Iqce基因及其表達(dá)產(chǎn)物在i型糖尿病診斷中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及IQCE基因及其表達(dá)產(chǎn)物在I型糖尿病診斷 中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 糖尿病是一組以高血糖為特征的代謝性疾病。高血糖則是由于胰島素分泌缺陷或 其生物作用受損，或兩者兼有引起。糖尿病時(shí)長期存在的高血糖，導(dǎo)致各種組織，特別是眼、 腎、心臟、血管、神經(jīng)的慢性損害、功能障礙。糖尿病根據(jù)病因?qū)W分為四種類型，即I型糖尿 病、II型糖尿病、妊娠糖尿病和特殊類型的糖尿病。
[0003] 糖尿病的病因和發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，至今尚未完全明了。目前認(rèn)為I型糖尿病是一 種在遺傳與環(huán)境相互作用下，以T細(xì)胞介導(dǎo)的特異性胰島細(xì)胞自身免疫性破壞為主要發(fā)病 機(jī)制的一種疾病。I型糖尿病具有多基因遺傳背景，易感性十分復(fù)雜，疾病的發(fā)生是多種基 因相互作用、相互影響的結(jié)果。
[0004] 目前臨床上使用抗體篩選和診斷I型糖尿病。只要所述特異性抗體存在，隨著時(shí)間 的推移，顯性糖尿病往往就會(huì)發(fā)展。雖然抗體篩選能夠檢測I型糖尿病風(fēng)險(xiǎn)的增加水平，但 是所述風(fēng)險(xiǎn)是基于群體研究而不能告知個(gè)體患者疾病是否存在患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)。因此，臨 床上需要一種方法能夠?qū)崿F(xiàn)個(gè)體化診斷。
[0005] 近年來，隨著對(duì)I型糖尿病相關(guān)基因的研究日趨深入，盡管已報(bào)道了一些與I型糖 尿病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)的基因，但是并沒有應(yīng)用到臨床上，因此發(fā)現(xiàn)一種特異性的I型糖尿病 標(biāo)記物應(yīng)用于臨床診斷具有重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種可用于I型糖尿病早期診 斷的分子標(biāo)志物-IQCE基因。相比傳統(tǒng)的I型糖尿病的診斷方法，使用分子標(biāo)志物來診斷I型 糖尿病具有及時(shí)性、特異性和靈敏性，使患者在疾病早期就能知曉風(fēng)險(xiǎn)，針對(duì)風(fēng)險(xiǎn)高低，采 取相應(yīng)的預(yù)防和治療措施。
[0007] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0008] 本發(fā)明提供了一種IQCE基因及其表達(dá)產(chǎn)物在制備診斷I型糖尿病的產(chǎn)品中的應(yīng) 用。
[0009] 進(jìn)一步，上面所提到的診斷產(chǎn)品包括:通過RT-PCR、實(shí)時(shí)定量PCR、免疫檢測、原位 雜交或芯片檢測IQCE基因及其表達(dá)產(chǎn)物的表達(dá)水平以診斷I型糖尿病的產(chǎn)品。
[0010] 進(jìn)一步，所述用RT-PCR診斷I型糖尿病的產(chǎn)品至少包括一對(duì)特異擴(kuò)增IQCE基因的 引物;所述用實(shí)時(shí)定量PCR診斷I型糖尿病的產(chǎn)品至少包括一對(duì)特異擴(kuò)增IQCE基因的引物； 所述用免疫檢測診斷I型糖尿病的產(chǎn)品包括:與IQCE蛋白特異性結(jié)合的抗體;所述用原位雜 交診斷I型糖尿病的產(chǎn)品包括:與IQCE基因的核酸序列雜交的探針;所述用芯片診斷I型糖 尿病的產(chǎn)品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括與IQCE蛋白特異性結(jié)合的抗 體，基因芯片包括與IQCE基因的核酸序列雜交的探針。
[0011] 進(jìn)一步，所述診斷產(chǎn)品包括芯片和/或試劑盒；其中所述芯片包括基因芯片、蛋白 質(zhì)芯片;所述試劑盒包括基因檢測試劑盒和蛋白免疫檢測試劑盒。所述基因檢測試劑盒包 括SYBR Green聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體系、用于擴(kuò)增IQCE基因和管家基因的引物對(duì);所述SYBR Green聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體系包含:PCR緩沖液、dNTPs、SYBR Green熒光染料。
[0012] 本發(fā)明提供了一種診斷I型糖尿病的產(chǎn)品，所述的產(chǎn)品能夠通過檢測IQCE基因的 表達(dá)水平來診斷I型糖尿病。
[0013] 進(jìn)一步，上面所述的產(chǎn)品包括芯片、或試劑盒。其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白 質(zhì)芯片;所述基因芯片包括固相載體以及固定在固相載體上的寡核苷酸探針，所述寡核苷 酸探針包括用于檢測IQCE基因轉(zhuǎn)錄水平的針對(duì)IQCE基因的寡核苷酸探針;所述蛋白質(zhì)芯片 包括固相載體以及固定在固相載體上的IQCE蛋白的特異性抗體;所述試劑盒包括基因檢測 試劑盒和蛋白免疫檢測試劑盒;所述基因檢測試劑盒包括用于檢測IQCE基因轉(zhuǎn)錄水平的試 劑;所述蛋白免疫檢測試劑盒包括IQCE蛋白的特異性抗體。其中，所述基因芯片可用于檢測 包括IQCE基因在內(nèi)的多個(gè)基因（例如，與I型糖尿病相關(guān)的多個(gè)基因）的表達(dá)水平。所述蛋白 質(zhì)芯片可用于檢測包括IQCE蛋白在內(nèi)的多個(gè)蛋白質(zhì)(例如與I型糖尿病相關(guān)的多個(gè)蛋白質(zhì)） 的表達(dá)水平。通過將多個(gè)與I型糖尿病的標(biāo)志物同時(shí)檢測，可大大提高I型糖尿病診斷的準(zhǔn) 確率。
[0014] 進(jìn)一步，上面所述試劑包括使用RT-PCR、實(shí)時(shí)定量PCR、免疫檢測、原位雜交或芯片 方法檢測IQCE基因表達(dá)水平過程中所需的試劑。優(yōu)選地，所述試劑包括針對(duì)IQCE基因的引 物和/或探針。
[0015] 進(jìn)一步，所述基因檢測試劑盒包含SYBR Green聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體系、用于擴(kuò)增 IQCE基因和管家基因的引物對(duì);所述SYBR Green聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體系包含:PCR緩沖液、 dNTPs、SYBR Green熒光染料。所述擴(kuò)增IQCE基因的引物對(duì)序列如下：正向引物序列為5'-AACTCCAGACCGATATGAAG-3' ；反向引物序列為5'-GCACCTCCTCGTAGTATG-3' ；所述管家基因?yàn)?GAPDH，擴(kuò)增GATOH的引物序列對(duì)如下：正向引物序列為5'-CTCTGGTAAAGTGGATATTGT-3' ；反 向引物序列為5 ' -GGTGGAATCATATTGGAACA-3 '。
[0016] 進(jìn)一步，所述基因檢測試劑盒還包含M-MLV逆轉(zhuǎn)錄體系，所述逆轉(zhuǎn)錄體系包括T重 復(fù)寡核苷酸Oligo dT、逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液、M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑、dNTPs。所述基因檢測 試劑盒可用于檢測包括IQCE基因在內(nèi)的多個(gè)基因（例如，與I型糖尿病相關(guān)的多個(gè)基因）的 表達(dá)水平。
[0017 ] 本發(fā)明中與IQCE基因的核酸序列雜交的探針可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合體、PNA 或其它衍生物。所述探針的長度沒有限制，只要完成特異性雜交、與目的核苷酸序列特異性 結(jié)合，任何長度都可以。所述探針的長度可短至25、20、15、13或10個(gè)堿基長度。同樣，所述探 針的長度可長至60、80、100、150、300個(gè)堿基對(duì)或更長，甚至整個(gè)基因。由于不同的探針長度 對(duì)雜交效率、信號(hào)特異性有不同的影響，所述探針的長度通常至少是14個(gè)堿基對(duì)，最長一般 不超過30個(gè)堿基對(duì)，與目的核苷酸序列互補(bǔ)的長度以15-25個(gè)堿基對(duì)最佳。所述探針自身互 補(bǔ)序列最好少于4個(gè)堿基對(duì)，以免影響雜交效率。
[0018]本發(fā)明中所述IQCE蛋白的特異性抗體包括單克隆抗體、多克隆抗體。所述IQCE蛋 白的特異性抗體包括完整的抗體分子、抗體的任何片段或修飾，例如，嵌合抗體、scFv、Fab、 F(ab'）2、Fv等。只要所述片段能夠保留與IQCE蛋白的結(jié)合能力即可。用于檢測蛋白質(zhì)水平 的抗體的制備是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并且本發(fā)明可以使用任何方法來制備所述抗體， 如所述的片段可以通過化學(xué)法從頭合成或利用重組DNA技術(shù)合成。
[0019] 在本發(fā)明的上下文中，"IQCE基因"包括人IQCE基因以及人IQCE基因的任何功能等 同物的多核苷酸。IQCE基因包括與目前國際公共核酸序列數(shù)據(jù)庫GeneBank中IQCE基因（NC_ 000007.14)DNA序列具有70%以上同源性，且編碼相同功能蛋白質(zhì)的DNA序列；
[0020] 優(yōu)選地，IQCE基因的編碼序列包括以下任一種DNA分子：
[0021] (1)序列表中SEQ ID N0.1所示的DNA序列；
[0022] (2)在嚴(yán)格條件下與（1)限定的DNA序列雜交且編碼相同功能蛋白質(zhì)的DNA序列；
[0023] (3)與（1)或(2)限定的DNA序列具有70%、優(yōu)選地，90%以上同源性，且編碼相同功 能蛋白質(zhì)的DNA分子。
[0024]在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述IQCE基因的編碼序列是SEQ ID NO. 1所示的DNA 序列。
[0025]本發(fā)明的IQCE基因可以是天然的或是人工合成的，或者使用可以表達(dá)IQCE的DNA 片段的載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞獲得。所述載體所述載體包括病毒載體、真核表達(dá)載體。
[0026] 病毒載體可以是任何適當(dāng)?shù)妮d體，包括但不限于逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、腺病毒載體、腺 病毒相關(guān)病毒載體、皰疹病毒(例如單純皰疹病毒、痘苗病毒及EB病毒)載體、甲病毒載體。