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生 儀器廠）。
[0018] 橫胺苯甲醒衍生物制備過程：
[0019] 取橫胺0.34g(2mmol)，溶于5mll，4-二氧六環(huán)溶液中，配得溶液1，稱取鄰苯二甲醒 0.27g( 2mmol)溶于15ml 1，4-二氧六環(huán)，配得溶液2，溶液巧日入至50ml錐形瓶中80°C攬拌，逐 滴加入溶液1，80°C攬拌反應(yīng)化，反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液冷卻至室溫析晶化，過濾干燥，得到橫 胺衍生物粗品。通過制備液相（Column: Sunf ire，（ 3.加 m，150*4.6mm)流動相A:此0(0.01 % TFA)-B:乙臘（0.01%TFA)l-9min 5%B-95%B，9-14min，95%B，14-15min 95%B-5%B，流 速1.OmL/min，柱溫40°C)制得橫胺衍生物純品，用紅外光譜掃描儀、ESI-MS與核磁共振法進(jìn) 行鑒定。
[0020] 反應(yīng)過程為：
[0021]
[0022] 對實(shí)施例的產(chǎn)物進(jìn)行檢驗(yàn)與分析：
[0023] 1.半抗原鑒定
[0024] (1)橫胺半抗原紅外光譜鑒定
[0025] 根據(jù)橫胺半抗原的紅外光譜，其中波數(shù)2820。111^2720細(xì)^醒基乂(：-即及收峰； 3518cm-i處吸收峰為半抗原中-N此吸收峰，1383-133。111-1，1161-1105(3111-1是￥3〇2吸收峰， 1503cm-i為vc = N的特征吸收；1668cm-i強(qiáng)吸收峰為幾基特征峰。由2820cm-i、2720cm-i、 1668cm-i醒基的特征吸收與1503cm-ic = N的特征吸收可推斷橫胺與鄰二苯甲醒連結(jié)成功。
[0026] (2)橫胺半抗原質(zhì)譜的鑒定
[0027] 橫胺半抗原的(+化SI-MS全掃描質(zhì)譜如圖1和圖2,出現(xiàn)m/z 289的[M+l]+準(zhǔn)分子離 子峰與半抗原分子質(zhì)量對應(yīng)。為了進(jìn)一步確定其結(jié)構(gòu)，對m/z 389.3的分子離子進(jìn)行了（ + ) ESI-MS2分析，m/z 289的分子離子裂解后出現(xiàn)m/z 272、224、208、178等碎牙離子峰，都能合 理歸屬，因此m/z289分子離子可歸屬為半抗原橫胺鄰二苯甲醒衍生物。
[0028] m/z289可能的碎裂機(jī)理：
[0029]
[0032] 圖 3是橫胺半抗原 1h-醒R: (500MHz，DMS0-d6)88.11 (d，2H，J = 8.5Hz，CHAr)，7.86 (d，2H，J = 8.5Hz，CHAr)，7.83(d，lH，J =細(xì)z，CH0) ,7.71 (dd，2H，J= 10Hz，7Hz，CSAr) ,7.57 (m，-N = 巧），7.35(s，2H，CpR)，5.10(s，2H，NH2)。圖4是橫胺半抗原l3c-NMR:(500MHz，DMS0- d6)Sl67.1(CH0)，142.2(C-l)，141.1(C-4)，138.9(C-2'),132.7(C-1'),131.9(C-3')， 128.3(C-6' ),126.7(C-3,5)，123.4(04' ),123.5(C-5' ),118.6(C-2,6)，50.4(N=CH)。從 碳原子與氨原子歸屬情況可推斷橫胺成功連接了鄰二苯甲醒。
[0033] 實(shí)施例2
[0034] 取橫胺0.34g (2mmo 1)，溶于5ml 1，4-二氧六環(huán)溶劑中，配得溶液1，稱取鄰苯二甲醒 0.27g( 2mmol)溶于15ml 1，4-二氧六環(huán)，配得溶液2，溶液巧日入至50ml錐形瓶中80°C攬拌，逐 滴加入溶液1，80°C攬拌反應(yīng)化，反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液冷卻至室溫析晶化，過濾干燥，得到橫 胺衍生物粗品。
[0035] 實(shí)施例3
[0036] 取橫胺0 . %g( 2mmol)，溶于5ml DMF或DMA溶液中，配得溶液1，稱取鄰苯二甲醒 0.27g( 2mmol)溶于15ml 1，4-二氧六環(huán)，配得溶液2，溶液巧日入至50ml錐形瓶中80°C攬拌，逐 滴加入溶液1，80°C攬拌反應(yīng)化，反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液冷卻至室溫析晶化，過濾干燥，得到橫 胺衍生物粗品。
[0037] 實(shí)施例4
[003引取橫胺0.34g(2mmol)，溶于5ml 1，4-二氧六環(huán)溶液中，配得溶液1，稱取香草醒 0.24g( 2mmol)溶于15ml 1，4-二氧六環(huán)，配得溶液2，溶液巧日入至50ml錐形瓶中80°C攬拌，逐 滴加入溶液1，80°C攬拌反應(yīng)化，反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液冷卻至室溫析晶化，過濾干燥，得到橫 胺衍生物粗品。
[0039] 實(shí)施例5
[0040] 取橫胺〇.34g(2mmol)，溶于5mll，4-二氧六環(huán)溶液中，配得溶液1，稱取對徑基苯甲 醒0.24g (2mmol)溶于15ml 1，4-二氧六環(huán)，配得溶液2，溶液巧日入至50ml錐形瓶中80°C攬拌， 逐滴加入溶液1，80°C攬拌反應(yīng)比，反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液冷卻至室溫析晶化，過濾干燥，得到 橫胺衍生物粗品。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.磺胺苯甲醛衍生物制備方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 取磺胺溶于溶劑中，配得溶液1;所述的溶劑為1，4_二氧六環(huán)、DMF或DMA中的一種； (2) 選取鄰苯二甲醛、香草醛、對羥基苯甲醛中一種溶解于1，4_二氧六環(huán)中，配得溶液 2； (3) 溶液2加熱80 °C攪拌，逐滴加入溶液1，保溫?cái)嚢璺磻?yīng)lh;溶液1中的溶質(zhì)和溶液2中 的溶質(zhì)摩爾量相同； (4) 反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液冷卻至室溫析晶2h，過濾干燥，得到磺胺衍生物粗品； (5) 通過制備液相制得磺胺衍生物純品。
【文檔編號】C07C311/39GK106083662SQ201610368335
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年5月21日
【發(fā)明人】魏東, 馮亭亭, 黃智鴻, 邢艷安, 喬文珍, 張秀敏, 郭振慧, 栗慧, 金艷丹
【申請人】魏東