Tn抗原及其合成工藝的制作方法
【專利摘要】一種Tn抗原的合成工藝，涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域。該合成工藝首先將給體與受體在三氟甲磺酸三甲基硅酯的催化作用下發(fā)生糖苷化反應(yīng)生成糖苷，其中給體的1號(hào)位用苯基三氟乙酰亞胺基取代保護(hù)，2號(hào)位用疊氮基團(tuán)取代保護(hù)，6號(hào)位用對(duì)硝基苯甲?；〈Ｗo(hù)，受體為1?芐基?2?芴酰基?絲氨酸/蘇氨酸；然后對(duì)糖苷的各基團(tuán)進(jìn)行轉(zhuǎn)化，生成Tn抗原，該合成工藝工序簡單，能夠?qū)崿F(xiàn)100％的α選擇性，Tn抗原的產(chǎn)率高。本發(fā)明還提供一種Tn抗原，該Tn抗原的純度高，可用于制作癌癥疫苗。
【專利說明】
Τη抗原及其合成工藝
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，且特別涉及一種Τη抗原及其合成工藝。
【背景技術(shù)】
[0002] Τη抗原是癌細(xì)胞表面的一種特異性糖類抗原，在乳腺癌、前列腺癌、肺癌、胰腺癌 等惡性細(xì)胞表面以簇狀的形式過量表達(dá)。作為乙酰氨基半乳糖衍生物，Τη抗原在正常細(xì)胞 中能進(jìn)一步延長糖鏈形成復(fù)合的低聚糖，所以對(duì)于正常細(xì)胞而言，它是隱形的。而在大多數(shù) 癌細(xì)胞中，由于其糖鏈延伸受阻，Τη抗原就暴露在細(xì)胞表面，因此Τη抗原的過量表達(dá)對(duì)于某 些癌細(xì)胞有高度的專一性，在癌癥的早期診斷方面是重要的參考數(shù)據(jù)。
[0003] 在設(shè)計(jì)合成癌癥疫苗的研究中，Τη抗原可以用于制作癌癥疫苗，讓人體產(chǎn)生針對(duì) Τη抗原的特異性抗體來進(jìn)攻癌細(xì)胞，達(dá)到免疫和治療的雙重效果。高純度的Τη抗原近年來 在癌癥疫苗研發(fā)領(lǐng)域被大量需求，每毫克Τη抗原的市價(jià)約為250美元。在自然界中Τη抗原的 含量非常稀少，因此通過天然萃取得到足夠量的Τη抗原是很有難度的，一般是通過化學(xué)合 成方法得到高純度的Τη抗體。
[0004] 在Τη抗體的化學(xué)合成過程中，必須在乙酰氨基半乳糖還原端引入一個(gè)α化學(xué)鍵，這 是糖化學(xué)合成上的一個(gè)難點(diǎn)?，F(xiàn)有Τη抗體的化學(xué)合成技術(shù)大同小異，主要是圍繞糖苷化反 應(yīng)的空間選擇性及產(chǎn)率進(jìn)行改良。糖苷化反應(yīng)是把糖的還原段(尾部)和另外一個(gè)糖單元或 者連接鏈連接起來的反應(yīng)，該反應(yīng)能生成兩種空間異構(gòu)產(chǎn)物:一種是α鍵產(chǎn)物，另一種是β鍵 產(chǎn)物。對(duì)于構(gòu)型相反的產(chǎn)品，藥效也可能完全相反，因此，對(duì)不同構(gòu)型的產(chǎn)品必須區(qū)分開，最 好能實(shí)現(xiàn)1〇〇 %的空間選擇性。通常制備β鍵產(chǎn)物可以用鄰位參與反應(yīng)的輔助方法實(shí)現(xiàn) 100%的空間選擇性，實(shí)現(xiàn)較容易，而制備具有100%的空間選擇性的α鍵產(chǎn)物則比較困難， 常用的合成方法有以下兩種。
[0005] 第一種方法是用2號(hào)位用疊氮基團(tuán)保護(hù)的給體1進(jìn)行α糖苷化反應(yīng)，通過給體1以及 不同的給體激活試劑可以提高α選擇性，然后再生成Τη抗原，該方法的反應(yīng)方程式如下：
[0006
[0007] 上述第一種方法比較簡單，但是生產(chǎn)效率不穩(wěn)定，尤其是大量生產(chǎn)時(shí)不容易控制α 選擇性，而且α選擇性較低，很難實(shí)現(xiàn)超過80 %的α選擇性。
[0008] 第二種方法是用2號(hào)位用亞胺保護(hù)的給體2進(jìn)行α糖苷化反應(yīng)，并使用一種自制的 鎳類催化劑進(jìn)行催化，用以提高α選擇性，然后再生成Τη抗原，該反應(yīng)方程式如下：
[0009]
[0010] 上述第二種方法的α選擇性較高，實(shí)現(xiàn)了在重量克級(jí)別生產(chǎn)時(shí)的100%α選擇性，提 高了產(chǎn)品的純度，簡化了提純步驟，但是糖苷化的產(chǎn)率只有66%，而且該方法必須使用自制 的鎳類催化劑，生產(chǎn)成本較高，不利于推廣使用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011] 本發(fā)明的目的在于提供一種Τη抗原，純度高，可用于制作癌癥疫苗。
[0012] 本發(fā)明的另一目的在于提供一種Τη抗原的合成工藝，工序簡單，能夠?qū)崿F(xiàn)100%的 α選擇性，且Τη抗原的產(chǎn)率高。
[0013] 本發(fā)明解決其技術(shù)問題是采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。
[0014] 一種Τη抗原，其結(jié)構(gòu)式如下所示：
[0015] "制
。
[0016] -種Τη抗原的合成工藝，其包括以下步驟：
[0017]糖苷化反應(yīng):將給體與受體在三氟甲磺酸三甲基硅酯的催化作用下發(fā)生糖苷化反 應(yīng)，生成糖苷，給體的結(jié)構(gòu)式 >
受體的結(jié)構(gòu)式^
糖苷的結(jié)構(gòu)式 y
?中，R1選自?；⑵S基、糖單元，R2選自?；?、芐基、糖單元;以及
[0018] 基團(tuán)處理:將糖苷的1號(hào)位的基團(tuán)轉(zhuǎn)化為
；2號(hào)位的基團(tuán)轉(zhuǎn)化為乙酰氨 基，3、4、6號(hào)位的基團(tuán)轉(zhuǎn)化為羥基，生成Τη抗原。
[0019] 進(jìn)一步地，在本發(fā)明較佳實(shí)施例中，上述給體的制備方法包括以下步驟：
[0020] 以結(jié)構(gòu)式）
的氨基葡萄糖為原料，將氨基葡萄糖的1號(hào)位用苯基三氟 乙酰亞胺基取代保護(hù)，2號(hào)位用疊氮基團(tuán)取代保護(hù)，6號(hào)位用對(duì)硝基苯甲?；〈Ｗo(hù)，生成 給體，給體的結(jié)構(gòu)式戈
其中R1=R2=對(duì)硝基苯甲?；?。
[0021 ]進(jìn)一步地，在本發(fā)明較佳實(shí)施例中，上述給體的制備方法包括以下步驟：
[0022]以結(jié)構(gòu)式為
；的氨基葡萄糖為原料，將氨基葡萄糖的1號(hào)位用連接烯丙 基的羥基取代保護(hù)，2號(hào)位用疊氮基團(tuán)取代保護(hù)，6號(hào)位用對(duì)硝基苯甲?；〈Ｗo(hù)，生成中 間體；以及
[0023]將中間體的1號(hào)位的連接烯丙基的羥基轉(zhuǎn)化成苯基三氟乙酰亞胺基，生成給體，給 體的結(jié)構(gòu)式為
其中R1=R2 =對(duì)硝基苯甲?；?。
[0024]進(jìn)一步地，在本友明較佳實(shí)施例中，上述給體的制備方法還包括將氨基葡萄糖的 3、4號(hào)位用對(duì)硝基苯甲?；〈Ｗo(hù)的步驟。
[0025] 進(jìn)一步地，在本發(fā)明較佳實(shí)施例中，上述給體的制備方法具體包括以下步驟：
[0026] 將氨基葡萄糖與1H-咪唑-1-磺酰疊氮鹽酸鹽反應(yīng)，使氨基葡萄糖2號(hào)位的氨基轉(zhuǎn) 化成疊氮基團(tuán)，生成第一保護(hù)產(chǎn)物；
[0027]將第一保護(hù)產(chǎn)物與烯丙基醇在三氟化硼乙醚的作用下反應(yīng)，使第一保護(hù)產(chǎn)物1號(hào) 位的羥基連接上烯丙基，生成第二保護(hù)產(chǎn)物；
[0028]將第二保護(hù)產(chǎn)物與對(duì)硝基苯甲酰氯在三乙胺的作用下反應(yīng)，使第二保護(hù)產(chǎn)物3、4、 6號(hào)位的羥基轉(zhuǎn)化成對(duì)硝基苯甲?；傻谌Ｗo(hù)產(chǎn)物；
[0029]將第三保護(hù)產(chǎn)物在零價(jià)金屬銥的催化作用下反應(yīng)，使第三保護(hù)產(chǎn)物1號(hào)位的連接 烯丙基的羥基異構(gòu)化成丙烯基，生成第四保護(hù)產(chǎn)物；
[0030] 將第四保護(hù)產(chǎn)物在碘的作用下水解，使第四保護(hù)產(chǎn)物1號(hào)位的丙烯基水解成羥基， 生成第五保護(hù)產(chǎn)物；
[0031] 將第五保護(hù)產(chǎn)物與2,2,2_三氟-N-苯基亞氨代乙酰氯在碳酸鉀的作用下反應(yīng)，使 第五保護(hù)產(chǎn)物1號(hào)位的羥基激活成苯基三氟乙酰亞胺基，生成給體，所給體的結(jié)構(gòu)式為
[0032]進(jìn)一步地，在本發(fā)明較佳實(shí)施例中，在第三保護(hù)產(chǎn)物進(jìn)行催化反應(yīng)之前，將第三保 護(hù)產(chǎn)物進(jìn)行純化處理。
[0033]進(jìn)一步地，在本發(fā)明較佳實(shí)施例中，將給體與受體在三氟甲磺酸三甲基硅酯的催 化作用下發(fā)生糖苷化反應(yīng)，生成糖苷，糖苷的結(jié)構(gòu)式為：
[0034] 進(jìn)一步地，在本發(fā)明較佳實(shí)施例中，上述基團(tuán)處理包括以下步驟：
[0035] 將糖苷與1，3-丙二硫醇反應(yīng)，糖苷2號(hào)位的疊氮基團(tuán)被還原成氨基，生成第一生成 產(chǎn)物；
[0036]將第一生成產(chǎn)物與乙酸酐在吡啶溶劑中反應(yīng)，使第一生成產(chǎn)物2號(hào)位的氨基轉(zhuǎn)化 成乙酰氨基，生成第二生成產(chǎn)物；
[0037] 將第二生成產(chǎn)物與氫氧化鈉反應(yīng)，第二生成產(chǎn)物3、4、6號(hào)位的對(duì)硝基苯甲?；D(zhuǎn) 化成羥基，1號(hào)位的氨基酸上的芴酰基轉(zhuǎn)化成氨基，氨基酸上的芐基酯轉(zhuǎn)化成羧酸，生成Τη 抗原。
[0038] 進(jìn)一步地，在本發(fā)明較佳實(shí)施例中，在糖苷在與1，3-丙二硫醇反應(yīng)之前，將糖苷進(jìn) 行純化處理。
[0039] 本發(fā)明實(shí)施例的Τη抗原及其合成工藝的有益效果是:本發(fā)明實(shí)施例的合成工藝首 先將給體與受體在三氟甲磺酸三甲基硅酯的催化作用下發(fā)生糖苷化反應(yīng)生成糖苷，給體的 1號(hào)位用苯基三氟乙酰亞胺基取代保護(hù)，2號(hào)位用疊氮基團(tuán)取代保護(hù)，6號(hào)位用對(duì)硝基苯甲酰 基取代保護(hù)，受體為1-芐基-2-芴?；?絲氨酸/蘇氨酸;然后將糖苷的1號(hào)位的基團(tuán)轉(zhuǎn)化為
;2號(hào)位的基團(tuán)轉(zhuǎn)化為乙酰氨基，3、4、6號(hào)位的基團(tuán)轉(zhuǎn)化為羥基，生成Τη抗原，該 ….、?'… ：， 合成工藝工序簡單，能夠?qū)崿F(xiàn)100 %的α選擇性，Τη抗原的產(chǎn)率高，而且合成的Τη抗原純度 高，可用于制作癌癥疫苗。
【具體實(shí)施方式】
[0040] 為使本發(fā)明實(shí)施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中 的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建 議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn) 品。
[0041 ]下面對(duì)本發(fā)明實(shí)施例的Τη抗原及其合成工藝進(jìn)行具體說明。
[0042] 本發(fā)明實(shí)施例提供一種Τη抗原，其結(jié)構(gòu)式如下所示：
[0043]
[0044] 本發(fā)明實(shí)施例還提供一種上述Τη抗原的合成工藝，其包括以下步驟：
[0045]糖苷化反應(yīng):將給體與受體在三氟甲磺酸三甲基硅酯(TMSOTf)的催化作用下發(fā)生 糖苷化反應(yīng)，生成糖苷。
[0046]其中，給體的結(jié)構(gòu)式戈 給體為半乳糖結(jié)構(gòu)，給體的1號(hào)位連接苯基 ?
?; 三氟乙酰亞胺3 \ 2號(hào)位連接疊氮基團(tuán)（-Ν3)，6號(hào)位連接對(duì)硝基苯甲?；? 0ρΝ02Βζ)保護(hù)；
[0047] 受體為1-芐基-2-芴酰基-絲氨酸/蘇氨酸，其結(jié)構(gòu)式〉
[0048] 糖苷的結(jié)構(gòu)式》 其中，R1、R2均選自酰基（如乙?；瑢?duì)硝基苯 ， 甲酰基）、芐基，糖單元（如唾液酸，氨基半乳糖等），R1、R2優(yōu)選為對(duì)硝基苯甲?；?OpN〇2Bz)。
[0049] 基團(tuán)處理:對(duì)糖苷的各基團(tuán)進(jìn)行轉(zhuǎn)化;將糖苷的1號(hào)位的基團(tuán)轉(zhuǎn)化屈
\ 號(hào)位的基團(tuán)轉(zhuǎn)化成乙酰氨基(-NHAc)，將糖苷3、4、6號(hào)位的基團(tuán)轉(zhuǎn)化成羥基(-OH)，生成Τη抗 原。采用本實(shí)施例的糖苷化反應(yīng)還可以用于合成與Τη抗原結(jié)構(gòu)類似的其它癌癥抗原，如 Tn3，STn，STn3，TF 等。
[0050 ]優(yōu)選地，Τη抗原的合成工藝包括以下步驟：
[0051] S1.給體的制備：以結(jié)構(gòu)式為
4的氨基葡萄糖為原料，將氨基葡萄糖的1 號(hào)位用苯基三氟乙酰亞胺基（
僅代保護(hù)，2號(hào)位用疊氮基團(tuán)（-Ν3)取代保護(hù)，6號(hào)位 用對(duì)硝基苯甲?；?-0ρΝ02Βζ)取代保護(hù)，優(yōu)選同時(shí)將氨基葡萄糖的3、4號(hào)位用對(duì)硝基苯甲
?；?_〇ρΝ〇2Βζ)取代保護(hù)，生成給體，給體的結(jié)構(gòu)式3 U =R2 =對(duì)硝基苯 甲?；?_0ρΝ02Βζ)。
[0052] 或者，以結(jié)構(gòu)式戈
的氨基葡萄糖為原料，將氨基葡萄糖的1號(hào)位用連接 烯丙基(-All)的羥基(-OH)，即-0A11取代保護(hù)，2號(hào)位用疊氮基團(tuán)（-N3)取代保護(hù)，6號(hào)位用 對(duì)硝基苯甲?；?_0ρΝ02Βζ)取代保護(hù)，優(yōu)選同時(shí)將氨基葡萄糖的3、4號(hào)位用對(duì)硝基苯甲酰 基(-0ρΝ0 2Βζ)取代保護(hù)，生成中間體；以及
[0053]將中間體的1號(hào)位的連接烯丙基的羥基（-0A11)轉(zhuǎn)化成苯基三氟乙酰亞胺基
生成給體，給體的結(jié)構(gòu)式爻
：? R1 = R 2 =對(duì)硝基苯甲?；? OpN〇2Bz)。
[0054] S2.糖苷化反應(yīng):將給體與受體在三氟甲磺酸三甲基硅酯（TMSOTf)的催化作用下 發(fā)生糖苷化反應(yīng)，生成糖苷。
[0055] S3.基團(tuán)處理:對(duì)糖苷的各基團(tuán)進(jìn)行轉(zhuǎn)化;將糖苷的1號(hào)位轉(zhuǎn)化成' 2號(hào)
位轉(zhuǎn)化成乙酰氨基(-NHAc)，將糖苷3、4、6號(hào)位的轉(zhuǎn)化成羥基(-OH)，生成Τη抗促、。
[0056] 進(jìn)一步優(yōu)選地，Τη抗原的合成工藝的反應(yīng)方程式如下所示：
[0057]
[0058] 參見上述反應(yīng)方程式可知，Τη抗原的合成工藝具體包括以下步驟：
[0059] W1.給體的制備：
[0060] 1.將氨基葡萄糖Β與1Η-咪唑-1-磺酰疊氮鹽酸鹽反應(yīng)，使氨基葡萄糖2號(hào)位的氨基 (-順2)轉(zhuǎn)化成疊氮基團(tuán)(_此），生成第一保護(hù)產(chǎn)物；
[0061 ] 2.將第一保護(hù)產(chǎn)物與烯丙基醇(Α110Η)在三氟化硼乙醚(BF3Et20)的作用下反應(yīng)， 使第一保護(hù)產(chǎn)物1號(hào)位的羥基(-OH)連接上烯丙基(-All)，即為-0A11，生成第二保護(hù)產(chǎn)物； [0062] 3.將第二保護(hù)產(chǎn)物與對(duì)硝基苯甲酰氯(pN02BzCl)在三乙胺(Et3N)的作用下反應(yīng)， 使第二保護(hù)產(chǎn)物3、4、6號(hào)位的羥基(-OH)轉(zhuǎn)化成對(duì)硝基苯甲?；?-0ρΝ0 2Βζ)，生成第三保護(hù) 產(chǎn)物，即中間體；
[0063] 4.將純化后的第三保護(hù)產(chǎn)物在四氫呋喃(THF)溶劑中，在零價(jià)金屬銥(IrQ絡(luò)合物） 的催化作用下反應(yīng)，使第三保護(hù)產(chǎn)物1號(hào)位的連接烯丙基的羥基(-0A11)異構(gòu)化成丙烯基(_ CH2 = CH-CH3)，生成第四保護(hù)產(chǎn)物；
[0064] 5.將第四保護(hù)產(chǎn)物在四氫呋喃和水的混合溶液(THF/H20)中，在碘(12)的作用下水 解，使第四保護(hù)產(chǎn)物1號(hào)位的丙烯基(-CH2 = CH-CH3)水解成羥基(-OH)，生成第五保護(hù)產(chǎn)物； [0065] 6.將第五保護(hù)產(chǎn)物與2,2,2_三氟-N-苯基亞氨代乙酰氯（C1-PTFA)在碳酸鉀 (K2C〇3)的作用下反應(yīng)，使第五保護(hù)產(chǎn)物1號(hào)位的羥基（-OH)激活成苯基三氟乙酰亞胺基

\生成給體F，給體F的結(jié)構(gòu)式為 )>
[0066] W2.糖苷化反應(yīng)：
[0067] 7.將給體F
_受體D(
￡甲苯溶劑中，在三氟甲 磺酸三甲基硅酯（TMSOTf)的惟化作用卜友生糖苷化反應(yīng)，生成糖苷E，糖苷E的結(jié)構(gòu)式為
把給體F激活成N-苯基三氟乙酰亞胺酸酯的形式，然后使用微量的 .> 三氟甲磺酸三甲基硅酯，在弱酸性催化條件，即可實(shí)現(xiàn)100%的α選擇性，高產(chǎn)率的糖苷化反 應(yīng)，從而優(yōu)化生產(chǎn)流程，提高產(chǎn)率，降低成本。
[0068] W3.基團(tuán)處理：
[0069] 8.將純化的糖苷Ε與1，3_丙二硫醇反應(yīng)，糖苷2號(hào)位的疊氮基團(tuán)（-Ν3)被還原成氨 基(-νη2)，生成第一生成產(chǎn)物；
[0070] 9.將第一生成產(chǎn)物與乙酸酐(Ac20)在吡啶溶劑中反應(yīng)，使第一生成產(chǎn)物2號(hào)位的 氨基(-NH2)轉(zhuǎn)化成乙酰氨基(-NHAC)，生成第二生成產(chǎn)物；
[0071 ] 10.將第二生成產(chǎn)物在氫氧化鈉(NaOH)水溶液和甲醇的的混合溶劑中反應(yīng)，第二
生成產(chǎn)物3、4、6號(hào)位的對(duì)硝基苯甲?；?_0ρΝ02Βζ)轉(zhuǎn)化成羥基(_0H)，1號(hào)位的氨基酸上的 芴?；?-NHFmoc)轉(zhuǎn)化成氨基(-NH2)，氨基酸上的芐基酯(_C02Bn)轉(zhuǎn)化成羧基(-C00H)，生成 Τη抗原。
[0072] 本發(fā)明實(shí)施例使用2號(hào)位用疊氮基團(tuán)保護(hù)的中間令 結(jié)構(gòu) ):， 與【背景技術(shù)】中的第一種方法使用的給體1類似，與第二種方法便用的給體2明Μ小向，目的 就是為了汲取第一種方法的優(yōu)點(diǎn)，簡化生產(chǎn)步驟，而且避免使用特殊的催化劑。
[0073] 另外，本發(fā)明實(shí)施例在給體1的基礎(chǔ)上進(jìn)行重新設(shè)計(jì)，形成中間體(給體F)進(jìn)行糖 苷化反應(yīng)，可使本發(fā)明實(shí)施例達(dá)到【背景技術(shù)】中的第二種方法的100%的α選擇性，并能獲得
【背景技術(shù)】中的第一種方法的80%以上的產(chǎn)率。
[0074] 本發(fā)明實(shí)施例使用基團(tuán)遠(yuǎn)程輔助效應(yīng)，改變6號(hào)位的保護(hù)基團(tuán)，使其能夠在糖苷化 反應(yīng)過程中輔助參與進(jìn)來，阻斷β反應(yīng)面，以獲取100%的高α選擇性。選用對(duì)硝基苯甲?；?團(tuán)（_0ρΝ02Βζ)保護(hù)給體F的6號(hào)位置，并添加對(duì)硝基苯甲?；谏a(chǎn)后期的托保護(hù)過程中， 由于使用的乙?；鶊F(tuán)是酯類保護(hù)基團(tuán)（與【背景技術(shù)】中的第一種方法相同），在堿性條件下一 步全部脫保護(hù)，工序簡單。
[0075]將把給體F激活成Ν-苯基三氟乙酰亞胺酸酯的形式，然后使用傳統(tǒng)的三氟甲磺酸 三甲基硅酯(微量即可）弱酸性催化條件即可實(shí)現(xiàn)1〇〇%α選擇性高產(chǎn)率的糖苷化反應(yīng)，從而 大大改良生產(chǎn)流程，提高產(chǎn)率，降低成本。
[0076]研究發(fā)現(xiàn)，在進(jìn)行糖苷化反應(yīng)時(shí)，如果在6號(hào)位設(shè)置有大位阻基團(tuán)或?；?，都可以 參與阻斷β反應(yīng)面提高α選擇性。本發(fā)明實(shí)施例在6號(hào)位用對(duì)硝基苯甲?；Ｗo(hù)，對(duì)硝基苯甲 ?；词酋；质谴笪蛔杌鶊F(tuán)，對(duì)硝基苯甲?；槍?duì)很多類型的分子(葡萄糖，麥芽三糖， 半乳糖等的含有不同保護(hù)基團(tuán)的糖分子)上都可以取得100%的α選擇性，以及80%以上的 產(chǎn)率，因此本發(fā)明實(shí)施例也可取得100%的α選擇性，以及80%以上的產(chǎn)率。
[0077]以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的特征和性能作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
[0078] 實(shí)施例1
[0079] 本實(shí)施例提供一種Τη抗原，按以下過程制備：
[0080] 將lOmmol，即0 · Olmol氨基葡萄f
.彳與llmmol的1H-咪唑-1-磺酰疊氮鹽 酸鹽反應(yīng)，生成第一保護(hù)產(chǎn)物；
[0081 ] 將lOmmol第一保護(hù)產(chǎn)物與12mmol稀丙基醇在lOmmol三氟化硼乙醚的作用下反應(yīng)， 生成第二保護(hù)產(chǎn)物；
[0082] 將lOmmol第二保護(hù)產(chǎn)物與30mmol對(duì)硝基苯甲酰氯在30mmol三乙胺的作用下反應(yīng)， 生成第三保護(hù)產(chǎn)物；
[0083]將純化后的lOmmol第三保護(hù)產(chǎn)物在四氫呋喃溶劑中在0. lmmol零價(jià)金屬銥的催化 作用下反應(yīng)，生成第四保護(hù)產(chǎn)物；
[0084 ]將1 Ommo 1第四保護(hù)產(chǎn)物在四氫咲喃和水的混合溶劑中，在2 Ommo 1碘的作用下水 解，生成第五保護(hù)產(chǎn)物；
[0085] 將lOmmol第五保護(hù)產(chǎn)物與15mmol的2,2,2_三氟-N-苯基亞氨代乙酰氯在40mmol碳 酸鉀的作用下反應(yīng)，生成給體。
[0086] 將lOmmol給體與15mmol受彳 在0 · 5mmol三氟甲磺酸三甲基娃酯的催 ) 化作用下，在甲苯溶劑中發(fā)生糖苷化反應(yīng)，生成糖苷，糖苷的產(chǎn)率為90%，高于80%，而且沒 有β產(chǎn)物生成，具有100 %的α選擇性。
[0087] 將純化的lOmmol糖苷與20mmol的1，3-丙二硫醇反應(yīng)，生成第一生成產(chǎn)物；
[0088] 將lOmmol第一生成產(chǎn)物與15mmol乙酸酐在吡啶溶劑中反應(yīng)，生成第二生成產(chǎn)物； [0089]將lOmmol第二生成產(chǎn)物在氫氧化鈉的水溶液和甲醇的混合溶劑中反應(yīng)，生成2.6g 產(chǎn)物。
[0090] 本實(shí)施例合成的產(chǎn)物的核磁共振檢測結(jié)果如下：
[0091] 1HNMR(400MHz,D20) ,54.83(daH,J = 3.6Hz,H-l) ,4,33(dd,lH,J = 6.7,2.1Hz), 3.96(dd，lH，J = 2.3，11.0，H-2)，3.86-3.85(m，lH，H-5)，3.83(d，lH，J=1.8Hz)，3.81(dd， lH，J = 3.2,0.8Hz，H-4)，3.73(dd，lH，J = 3.2，11.0Hz，H-3)，3.63(dd，lH，J=11.9,7.0Hz， H-6b)，3,58(dd，lH，J = 11.9,4.8Hz，H-6a)，1.90(s，3H，NAc)，1.25(d，3H，J = 6.5Hz)。
[0092] 13C匪R(100MHz，D2〇)，δ175· 1，172·5,99·6,74·5,71·4,68·2,67·1，61·7,58·8， 49.8,22.3,18.2〇
[0093] 本實(shí)施例合成的產(chǎn)物的質(zhì)譜檢測結(jié)果如下：
[0094] ESI-MS[M+Na]+m/z: Ci2H22N2Na〇8，分子量計(jì)算值：345 · 3;實(shí)測值：345 · 2。
[0095] 因此，本實(shí)施例合成的產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)式為即為Τη抗原，實(shí)現(xiàn)
w'、 ， 100%的α選擇性；由于糖苷的產(chǎn)率高，因此Τη抗原的產(chǎn)率高。
[0096] 實(shí)施例2
[0097] 本實(shí)施例提供一種Τη抗原，按以下過程制備：
[0098] 將lOmmol氨基葡萄
與13mmol的1H-咪唑-1-磺酰疊氮鹽酸鹽反應(yīng)，生 成第一保護(hù)產(chǎn)物；
[00"] 將lOmmol第一保護(hù)產(chǎn)物與15mmol稀丙基醇在lOmmol三氟化硼乙醚的作用下反應(yīng)， 生成第二保護(hù)產(chǎn)物；
[0?00] 將lOmmol第二保護(hù)產(chǎn)物與40mmol對(duì)硝基苯甲酰氯在40mmol三乙胺的作用下反應(yīng)， 生成第三保護(hù)產(chǎn)物；
[0101]將純化后的lOmmol第三保護(hù)產(chǎn)物在四氫呋喃溶劑中，在〇.〇8mmol零價(jià)金屬銥的催 化作用下反應(yīng)，生成第四保護(hù)產(chǎn)物；
[0102] 將lOmmol第四保護(hù)產(chǎn)物在四氫呋喃和水的混合溶液中，在30mmol碘的作用下水 解，生成第五保護(hù)產(chǎn)物；
[0103] 將lOmmol第五保護(hù)產(chǎn)物與20mmol的2,2,2_三氟-N-苯基亞氨代乙酰氯在40mmol碳 酸鉀的作用下反應(yīng)，生成給體。
[0104] 將lOmmol給體與12mmol受' 在0.8mmol三氟甲磺酸三甲基娃酯的催 ) 化作用下，在甲苯溶液中發(fā)生糖苷化反應(yīng)，生成糖苷，糖苷的產(chǎn)率為85%，高于80%，而且沒 有β產(chǎn)物生成，具有100 %的α選擇性。
[0105] 將純化的lOmmol糖苷與18mmol的1，3-丙二硫醇反應(yīng)，生成第一生成產(chǎn)物；
[0106] 將lOmmol第一生成產(chǎn)物與20mmol乙酸酐在吡啶溶劑中反應(yīng)，生成第二生成產(chǎn)物；
[0107] 將lOmmol第二生成產(chǎn)物在氫氧化鈉的水溶液和甲醇的混合溶劑中反應(yīng)，生成2.8g 產(chǎn)物，生成的產(chǎn)物經(jīng)核磁共振檢測和質(zhì)譜檢測，結(jié)果如下：
[0108] 本實(shí)施例合成的產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)式為 即為Τη抗原，實(shí)現(xiàn)100%的α ，. 選擇性，由于糖苷的產(chǎn)率高，因此Τη抗原的產(chǎn)率高。
[0109] 實(shí)施例3
[0110] 本實(shí)施例提供一種Τη抗原，按以下過程制備：
[0111] 將O.lmol氨基葡萄糖
i〇.12mol的1H-咪唑-1-磺酰疊氮鹽酸鹽反應(yīng)， 生成第一保護(hù)產(chǎn)物；
[0112] 將O.lmol第一保護(hù)產(chǎn)物與O.llmol烯丙基醇在O.lmol三氟化硼乙醚的作用下反 應(yīng)，生成第二保護(hù)產(chǎn)物；
[0113] 將O.lmol第二保護(hù)產(chǎn)物與0.35mol對(duì)硝基苯甲酰氯在0.35mol三乙胺的作用下反 應(yīng)，生成第三保護(hù)產(chǎn)物；
[0114] 將純化后的O.lmol第三保護(hù)產(chǎn)物在四氫呋喃溶劑中，在O.OOlmol零價(jià)金屬銥的催 化作用下反應(yīng)，生成第四保護(hù)產(chǎn)物；
[0115]將0. lmo 1第四保護(hù)產(chǎn)物在四氫呋喃和水的混合溶液中，在0.15mo 1碘（I2)的作用 下水解，生成第五保護(hù)產(chǎn)物；
[0116] 將0 · lmol第五保護(hù)產(chǎn)物與0 · 2mol的2，2，2-三氟-N-苯基亞氨代乙酰氯在0 ·4mol碳 酸鉀的作用下反應(yīng)，生成給體。
[0117] 將O.lmol給體與0.12mol受彳；
在O.Olmol三氟甲磺酸三甲基硅酯的 催化作用下發(fā)生糖苷化反應(yīng)，生成糖苷，糖苷的產(chǎn)率為產(chǎn)率83 %，高于80 %，而且沒有β產(chǎn)物 生成，具有1〇〇 %的α選擇性。
[0118] 將純化的0. lmol糖苷與0.2mol的1，3-丙二硫醇反應(yīng)，生成第一生成產(chǎn)物；
[0119] 將O.lmol第一生成產(chǎn)物與0.2mol乙酸酐在吡啶溶劑中反應(yīng)，生成第二生成產(chǎn)物；
[0120] 將O.lmol第二生成產(chǎn)物在氫氧化鈉的水溶液和甲醇的混合溶劑中反應(yīng)，生成25g 產(chǎn)物，生產(chǎn)的產(chǎn)物經(jīng)核磁共振檢測和質(zhì)譜檢測，結(jié)果如下：
[0121] 本實(shí)施例合成的產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)式為
即為Τη抗原，實(shí)現(xiàn)100 %的α 選擇性，由于糖苷的產(chǎn)率高，因此Τη抗原的產(chǎn)率高。
[0122] 綜上所述，本發(fā)明實(shí)施例的Τη抗原純度高，可用于制作癌癥疫苗;本發(fā)明實(shí)施例的 Τη抗原的合成工藝，工序簡單，能夠?qū)崿F(xiàn)100 %的α選擇性，且Τη抗原的產(chǎn)率高。
[0123] 以上所描述的實(shí)施例是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。本發(fā)明的實(shí) 施例的詳細(xì)描述并非旨在限制要求保護(hù)的本發(fā)明的范圍，而是僅僅表示本發(fā)明的選定實(shí)施 例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的 所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種Tn抗原，其特征在于，其結(jié)構(gòu)式如下所示：2. -種如權(quán)利要求1所述的Tn抗原的合成工藝，其特征在于，其包括以下步驟： 糖苷化反應(yīng):將給體與受體在三氟甲磺酸三甲基硅酯的催化作用下發(fā)生糖苷化反應(yīng)，生成糖苷，所述給體的結(jié)構(gòu)式為 所述受體的結(jié)構(gòu)式為 聽述糖 ， 苷的結(jié)構(gòu)式^中，Rl選自?；⑵S基、糖單元，R2選自?；?、芐基、糖單元；以及 基團(tuán)處理:將所述糖苷的1號(hào)位的基團(tuán)轉(zhuǎn)化為 2號(hào)位的基團(tuán)轉(zhuǎn)化為乙酰氨 基，3、4、6號(hào)位的基團(tuán)轉(zhuǎn)化為羥基，生成所述Tn抗原。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的Tn抗原的合成工藝，其特征在于，所述給體的制備方法包括以 下步驟： 以結(jié)構(gòu)式為；的氨基葡萄糖為原料，將所述氨基葡萄糖的1號(hào)位用苯基三氟 乙酰亞胺基取代保護(hù)，2號(hào)位用疊氮基團(tuán)取代保護(hù)，6號(hào)位用對(duì)硝基苯甲酰基取代保護(hù)，生成 所述給體，所述給體的結(jié)構(gòu)式戈卩中1?1 =R2 =對(duì)硝基苯甲?；?。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的Tn抗原的合成工藝，其特征在于，所述給體的制備方法包括以 下步驟： 以結(jié)構(gòu)?!的氨基葡萄糖為原料，將所述氨基葡萄糖的1號(hào)位用連接烯丙 基的羥基取代保護(hù)，2號(hào)位用疊氮基團(tuán)取代保護(hù)，6號(hào)位用對(duì)硝基苯甲?；〈Ｗo(hù)，生成中 間體；以及 將所述中間體的1號(hào)位的所述連接烯丙基的羥基轉(zhuǎn)化成苯基三氟乙酰亞胺基，生成所 述給體，所述給體的結(jié)構(gòu)式.其中Rl =R2 =對(duì)硝基苯甲?；?。5. 根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的T η抗原的合成工藝，其特征在于，所述給體的制備方法還 包括將所述氨基葡萄糖的3、4號(hào)位用對(duì)硝基苯甲?；〈Ｗo(hù)的步驟。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的Tn抗原的合成工藝，其特征在于，所述給體的制備方法具體包 括以下步驟： 將所述氨基葡萄糖與IH-咪唑-1-磺酰疊氮鹽酸鹽反應(yīng)，使所述氨基葡萄糖2號(hào)位的氨 基轉(zhuǎn)化成疊氮基團(tuán)，生成第一保護(hù)產(chǎn)物； 將所述第一保護(hù)產(chǎn)物與烯丙基醇在三氟化硼乙醚的作用下反應(yīng)，使所述第一保護(hù)產(chǎn)物 1號(hào)位的羥基連接上烯丙基，生成第二保護(hù)產(chǎn)物； 將所述第二保護(hù)產(chǎn)物與對(duì)硝基苯甲酰氯在三乙胺的作用下反應(yīng)，使所述第二保護(hù)產(chǎn)物 3、4、6號(hào)位的羥基轉(zhuǎn)化成對(duì)硝基苯甲酰基，生成第三保護(hù)產(chǎn)物； 將所述第三保護(hù)產(chǎn)物在零價(jià)金屬銥的催化作用下反應(yīng)，使所述第三保護(hù)產(chǎn)物1號(hào)位的 所述連接烯丙基的羥基異構(gòu)化成丙烯基，生成第四保護(hù)產(chǎn)物； 將所述第四保護(hù)產(chǎn)物在碘的作用下水解，使所述第四保護(hù)產(chǎn)物1號(hào)位的所述丙烯基水 解成羥基，生成第五保護(hù)產(chǎn)物； 將所述第五保護(hù)產(chǎn)物與2，2，2-三氟-N-苯基亞氨代乙酰氯在碳酸鉀的作用下反應(yīng)，使 所述第五保護(hù)產(chǎn)物1號(hào)位的所述羥基激活成苯基三氟乙酰亞胺基，生成所述給體，所述給體 的結(jié)構(gòu)式j(luò)7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的Tn抗原的合成工藝，其特征在于，在所述第三保護(hù)產(chǎn)物進(jìn)行催 化反應(yīng)之前，將所述第三保護(hù)產(chǎn)物進(jìn)行純化處理。8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的Tn抗原的合成工藝，其特征在于，將所述給體與所述受體在三 氟甲磺酸三甲基硅酯的催化作用下發(fā)生糖苷化反應(yīng)，生成糖苷，所述糖苷的結(jié)構(gòu)式為：9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的Tn抗原的合成工藝，其特征在于，所述基團(tuán)處理包括以下步 驟： 將所述糖苷與1，3-丙二硫醇反應(yīng)，所述糖苷2號(hào)位的疊氮基團(tuán)被還原成氨基，生成第一 生成產(chǎn)物； 將所述第一生成產(chǎn)物與乙酸酐在吡啶溶劑中反應(yīng)，使所述第一生成產(chǎn)物2號(hào)位的氨基 轉(zhuǎn)化成乙酰氨基，生成第二生成產(chǎn)物； 將所述第二生成產(chǎn)物與氫氧化鈉反應(yīng)，所述第二生成產(chǎn)物3、4、6號(hào)位的對(duì)硝基苯甲酰 基轉(zhuǎn)化成羥基，1號(hào)位的氨基酸上的芴?；D(zhuǎn)化成氨基，氨基酸上的芐基酯轉(zhuǎn)化成羧酸，生 成所述Tn抗原。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的Tn抗原的合成工藝，其特征在于，在所述糖苷在與所述1，3-丙二硫醇反應(yīng)之前，將所述糖苷進(jìn)行純化處理。
【文檔編號(hào)】C07H15/04GK106008617SQ201610406628
【公開日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年6月12日
【發(fā)明人】唐露
【申請(qǐng)人】唐露