H,4.73；N,9.86.Found：C, 59·19 ;Η，4·72;Ν，9·85·
[0068] 實(shí)施例十八：l-(5-(5-溴-I-甲基-IH-吲哚-3-基)-3_(3,4-二甲氧基苯基)-4,5_ 二氫-IH-吡唑-1-基）乙酮(6r)的制備
[0070]制備方法參考實(shí)施例一。Yield: 64.8% .m. P .229 ~NMR(DMS〇-d6， 400MHz)S:7.61(s，lH)，7.43-7.36(m，2H)，7.33(d，J = 8.3Hz，lH)，7.26(d，J = 9.1Hz，2H)， 7.03(d，J = 8.4Hz，lH)，5.78(dd，J=11.6,4.0Hz，lH)，3.85-3.75(m，7H)，3.72(s，3H)，3.24 (dd, J =17.9,4. ΙΗζ,ΙΗ) ,2.27 (s,3H) .MS (ESI )m/z： 456.08 (C22H22BrN3O3, [M+H] + ) ? Anal.Calcd for C22H22BrN3O3:C，57.90;H，4.86;N，9.21.Found:C，57.98;H，4.87;N，9.22. [0071] 實(shí)施例十九：卜(5-(5-溴-I-甲基-IH-吲噪-3-基)-3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4， 5-二氫-IH-吡唑-1-基）乙酮(6s)的制備
[0073] 制備方法參考實(shí)施例一。Yield:40.6% .m.p.228~NMR(DMS〇-d6， 400MHz)S:7.65(s，lH)，7.39(d，J = 8.7Hz，lH)，7.26(t，J = 5.1Hz，2H)，7.09(s，2H)，5.82 (dd，J=11.6,4.1Hz，lH)，3·87-3.76(m，7H)，3.72(s，6Η)，3·30-3.28(m，lH)，2.29(s，3H) .MS(ESI)m/z：486.10(C23H24BrN 3〇4,[M+H] + ) .Anal. Calcd for C23H24BrN3O4: C, 56.80 ； H, 4.97;N，8.64.Found:C，56.81;H，4.97;N，8.62.
[0074] 實(shí)施例二十：l-(5_(5-溴-I-甲基-IH-吲哚-3-基)-3_(4-氟苯基)-4,5_ 二氫-IH-吡唑-1-基）乙酮(6t)的制備
[0076] 制備方法參考實(shí)施例一。Yield:38.6% .m.p. 199~SOOqC^1H NMR(DMS〇-d6， 400MHz)S:7.89(dd，J = 8.7,5.5Hz，2H)，7.60(s，lH)，7.39(d，J = 8.7Hz，lH)，7.33(t，J = 8.9Hz，2H)，7.30(s，lH)，7.25(d，J = 6.9Hz，lH)，5.81(dd，J=11.7,4.2Hz，lH)，3.83(dd，J = 18.0，11.7Hz，lH)，3.72(s，3H)，3.26(dd，J=18.0,4.3Hz，lH)，2.26(s，3H).MS(ESI)m/z: 414.05 (C20Hi7BrFN3O, [M+H] + ) .Anal .Calcd for C20Hi7BrFN3O ： C, 57.99 ； H, 4.14 ； N, 10.14.Found:C，57.88;H，4.14;N，10.16.
[0077] 實(shí)施例二^^一：1-(5-(5-溴-卜甲基-1H-吲哚- 3-基)-3-(4-氯苯基)-4,5-二氫― IH-吡唑-1-基）乙酮(6u)的制備
[0079]制備方法參考實(shí)施例一。Yield:48.5% ·πι·ρ·200~SOIqC-1H NMR(DMS〇-d6， 400MHz)S:7.84(d，J = 8.5Hz，2H)，7.60(s，lH)，7.54(d，J = 8.5Hz，2H)，7.38(d，J = 8.7Hz， lH)，7.29(s，lH)，7.25(d，J = 8.7Hz，lH)，5.81(dd，J=11.7,4.1Hz，lH)，3.82(dd，J=18.0， 11.8Hz，lH)，3.71(s，3H)，3.25(dd，J=18.0,4.3Hz，lH)，2.27(s，3H).MS(ESI)m/z:430.02 (C20HnBrClN3O，[M+H] + )·Anal · Calcd for C2QHnBrClN3O: C，55 · 77;H，3 · 98;N，9 · 76 · Found: C，55.91;H，3.97;N，9.78.
[0080] 實(shí)施例二十二：1-(5-(5-溴-丨_甲基-1H-吲哚- 3-基)-3-(4-溴苯基)-4,5-二氫― IH-吡唑-1-基）乙酮(6v)的制備
[0082]制備方法參考實(shí)施例一。Yield: 37.0% .m·ρ .206~SOTqC^1H NMR(DMS〇-d6， 400MHz)S:7.77(d，J = 8.5Hz，2H)，7.68(d，J = 8.6Hz，2H)，7.59(s，lH)，7.39(d，J = 8.7Hz， lH)，7.30(s，lH)，7.25(d，J = 7.0Hz，lH)，5.81(dd，J=11.7,4.3Hz，lH)，3.82(dd，J=18.0， 11.8Hz，lH)，3.72(s，3H)，3.25(dd，J=18.0,4.4Hz，lH)，2.27(s，3H).MS(ESI)m/z:473.97 (C20Hi7Br2N3O, [M+H]+).Anal.Calcd for C20Hi7Br2N3O：C,50.55；H,3.61；N,8.84.Found：C, 50·42 ;Η，3·61;Ν，8·86·
[0083]實(shí)施例二十三:一類吲哚乙?；吝蜓苌锏捏w外抗癌活性研究進(jìn)展
[0084] 采用MTT [ 3- (4，5)_雙甲基-2-噻唑_(2，5)_苯基溴化四氮唑藍(lán)]法來測(cè)定含甲硝唑 骨架的吡唑硝基咪唑衍生物對(duì)人肝癌細(xì)胞(HEPG2)，人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)以及人肺腺癌細(xì) 胞(Α549)的抑制率達(dá)到50%時(shí)的藥物濃度（half maximal inhibitory concentration， IC5〇)。以及對(duì)人腎上皮細(xì)胞(293T)的細(xì)胞毒性，每個(gè)化合物的毒性用抑制293T細(xì)胞存活率 到50%時(shí)的濃度來表示。
[0085] (1)培養(yǎng)液的配制：DMEM(基礎(chǔ)培養(yǎng)基）89%，胎牛血清10%，青霉素鏈霉素溶液 (10000IU/mL，10000yg/mL)1 %。
[0086] (2)四種貼壁癌細(xì)胞的培養(yǎng)：利用上述培養(yǎng)液(培養(yǎng)液體積約為培養(yǎng)瓶容量的1/ 10 )，在37°C，5 % CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)判斷傳代時(shí)間。
[0087] (3)不同濃度藥物的配制:利用三蒸水(少量DMSO助溶)配制儲(chǔ)備液，加藥后的每孔 細(xì)胞懸液中DMSO的終濃度一般不超過0.05%-0.1 % ;用三蒸水把儲(chǔ)備液稀釋至六個(gè)濃度梯 度（lOyg/mL，2yg/mL，0 · 4yg/mL，0 · 08yg/mL，0 · 016yg/mL，0 · 003yg/mL);保存于-20°C冰箱中 備用。
[0088] (4)細(xì)胞孵育:取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期腫瘤細(xì)胞，調(diào)細(xì)胞懸液濃度為1-1.5 X 105/mL，混勻后 加入96孔培養(yǎng)板中（IOOyL/孔），在37°C，5 % CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。
[0089] (5)加藥:將稀釋好的不同濃度梯度的藥物分別加入到96孔培養(yǎng)板中，每個(gè)濃度梯 度設(shè)3個(gè)平孔，繼續(xù)培養(yǎng)48h。實(shí)驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)組(培養(yǎng)液、細(xì)胞、藥物）、對(duì)照組(培養(yǎng)液和細(xì)胞） 和空白組（只有培養(yǎng)液）。
[0090] (6)存活細(xì)胞檢測(cè):在培養(yǎng)了48h后的96孔板中，加 MTT(5mg/mL)10yL/孔;在37°C放 置4h后，移除上清液，加 DMSO 150yL/孔，振蕩至formazan結(jié)晶全部溶解;利用自動(dòng)酶標(biāo)儀在 570nm波長(zhǎng)處檢測(cè)各孔的光密度(0D值）。
[0091] 抑制率的計(jì)算：
[0092] 生長(zhǎng)抑制率=(1-存活率）X 100% = [1-(0D實(shí)驗(yàn)-OD空白）/(0D對(duì)照-OD空白）]X 100% (0D實(shí)驗(yàn)表示實(shí)驗(yàn)組的平均光密度，OD對(duì)照表示對(duì)照組的平均光密度，OD空白表示空 白組的平均光密度）。
[0093]根據(jù)藥物濃度_細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率的標(biāo)準(zhǔn)曲線，求其IC50。
[0094]本發(fā)明所列一類吲哚乙?；吝蜓苌飳?duì)腫瘤細(xì)胞，正常細(xì)胞以及微管蛋白聚合 的抑制IC5Q值(μπιο I /mL)見下表
[0095]
[0096] 從上述實(shí)驗(yàn)可知:本發(fā)明對(duì)人肝癌細(xì)胞(HEPG2)，人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)以及人肺 腺癌細(xì)胞(A549)有明顯的抑制作用，與對(duì)照組相比，活性明顯提高。本發(fā)明對(duì)人腎上皮細(xì)胞 (293T)表現(xiàn)出了相當(dāng)或者優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照藥物的細(xì)胞毒性，可以用于制取抗腫瘤藥物。
[0097] 以上詳細(xì)描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實(shí)施方式中 的具體細(xì)節(jié)，在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi)，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行多種等同變換，這 些等同變換均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。另外需要說明的是，在上述【具體實(shí)施方式】中所描述 的各個(gè)具體技術(shù)特征，在不矛盾的情況下，可以通過任何合適的方式進(jìn)行組合。為了避免不 必要的重復(fù)，本發(fā)明對(duì)各種可能的組合方式不再另行說明。此外，本發(fā)明的各種不同的實(shí)施 方式之間也可以進(jìn)行任意組合，只要其不違背本發(fā)明的思想，其同樣應(yīng)當(dāng)視為本發(fā)明所公 開的內(nèi)容。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一類嗎I噪乙酷基化挫衍生物，其結(jié)構(gòu)如式所示，2. -種制備嗎I噪乙酷基化挫衍生物的方法，其特征在于，所述一類嗎I噪乙酷基化挫衍 生物的結(jié)構(gòu)如式所示，制備方法步驟如下： 步驟1.冰浴條件下，向反應(yīng)容器中依次加入結(jié)構(gòu)如式A所示的化合物，P0C13于DMF中反 應(yīng)，充分反應(yīng)后，得到結(jié)構(gòu)如式B所示的化合物。 步驟2.依次向反應(yīng)容器中加入THF，N址W及結(jié)構(gòu)如式B所示的化合物，冰浴反應(yīng)，再加 入CH3I室溫反應(yīng)，TLC跟蹤，充分反應(yīng)后，得到結(jié)構(gòu)如式C所示的化合物。 步驟3.室溫下，依次向反應(yīng)容器中加入無水乙醇溶液，結(jié)構(gòu)如式C所示的化合物，不同 取代的乙酷苯，KOH，充分反應(yīng)，得到結(jié)構(gòu)如式D所示的化合物。 步驟4.依次向反應(yīng)容器中加入無水乙醇溶液，結(jié)構(gòu)如式D所示的化合物，水合阱，回流 2h，冷卻轉(zhuǎn)移至-20°C過夜，充分反應(yīng)后得到結(jié)構(gòu)如式E所示的化合物。 步驟5.依次向反應(yīng)容器中加入乙酸，EDC · HC1，冊(cè)化W及二氯甲燒溶液，隨后在化保護(hù) 下加入結(jié)構(gòu)如式E所示的化合物，充分反應(yīng)后得到結(jié)構(gòu)如式F所示的化合物。3. -類嗎I噪乙酷基化挫衍生物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用，其特征在于，其結(jié)構(gòu)如式所 示4. 一種抗癌藥物，其特征在于，包括結(jié)構(gòu)如式所示的化合物及醫(yī)學(xué)上可接受的載體，
【專利摘要】本發(fā)明公開了一類吲哚乙?；吝蜓苌锏闹苽浞椒ㄅc應(yīng)用，所述合成的化合物的結(jié)構(gòu)如式所示，本發(fā)明對(duì)人肝癌細(xì)胞(HepG2)，人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)以及人肺腺癌細(xì)胞(A549)有明顯的抑制作用，因此本發(fā)明的一類吲哚乙?；吝蜓苌锏闹苽浞椒ㄅc應(yīng)用可以應(yīng)用于制備抗腫瘤藥物。
【IPC分類】A61K31/4155, A61P35/00, C07D403/04
【公開號(hào)】CN105541805
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610127242
【發(fā)明人】朱海亮, 晏天龍, 張雅亮, 秦亞娟, 李波燕, 楊夢(mèng)如
【申請(qǐng)人】南京大學(xué)
【公開日】2016年5月4日
【申請(qǐng)日】2016年3月4日