檢測疾病相關(guān)的eb病毒變異位點(diǎn)的試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于PCR檢測試劑盒領(lǐng)域，設(shè)及選自EB病毒基因組的36個(gè)變異位點(diǎn)的一個(gè) 或一個(gè)W上的組合在制備檢測疾病相關(guān)的EB病毒變異位點(diǎn)的試劑盒中的用途，W及一種用 于檢測疾病相關(guān)的EB病毒變異位點(diǎn)的試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著人類平均壽命的延長和生活行為方式等改變，惡性腫瘤已成為嚴(yán)重威脅人類 健康的重要疾病和全球重大的公共衛(wèi)生問題。近年來，中國惡性腫瘤呈高發(fā)態(tài)勢，每年的新 增病例占全球新增病例的20% W上，據(jù)統(tǒng)計(jì)中國每年新發(fā)癌癥病例約達(dá)350萬，死亡病例超 過200萬，是我國民眾的重要死亡原因。通過實(shí)施W證據(jù)為基礎(chǔ)的癌癥預(yù)防、早期發(fā)現(xiàn)和癌 癥患者管理策略可使癌癥得W減少和控制。
[0003] 鼻咽癌是我國常見的惡性腫瘤之一，每年新增病例約占全球的80%，多見于華南 地區(qū)的廣東、廣西、海南、福建、湖南、江西等省份。鼻咽癌的病因?qū)W研究表明，遺傳、環(huán)境與 EB病毒感染是其發(fā)病的主要原因。由于鼻咽腔位置隱蔽、早期癥狀不明顯，W致早期診斷率 較低，較大地影響了鼻咽癌患者的生存率，而篩查是目前為止提高鼻咽癌患者早診率、降低 其死亡率的較好方法。
[0004] 邸病毒是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)與人類腫瘤發(fā)生相關(guān)的病毒，其在全球人群中廣泛感染， 感染率達(dá)到90 %，多W無癥狀感染方式潛伏于個(gè)體B淋己細(xì)胞;除鼻咽癌外，EB病毒感染還 與多種腫瘤發(fā)生有關(guān)，包括伯基特淋己瘤、霍奇金淋己瘤、NK/T細(xì)胞性淋己瘤W及部分胃癌 等。邸病毒演變和特定亞型選擇并最終導(dǎo)致鼻咽癌等疾病局部高發(fā)的機(jī)制仍有待解釋。然 而，EB病毒分型是標(biāo)識病毒基因序列差異、發(fā)現(xiàn)疾病特異病毒亞型的基礎(chǔ)。W往大量研究工 作主要根據(jù)EB病毒基因組個(gè)別位點(diǎn)或區(qū)域的基因序列信息來對EB病毒進(jìn)行分類，對于鼻咽 癌來說，其中某些分型并不特異，同一區(qū)域的正常對照人群與鼻咽癌患者存在相近的邸病 毒亞型感染率，并且運(yùn)種窮舉策略，相對于約172肺的邸病毒基因組而言，大大降低了檢出 鼻咽癌相關(guān)的邸病毒亞型的可能性。
[000引目前，尚無特效的針對鼻咽癌的EB病毒疫苗，鑒定出鼻咽癌相關(guān)的EB病毒變異對 于疫苗的研發(fā)設(shè)計(jì)十分重要，同時(shí)也給鼻咽癌治療的祀點(diǎn)研究及個(gè)體化診療提供重要參 考。因此，在全基因組水平對邸病毒序列進(jìn)行分析，鑒定出鼻咽癌相關(guān)的病毒變異位點(diǎn)及病 毒亞型，可用于鼻咽癌高發(fā)區(qū)人群篩查、鼻咽癌發(fā)病高危人群早診早治及疾病治療研究，并 最終使鼻咽癌患者得到及時(shí)診斷和有效治療，改善患者預(yù)后，減輕個(gè)人、家庭和社會(huì)的腫瘤 負(fù)擔(dān)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供選自EB病毒基因組的變異位點(diǎn)在制備檢測疾病相關(guān) 的EB病毒變異位點(diǎn)的試劑盒中的用途，具體是選自EB病毒基因組的36個(gè)變異位點(diǎn)的一個(gè)或 一個(gè)W上的組合在制備檢測疾病相關(guān)的EB病毒變異位點(diǎn)的試劑盒中的用途，所述變異位點(diǎn) 為：loc613、loc629、loc632、loc2773、loc6210、loc6584、loc7048、loc40607、loc44531、 loc60527、loc62500、loc63009、loc67746、loc84414、locl08：M7、loci15575、locl22141、 locl26187、locl28269、locl32225、locl37316、locl39684、locl45737、locl45919、 Iocl46628、locl50022、locl52087、locl54387、locl56133、locl56139、locl56637、 locl62215、locl62476、locl62507、locl63364U及l(fā)ocl65087。
[0007] 本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種用于檢測疾病相關(guān)的EB病毒變異位點(diǎn)的試劑盒， 可W同時(shí)檢測多個(gè)EB病毒變異位點(diǎn)并對病毒亞型進(jìn)行分類，可W為個(gè)體罹患鼻咽癌相對風(fēng) 險(xiǎn)估計(jì)、鼻咽癌高發(fā)區(qū)人群篩查、鼻咽癌發(fā)病高危人群早期預(yù)防、病毒疫苗研發(fā)等提供重要 參考。
[0008] 本發(fā)明所述的用于檢測疾病相關(guān)的EB病毒變異位點(diǎn)的試劑盒，該試劑盒包括檢測 EB病毒基因組的36個(gè)變異位點(diǎn)的一個(gè)或一個(gè)W上的組合的PCR擴(kuò)增引物和單堿基延伸引 物，所述變異位點(diǎn)為：l〇c613、loc629、loc632、loc2773、loc6210、loc6584、loc7048、 Ioc40607、loc44531、loc60527、loc62500、loc63009、loc67746、loc84414、locl08347、 locll5575、locl22141、locl26187、locl28269、locl32225、locl37316、locl39684、 locl45737、loc145919、loc146628、loc150022、locl52087、locl54387、locl56133、 locl56139、locl56637、locl62215、locl62476、locl62507、locl63364U及l(fā)ocl65087。
[0009] 根據(jù)本發(fā)明所述的用于檢測疾病相關(guān)的EB病毒變異位點(diǎn)的試劑盒的進(jìn)一步特征， 該試劑盒還包括DNA提取試劑和PCR反應(yīng)試劑。
[0010] 根據(jù)本發(fā)明所述的用于檢測疾病相關(guān)的EB病毒變異位點(diǎn)的試劑盒的進(jìn)一步特征， 所述檢測l〇c613的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID N0:1和SEQ ID N0:2，W及單堿基延 伸引物的序列為SEQ ID N0:3;所述檢測loc629的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID N0:4 和SEQ ID N0:5，W及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID ^:6;所述檢測1〇〇632的口0?擴(kuò)增引 物的序列分別為SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8, W及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO:9; 所述檢測l〇c2773的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO: 10和SEQ ID NO: 11，W及單堿基 延伸引物的序列為SEQ ID NO: 12;所述檢巧Uloc6210的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO: 13和SEQ ID NO: 14, W及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO: 15;所述檢測loc6584的 PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:17，W及單堿基延伸引物的序列為 沈Q ID NO: 18;所述檢測1〇(：7048的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO: 19和沈Q ID NO: 20，W及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO:21;所述檢測loc40607的PCR擴(kuò)增引物的序列 分別為SEQ ID NO: 22和SEQ ID NO: 23, W及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO: 24;所述 檢測loc44531的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO: 25和SEQ ID NO: 26, W及單堿基延 伸引物的序列為SEQ ID N0:27;所述檢測loc60527的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID N0:28和SEQ ID N0:29，W及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID N0:30;所述檢測loc62500的 PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID N0:31和SEQ ID N0:32，W及單堿基延伸引物的序列為 SEQ ID N0:33;所述檢測loc63009的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID N0:34和SEQ ID NO:35，W及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO:36;所述檢測loc67746的PCR擴(kuò)增引物的 序列分別為SEQ ID N0:37和SEQ ID N0:38，W及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID N0:39; 所述檢測l〇c84414的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO :40和SEQ ID NO:41，W及單堿 基延伸引物的序列為SEQ ID ^):42;所述檢測1〇(3108347的口〇?擴(kuò)增引物的序列分別為560 ID NO :43和SEQ ID NO :44，W及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO: 45;所述檢測 locll5575的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID N0:46和SEQ ID N0:47，W及單堿基延伸引 物的序列為SEQ ID N0:48;所述檢測locl22141的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID N0:49 和沈Q ID N0:50，W及單堿基延伸引物的序列為沈Q ID N0:51;所述檢測locl26187的PCR 擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:53，W及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO: 54;所述檢測locl28269的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為沈Q ID NO: 55和SEQ ID NO: 56, W及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO: 57;所述檢測locl32225的PCR擴(kuò)增引物的序 列分別為SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:59，W及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO:60;所 述檢測l〇cl37316的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID N0:61和SEQ ID N0:62，W及單堿基 延伸引物的序列為SEQ ID N0:63;所述檢測locl39684的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID N0:64和沈Q ID N0:65，W及單堿基延伸引物的序列為沈Q ID N0:66;所述檢測locl45737 的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO:67和SEQ ID NO:68，W及單堿基延伸引物的序列 為SEQ ID N0:69;所述檢測locl45919的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID N0:70和SEQ ID ^:71，^及單堿基延伸引物的序列為560 10^:72;所述檢測1〇〇146628的?〇?擴(kuò)增引物的 序列分別為SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:74，W及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID NO:75; 所述檢測l〇cl50022的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID N0:76和SEQ ID N0:77，W及單堿 基延伸引物的序列為SEQ ID NO:78;所述檢測locl52087的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID N0:79和SEQ ID N0:80，W及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID N0:81;所述檢測 locl54387的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID N0:82和SEQ ID N0:83，W及單堿基延伸引 物的序列為SEQ ID NO:84;所述檢測locl56133的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO:85 和沈Q ID N0:86，W及單堿基延伸引物的序列為沈Q ID N0:87;所述檢測locl56139的PCR 擴(kuò)增引物的序列分別為SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89，W及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID N0:90;所述檢測locl56637的PCR擴(kuò)增引物的序列分別為沈Q ID N0:91和SEQ ID NO: 92，W及單堿基延伸引物的序列為SEQ ID N0:93;所述檢測locl62215的PCR擴(kuò)增引物的序 列分別為SEQ ID NO:94和SEQ ID N