[0014] 實(shí)施例2牛募子油的化學(xué)成分分析 (1)牛募子油中揮發(fā)油成分的提取 利用水蒸氣蒸饋法提取牛募子油中揮發(fā)性組分，準(zhǔn)確稱取牛募子油35.0 g，W料液比 1:5加入5%氯化鋼溶液165 mL于圓底燒瓶中，加熱，從冷凝管下端管口處滴下第一滴液體時(shí) 開始計(jì)時(shí)，控制溫度，保持微沸狀態(tài)，蒸饋5 h。充分冷卻后，吸取上層油狀物，40 °C水浴吹 干，稱重，W備GC-MS分析。
[0015] (2)牛募子油中脂肪酸成分的甲醋化 由于脂肪酸成分沸點(diǎn)較高，現(xiàn)將其進(jìn)行甲醋衍生化，W降低其沸點(diǎn)，適應(yīng)GC-MS檢測要 求。步驟（1)牛募揮發(fā)油提取完成后，向燒瓶中加入25 mL正己燒，使用分液漏斗分離脂肪酸 成分，準(zhǔn)確吸取0.5 mL分離的脂肪酸成分于25 mL容量瓶中，加入2.5 mL乙酸/正己燒混合 溶劑（體積比2:1)、2.5 1111^甲醇溶液和2.5 1111^氨氧化鐘溶液（0.8 111〇1幾），搖勻后靜置5 min,使充分反應(yīng)。5 min后，加蒸饋水至容量瓶刻度，終止反應(yīng)。吸取上層脂肪酸甲醋產(chǎn)物， 45 °C水浴吹干，稱重，W備GC-MS分析。
[0016] (3)牛募子油成分分析 分別對(duì)牛募油揮發(fā)性成分W及甲醋化衍生后的脂肪酸類化合物進(jìn)行GC-MS分析。使用 儀器為：Agilent 7890A/5975C型色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀。氣相色譜條件：HP-Chiral 20f3(25mm XO.25mm)石英毛細(xì)管柱，初始柱溫設(shè)定為100 °C，3 min內(nèi)程序升溫至260 °C，壓力設(shè)定 為50 kPa，化作載氣，汽化室溫度280°C，流量1.0 ml/min，分流比為10:1。質(zhì)譜條件:加熱雙 曲面四級(jí)桿分析器，離子源采用EI，電子轟擊能量為70 eV，加速電壓3kV，分辨率500,靈敏 度S/N ^ 400，離子源溫度240 °C，進(jìn)樣量0.化1，質(zhì)譜庫采用NIST11。
[0017] GC-MS試驗(yàn)共鑒定出16種揮發(fā)油類成分，其分子式、相對(duì)豐度等信息見附錄表1。由 表1可知，牛募子揮發(fā)油成分主要包括醋、酸、醒和締等四類成分。其中，亞油酸甲醋和油酸 甲醋為主要揮發(fā)油，分別占36.02 %、21.10 %，其次是甲基環(huán)己燒，相對(duì)含量為17.57 %。另 外還含有少量醇、酬、倍半祗和直鏈燒控等。
[001 引
脂肪酸部分共鑒定出44種化合物，其中脂肪酸成分有19種，并用面積歸一法進(jìn)行了定 量測定，結(jié)果見附錄表2。從表2可知，牛募油中含有多種脂肪酸，其中亞油酸的含量最高，相 對(duì)豐度高達(dá)57.25 %，其次為油酸23.96 %，棟桐酸5.24 %，硬脂酸2.39 %，其他2.49 %。不飽 和脂肪酸占絕大部分，是總脂肪酸含量的86.45%。
[0019] 實(shí)施例3牛募巧、牛募巧元、牛募酪E和牛募酪哺勺制備方法 (1) 對(duì)實(shí)施例1得到的脫脂牛募子粉進(jìn)行回流提取3~4次，采用150~300目篩過濾每次提 取的提取液，合并濾液并進(jìn)行濃縮，得到提取浸膏;其中，提取液為質(zhì)量濃度為95%的水醇溶 液，每次提取時(shí)所述水醇溶液的使用質(zhì)量為所述脫脂牛募子粉的10倍，每次提取時(shí)間為2小 時(shí)； (2) 向1 kg步驟(1)得到的牛募子醇濃縮液提取浸膏中加入C出Cl2(2.0 L)萃取3次，收 集萃取液，減壓濃縮，得C出C12粗提物浸膏(450.0 g)。
[0020] (3)向C此Cb粗提物浸膏中加入拌樣硅膠拌樣，進(jìn)行硅膠柱色譜層析，利用二氯甲 燒-甲醇系統(tǒng)對(duì)牛募子C此Cb粗提物進(jìn)行硅膠柱層析(硅膠柱的徑高比為1:8)分離，用二氯 甲燒：甲醇（100:0，100:2，100:5，100:8，100:10，0:100)梯度洗脫，每個(gè)梯度洗脫5~8 個(gè)保留體積，每保留體積收集為一個(gè)饋分;其中，所述硅膠柱色譜層析中拌樣硅膠與待 分離樣品的質(zhì)量比為1:1，填料硅膠與拌樣硅膠的質(zhì)量比為5:1; 對(duì)收集得到的每一個(gè)饋分進(jìn)行薄層色譜分析，用體積比為100:5的二氯甲燒-甲醇展開 劑檢測牛募巧元、體積比為100:8的二氯甲燒-甲醇展開劑檢測牛募酪E、體積比為100:10的 二氯甲燒-甲醇展開劑檢測牛募巧、體積比為100:15的二氯甲燒-甲醇展開劑檢測牛募酪H， 合并薄層分析結(jié)果相似的饋分，結(jié)果顯示牛募巧元集中在二氯甲燒：甲醇=100:2梯度、牛募 酪E集中在二氯甲燒：甲醇=100:5梯度、牛募巧集中在二氯甲燒：甲醇=100:8梯度、牛募酪Η 集中在二氯甲燒：甲醇=100:10梯度，分別得到牛募巧元饋分、牛募酪Ε饋分、牛募巧饋分和 牛募酪Η饋分； (4)在100:2洗脫梯度獲得牛募巧元饋分，將牛募巧元饋分濃縮至40g放置lOh后，有白 色無定型粉末析出，得到牛募巧元純品，純度68.5%，收率63%(實(shí)際制備量和理論計(jì)算量之 比，下同）;再用甲醇重結(jié)晶牛募巧元純品3次，得白色粉末狀晶體，為牛募巧元高純品，收率 38.5%，純度 97.5%; 巧)在100:5洗脫梯度獲得牛募酪E粗品76.5 g，用甲醇溶解至形成真溶液，1倍硅膠拌 樣，采用中低壓正相硅膠制備色譜進(jìn)行分離，填料硅膠600 g。使用石油酸：乙酸乙醋（100: 8, 100:12, 0:100)梯度洗脫，每個(gè)梯度洗脫5~8個(gè)保留體積，對(duì)每個(gè)梯度的洗脫液用體積 比為100:8的二氯甲燒-甲醇溶液作為展開劑進(jìn)行薄層色譜分析，合并分析結(jié)果相似的饋分 并濃縮，得到牛募酪E純品，經(jīng)分析，牛募酪E主要集中在石油酸：乙酸乙醋=100:12梯度，純 度55.1%，收率60.3%，得牛募酪E純品；進(jìn)一步對(duì)上述牛募酪E純品進(jìn)行高效液相制備，W甲 醇:水(61: 39)為流動(dòng)相，流速3.0 ml/min，檢測波長280 nm，收集出峰的洗脫液，并對(duì)洗脫 液進(jìn)行甲醇重結(jié)晶，最后分得牛募酪E高純品，純度98.5%，收率45.5%; (6) 在100:8洗脫梯度獲得牛募巧饋分，放置4 h后，有白色針晶析出，靜置12-2地，得到 牛募巧純品，純度為82.5%，收率74.5%;進(jìn)一步對(duì)牛募巧純品進(jìn)行甲醇重結(jié)晶3次，得白色粉 末狀晶體，牛募巧高純品，純度98.3%，收率58.5%; (7) 在100:10洗脫梯度獲得牛募酪Η粗品5.3 g，用甲醇溶解至形成真溶液后，1倍硅膠 拌樣，采用中低壓正相硅膠制備色譜進(jìn)行分離，填料硅膠110.0 g，乙酸乙醋：甲醇（100:3， 100:5，0:100)梯度洗脫，每個(gè)梯度洗脫5~8個(gè)保留體積，對(duì)每個(gè)梯度的洗脫液用體積比為 100:15的二氯甲燒-甲醇溶液作為展開劑進(jìn)行薄層色譜分析，合并分析結(jié)果相似的饋分并 濃縮，得到牛募酪Η純品，牛募酪Η主要富集在乙酸乙醋：甲醇=100:5梯度，純度51.2%，收率 55.3%。進(jìn)一步對(duì)牛募酪Η純品再進(jìn)行高效液相色制備，W甲醇:水(40:60)為流動(dòng)相，流速為 3.0 ml/min，檢測波長280皿，并進(jìn)行甲醇重結(jié)晶，最后分離得牛募酪Η高純品，純度98.6%， 收率 43.5〇/〇。
[0021] 實(shí)施例4牛募巧、牛募巧元、牛募酪Ε和牛募酪哺勺結(jié)構(gòu)鑒定 用UV、IR、醒R、MS等波譜分析方法對(duì)實(shí)施例3中制備得到的木脂素類成分進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒 定。
[0022] (1)牛募巧的結(jié)構(gòu)鑒定 白色無定型粉末，C2訊34〇ii，ESI-MS m/z: 557 [ Μ +化]+。易溶于二氯甲燒、甲醇、乙 酸乙醋等有機(jī)溶劑，難溶于水。UV光譜顯示在210 nm和280 nm處有強(qiáng)吸收，表明此化合物含 有芳香環(huán)。IR圖譜中存在3350 cm-i(v〇H峰）、3000 cnfi(苯環(huán)v=CH峰）、1750 cm-i(醋幾基vC= 0峰）、1650-1450 cnfi(苯環(huán)骨架振動(dòng)vC=C峰)等特征峰，表明該化合物結(jié)構(gòu)中存在芳環(huán)和幾 基。分析1H-NMR(400MHz，CD30D)和Uc-NMR( lOOMHz，CD30D)數(shù)據(jù)，參比文獻(xiàn)報(bào)道，同時(shí)與標(biāo)品 共薄層比對(duì)，鑒定該化合物為牛募巧(arctiin)。
[0023] (2)牛募巧元的結(jié)構(gòu)鑒定 白色無定型粉末，C2冊406，ESI-MS m/z: 395 [ Μ +化]+。易溶于二氯甲燒、乙酸乙醋 等有機(jī)溶劑，難溶于水。UV光譜顯示在210 nm和280 nm處有強(qiáng)吸收，表明此化合物含有芳香 環(huán)。IR圖譜中存在3350 cm-i(v〇H峰）、3000 cn