一種從牛蒡子中分離牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚e和牛蒡酚h的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于分離提取技術(shù)領(lǐng)域，設(shè)及一種從牛募子中分離牛募子油及木脂類化合 物的方法，具體設(shè)及一種從牛募子中分離牛募子油、牛募巧、牛募巧元、牛募酪Ε和牛募酪Η 的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 牛募子是菊科牛募屬(Arctium lappa L.)二年生草本植物牛募的干燥成熟果實(shí)， 其廣泛分布于東亞國(guó)家，屬解表藥中發(fā)散風(fēng)熱藥，具有疏散風(fēng)熱、宣肺透疹、消腫解毒之功 效，為歷版《中國(guó)藥典》所收錄?，F(xiàn)代藥理研究證明牛募子具有抗炎、抗腫瘤、降血壓和調(diào)節(jié) 免疫等活性，其化學(xué)成分主要含揮發(fā)油類和木脂素類，其中木脂素類成分主要包括牛募巧、 牛募巧元、牛募酪E、牛募酪H。牛募子中牛募油、牛募巧元、牛募巧運(yùn)些化學(xué)成分在治療適應(yīng) 癥方面有一定的區(qū)別，需要根據(jù)治療作用選擇相應(yīng)的目標(biāo)成分，牛募油主要為祗類和倍半 祗類揮發(fā)油W及脂肪酸類化合物，具有較好的抗菌效果；牛募巧和牛募巧元均具有抗炎鎮(zhèn) 痛、治療糖尿病并發(fā)癥等方面的作用，但牛募巧和牛募巧元療效上也存在略微的差異性，牛 募巧具有良好的抗腫瘤、抗炎、鎮(zhèn)痛的作用，牛募巧元具有良好的抗糖尿病血管性病變的作 用。由此可見，牛募子提取物具有良好的藥理效果，但怎么能夠充分利用牛募子藥材資源， 將其中的成分逐一獲得是目前牛募子提取分離工藝的難點(diǎn)。
[0003] 專利CN101278940A提供了用牛募巧和牛募巧元組成不同組合物比例治療糖尿病 性屯、血管病變的作用，確定了最佳的比例，但該制備方法復(fù)雜，需先用牛募子藥材經(jīng)大孔樹 脂獲得牛募子巧，再又用牛募子藥材經(jīng)硅膠柱層析獲得牛募子巧元，隨后將牛募巧和牛募 巧元組成不同比例的混合物進(jìn)行篩選，太過于繁瑣。專利CN1323674C提供了一種用于治療 糖尿病腎病或糖尿病的牛募子總木脂素巧類提取物的制備方法，獲得了牛募子總木脂素巧 類物質(zhì)50-90%(紫外分光光度法測(cè)定）的提取物原料，用于治療糖尿病腎病和糖尿病，解決 了糖尿病腎病或糖尿病的專用藥物，但該方法中原料為總木脂素，且未有進(jìn)一步提純，未獲 得主要活性成分牛募巧、牛募巧元、牛募酪E和牛募酪H，提取物中多糖等雜質(zhì)也未進(jìn)行分 離，存在一定的不足。專利CN1000443493C提供了一種制備牛募巧和牛募巧元的制備方法， 該專利采用有機(jī)溶劑脫脂、聚酷胺柱層析的方法獲得了牛募子油，同時(shí)也獲得了牛募巧及 其巧元的混合物，但該工藝使用有機(jī)溶劑提取牛募子藥材，有機(jī)溶劑用量大、對(duì)環(huán)境的影響 也大，并且所獲得的牛募巧、牛募巧元為混合物，不能根據(jù)治療特點(diǎn)選用相應(yīng)的化學(xué)成分組 成混合物。
[0004] 因此，為進(jìn)一步使中藥現(xiàn)代化，提高木脂素類成分應(yīng)用范圍及應(yīng)用效果，有必要對(duì) 牛募子木脂素類成分進(jìn)行單獨(dú)分離，獲得其主要活性成分，根據(jù)食品藥品領(lǐng)域的需要，單獨(dú) 應(yīng)用或分別按需求W不同比例應(yīng)用，但目前并沒有充分利用牛募子藥材同時(shí)取得牛募油、 牛募巧、牛募巧元及其它木脂素類化學(xué)成分的方法。
[0005]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：如何提供一種從 牛募子中分離牛募子油、牛募巧、牛募巧元、牛募酪E和牛募酪Η的方法，使其能夠通過一條 路線同時(shí)從牛募子中分離出牛募子油、牛募巧元、牛募巧、牛募酪Ε和牛募酪Η，并且具有充 分利用原料、分離方法簡(jiǎn)單高效、實(shí)用性好、環(huán)境污染小的特點(diǎn)。
[0007] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：一種從牛募子中分離牛募子 油、牛募巧、牛募巧元、牛募酪Ε和牛募酪Η的方法，包括如下步驟： 1) 將牛募子粉碎后進(jìn)行C〇2超臨界萃取脫脂5~7小時(shí)，得到牛募子油和脫脂牛募子粉； 2) 對(duì)步驟1)得到的脫脂牛募子粉回流提取3~4次，過濾每次提取的提取液，合并濾液并 進(jìn)行濃縮，得到提取浸膏;其中，提取液為質(zhì)量濃度為50~95%的水醇溶液，每次提取時(shí)所述 提取液的使用質(zhì)量為所述脫脂牛募子粉質(zhì)量的5~10倍，每次提取時(shí)間為0.5~2小時(shí)； 3) 采用C此亂萃取步驟2)得到的提取浸膏2~3次，合并萃取液，得到待分離樣品；其中， 所述C出C12與所述提取浸膏的質(zhì)量體積比為2~3 mL:l g; 4) 將步驟3)得到的待分離樣品濃縮，加入拌樣硅膠拌樣，進(jìn)行硅膠柱色譜層析，采用梯 度洗脫模式，所述梯度洗脫使用的洗脫液依次為體積比100:0、100: 2、100: 5、100: 8、 100: 10和0:100的二氯甲燒-甲醇溶液，每個(gè)梯度洗脫5~8個(gè)保留體積，每1/^3保留體積收集 為一個(gè)饋分;其中，所述硅膠柱色譜層析中拌樣硅膠與待分離樣品的質(zhì)量比為1~2:1，填料 硅膠與拌樣硅膠的質(zhì)量比為5~15:1; 5) 對(duì)步驟4)收集得到的每一個(gè)饋分進(jìn)行薄層色譜分析，用體積比為100:5的二氯甲燒- 甲醇展開劑檢測(cè)牛募巧元、體積比為100:8的二氯甲燒-甲醇展開劑檢測(cè)牛募酪E、體積比為 100:10的二氯甲燒-甲醇展開劑檢測(cè)牛募巧、體積比為100:15的二氯甲燒-甲醇展開劑檢測(cè) 牛募酪H，合并薄層分析結(jié)果相似的饋分，分別得到牛募巧元饋分、牛募酪E饋分、牛募巧饋 分和牛募酪Η饋分； 6) 分別對(duì)步驟5)得到的牛募巧元饋分和牛募巧饋分進(jìn)行濃縮干燥，得到牛募巧元純品 和牛募巧純品； 7) 用醇溶解步驟5)得到的牛募酪Ε饋分，并加入拌樣硅膠拌樣，采用中低壓正相硅膠色 譜進(jìn)行梯度洗脫，所述梯度洗脫使用的洗脫液依次為體積比100:8、100:12和0:100的石油 酸-乙酸乙醋溶液，每個(gè)梯度洗脫5~8個(gè)保留體積，對(duì)每個(gè)梯度的洗脫液用體積比為100:8的 二氯甲燒-甲醇溶液作為展開劑進(jìn)行薄層色譜分析，合并分析結(jié)果相似的饋分并濃縮，得到 牛募酪Ε純品；其中，所述拌樣硅膠與牛募酪Ε饋分的質(zhì)量比為1~2:1，所述中低壓正相硅膠 色譜中填料硅膠與拌樣硅膠的質(zhì)量比為6~10:1; 8) 用醇溶解步驟5)得到的牛募酪Η饋分，并加入拌樣硅膠拌樣，采用中低壓正相硅膠色 譜進(jìn)行梯度洗脫，所述梯度洗脫使用的洗脫液依次為體積比100:3、100:5和0:100的乙酸乙 醋-甲醇溶液，每個(gè)梯度洗脫5~8個(gè)保留體積，對(duì)每個(gè)梯度的洗脫液用體積比為100:15的二 氯甲燒-甲醇溶液作為展開劑進(jìn)行薄層色譜分析，合并分析結(jié)果相似的饋分并濃縮，得到牛 募酪Η純品；其中，所述拌樣硅膠與牛募酪Ε饋分的質(zhì)量比為1~2:1，所述中低壓正相硅膠色 譜中填料硅膠與拌樣硅膠的質(zhì)量比為10~20:1。
[0008] 相比現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有如下有益效果： 1、本發(fā)明方法采用C〇2超臨界萃取法對(duì)牛募子進(jìn)行脫脂，得到牛募子油，相比于現(xiàn)有技 術(shù)來說避免了有機(jī)試劑脫脂帶來的環(huán)境污染問題，更具有環(huán)境友好性，且采用C〇2超臨界萃 取方法對(duì)牛募子油的萃取率更高(能夠得到牛募子原料重量12~18%的牛募子油），避免因含 牛募子油對(duì)后續(xù)牛募巧、牛募巧元等活性成分的制備存在干擾和影響的問題，同時(shí)制得的 牛募子油營(yíng)養(yǎng)價(jià)值更高。
[0009] 2、本發(fā)明首次提出了采用一種連續(xù)式分離路線完成牛募子中多種產(chǎn)物的分離，結(jié) 合牛募巧、牛募巧元、牛募酪E和牛募酪Η的性質(zhì)，通過創(chuàng)新性的研究得到了各產(chǎn)物的分離條 件，分離出了品質(zhì)優(yōu)良的牛募巧、牛募巧元、牛募酪Ε和牛募酪Η的高純品，純度均在95%W 上，充分利用了原料，節(jié)約了資源，實(shí)用性強(qiáng)。
[0010] 3、本發(fā)明分離方法相比于現(xiàn)有技術(shù)分離效率更高，制得的各產(chǎn)品純度高，無需進(jìn) 行額外的處理即可用作為相關(guān)疾病治療藥物的原料藥，可W單獨(dú)或與其他物質(zhì)混合作為原 料應(yīng)用于藥品食品領(lǐng)域，尤其是在糖尿病和糖尿病腎病領(lǐng)域的應(yīng)用，具有更好的市場(chǎng)前景， 產(chǎn)品價(jià)值高。
[0011]
【具體實(shí)施方式】
[0012] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明方法作進(jìn)一步說明，但運(yùn)些實(shí)施例不得理解為任何 意義上的對(duì)本發(fā)明權(quán)利要求的限制。
[0013] 實(shí)施例1牛募子脫脂制備牛募子油 將牛募子粉碎成能過10目篩的粗粉，用C〇2超臨界萃取設(shè)備進(jìn)行脫脂6小時(shí)，得到牛募 子油和脫脂牛募子粉。0)2超臨界萃取的工藝條件為，萃取壓力30 MPa、萃取溫度40°C、分離 壓力10 MPa、分離溫度40°C、二氧化碳流量500 LA。