步驟更加簡(jiǎn)單易行，運(yùn)一點(diǎn)對(duì)于1中標(biāo)記的顯像探針 來(lái)說(shuō)，非常重要，因?yàn)?中的半衰期為109分鐘，如果操作時(shí)間太長(zhǎng)，很多同位素1中會(huì)衰變，沒(méi) 有起到顯像的作用，而且操作人員接受到的放射性福射也會(huì)增加。因此，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù) 相比有很大的提高；
[0031] 同時(shí)，現(xiàn)有技術(shù)用isf-fbem標(biāo)記水溶性的蛋白不合適，因?yàn)閕8F-F肥Μ是脂溶性的， 溶于乙醇而不溶于水，而Cys-Annexin V蛋白是水溶性的，溶液中乙醇的濃度不能超過(guò) 10%，否則蛋白會(huì)變性，導(dǎo)致無(wú)法標(biāo)記。而本發(fā)明所用的標(biāo)記前體i8F-A1 -NOTA-Maleimide是 水溶性的，與切s-Annexin V蛋白標(biāo)記就非常方便，由此可見(jiàn)，本發(fā)明的技術(shù)方案，在標(biāo)記時(shí) 間和標(biāo)記物性質(zhì)方面優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)；
[0032] (2)本發(fā)明所述的"F快速標(biāo)記切s-Annexin V的方法，通過(guò)（1)取正電子顯像核 素"F溶液，加入含有A1C13的緩沖溶液和含有NOTA-maleimide的溶液，，混合均勻，于80-100 °C下加熱5-20min，即得含有所述i8F-Al-NOTA-Maleimide的溶液，然后進(jìn)行純化，備用；（2) 取步驟（1)中得到的含有所述標(biāo)記前體i8F-Al-NOTA-Maleimide的溶液，加入到含Cys- Annexin V的溶液中，混合均勻得反應(yīng)液，將所述反應(yīng)液置于35-37°C下水浴反應(yīng)至生成具 有如i8F-A1-N0TA-切S-Annexin V所示結(jié)構(gòu)的所述標(biāo)記產(chǎn)物；通過(guò)步驟（1)中獲得標(biāo)記前 體1中-4^^)了4-]\&11611111(16，然后將純化后的標(biāo)記前體1中-41-^了4-]\&116山1(16溶液加入到 含切s-Annexin V的溶液中，在35-37°C下水浴條件下，切s-Annexin V的C端的游離琉基與 所述標(biāo)記前體1中-Al-NOTA-Maleimide上的雙鍵發(fā)生特異性連接，可較好的保證正電子顯像 核素的定位標(biāo)記，避免了標(biāo)記位置、標(biāo)記數(shù)量的不確定帶來(lái)的顯像特異性低的問(wèn)題，同時(shí)顯 著提高了標(biāo)記率，大大縮短了標(biāo)記時(shí)間，提高了標(biāo)記效率，解決了現(xiàn)有技術(shù)中的正電子顯像 核素1中定位標(biāo)記切S-Annexin V的標(biāo)記率低，標(biāo)記時(shí)間長(zhǎng)，效率低的問(wèn)題；
[0033] (3)本發(fā)明所述的放射性核素快速標(biāo)記〔73-4]1]16^;[]1￥的方法，通過(guò)在所述步驟 (1)中，將制備的所述isp-Al -NOTA-Ma 1 e imi de的溶液采用制備型HPLC法進(jìn)行純化，色譜條件 為:制備型反相C18柱，W含質(zhì)量濃度為0.05%-0.3%Ξ氣乙酸的質(zhì)量濃度為5-20%的乙臘 溶液為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，流速為1.5-5mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210-230nm，收集出峰時(shí)間為8- 13min下流出的組分，即為純化后的所述i8F-A^NOTA-Maleimide溶液;通過(guò)對(duì)步驟（1)中制 備得到的所述i8F-Al-NOTA-Maleimide溶液進(jìn)行純化，使得所述i8F-Al-NOTA-Maleimide溶 液雜質(zhì)含量降低，所述isp-Al-NOTA-Maleimide的純度大大提高，進(jìn)而促進(jìn)其與切s-Annexin V的連接，大大提高了標(biāo)記率和縮短了標(biāo)記時(shí)間，提高了標(biāo)記效率，解決了現(xiàn)有技術(shù)中的1中 定位標(biāo)記切s-Annexin V的標(biāo)記率低，標(biāo)記時(shí)間長(zhǎng)，效率低的問(wèn)題，同時(shí)還大大提高了標(biāo)記 產(chǎn)物isF-NOTA-切s-Annexin V的純度，獲得了顯著的技術(shù)效果；
[0034] (4)本發(fā)明所述的陽(yáng)T顯像劑，包括i8F-A^N0TA-切s-Annexin V，標(biāo)記后的i8F-A1- N0TA-切s-Annexin V與切s-Annexin V具有相近似的性能，作為顯像劑應(yīng)用于檢測(cè)時(shí)，可直 觀反映出細(xì)胞的調(diào)亡情況，且顯像結(jié)果與原位末端標(biāo)記法檢測(cè)細(xì)胞調(diào)亡的結(jié)果相一致，結(jié) 果準(zhǔn)確，并且，實(shí)現(xiàn)了定位標(biāo)記的1SF-A1-N0TA-切s-Annexin V，其顯像特異性優(yōu)異，可實(shí)現(xiàn) 良好的顯像效果。
【附圖說(shuō)明】
[0035] 為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明【具體實(shí)施方式】或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)具體 實(shí)施方式或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見(jiàn)地，下面描述中的 附圖是本發(fā)明的一些實(shí)施方式，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前 提下，還可W根據(jù)運(yùn)些附圖獲得其他的附圖。
[0036] 圖 1 為實(shí)施例 1 中Cys-Annexin V的HPLC色譜圖（tR=10.6min);
[0037] 圖2為實(shí)施例1中標(biāo)記蛋白"F-Al-NOTA-Cys-Annexin V的HPLC色譜圖（tR = 10.6min，標(biāo)記率大于90% );
[003引圖3為實(shí)施例1中純化后"F-A1-N0TA-切s-Annexin V的HPLC色譜圖（tR=10.6min， 放化純大于95% );
[0039] 圖 4 為實(shí)施例 1 中"F-Al-NOTA-Maleimide 的 HPLC 色譜圖（tR=15.6min);
[0040] 圖5為實(shí)施例1中原料1中-離子的HPLC色譜圖（tR= 15. Omin);
[0041 ] 圖6為實(shí)施例11中大鼠肝臟調(diào)亡模型注射isF-AI-NOTA-切s-Annexin Vlh后的顯像 圖，箭頭所指為肝臟區(qū)域。
【具體實(shí)施方式】
[0042] 下述實(shí)施例中，所用的原料正電子顯像核素 i8F、NOTA-Maleimide與切s-Annexin V 可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員常規(guī)方法制備或購(gòu)買(mǎi)得到。例如，所述切s-Annexin V可采用中國(guó)專(zhuān) 利文獻(xiàn)CN102690345A中記載的在大腸桿菌中克隆、表達(dá)并純化得到的Annexin V變體的方 法得到；本發(fā)明中的切s-Annexin V由江蘇祀標(biāo)生物醫(yī)藥研究所有限公司提供;所述N0TA- maleimide可購(gòu)自法國(guó)化ematech公司或美國(guó)Macrocyclic S公司；上述各型號(hào)產(chǎn)品并無(wú)明 顯區(qū)別，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)效果不產(chǎn)生影響。
[00創(chuàng)下述實(shí)施例中設(shè)及到的，所述"F-Al-NOTA-Maleimide，即氣(1中)化侶-((4-簇甲 基-7-[(2-馬來(lái)酷亞胺基-乙基氨甲基)-簇甲基]-[1，4,7]Ξ氮雜環(huán)壬燒-1-基)-乙酸，其結(jié) 構(gòu)式如下：
[0044]
[0045] 所述切s-Annexin V為Annexin V的變體蛋白，在天然的Annexin V的C-末端添加 1 個(gè)半脫氨酸，其結(jié)構(gòu)如下：
[0046]
[0047] 所述i8F-Al-N0TA-Maleimide與切s-Annexin V的標(biāo)記反應(yīng)過(guò)程如下所不：
[004引
[0049] 實(shí)施例1
[0050] 本實(shí)施例所述的1中快速標(biāo)記切S-Annexin V的方法，具體包括W下步驟：
[00引](1)"F-Al-N0TA-Maleimide的制備：取回旋加速器打出的含"F的祀水200yL(約 3700MBq)，加入2(Κ)化含AlCh的濃度為〇.5mol/L、抑=4的乙酸鋼-乙酸緩沖溶液和20化L含 5mg/mL的NOTA-maleimide的乙臘溶液，其中所述含AlCh的緩沖溶液中AlCh的濃度為lOmg/ mL，混合均勻后于90°C反應(yīng)10分鐘，即得i8F-Al-NOTA-Maleimide，將制備的isF-AI-NOTA- Maleimide溶液采用制備型HPLC法純化，色譜條件為：制備型反相C18柱(Phenomenex 00G- 4252-N0,5皿，1〇QA，250x 10mm)，W含質(zhì)量濃度為0.1%S氣乙酸的質(zhì)量濃度為10%的乙 臘溶液為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，流速為2mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，收集出峰時(shí)間為12.34min下 流出的組分，即為純化后的所述"F-Al-NOTA-Maleimide溶液，備用；
[0化2] (2)i8F-Al-N0TA-Cys-Annexin V的制備：取步驟（1)中得到的"F-Al-NOTA- Maleimide溶液，用生理鹽水稀釋成370MBq/mL，取100化稀釋的所述"F-Al-NOTA-Maleimide 溶液加入到20化L的含濃度為1 mg/mL的切S-AnneX iη V的憐酸鹽緩沖液中，混合均勻后，置 于37°C水浴中反應(yīng)30min，即得到標(biāo)記產(chǎn)物"F-A1-N0TA-切s-Annexin V。
[0053] 將上述方法得到的標(biāo)記產(chǎn)物1 8F-A 1 -NOTA-CyS-AnneXiη V采用高效液相色譜 化化C)法檢測(cè)，取所述標(biāo)記產(chǎn)物i8F-A1-N0TA-切s-Annexin V溶液上TSK G化凝膠柱（SW G2000SWXL)，W濃度為0.05M(即mol/L，下同）、pH值為7.0的憐酸鹽緩沖液為流動(dòng)相，流動(dòng)相 的流速為l.OmL/min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm，同時(shí)設(shè)置有同位素檢測(cè)儀，進(jìn)行檢測(cè)。再W相 同的檢測(cè)條件檢測(cè)未標(biāo)記的切s-Annexin ￥，1中-離子W及i8F-Al-N0TA-Maleimide溶液。如 圖 1、3、4、5所示，分別為Cys-Annexin V、i8F-Al-N0TA-Cys-Annexin V、i8f-A1-N0TA- MaleimideW及1中-離子色譜圖。通過(guò)圖1、圖3、圖4與圖5的對(duì)比可知，i8F-Al-N0TA-Cys- Annexin V的保留時(shí)間（tR)為10.6min，與沒(méi)有標(biāo)記的切s-Annexin V的保留時(shí)間相一致， 而i8F-A^N0TA-Maleimide和1中-離子的保留時(shí)間（tR)分別為15.7min和15min。通過(guò)分析圖 2,計(jì)算得到標(biāo)記率為90.1%。
[0化4] 將得到的標(biāo)記產(chǎn)物1中-A1-N0TA-切s-Annexin V經(jīng)PD-10柱純化后，得到的產(chǎn)品的 放化純大于95%，其HPLC色譜圖見(jiàn)圖3所示。
[0055] 上述結(jié)果表明，本發(fā)明的i8F-Al-N0TA-Maleimide標(biāo)記切s-Annexin V的方法，具有 較高的標(biāo)記率90.1%，標(biāo)記產(chǎn)物"F-A1-N0TA-切s-Annexin V與"F-Al-NOTA-Maleimide能 很好的分離，經(jīng)純化后i8F-A1-N0TA-切S-Annexin V的放化純大于95%。
[0056] 實(shí)施例2
[0057] 本實(shí)施例所述的1中快速標(biāo)記切s-Annexin V的方法，具體包括W下步驟：
[005引 （1)"F-Al-N0TA-Maleimide的制備：取回旋加速器打出的含"F的祀水200yL(約 3700MBq)，加入150化含lOmg/mL的A1C13的濃度為0.5mol/L、pH=4的乙酸鋼-乙酸緩沖溶液 和300此含5mg/mL的NOTA-maleimide的乙臘溶液，混合均勻后于90°C反應(yīng)10分鐘，即得"F- Al-NOTA-Maleimide，將制備的"F-Al-NOTA-Maleimide溶液采用制備型HPLC法純化，色譜條 件為：制備型反相C18柱（Phenomenex00G-4252-N0,5皿，100Λ，250χ 10mm)，W含質(zhì)量濃度 為0.01 % Ξ氣乙酸的質(zhì)量濃度為30 %的乙臘溶液為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，流速為0.5mL/min，檢 ii波長(zhǎng)為210nm，收集出峰時(shí)間為13.5min下流出的組分，即為純化后的所述"F-A1-N0TA- Maleimide溶液，備用；
[0化9] (2)i8F-Al-N0TA-Cys-Annexin V的制備：取步驟（1)中得到的"F-Al-NOTA- Maleimide溶液，用生理鹽水稀釋成370MBq/mL，取100化稀釋的所述"F-Al-NOTA-M