一種處理支原體污染的試劑、及其試劑盒和處理方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種處理支原體污染的試劑、及其試劑盒和處理方法，所述試劑為包含抗生素太妙菌素、二甲胺四環(huán)素和抗生素環(huán)丙沙星的溶液；其中，所述抗生素太妙菌素、所述二甲胺四環(huán)素與所述二甲胺四環(huán)素，三者的濃度比值為4：1：3。本發(fā)明的處理支原體污染的試劑、及其試劑盒和處理方法，采用了特定比例的抗生素太妙菌素、二甲胺四環(huán)素與二甲胺四環(huán)素的三者的組合，能顯著提高支原體污染處理的效果；并且能夠簡便、安全且快速有效地處理支原體污染的問題。
【專利說明】
一種處理支原體污染的試劑、及其試劑盒和處理方法
技術領域
[0001]本發(fā)明涉及一種處理支原體污染的試劑、及其試劑盒和處理方法，屬于生物技術領域。
【背景技術】
[0002]支原體(Mycoplasma)污染是細胞培養(yǎng)過程中最常見的污染之一，特別是在哺乳動物細胞的培養(yǎng)過程中，支原體污染問題尤其令人頭疼，主要原因有以下三點:I)支原體體積非常小，直徑為0.ιμπι，一般過濾除菌無法去除，光學顯微鏡下難以看清它的形態(tài)結構;2)支原體生命力頑強，能在偏堿條件(pH 7.6?8.0)下生存，且對青霉素有抗藥性;3)細胞受支原體污染初期，部分敏感細胞可見細胞生長增增殖變慢、形態(tài)變圓。但多數細胞污染后無明顯變化，或略有變化，若不及時處理，還會產生交叉污染。支原體最終會導致細胞死亡，不過更常見的情況是，支原體與細胞共存;在這過程當中，支原體慢慢增殖，直至對細胞產生明顯的影響，如干擾細胞迀移、信號轉導、淋巴細胞活化和細胞因子表達。
[0003]對于相關科研工作者來說，最可怕的是支原體污染在不知不覺中改變許多參數，使研究成果的可信度大打折扣，甚至造成重大損失。
[0004]遭受支原體污染的細胞一般被直接扔棄;但有一些特殊的情況下，需要保留細胞；因此在確認發(fā)生支原體污染后，需要通過一些比較特殊的實驗進行處理來保留細胞。
[0005]因此需要一種能夠處理支原體污染、并能夠拯救被污染的細胞的處處理試劑盒。

【發(fā)明內容】

[0006]鑒于相關技術的上述問題和/或其他問題，本發(fā)明一方面提供了一種處理支原體污染的試劑，所述試劑為包含抗生素太妙菌素、二甲胺四環(huán)素和抗生素環(huán)丙沙星的溶液;其中，所述抗生素太妙菌素、所述二甲胺四環(huán)素與所述二甲胺四環(huán)素，三者的濃度比值為4:1:3。
[0007]優(yōu)選的，所述試劑為所述抗生素太妙菌素、二甲胺四環(huán)素和抗生素環(huán)丙沙星溶解于無菌雙蒸水所形成的溶液。
[0008]本發(fā)明另一方面提供了一種處理支原體污染的試劑盒，所述試劑盒包括上述的試劑。
[0009]優(yōu)選的，所述抗生素太妙菌素的濃度為20mg/ml，所述二甲胺四環(huán)素的濃度5mg/ml，所述抗生素環(huán)丙沙星的濃度為15mg/ml。
[0010]優(yōu)選的，所述試劑盒中，所述試劑的規(guī)格為10ml、50ml、20ml或1ml。
[0011]本發(fā)明再一方面提供了一種處理支原體污染的方法，其中，將上述的試劑，或者上述試劑盒中的試劑與新鮮培養(yǎng)基混合以獲得抗生素培養(yǎng)基，所述抗生素培養(yǎng)基中的所述抗生素太妙菌素的濃度為20mg/ml，所述二甲胺四環(huán)素的濃度5mg/ml，所述抗生素環(huán)丙沙星的濃度為15mg/ml;將待處理的細胞培養(yǎng)物添加到所述抗生素培養(yǎng)基中，培養(yǎng)3天后，舍棄舊的培養(yǎng)基;再更換新的所述抗生素培養(yǎng)基，培養(yǎng)3天；如此循環(huán)，直至檢測不到支原體污染情況。
[0012]優(yōu)選的，所述待處理的細胞培養(yǎng)物的培養(yǎng)條件如下:細胞培養(yǎng)密度大約為50000?100000個/ml，溫度 37°C 以及 5%C02。
[0013]與現有技術相比，本發(fā)明的處理支原體污染的試劑、及其試劑盒和處理方法，采用了抗生素太妙菌素、二甲胺四環(huán)素與二甲胺四環(huán)素的組合，并且發(fā)明人經過大量試驗研究意外地發(fā)現，特定比例的三種抗生素的組合，能夠更有效的處理支原體污染的問題，并且三者特定比例的組合的效果遠優(yōu)越于抗生素太妙菌素與二甲胺四環(huán)素組合的效果，這說明了二甲胺四環(huán)素與抗生素太妙菌素、二甲胺四環(huán)素之間存在一定的協(xié)同效應，能顯著提高支原體污染處理的效果；另外，本發(fā)明的處理支原體污染的試劑、及其試劑盒和處理方法還具有以下優(yōu)點:I)操作簡便:可以直接處理細胞培養(yǎng)過程中出現的支原體污染現象，處理試劑無需再溶解；2)使用安全:專門為殺滅支原體而設計，最大化的減少對常規(guī)培養(yǎng)細胞的傷害;3)快速有效:本試劑盒針對支原體的生物特性，采用最有效的成分，以達到快速、有效處理支原體污染的目的;總的來說，能夠簡便、安全且快速有效地處理支原體污染的問題。
【附圖說明】
[0014]圖1a為采用實施例1試劑處理支原體污染后的支原體檢測結果圖；
[0015]圖1b為采用對比例I的抗生素培養(yǎng)基處理支原體污染后的支原體檢測結果圖；
[0016]圖1c為采用對比例2的抗生素培養(yǎng)基處理支原體污染后的支原體檢測結果圖。
【具體實施方式】
[0017]以下通過實施例對本發(fā)明作進一步的說明，但本發(fā)明并不限于這些【具體實施方式】。
[0018]實施例1:處理支原體污染的試劑以及試劑盒的配制
[0019]以1ml規(guī)格的試劑盒為例:
[°02°] 將200mg太妙菌素，50mg二甲胺四環(huán)素和150mg抗生素環(huán)丙沙星依次溶于1ml無菌雙蒸水中，充分混勻，即得到配制好的處理支原體污染的試劑;然后，再將該試劑裝配到試劑盒中。
[0021]實施例2:處理支原體污染的方法
[0022]將實施例1配制的試劑(或者說試劑盒中的試劑)，按照1:100的體積比例(即，稀釋后的體積為實施例1的試劑體積的100倍)添加到新鮮的RMPI 1640培養(yǎng)基(待處理的細胞為293T細胞，其采用RMPI 1640培養(yǎng)基)中獲得抗生素培養(yǎng)基，其中，抗生素太妙菌素的濃度為
0.2mg/ml，二甲胺四環(huán)素的濃度0.05mg/ml，抗生素環(huán)丙沙星的濃度為0.15mg/ml。
[0023]將待處理的細胞培養(yǎng)物添加到上述的抗生素培養(yǎng)基中，培養(yǎng)3天后，舍棄舊的培養(yǎng)基;再更換新的抗生素培養(yǎng)基，培養(yǎng)3天;如此循環(huán)，直至檢測不到支原體污染情況。
[0024]檢測不到支原體污染情況后，可以進行正常的細胞培養(yǎng)或傳代培養(yǎng)。
[0025]在本實施例中，待處理的細胞培養(yǎng)物的培養(yǎng)條件如下:細胞培養(yǎng)密度大約為80000個/ml，溫度37 °C以及5% CO2。
[0026]在本實施例中，經過3個循環(huán)后，基本上檢測不到支原體污染情況了。
[0027]效果數據
[0028]實施例1的試劑與新鮮的RMPI1640培養(yǎng)基混合后的抗生素培養(yǎng)基中，抗生素太妙菌素的濃度為0.2mg/ml，二甲胺四環(huán)素的濃度0.05mg/ml，抗生素環(huán)丙沙星的濃度為0.15mg/ml;總抗生素濃度為0.4mg/ml ；
[0029]對比例1:
[0030]按照同樣的方法，配制對比例I的抗生素培養(yǎng)基，其中，抗生素太妙菌素的濃度為0.32mg/ml，二甲胺四環(huán)素的濃度0.08mg/ml;總抗生素濃度為0.4mg/ml ；
[0031]對比例2:
[0032]按照同樣的方法，配制對比例2的抗生素培養(yǎng)基，其中，抗生素環(huán)丙沙星的濃度為0.4mg/ml ；總抗生素濃度為0.4mg/ml ；
[0033]將待處理的細胞培養(yǎng)物分成3份，分別添加到實施例1的試劑配制的抗生素培養(yǎng)基、對比例I的抗生素培養(yǎng)基和對比例2的抗生素培養(yǎng)基，培養(yǎng)3天后，舍棄舊的培養(yǎng)基;再更換新的各自的抗生素培養(yǎng)基，培養(yǎng)3天;如此循環(huán)。
[0034]每經歷一個循環(huán)周期，取各自的培養(yǎng)物進行支原體檢測，檢測結果參圖la、lb和Ic0
[0035]參見圖la，采用實施例1的試劑，經歷3個循環(huán)周期后，檢測不到支原體污染情況了；
[0036]然而，參見圖1b和Ic，對比例I和對比例2，在經歷3個循環(huán)周期后，仍存在支原體污染情況。
[0037]由此可以看出，同樣的總抗生素濃度以及同樣的處理方法，采用抗生素太妙菌素、二甲胺四環(huán)素與二甲胺四環(huán)素的三者的特定比例組合的試劑的支原體污染處理效果遠優(yōu)越于抗生素太妙菌素與二甲胺四環(huán)素兩者組合的效果，也遠優(yōu)越于二甲胺四環(huán)素的處理效果，這說明了二甲胺四環(huán)素與抗生素太妙菌素、二甲胺四環(huán)素之間存在一定的協(xié)同效應，能顯著提高支原體污染處理的效果。
[0038]應當理解，雖然本說明書按照實施方式加以描述，但并非每個實施方式僅包含一個獨立的技術方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領域技術人員應當將說明書作為一個整體，各實施方式中的技術方案也可以經適當組合，形成本領域技術人員可以理解的其他實施方式。
[0039]上文所列出的一系列的詳細說明僅僅是針對本發(fā)明的可行性實施方式的具體說明，它們并非用以限制本發(fā)明的保護范圍，凡未脫離本發(fā)明技藝精神所作的等效實施方式或變更均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內。
【主權項】
1.一種處理支原體污染的試劑，其特征在于:所述試劑為包含抗生素太妙菌素、二甲胺四環(huán)素和抗生素環(huán)丙沙星的溶液;其中， 所述抗生素太妙菌素、所述二甲胺四環(huán)素與所述二甲胺四環(huán)素，三者的濃度比值為4:1:3。2.如權利要求1所述的試劑，其特征在于:所述試劑為所述抗生素太妙菌素、二甲胺四環(huán)素和抗生素環(huán)丙沙星溶解于無菌雙蒸水所形成的溶液。3.一種處理支原體污染的試劑盒，其特征在于:所述試劑盒包括如權利要求1至2中任意一項所述的試劑。4.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于:所述抗生素太妙菌素的濃度為20mg/ml，所述二甲胺四環(huán)素的濃度5mg/ml，所述抗生素環(huán)丙沙星的濃度為15mg/ml。5.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于:所述試劑盒中，所述試劑的規(guī)格為10ml、50ml、20ml或1ml。6.一種處理支原體污染的方法，其特征在于: 將所述權利要求1至2中任意一項所述的試劑，或者所述權利要求3至5中任意一項所述的試劑盒中的試劑與新鮮培養(yǎng)基混合以獲得抗生素培養(yǎng)基，所述抗生素培養(yǎng)基中的所述抗生素太妙菌素的濃度為20mg/ml，所述二甲胺四環(huán)素的濃度5mg/ml，所述抗生素環(huán)丙沙星的濃度為15mg/ml; 將待處理的細胞培養(yǎng)物添加到所述抗生素培養(yǎng)基中，培養(yǎng)3天后，舍棄舊的培養(yǎng)基;再更換新的所述抗生素培養(yǎng)基，培養(yǎng)3天;如此循環(huán)，直至檢測不到支原體污染情況。7.如權利要求6所述的方法，其特征在于: 所述待處理的細胞培養(yǎng)物的培養(yǎng)條件如下:細胞培養(yǎng)密度大約為50000?100000個/ml，溫度37 °C 以及5% CO2。
【文檔編號】C12N5/071GK106047797SQ201610692668
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年8月19日
【發(fā)明人】張智培, 熊延獅
【申請人】上海逍鵬生物科技有限公司