3個獨立的實驗。p〈0.05 (t檢驗)，在三個獨立的實驗中得到相似的結果:ρ〈0.05并且P〈0.01 (t檢驗)參見圖11圖12。
[0029]圖11顯示為短時間預處理受體激動劑并沒有改變I型干擾素及其下游基因的表達。
[0030]圖12顯示為RXR和RAR激動劑誘導環(huán)氧合酶I的表達。
[0031]圖6顯示為環(huán)氧合酶I調節(jié)RXR對干擾素產生的抑制作用:U)環(huán)氧合酶I和環(huán)氧合酶2的標準化探針強度基因數(shù)據如圖4A所示。根據430.2基因芯片的設計，標準化探針強度與基因的絕對復制呈正相關?；虮磉_數(shù)據表現(xiàn)為均數(shù)土標準差(** ^0.0Lt檢驗);(B)J2骨髓源性巨噬細胞給予DMSO或9cRA預處理或者在9cRA中加入環(huán)氧合酶1/2泛抑制劑吲哚美辛/雙氯芬酸(1nM)處理24小時后轉染lug/mlpoly I:C2小時或4小時后提取其RNA并通過半定量PCR檢測干擾素I和干擾素4mRNA表達；(O J2骨髓源性巨噬細胞轉染對照組干擾RNA、干擾環(huán)氧合酶1、干擾環(huán)氧合酶2、干擾環(huán)氧合酶1&2，24小時后給予DMSO或9順式維甲酸預處理16小時，轉染lug/mlpoly I:C2小時后提取其RNA并通過半定量PCR檢測干擾素4mRNA表達；(仍J2骨髓源性巨噬細胞給予DMSO或9順式維甲酸或者在9順式維甲酸中加入環(huán)氧合酶I特異性抑制劑SC560 (1nM)或加入環(huán)氧合酶2特異性抑制劑NS398 (1nM)預處理24小時后，轉染lug/mlpoly I:C2小時或4小時后提取其RNA并通過半定量PCR檢測干擾素4mRNA表達；(幻來自于野生型的原代骨髓源性巨噬細胞或環(huán)氧合酶I敲除的小鼠給予DMS0、9順式維甲酸、HX531預處理72小時后(每24小時更換培養(yǎng)基并增加配方)轉染lug/mlpoly I:C4小時后提取其RNA并通過半定量PCR檢測干擾素I和干擾素4mRNA表達；(/0病毒感染通過病原體識別受體下游信號來激活干擾素調節(jié)因子3，然后引起多個抗病毒基因的轉錄。同時干擾素調節(jié)因子3的激活抑制核受體RXR，通過誘導環(huán)氧合酶I抑制抗病毒基因的表達。
[0032](B-F)數(shù)據表現(xiàn)為均數(shù)土標準差(η = 3)，上圖作為其代表性實驗。在三個獨立的實驗中得到相似的結果< 0.05且< 0.01 (t檢驗)
圖13顯示為在9順式維甲酸預處理組以及Poly 1:C激活巨噬細胞組，環(huán)氧合酶I在前列腺素(PGE2)生物合成中起主要作用:(A)將Coxl或Cox2進行梯度稀釋，以其作為模板，分別進行qPCR。結果顯示Coxl及Cox2標準曲線中擴增循環(huán)值(Ct值)及拷貝數(shù)可得出該細胞模型中環(huán)氧合酶I及環(huán)氧合酶2的絕對表達量；(B) J2骨髓源性巨噬細胞在9順式維甲酸預處理16小時后，轉染lug/mlpoly I:C2小時后提取其RNA并通過半定量PCR檢測環(huán)氧合酶I以及環(huán)氧合酶2的絕對表達量(標準曲線如圖13A所示)，兩個獨立實驗的實驗數(shù)據已在圖中顯示；(C) J2骨髓源性巨噬細胞在轉染空白對照(siRNA)，s1-Coxl,s1-Cox2或s1-Coxl與s1-Cox224小時后，隨后用DMSO或9順式維甲酸處理16小時后，再轉染lug/mlpoly 1:C2小時后提取其RNA并通過半定量PCR檢測環(huán)氧合酶ImRNA及環(huán)氧合酶2mRNA的絕對表達量(D)野生型細胞或Coxl缺失型J2骨髓源性巨噬細胞在DMS0，9cRA或HX531處理16小時后，轉染lug/mlpoly I:C2小時后提取其RNA并通過半定量PCR檢測Ifn β mRNA表達量。(E) J2骨髓源性巨噬細胞在DMSO或9cRA處理16h后，收集細胞上清液，ELISA檢測PGE2表達量。(F) J2骨髓源性巨噬細胞用DMSO或9cRA預處理16h，收集上清作為對照組。隨后，在指定時間轉染lug/ml poly 1:C，通過ELISA檢測對照組與poly I:C轉染組上清中PGE2表達量。
[0033]iC-F)數(shù)據表現(xiàn)為均數(shù)土標準差(n=3)，上圖作為其代表性實驗。在三個獨立的實驗中得到相似的結果:*/"< 0.05且** P< 0.01 (t檢驗)
【具體實施方式】:
以下通過特定的具體實例說明本發(fā)明的實施方式，本領域技術人員可由本說明書所揭露的內容輕易地了解本發(fā)明的其他優(yōu)點與功效。本發(fā)明還可以通過另外不同的【具體實施方式】加以實施或應用，本說明書中的各項細節(jié)也可以基于不同觀點與應用，在沒有背離本發(fā)明的精神下進行各種修飾或改變。
[0034]在進一步描述本發(fā)明【具體實施方式】之前，應理解，本發(fā)明的保護范圍不局限于下述特定的具體實施方案；還應當理解，本發(fā)明實施例中使用的術語是為了描述特定的具體實施方案，而不是為了限制本發(fā)明的保護范圍；在本發(fā)明說明書和權利要求書中，除非文中另外明確指出，單數(shù)形式“一個”、“一”和“這個”包括復數(shù)形式。
[0035]當實施例給出數(shù)值范圍時，應理解，除非本發(fā)明另有說明，每個數(shù)值范圍的兩個端點以及兩個端點之間任何一個數(shù)值均可選用。除非另外定義，本發(fā)明中使用的所有技術和科學術語與本技術領域技術人員通常理解的意義相同。除實施例中使用的具體方法、設備、材料外，根據本技術領域的技術人員對現(xiàn)有技術的掌握及本發(fā)明的記載，還可以使用與本發(fā)明實施例中所述的方法、設備、材料相似或等同的現(xiàn)有技術的任何方法、設備和材料來實現(xiàn)本發(fā)明。
[0036]除非另外說明，本發(fā)明中所公開的實驗方法、檢測方法、制備方法均采用本技術領域常規(guī)的分子生物學、生物化學、染色質結構和分析、分析化學、細胞培養(yǎng)、重組DNA技術及相關領域的常規(guī)技術。這些技術在現(xiàn)有文獻中已有完善說明，具體可參見Sambrook等 MOLECULAR CLONING:A LABORATORY MANUAL, Second edit1n，Cold Spring HarborLaboratory Press,1989 and Third edit1n,2001 ；Ausubel 等，CURRENT PROTOCOLSIN MOLECULAR B1LOGY， John Wiley & Sons， New York,1987 and per1dic updates ；the series METHODS IN ENZYM0L0GY， Academic Press, San Diego ；ffolffe, CHROMATINSTRUCTURE AND FUNCT1N, Third edit1n， Academic Press, San Diego，1998 ;METH0DSIN ENZYM0L0GY，Vol.304，Chromatin (P.M.Wassarman and A.P.ffolffe, eds.)，AcademicPress, San Diego,1999 ；和 METHODS IN MOLECULAR B1LOGY, Vol.119，ChromatinProtocols (P.B.Becker, ed.) Humana Press, Totowa, 1999 等。
[0037]核受體超家族(nuclear receptor superfamily)是一組配體激活的轉錄因子家族，通過在信號分子與轉錄應答間建立聯(lián)系，調控著細胞的生長和分化。RXR在抵御病毒感染的宿主防御中的作用仍然是未知的。我們發(fā)現(xiàn)RXR的過度表達以及其配體的刺激會導致宿主細胞的易感性的水泡口炎病毒VSV的功能缺失或RXR拮抗劑治療使其病毒感染。與這些功能型研究相一致的是，配體刺激RXR在巨噬細胞顯著抑制抗病毒基因的表達，其中包括一型干擾素以及多種干擾素刺激基因。我們的研究已經提供了進一步證據表明，COXl在RXR刺激巨噬細胞中顯著誘導產生，介導RXR對一型干擾素的抑制作用，因此我們發(fā)現(xiàn)了一種新型的RXR-Cox-1依賴性途徑，其在抑制一型干擾素-調節(jié)抗病毒免疫中起到重要作用。這說明，RXR在病毒感染的自身免疫反應中通過下調其表達來抑制抗病毒基因的表達，并在宿主抗病毒反應中起到優(yōu)勢作用。
[0038]各實施例中所使用的RAW264.7細胞系從ATCC公司購得，并給與DMEM加百分之十的FBS以及百分之一的青霉素或鏈霉素共同培養(yǎng)。RAW264.7細胞系從ATCC公司購得，并給與DMEM加百分之十的FBS以及百分之一的青霉素或鏈霉素共同培養(yǎng)。
[0039]本發(fā)明實施例中所使用的水泡型口炎病毒毒株(毒株編號)由UCLA的Lee博士提供。
[0040]將RAW264.7細胞植入6孔板中鋪成6*105，給予DMSO或RXR激動劑或RXR拮抗劑處理16-24小時。病毒傳播同之前描述的一致(Doyle等2002)。在培養(yǎng)基中細胞感染VSV(感染復數(shù)=0.01) I小時后，重新更換含有百分之一胎牛血清的DMEM。VSV-G假病毒包含reniila熒光素酶受體由UCLA的Lee博士提供。感染方式同前描述一致，并由熒光素酶檢測試劑盒進行定量檢測(Promega)。
[0041]穩(wěn)定的細胞系的構建方法:人RXR克隆到pBABE -嘌呤霉素逆轉錄載體中，重組pBABE-人RXR，pBABE空載體，或pBABE-人RXR共轉染載體psiA48小時。收