一種聚蘋(píng)果酸的提取方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種聚蘋(píng)果酸的提取方法，將發(fā)酵培養(yǎng)聚蘋(píng)果酸和膜分離技術(shù)結(jié)合一起，在發(fā)酵進(jìn)入穩(wěn)定期后，取樣進(jìn)行膜過(guò)濾，透過(guò)的物質(zhì)進(jìn)行分級(jí)提取，同時(shí)截留的大分子量的物質(zhì)以及菌體回流，繼續(xù)合成聚蘋(píng)果酸，摒棄了傳統(tǒng)的獨(dú)立發(fā)酵和提取過(guò)程，提高了工作效率，降低了提取工藝的成本，并且可以根據(jù)選擇不同截留分子量的超濾膜一次性提取不同分子量的聚蘋(píng)果酸，是一種高效制備不同分子量聚蘋(píng)果酸的有效方法。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
-種聚蘋(píng)果酸的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及高分子聚合物制備領(lǐng)域，尤其設(shè)及一種聚蘋(píng)果酸的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 出芽短梗霉又名出芽巧霉，分類(lèi)屬于半知菌綱，是一種具有酵母型和菌絲型形態(tài) 的多形真菌。出芽短梗霉在發(fā)酵過(guò)程中能夠合成聚蘋(píng)果酸、抗菌素、酶、胞外多聚糖及單細(xì) 胞蛋白等多種產(chǎn)物。有報(bào)道指出LIUSJ等利用出芽短梗霉發(fā)酵得到了聚蘋(píng)果酸，并發(fā)現(xiàn)聚蘋(píng) 果酸的產(chǎn)生是在對(duì)數(shù)期。
[0003] 聚蘋(píng)果酸是W蘋(píng)果酸為唯一單體合成的高分子聚合物，獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)使其具有 生物相容性、生物可降解性和生物可吸收性等優(yōu)良性質(zhì)。其次，它作為一種水溶性脂肪族聚 醋，具有高度水溶性、可化學(xué)衍生性。聚蘋(píng)果酸的獨(dú)特的性質(zhì)，使其在醫(yī)藥、化妝品、環(huán)境治 理W及香精香料等許多方面有著廣闊的應(yīng)用前景。生物合成法合成聚蘋(píng)果酸主要是通過(guò)微 生物在發(fā)酵合成后，分泌到胞外，存在于發(fā)酵液中，再經(jīng)過(guò)后續(xù)的提取工藝即可得到聚蘋(píng)果 酸產(chǎn)品，和化學(xué)合成法相比，生物法具有成本低、反應(yīng)條件溫和、分子量相對(duì)較高等優(yōu)點(diǎn)，因 此生物法合成聚蘋(píng)果酸具有廣闊的發(fā)展前景。
[0004] 聚蘋(píng)果酸能夠應(yīng)用到藥物載體領(lǐng)域，其分子量是評(píng)價(jià)其作為藥物載體性能的重要 指標(biāo)，能夠用作藥物載體的聚合物分子量范圍是1.5~200W)a，在該范圍內(nèi)，適當(dāng)提高聚蘋(píng) 果酸分子量，可W提高其載藥量，而當(dāng)分子量過(guò)高時(shí)，則難W穿過(guò)細(xì)胞膜而失去作為藥物載 體的性能。
[0005] 目前，有關(guān)微生物發(fā)酵合成聚蘋(píng)果酸的方法有多種，其中包括誘變獲得高產(chǎn)菌株、 優(yōu)化發(fā)酵條件W及培養(yǎng)基提高產(chǎn)量、復(fù)合添加生長(zhǎng)因子提高產(chǎn)量等等，有關(guān)聚蘋(píng)果酸提取 方面的專(zhuān)利也有一些，包括有機(jī)溶劑提取法、全水化提取等等，實(shí)驗(yàn)室曾經(jīng)采用改變發(fā)酵條 件或添加某一種生長(zhǎng)因子的方法生產(chǎn)不同分子量的聚蘋(píng)果酸，該方法只能針對(duì)合成某一特 定分子量的聚蘋(píng)果酸。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 有鑒于此，本發(fā)明旨在提出一種聚蘋(píng)果酸的提取方法，W解決現(xiàn)有技術(shù)中聚蘋(píng)果 酸分子量大，并且一次提取聚蘋(píng)果酸分子量單一的問(wèn)題。
[0007] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是運(yùn)樣實(shí)現(xiàn)的:一種聚蘋(píng)果酸的提取方法，包 括種子培養(yǎng)、發(fā)酵培養(yǎng)、分離提取及聚蘋(píng)果酸純度的測(cè)定，其中分離提取的方法如下：
[000引（1)當(dāng)種子液發(fā)酵培養(yǎng)48-6化時(shí)，開(kāi)始將發(fā)酵液進(jìn)行分離，在發(fā)酵罐出料口處安有 超濾膜，每隔8-12h從發(fā)酵罐出料口處膜過(guò)濾取出300~500ml的發(fā)酵液透過(guò)液，將菌體W及 大分子物質(zhì)截留在發(fā)酵罐中繼續(xù)反應(yīng)，同時(shí)往發(fā)酵罐中加入與透過(guò)液相同體積的發(fā)酵培養(yǎng) 基，獲得的發(fā)酵液依次經(jīng)過(guò)截留分子量為20KDa、10KDa、5邸a的超濾膜進(jìn)行超濾；
[0009] (2)將步驟（1)中依次經(jīng)過(guò)=種超濾膜超濾獲得的=種濾液，分別進(jìn)行活性炭脫 色，然后分別經(jīng)過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后進(jìn)行真空冷凍干燥，獲得=種分子量的聚蘋(píng)果酸。
[0010] 優(yōu)選，種子培養(yǎng)的方法為:將出芽短梗霉斜面活化4-化，然后用無(wú)菌水洗下抱子， 制備抱子懸液，將抱子懸液轉(zhuǎn)接到裝有種子培養(yǎng)基的容器中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25-35°C，轉(zhuǎn) 速 160-200r/min，培養(yǎng) 30-6化。
[0011] 優(yōu)選，發(fā)酵培養(yǎng)的方法為:在無(wú)菌條件下，將種子液接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐 中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為轉(zhuǎn)速500-700r/min，罐壓為0.1 -0.3Mpa，通風(fēng)比1:6-1:4。
[0012] 優(yōu)選，聚蘋(píng)果酸純度的測(cè)定采用高效液相色譜法，首先稱取質(zhì)量為ml的聚蘋(píng)果酸， 配制成濃度為2g/L的溶液，然后用移液管取5血聚蘋(píng)果酸溶液加入等體積的Imol/L出S化溶 液，于ll〇°C條件下水解lOh，將聚蘋(píng)果酸完全水解為單體蘋(píng)果酸;然后用高效液相色譜法測(cè) 定水解前后蘋(píng)果酸的含量，結(jié)合蘋(píng)果酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線得出聚蘋(píng)果酸中蘋(píng)果酸的含量，水解前 蘋(píng)果酸含量和水解后蘋(píng)果酸的含量之差為聚蘋(píng)果酸的含量m2,聚蘋(píng)果酸的純度為：
[0013] 優(yōu)選，種子培養(yǎng)基的組成為：薦糖80-120g/L，酵母膏2-4g/L，硫酸錠l-3g/L，下二 酸3-5邑/1，皿2口04 0.2-0.8邑/1，]\%504.7出0 0.05-0.15邑/1，2記04.7此0 0.03-0.06邑/1，其 余為蒸饋水。
[0014] 優(yōu)選，發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為：薦糖100-300g/L，蛋白腺20-40g/L，K&P04 0.05- 0.13g/L，NaN〇3 3-5g/L，MgS〇4. 7出0 0.3-0.9g/L，KCl 0.2-0.8g/L，MnS〇4 0.01-0.08g/L， 其余為蒸饋水。
[0015] 優(yōu)選，種子培養(yǎng)基的組成為：薦糖lOOg/L，酵母膏3g/L，硫酸錠2g/L，下二酸4g/L， 1(出口04 0.5邑/1，1邑504?7出0 0.1邑/1，211504?7出0 0.05邑/1，其余為蒸饋水。
[0016] 優(yōu)選，發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為：薦糖200g/L，蛋白腺30g/L，K此P〇4〇. Ig/L，化N03 4g/ ^1邑504*7出0 0.6邑/1，腺10.5邑/1，1記04 0.05邑/1，其余為蒸饋水。
[0017] 相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明所述的一種聚蘋(píng)果酸提取方法，具有W下優(yōu)勢(shì)：
[0018] (1)本發(fā)明所述的一種聚蘋(píng)果酸的提取方法，將發(fā)酵培養(yǎng)聚蘋(píng)果酸和膜分離技術(shù) 巧妙的結(jié)合一起，在發(fā)酵進(jìn)入穩(wěn)定期后，取樣進(jìn)行膜過(guò)濾，透過(guò)的物質(zhì)分級(jí)提取，同時(shí)截留 的大分子量的物質(zhì)W及菌體回流，繼續(xù)合成聚蘋(píng)果酸，擬棄了傳統(tǒng)的獨(dú)立發(fā)酵和提取過(guò)程， 提高了工作效率，降低了提取工藝的成本。
[0019] (2)本發(fā)明所述的一種聚蘋(píng)果酸的提取方法，可W根據(jù)選擇不同截留分子量的超 濾膜一次性提取不同分子量的聚蘋(píng)果酸，是一種高效制備不同分子量聚蘋(píng)果酸的有效方 法。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的內(nèi)容進(jìn)一步說(shuō)明。
[0021] 實(shí)施案例1:
[0022] (1)種子培養(yǎng)
[0023] 將出芽短梗霉斜面活化地，然后用無(wú)菌水洗下抱子，制備抱子懸液，將抱子懸液轉(zhuǎn) 接到含種子培養(yǎng)基的容器中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25 °C，轉(zhuǎn)速16化/min，培養(yǎng)30h，其中種子培養(yǎng)基 組成為：薦糖80g/L，酵母膏2g/L，硫酸錠Ig/L，下二酸3g/L，K此P〇4 0.2g/L，MgS〇4 ? 7出0 0.05g/L，aiS〇4 ? 7出0 0.03g/L，其余為蒸饋水；
[0024] (2)發(fā)酵培養(yǎng)
[0025] 在無(wú)菌條件下，將步驟（1)中得到的種子液接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中進(jìn)行 培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為轉(zhuǎn)速50化/min，罐壓0.1 Mpa，通風(fēng)比1:4，其中發(fā)酵培養(yǎng)基為:薦糖lOOg/L， 蛋白腺20g/L，KH2P〇4 0.05g/L，NaN〇3 3g/L，MgS〇4.7H2〇 0.3g/L，KCl 0.2g/L，MnS〇4 O.Olg/L，其余為蒸饋水；
[00%] (3)發(fā)酵液分離、過(guò)濾
[0027]當(dāng)步驟(2)中種子液發(fā)酵培養(yǎng)48h時(shí)，開(kāi)始將發(fā)酵液進(jìn)行分離，在發(fā)酵罐出料口處 安裝有超濾膜，每隔化從發(fā)酵罐出料口處膜過(guò)濾取出300ml發(fā)酵液透過(guò)液，截留菌體W及大 分子物質(zhì)返回到發(fā)酵罐中繼續(xù)反應(yīng)，同時(shí)往發(fā)酵罐中加入300ml發(fā)酵培養(yǎng)基，獲得的發(fā)酵液 依次用截留分子量為20KDa、10KDa、5邸a的超濾膜進(jìn)行超濾；
[00%] (4)聚蘋(píng)果酸的制備
[0029] 將步驟(3)中超濾獲得的=種分子量區(qū)間的濾液，分別進(jìn)行活性炭脫色，然后分別 經(jīng)過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后進(jìn)行真空冷凍干燥；
[0030] (5)聚蘋(píng)果酸純度的測(cè)定
[0031 ]對(duì)步驟(4)中獲得的=種分子量的聚蘋(píng)果酸采用高效液相色譜法進(jìn)行聚蘋(píng)果酸的 含量測(cè)定，測(cè)得聚蘋(píng)果酸的純度均達(dá)到80.44% W上。
[0032] 實(shí)施案例2:
[00削 （1)種子培養(yǎng)
[0034] 將出芽短梗霉斜面活化化，然后用無(wú)菌水洗下抱子，制備抱子懸液，將抱子懸液轉(zhuǎn) 接到含有種子培養(yǎng)基的容器中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度35 °C，轉(zhuǎn)速20化/min，培養(yǎng)60h，其中種子培養(yǎng) 基組成為:薦糖120g/L，酵母膏4g/L，硫酸錠3g/L，下二酸5g/L，K出P〇4 0.8g/L，MgS〇4 ? 7此0 0.15g/L，aiS〇4 ? 7出0 0.06g/L，其余為蒸饋水；
[0035] (2)發(fā)酵培養(yǎng)
[0036] 在無(wú)菌條件下，將步驟（1)中得到的種子液接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中進(jìn)行 培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為轉(zhuǎn)速70化/min，罐壓0.3Mpa，通風(fēng)比1:6，其中發(fā)酵培養(yǎng)基為:薦糖300g/L， 蛋白腺40g/L，KH2P〇4 0.13g/L，化N03 5g/L，MgS〇4.7H2〇 0.9g/L，KCl 0.8g/L，MnS〇4 0.08g/L，其余為蒸饋水；
[0037] (3)發(fā)酵液分離、過(guò)濾
[0038] 當(dāng)步驟(2)中種子液發(fā)酵培養(yǎng)54h時(shí)，開(kāi)始將發(fā)酵液進(jìn)行分離，在發(fā)酵罐出料口處 安裝有超濾膜，每隔IOh從發(fā)酵罐出料口處膜過(guò)濾取出400ml發(fā)酵液透過(guò)液，截留菌體W及 大分子物質(zhì)返回到發(fā)酵罐中繼續(xù)反應(yīng)，同時(shí)往發(fā)酵罐中加入400ml發(fā)酵培養(yǎng)基，獲得的發(fā)酵 液依次用截留分子量為20KDa、1 OKDa、5邸a的超濾膜進(jìn)行超濾；
[0039] (4)聚蘋(píng)果酸的制備
[0040] 將步驟(3)中超濾獲得的=種分子量區(qū)間的濾液，分別進(jìn)行活性炭脫色，然后經(jīng)過(guò) 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后進(jìn)行真空冷凍干燥；
[0041] (5)聚蘋(píng)果酸純度的測(cè)定
[0042] 對(duì)步驟(4)中獲得的=種分子量的聚蘋(píng)果酸采用高效液相色譜法進(jìn)行聚蘋(píng)果酸的 含量測(cè)定，測(cè)得聚蘋(píng)果酸的純度均達(dá)到84.03% W上。
[0043] 實(shí)施案例3:
[0044] (I)種子培養(yǎng)
[0045] 將出芽短梗霉斜面活化4.化，然后用無(wú)菌水洗下抱子，制備抱子懸液，將抱子懸液 轉(zhuǎn)接到含有種子培養(yǎng)基的容器中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度28°C，轉(zhuǎn)速18化/min,培養(yǎng)40h，其中種子培 養(yǎng)基組成為：薦糖lOOg/L，酵母膏3g/L，硫酸錠2g/L，下二酸4g/L，K此P〇4 0.5g/L，MgS〇4 ? 7出0 0.1邑/1，211504?7出0 0.05邑/1，其余為蒸饋水；
[0046] (2)發(fā)酵培養(yǎng)
[0047] 在無(wú)菌條件下，將步驟（1)中得到的種子液接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中進(jìn)行 培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為轉(zhuǎn)速60化/min，罐壓0.2Mpa，通風(fēng)比1:5，其中發(fā)酵培養(yǎng)基為:薦糖200g/L， 蛋白腺30g/L，KH2P〇4 0.1g/L，NaN〇3 4g/L，MgS〇4*7出0 0.6g/L，KCl 0.5g/L，MnS〇4 0.05g/ L，其余為蒸饋水；
[004引（3)發(fā)酵液分離、過(guò)濾
[0049] 當(dāng)步驟(2)中種子液發(fā)酵培養(yǎng)60h時(shí)，開(kāi)始將發(fā)酵液進(jìn)行分離，在發(fā)酵罐出料口處 安裝有超濾膜，每隔12h從發(fā)酵罐出料口處膜過(guò)濾取出500ml發(fā)酵液透過(guò)液，截留菌體W及 大分子物質(zhì)返回到發(fā)酵罐中繼續(xù)反應(yīng)，同時(shí)往發(fā)酵罐中加入500ml發(fā)酵培養(yǎng)基，獲得的發(fā)酵 液依次用截留分子量為20KDa、1 OKDa、5邸a的超濾膜進(jìn)行超濾；
[0050] (4)聚蘋(píng)果酸的制備
[0051] 將步驟(3)中超濾獲得的S種分子量區(qū)間的濾液，分別進(jìn)行活性炭脫色，然后經(jīng)過(guò) 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后進(jìn)行真空冷凍干燥；
[0052] (5)聚蘋(píng)果酸純度的測(cè)定
[0053] 對(duì)步驟(4)中獲得的=種分子量的聚蘋(píng)果酸采用高效液相色譜法進(jìn)行聚蘋(píng)果酸的 含量測(cè)定，測(cè)得聚蘋(píng)果酸的純度均達(dá)到83.95% W上。
[0化4] 實(shí)施案例4:
[00對(duì) （1)種子培養(yǎng)
[0056] 將出芽短梗霉斜面活化地，然后用無(wú)菌水洗下抱子，制備抱子懸液，將抱子懸液轉(zhuǎn) 接到含有種子培養(yǎng)基的容器中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度28°C，轉(zhuǎn)速18化/min,培養(yǎng)40h，其中種子培養(yǎng) 基組成為:薦糖lOOg/L，酵母膏3g/L，硫酸錠2g/L，下二酸4g/L，K出P〇4 0.5g/L，MgS〇4 ? 7此0 0.1g/L，ZnS〇4 ? 7出0 0.05g/L，其余為蒸饋水；
[0057] (2)發(fā)酵培養(yǎng)
[0058] 在無(wú)菌條件下，將步驟（1)中得到的種子液接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中進(jìn)行 培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為轉(zhuǎn)速60化/min，罐壓0.2Mpa，通風(fēng)比1:5，其中發(fā)酵培養(yǎng)基為:薦糖200g/L， 蛋白腺30g/L，KH2P〇4 0.1g/L，NaN〇3 4g/L，MgS〇4*7出0 0.6g/L，KCl 0.5g/L，MnS〇4 0.05g/ L，其余為蒸饋水；
[0059] (3)發(fā)酵液分離、過(guò)濾
[0060] 當(dāng)步驟(2)中種子液發(fā)酵培養(yǎng)60h時(shí)，開(kāi)始將發(fā)酵液進(jìn)行分離，在發(fā)酵罐出料口處 安裝有超濾膜，每隔IOh從發(fā)酵罐出料口處膜過(guò)濾取出400ml發(fā)酵液透過(guò)液，截留菌體W及 大分子物質(zhì)返回到發(fā)酵罐中繼續(xù)反應(yīng)，同時(shí)往發(fā)酵罐中加入400ml發(fā)酵培養(yǎng)基，獲得的發(fā)酵 液依次用截留分子量為20KDa、1 OKDa、5邸a的超濾膜進(jìn)行超濾；
[0061] (4)聚蘋(píng)果酸的制備
[0062] 將步驟(3)中超濾獲得的=種分子量區(qū)間的濾液，分別進(jìn)行活性炭脫色，然后經(jīng)過(guò) 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后進(jìn)行真空冷凍干燥；
[0063] (5)聚蘋(píng)果酸純度的測(cè)定
[0064] 對(duì)步驟(4)中獲得的=種分子量的聚蘋(píng)果酸采用高效液相色譜法進(jìn)行聚蘋(píng)果酸的 含量測(cè)定，測(cè)得聚蘋(píng)果酸的純度均達(dá)到85.12% W上。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種聚蘋(píng)果酸的提取方法，包括種子培養(yǎng)、發(fā)酵培養(yǎng)、分離提取及聚蘋(píng)果酸純度的測(cè) 定，其特征在于分離提取的方法如下： (1) 當(dāng)種子液發(fā)酵培養(yǎng)48_60h時(shí)，開(kāi)始將發(fā)酵液進(jìn)行分尚，在發(fā)酵罐出料口處安有超濾 膜，每隔8_12h從發(fā)酵罐出料口處膜過(guò)濾取出300~500ml的發(fā)酵液透過(guò)液，將菌體以及大分 子物質(zhì)截留在發(fā)酵罐中繼續(xù)反應(yīng)，同時(shí)往發(fā)酵罐中加入與透過(guò)液相同體積的發(fā)酵培養(yǎng)基， 獲得的發(fā)酵液依次經(jīng)過(guò)截留分子量為20KDa、10KDa、5KDa的超濾膜進(jìn)行超濾； (2) 將步驟（1)中依次經(jīng)過(guò)三種超濾膜超濾獲得的三種濾液，分別進(jìn)行活性炭脫色，然 后分別經(jīng)過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后進(jìn)行真空冷凍干燥，獲得三種分子量的聚蘋(píng)果酸。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種聚蘋(píng)果酸的提取方法，其特征在于所述種子培養(yǎng)的方法 為:將出芽短梗霉斜面活化4-5h，然后用無(wú)菌水洗下孢子，制備孢子懸液，將孢子懸液轉(zhuǎn)接 到裝有種子培養(yǎng)基的容器中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25-35°C，轉(zhuǎn)速160-200r/min，培養(yǎng)30-60h。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種聚蘋(píng)果酸的提取方法，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)的方法 為:在無(wú)菌條件下，將種子液接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為轉(zhuǎn)速 500-700r/min，罐壓為0 · 1-0 · 3Mpa，通風(fēng)比 1:6-1:4。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種聚蘋(píng)果酸的提取方法，其特征在于所述聚蘋(píng)果酸純度的 測(cè)定采用高效液相色譜法，首先稱取質(zhì)量為ml的聚蘋(píng)果酸，配制成濃度為2g/L的溶液，然后 用移液管取5mL聚蘋(píng)果酸溶液加入等體積的lmol/L H2S〇4溶液，于110°C條件下水解10h，將 聚蘋(píng)果酸完全水解為單體蘋(píng)果酸;然后用高效液相色譜法測(cè)定水解前后蘋(píng)果酸的含量，結(jié) 合蘋(píng)果酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線得出聚蘋(píng)果酸中蘋(píng)果酸的含量，水解前蘋(píng)果酸含量和水解后蘋(píng)果酸的 含量之差為聚蘋(píng)果酸的含量m2,聚蘋(píng)果酸的純度為：5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種聚蘋(píng)果酸的提取方法，其特征在于所述種子培養(yǎng)基的組 成為:蔗糖80-120g/L，酵母膏2-4g/L，硫酸銨 l-3g/L，丁二酸3-5g/L，KH2P〇4 0 · 2-0 · 8g/L， MgS〇4 · 7H20 0.05-0.15g/L，ZnS〇4 · 7Η200· 03-0.06g/L，其余為蒸餾水。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種聚蘋(píng)果酸的提取方法，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組 成為：蔗糖100-30(^/1，蛋白胨20-4(^/1，1〇12?040.05-0.138/1，恥腸3 3-58/1，]\%504.7!120 0.3-0.9g/L，KCl 0.2-〇.8g/L，MnS〇4 0.01_0.08g/L，其余為蒸餾水。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種聚蘋(píng)果酸的提取方法，其特征在于所述種子培養(yǎng)基的組 成為：蔗糖l〇〇g/L，酵母膏3g/L，硫酸銨2g/L，丁二酸4g/L，KH 2P〇4 0 · 5g/L，MgS〇4 · 7H20 0.1g/L，ZnS〇4 · 7H20 0.05g/L，其余為蒸餾水。8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種聚蘋(píng)果酸的提取方法，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組 成為：蔗糖 200g/L，蛋白胨 30g/L，KH2P〇4 0.1g/L，NaN034g/L，MgS〇4 · 7H20 0.6g/L，KCl 0.5g/L，MnS〇4 0.05g/L，其余為蒸餾水。
【文檔編號(hào)】C12R1/645GK105925626SQ201610409712
【公開(kāi)日】2016年9月7日
【申請(qǐng)日】2016年6月7日
【發(fā)明人】殷海松, 喬長(zhǎng)晟, 邊艷慧, 陳珊, 湯衛(wèi)華, 劉鵬, 張樂(lè), 牛紅軍, 劉鑫龍, 張軼斌, 馬倩影, 劉晨
【申請(qǐng)人】天津市輕工業(yè)化學(xué)研究所有限公司