煙曲霉Asp f 4的線性抗原表位最小基序肽Asp f 4^226-232及其擴展短肽的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體為煙曲霉Asp f 4的線性抗原表位最小基序肽及其擴展短肽。本發(fā)明的煙曲霉Asp f 4的線性抗原表位最小基序肽為Asp f 4226?232，最小基序肽的擴展短肽為Asp f 4224?232、Asp f 4225?233和Asp f 4226?234，其氨基酸序列如SEQ ID No.1~SEQ ID No.4所示。它們可作為抗原單獨或組合用于特異檢測煙曲霉感染患者血清。
【專利說明】
煙曲霉Asp f 4的線性抗原表位最小基序肽Asp f 4226—232及其擴展短肽
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及導(dǎo)致侵襲性曲霉病、變應(yīng)性支氣管炎和曲霉腫發(fā)生的煙曲霉主要抗原蛋白Asp f 4的線性B細胞表位(B cell epitope, BCE，或稱抗原表位或決定簇)及其最小基序肽，以及這些表位基序肽的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]煙曲霉(Aspergillus fumigatus)是一種廣泛存在于自然界中的條件致病菌，易感人群吸入其孢子，定植于肺部，從而產(chǎn)生三種曲霉病:導(dǎo)致咯血的曲霉腫、導(dǎo)致肺纖維化的變應(yīng)性支氣管炎和具有較高死亡率的侵襲性曲霉病(Warris A，et al.The b1logy ofpulmonary aspergillus infect1ns.J Infect, 69 Suppl 1:S36-41，2014)。
[0003]血清免疫學(xué)指標(biāo)對于曲霉病的診斷非常重要(Chabi ML, et al.Pulmonaryaspergillosis.Diagn Interv Imaging, 96(5):435-42,2015)oGM(Galactomannan，半乳甘露聚糖)和BG((l，3)-13-D-gluCanS，(l，3)-13-D -葡聚糖)是煙曲霉細胞壁的多糖成分，隨著孢子的萌發(fā)和菌絲體的生長而進入宿主的血循環(huán)，因此可分別用GM和BG單抗檢測血清中相應(yīng)的循環(huán)抗原，為目前臨床上診斷煙曲霉感染的常用方法，但在特異性和靈敏度方面存在一定的局限性(廖萬清.侵襲性真菌感染的實驗室診斷.檢驗醫(yī)學(xué)，25(7): 503-506，2010)。已有的研究表明利用煙曲霉免疫原性強的體外重組蛋白，可以檢測感染者血清中相應(yīng)的循環(huán)抗體，但單個重組蛋白同樣在特異性和靈敏度方面存在一定的局限性(SarfatiJ,et al.Recombinant antigens as diagnostic markers for aspergillosis.DiagnMicrobil infect Dis, 55(4): 279-91，2006)。一個蛋白抗原的長表位肽可能與其它抗原蛋白的抗體起交叉反應(yīng)，因此鑒定蛋白抗原表位的最小基序可以提高檢測的特異性;將多個蛋白抗原表位的最小基序組成嵌合肽可以提高檢測的靈敏度。
[0004]Asp f 4作為變應(yīng)原之一，為功能未知蛋白，其命名由世界衛(wèi)生組織和國際免疫學(xué)會聯(lián)合會變應(yīng)原命名分委員會(World Health Organizat1n and Internat1nal Un1nof Immunological Societies (WH0/IUIS) Allergen Nomenclature Sub-committee)批準(zhǔn)同意(http://www.allergen.0rg/search.php?TaxSource=Fungi Ascomycota)。人體感染煙曲霉后，免疫系統(tǒng)產(chǎn)生相應(yīng)的抗Asp f 4的IgG、IgE和IgA抗體(Kurup VP, et al.Specific antibodies to recombinant allergens of Aspergillus fumigatus incystic fibrosis patients with ΑΒΡΑ.Cl in Mol Allergy, 4:11,2006)。鑒定 Asp f 4 的抗原表位最小基序，將其和煙曲霉其它抗原表位肽的最小表位基序構(gòu)建檢測血清嵌合肽，有助于提高診斷煙曲霉感染的特異性和靈敏度。因此，我們用大腸桿菌表達Asp f 415-322 ,經(jīng)鎳柱純化后免疫新西蘭白兔，得到Asp f 4抗血清。用改良的生物合成肽策略表達相互重疊9個氨基酸殘基、覆蓋Asp f 415—322全長的18肽融合蛋白，繼而用Asp f 4抗血清進行免疫印跡，鑒定陽性18肽;對陽性18肽進一步構(gòu)建相互重疊8個氨基酸殘基的9肽融合蛋白，鑒定最小表位基序(Xu, et al.Minimal motif mapping of a known epitope on humanzona pellucida protein-4 using peptide b1synthesis strategy.J ReprodImmunol, 81: 9-16, 2009)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供煙曲霉Aspf 4蛋白的抗原表位最小基序妝，并提供含有所述最小基序肽的擴展短肽，同時提供含所述基序肽的短肽的應(yīng)用。
[0006]本發(fā)明提供的煙曲霉Aspf 4蛋白的線性抗原表位最小基序妝，其氣基酸序列為SEQ ID N0.1所示，記為Asp f 4226-232，一字簡寫的氨基酸序列為:kdqfggy。
[0007]本發(fā)明還提供煙曲霉Aspf 4蛋白的線性抗原表位最小基序肽Asp f 4226—232的擴展短肽(9肽)，其序列如SEQ.1D N0.2— SEQ.1D Νο.4所示，其中:
SEQ.1D N0.2:XiX2kdqfggy，記為Asp f 4224—2320
[0008]其中&是1^，乂2是P，為最小基序Aspf 232擴展殘基，在化學(xué)合成或融合表達9肽融合蛋白的場合，擴展的殘基部分可增刪或用其它殘基替代。
[0009]SEQ.1D N0.3 = XikdqfggyX2f 4225—233。其中X^P，X2是S，為最小基序Aspf 4226—232擴展殘基，在化學(xué)合成或融合表達9肽融合蛋白的場合，擴展的殘基部分可增刪或用其它殘基替代。
[0010]SEQ.1D N0.^kdqfggyX1X2,記為Asp f 4226—234。其中X^S，X2是C，為最小基序Aspf 4226—232擴展殘基，在化學(xué)合成或融合表達9肽融合蛋白的場合，擴展的殘基部分可增刪或用其它殘基替代。
[0011]本發(fā)明的內(nèi)容進一步具體描述如下:
1.根據(jù)煙曲霉Af293菌株的Aspf 4CNCBI access1n No:XP_749515)全長322aa的蛋白序列，經(jīng)Signal P軟件預(yù)測，信號肽為l_14aa。去除Asp f 4信號肽l_14aa編碼序列，依據(jù)大腸桿菌密碼子偏好性，全合成Asp f 415—322編碼基因，從EcoR I和Sal I酶切位點克隆于pET-22(b+)質(zhì)粒，構(gòu)建pET-22(b)_ Asp f 415—322重組質(zhì)粒;將C端帶有6XHis標(biāo)簽的重組質(zhì)粒pET-22(b)_ Asp f 415—322轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)，誘導(dǎo)表達得到重組蛋白Asp f 415一322;通過鎳柱親和層析后獲得純化Asp f 415—322;純化Asp f 415—322免疫新西蘭白兔，得到高特異性兔抗Asp f 4抗血清(圖1);
2.用pXXGST-Ι融合表達質(zhì)粒，構(gòu)建相互重疊9個氨基酸殘基、覆蓋Aspf 415—322全長的GST-18肽融合蛋白(Xu，et al.Minimal motif mapping of a known epitope on humanzona pellucida protein-4 using peptide b1synthesis strategy.J ReprodImmunol, 81: 9-16，2009)。繼而用兔Asp f 4抗血清進行免疫印跡，鑒定得到其中的一個陽性18肽:Asp f 4222_239delpkdqfg gysctwgef(圖2)。構(gòu)建相互重疊8個氨基酸殘基、覆蓋Asp f —239的GST-9肽融合蛋白，免疫印跡鑒定得到3個陽性9肽:Asp f 4224"232LPkdqfggy、Asp f 4225—233PkdqfggyS和Asp f 4226—234kdqfggySC，其共有序列Asp f 4226—232kdqfggy為Asp f 4抗原最小表位基序肽(圖3)。
[0012]本發(fā)明所述的表位最小基序肽Aspf 4226—232可用于制備作為臨床診斷由煙曲霉感染導(dǎo)致侵襲性曲霉病、變應(yīng)性支氣管炎和曲霉腫血清識別表位標(biāo)志物。
[0013]本發(fā)明所述的表位最小基序肽的擴展短肽Aspf 4224-232,Asp f 4225—233和Asp f4226—234單獨或組合用于制備作為臨床診斷由煙曲霉感染導(dǎo)致侵襲性曲霉病、變應(yīng)性支氣管炎和曲霉腫血清識別表位標(biāo)志物。
【附圖說明】
[0014]圖1兔抗Asp f 4抗血清ELISA結(jié)果。I號、2號、3號和4號為Asp f 4免疫兔血清，對照為免疫前兔血清。
[0015]圖2Asp f 4 18肽融合蛋白電泳和免疫印跡圖。上方藍色條帶為電泳圖譜，下方黑色條帶為免疫印跡圖譜。O號泳道為pXXGST-2表達的GST188，1至34號泳道為跨域Asp f415—322、相互重疊9個氨基酸殘基的18肽與GST188融合蛋白，由于Asp f 415—322全長308aa，故34號泳道為Asp f 4312—322。；其中24號泳道免疫印跡陽性條帶為Asp f 239。
[0016]圖3 Asp f 232最小表位肽基序免疫印跡圖。24-2表示Asp f 4223—231，24-3表示Asp f 4224—232，24-4表示Asp f 4225—233，24-5表示Asp f 4226—234，24-6表示Asp f 4227—235，箭頭表示免疫印跡反應(yīng)陽性條帶。最小表位肽基序為Asp f 4226—232kdqfggy。
【具體實施方式】
[0017]本發(fā)明可進一步通過下列實例描述。這些例子并不意味限制本發(fā)明所涉及的范圍，該范圍在之前的描述中已被充分陳述闡明。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，均按照常規(guī)條件以及[美]J.薩姆布魯克和D.W.拉塞爾編著黃培堂等翻譯的第三版“分子克隆:實驗室手冊”(科學(xué)出版社，2002)和[美]E.哈洛和D.萊恩編著沈關(guān)心等翻譯的“抗體技術(shù)實驗指南”(科學(xué)出版社，2002)中所述的步驟，或按照生產(chǎn)銷售商建議的條件進行。
[0018]材料和方法:
1.pET-22(b+)質(zhì)粒和E.coli BL21(DE3)菌株購自德國Novagen公司，熱誘導(dǎo)表達質(zhì)粒pXXGST-Ι和對照質(zhì)粒pXXGST-2由本專利發(fā)明人構(gòu)建(專利號:200710173305.2);
2.限制性內(nèi)切酶EcoRKBamH 1、Sal I購自美國New England B1labs公司，DL2000DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)購于北京康為世紀(jì)生物科技有限公司，T4 DNA連接酶和預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)購自美國Thermo-Fermentas公司，小鼠6 X His單克隆抗體和弗氏完全佐劑以及弗氏不完全佐劑購于美國Sigma公司，辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的羊抗鼠IgG和辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的羊抗兔IgG購自美國Santa Cruz B1technology公司；
3.Gel Extract1n凝膠回收試劑盒和Plasmid Mini質(zhì)粒小量抽提試劑盒購于美國Omega公司；
4.新西蘭白兔購自上海西普爾-必凱實驗動物有限公司；
5.Asp f 415—322編碼基因由上海旭冠生物科技發(fā)展有限公司合成。兩端分別為BamH I和Sal I粘性末端，中間為覆蓋Asp f 415—322全長且相互重疊9個氨基酸殘基的18肽編碼DNA序列加TAA終止密碼子的正負鏈DNA片段以及覆蓋免疫印跡反應(yīng)18肽且相互重疊8個氨基酸殘基的9肽編碼DNA序列加TAA終止密碼子的正負鏈DNA片段由上海杰李生物技術(shù)有限公司合成。DNA重組子測序由上海睿迪生物科技有限公司完成。
[0019]Asp f 4m—232最小表位肽基序鑒定的具體步驟如下:
1.煙曲霉Asp f 415—322的表達與純化
1.1表達載體pET-22(b)_ Asp f 415—322的構(gòu)建
根據(jù)煙曲霉Af293菌株的Asp f 4CNCBI access1n No:XP_749515)的蛋白序列，經(jīng)Signal P軟件預(yù)測，信號肽為l_14aa。去除Asp f 4信號肽l_14aa編碼序列，依據(jù)大腸桿菌密碼子偏好性，全合成Asp f 415—322編碼基因，從EcoR I和Sal I酶切位點克隆于pET_22(b+ )質(zhì)粒，構(gòu)建pET-22(b)_ Asp f 415—322重組質(zhì)粒，Asp f 415—322全長為308個氨基酸。
[0020]1.2 重組Asp f 415—322表達
將C端帶有6XHis標(biāo)簽的重組質(zhì)粒pET-22(b)_ Asp f 415—322取IyL(約lOOng/yL)轉(zhuǎn)化至丨JlOlIL大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細胞中，冰浴30min后42°C熱激90s，冰上冷卻5min，加入900pL LB液體培養(yǎng)基37°C復(fù)蘇40min?60min，最后10000r/min離心Imin棄去約800 yL培養(yǎng)基，其余混勻后涂氨芐青霉素抗性的LB平板。待菌液被培養(yǎng)基吸收后37°C倒置培養(yǎng)16?24h0
[0021 ]挑取單克隆菌落于含SOyg/mL氨芐青霉素的3mL LB液體培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)過夜。翌日，按照1: 50的比例將過夜菌轉(zhuǎn)接至新的3mL LB液體培養(yǎng)基中，氨芐青霉素的工作濃度不變，37°C培養(yǎng)約2.5?3K0D600為0.6?0.8)后，取出ImL菌液樣本作為誘導(dǎo)前對照，其余菌液加入終濃度為ImM的異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)重組蛋白表達，表達條件為37°C培養(yǎng)4h。取500 yL誘導(dǎo)后菌液樣本，10000r/min離心5min，收集菌體，用150yL I X PBS緩沖液溶菌，并加入50 pL 4XSDS-PAGE Loading Buffer混勾，沸水煮樣7?1min保存待用。
[0022 ] 配制2塊相同的12%的SDS-PAGE膠，按照同樣的順序(蛋白分子量marker—誘導(dǎo)前全菌蛋白—誘導(dǎo)后全菌蛋白)和同樣的上樣量(5 nL)在同一電泳系統(tǒng)內(nèi)進行SDS-PAGE凝膠電泳。電泳完成后，其中一塊膠用于考馬斯亮藍R250染色分析誘導(dǎo)表達條帶，另一塊用小鼠6 X把8單克隆抗體為一抗、!11^標(biāo)記的羊抗鼠]^6為二抗進行￥68七61'11-13101:驗證。實驗結(jié)果表明成功表達了重組蛋白Asp f 415—322。
[0023]1.3重組蛋白Asp f 415—322的純化
選取表達量高的單克隆菌株作為保種菌。取保種菌1yL接入50mL含50ug/mL氨芐青霉素的LB液體培養(yǎng)基中37 °C培養(yǎng)過夜。次日，按照1:50的比例將菌液轉(zhuǎn)入500mL含50μg/mL氨芐青霉素的LB液體培養(yǎng)基中，用ImM IPTG誘導(dǎo)4h，5000r/min 4°C離心5min，棄去培養(yǎng)基收集菌體。菌體稱重(事先稱好500mL塑料瓶的重量)后，加入菌體重量10陪的I Xstartbuffer(Ig菌體加1mL I X start buffer ； start buffer: 5OmM Na2HP04/NaH2P04，pH8.0，300mM NaCl，1mM咪唑，ImM β_巰基乙醇)，重懸菌體。用高壓細胞破碎機在合適的壓力下破菌，重復(fù)破菌3次后，4°C、15000rpm離心30分鐘，收集上清。5mL His Trap HP預(yù)裝柱事先用5倍柱體積的純水沖凈，并以5倍柱體積以上的Start Buffer平衡。上樣完畢后，以StartBuffer沖洗柱子，去除未吸附的蛋白。以含40 mM咪卩坐濃度的Start Buffer沖洗柱子，盡量去除雜蛋白，隨后設(shè)置 15mL 長度，12%-100% Elut1n Buffer (50mM Na2HPO4ZNaH2PO4,300mM NaCl，250mM咪唑，pH 8.0)洗脫，收集目的蛋白。與此同時將pET_22(b+)空質(zhì)粒作為陰性對照與實驗重組質(zhì)粒pET-22(b)_ Asp f 415—322做平行實驗，并收集兩個空質(zhì)粒的誘導(dǎo)前菌體及IPTG誘導(dǎo)4h后菌體，用于SDS-PAGE電泳。
[0024]分別收集全菌液、上清和純化產(chǎn)物20uL，加入工作濃度為I X SDS Loading BufferLoading混勻，煮沸5min，冷卻后取1yL上樣，用于變性SDS-PAGE電泳檢測。將蛋白條帶和預(yù)計分子量測吻合，純度達到80%以上的樣品合并，并進行超濾、濃縮處理，用Bradford法估測純化后蛋白濃度。用像素計算軟件估測詳細的純化蛋白的純度。
[0025]2.兔抗重組蛋白Asp f 4抗血清的制備取Img Asp f 415—322純化蛋白與等體積弗氏完全佐劑乳化后皮下注射新西蘭白兔，進行初次免疫;3周后取0.5mg Asp f 415—322純化蛋白與等體積弗氏不完全佐劑乳化后皮下注射新西蘭白兔，進行第一次加強免疫；2周后取0.5mg Asp f 415—322純化蛋白與等體積弗氏不完全佐劑乳化后皮下注射新西蘭白兔，進行第二次加強免疫;第二次加強免疫一周后，在實驗兔子的耳緣靜脈取血約3?5mL，離心得到抗血清，ELISA法檢測抗體效價后備用。
[0026]3.Asp f 4m—232最小表位肽基序鑒定
3.1Asp f 239陽性表位肽鑒定
依據(jù)Asp f 4基因序列公開信息，設(shè)計跨越Asp f 415—322全序列的系列相互重疊9個氨基酸殘基的18肽編碼DNA正負鏈片段(正鏈5，-端加5 ’ -gatcc, 3，-端加taag-3，；負鏈5，-端加5 ’-tcgactta，3 ’ -端加g_3 ’ )，外送DNA合成。將I或2個OD的互補正負鏈片段用ddifeO溶解成20 ymolAiL儲存液(根據(jù)DNA合成報告單數(shù)據(jù))，各取10 yL儲存液和20 (1(1!120于1.5 mLEppendorf管中，94°C水浴加熱5 min，自然降至室溫后，在15 yL反應(yīng)體積中吸入2 yL退火片段、I pL約200 ng/yL經(jīng)BamH I和Sal I雙酶切的pXXGST-Ι質(zhì)粒、I yL T4 DNA連接酶和其1.5 yL緩沖液，連接過夜;連接液轉(zhuǎn)化感受態(tài)BL21 (DE3)宿主菌，涂布含Amp的LB平板上，于37°C培養(yǎng)過夜;第二天挑取氨芐LB平板上長出的單克隆轉(zhuǎn)接3 mL LB培養(yǎng)液誘導(dǎo)表達，以由pXXGST-2表達的GST188蛋白為對照，各表達的GST188-18肽融合蛋白經(jīng)15% SDS-PAGE分析確認(與對照蛋白電泳迀移率相差約2 kDa)，挑取各重組克隆外送進行DNA測序。將插入片段測序結(jié)果正確的克隆接種加入Amp的3 mL LB培養(yǎng)液中，于30°C振蕩培養(yǎng)過夜，翌日晨按1/50比例轉(zhuǎn)接新鮮含Amp的LB培養(yǎng)液中，30°C振蕩培養(yǎng)2?3 h至菌體濃度達到0.6?0.8 OD后，調(diào)高溫度至42°C熱誘導(dǎo)4 h，離心收集菌體，加上樣裂解液煮沸5 min，進行15%SDS-PAGE。用兔抗Asp f 4抗血清為一抗，羊抗兔IgG /HRP為二抗，進行免疫印跡。Asp f4222-239為陽性表位肽之一。
[0027]3.2 Asp f 4m—232最小表位基序肽鑒定
以pXXGST-Ι為表達載體，構(gòu)建表達跨越Asp f 4222—239、相互重疊8個氨基酸殘基的系列9肽GST188融合蛋白，用兔抗Asp f 4抗血清為一抗，羊抗兔IgG /HRP為二抗，進行免疫印跡，Asp f 4224—232LPkdqfggy、Asp f 4225—233PkdqfggyS和Asp f 4226—234kdqfggySC為陽性表位肽，其共有序列Asp f 4226—232kdqfggy為Asp f 4抗原最小表位基序肽。
[0028]應(yīng)用例
應(yīng)用Asp f 4224—232、Asp f 4225—233和Asp f 4226—234檢測血清中Asp f 4抗體
1.用Aspf 415—322蛋白免疫新西蘭白兔后取血清，以免疫前血清為對照，4只實驗兔的Asp f 4抗體滴度均達到1.28X 15以上(圖1)，用于后續(xù)免疫印跡反應(yīng)；
2.以pXXGST-Ι為載體，表達Aspf 4223-231、Asp f 4224-232、Asp f 4225-233、Asp f 4226一234和Asp f 4227—235融合蛋白；
3.表達的Aspf 4223—231、Asp f 4224—232、Asp f 4225—233、Asp f 4226—234和Asp f 4227—235融合蛋白進行15% SDS-PAGE電泳；
4.將電泳凝膠蛋白條帶電轉(zhuǎn)移至PVDF膜，印跡膜用封閉液(TBSTM)封閉后，用封閉緩沖液(TBST)洗膜，然后以一定比例稀釋的實驗兔血清為一抗，4°C振蕩孵育過夜；
5.次日，用TBST洗膜后將印跡膜置于TBSTM中，加入一定比例稀釋的HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG為二抗，室溫震蕩孵育1.5h。用TBST洗膜3遍后將膜置于TBS緩沖液中，加入ECL化學(xué)發(fā)光劑，約Imin后進行曝光，判斷檢測結(jié)果。包含最小表位基序肽Asp f 4226—232kdqfggy的Asp f4224-232、Asp f 4225-233和Asp f 4226-234印跡反應(yīng)為陽性；而Asp f 4223—231kLPkdqfgg和Asp f
4227—235dqfggySCT由于分別缺少包含于最小表位基序肽Asp f 232中的第232位殘基Y和第226位殘基k，印跡反應(yīng)為陰性(圖3)。
[0029]盡管本發(fā)明描述了Asp f 4蛋白抗原表位最小基序Asp f 4226—232kdqfggy，以及可單獨和/或組合用含最小基序的9肽或9肽融合蛋白研制用作檢測人煙曲霉感染的抗原肽(或化學(xué)合成或融合表達)，但有一點對于相關(guān)領(lǐng)域研究技術(shù)人員來說是顯而易見的，即在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的情況下，可對本發(fā)明的表位肽基序和擴展的含最小基序9肽融合蛋白作各種變化改動。因此，所附權(quán)利要求覆蓋了所有這些在本發(fā)明范圍內(nèi)的變動。
【主權(quán)項】
1.一種煙曲霉Asp f 4蛋白的最小表位基序肽，其特征在于具有SEQ.1D N0.1所示氨基酸序列，記為Asp f 4m—232，其一字簡寫氨基酸序列為kdqfggy。2.一種含如權(quán)利要求1所述煙曲霉Asp f 4蛋白的最小表位基序肽的擴展短肽，其特征在于: 具有SEQ.1D N0.2所示氨基酸序列，記為Asp f 4224—232，擴展9肽一字簡寫氨基酸序列為LPkdqfggy;或者， 具有SEQ.1D N0.3所示氨基酸序列，記為Asp f 233，擴展9肽一字簡寫氨基酸序列為PkdqfggyS;或者， 具有SEQ.1D N0.4所示氨基酸序列，記為Asp f 234，擴展9肽一字簡寫氨基酸序列^kdqfggySC; 在化學(xué)合成或融合表達9肽融合蛋白的場合，擴展的殘基部分可增刪或用其它殘基替代。3.如權(quán)利要求1所述的表位最小基序肽在制備作為臨床診斷由煙曲霉感染導(dǎo)致侵襲性曲霉病、變應(yīng)性支氣管炎和曲霉腫血清識別表位標(biāo)志物中的應(yīng)用。4.如權(quán)利要求2所述的表位最小基序肽的擴展短肽單獨或組合在制備作為臨床診斷由煙曲霉感染導(dǎo)致侵襲性曲霉病、變應(yīng)性支氣管炎和曲霉腫血清識別表位標(biāo)志物中的應(yīng)用。
【文檔編號】G01N33/68GK105859847SQ201610366589
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年5月30日
【發(fā)明人】顧少華, 霍克克, 徐萬祥, 石晶, 高巖, 季朝能, 謝毅
【申請人】復(fù)旦大學(xué)