Myoz1作為癌癥分子靶標(biāo)中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及MY0Z1作為癌癥分子靶標(biāo)中的應(yīng)用， 更具體的涉及MY0Z1作為口腔鱗狀細(xì)胞癌分子靶標(biāo)中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 口腔鱗狀細(xì)胞癌（oralsquamouscellcarcinoma，0SCC)為頭頸部常見的惡性腫 瘤，約占全身惡性腫瘤的3%?？谇击[狀細(xì)胞癌的發(fā)病因素有很多，如嗜酒，嗜煙及咀嚼檳榔 等。其好發(fā)部位依次為舌、牙齦、頰、愕、唇、口底。我國每年惡性腫瘤新發(fā)病例約152萬，死 亡105萬人，每年新發(fā)病例4. 56萬人。雖癌癥治療己取得進展，臨床上的手術(shù)方式、功能修 復(fù)、術(shù)后感染控制、輔助放化療等技術(shù)有明顯的提高和改善，對口腔癌的早期診斷治療、發(fā) 生發(fā)展機理、生物治療、靶向治療等研究也獲得了一些進步，但是，患者的五年生存率仍然 沒有得到明顯的提高，不超過50%，其主要原因是對口腔癌的發(fā)生發(fā)展、關(guān)鍵調(diào)控因素、特 異性標(biāo)記物等不清楚。因此，探討口腔癌的發(fā)生、發(fā)展的機理，思考潛在的治療靶標(biāo)，研究相 應(yīng)的治療策略和臨床應(yīng)用可能，對提高患者的生存率和改善預(yù)后具有重要的意義。
[0003] 發(fā)明人通過Illumina公司的HiSeq2500高通量測序平臺選取2例口腔鱗狀細(xì)胞 癌癌組織、癌旁組織及3例正常組織的轉(zhuǎn)錄組深度測序分析，初步篩選出口腔鱗狀細(xì)胞癌 相關(guān)基因ΜΥ0Ζ1，進一步RT-PCR實驗證實了ΜΥ0Ζ1基因與口腔鱗狀細(xì)胞癌的關(guān)系：ΜΥ0Ζ1與 口腔鱗狀細(xì)胞癌具有很好的相關(guān)性，可用于制備口腔鱗狀細(xì)胞癌輔助診斷或者預(yù)后制劑， 具有重要的臨床實際應(yīng)用價值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供檢測MY0Z1基因和/其表達(dá)產(chǎn)物的試劑在制備口腔癌診斷 劑中的應(yīng)用。
[0005] 進一步，口腔癌為口腔鱗狀細(xì)胞癌。
[0006] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明首先通過高通量測序結(jié)合生物信息學(xué)方法篩選到候選基 因MY0Z1，進一步通過分子生物學(xué)方法驗證了MY0Z1與口腔癌的關(guān)系：MY0Z1在口腔癌患者 中低表達(dá)，與口腔癌具有很好的相關(guān)性，可用于制備治療口腔癌制劑和/或口腔癌診斷制 劑，具有重要的臨床應(yīng)用價值。
[0007] 本發(fā)明的目的在于提供MY0Z1基因在制備口腔癌診斷制劑中的應(yīng)用。
[0008] 進一步，口腔癌診斷制劑包括用熒光定量PCR方法、基因芯片方法檢測口腔癌患 者組織中MY0Z1基因的表達(dá)。
[0009] 熒光定量PCR法是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針，對PCR產(chǎn)物進行標(biāo) 記跟蹤，實時在線監(jiān)控反應(yīng)過程，結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對產(chǎn)物進行分析，計算待測樣品模板 的初始濃度。熒光定量PCR的出現(xiàn)，極大地簡化了定量檢測的過程，而且真正實現(xiàn)了絕對定 量。多種檢測系統(tǒng)的出現(xiàn)，使實驗的選擇性更強。自動化操作提高了工作效率，反應(yīng)快速、 重復(fù)性好、靈敏度高、特異性強、結(jié)果清晰。
[0010] 基因芯片又稱為DNA微陣列（DNAmicroarray)，可分為三種主要類型：1)固定在 聚合物基片（尼龍膜，硝酸纖維膜等）表面上的核酸探針或cDNA片段，通常用同位素標(biāo)記 的靶基因與其雜交，通過放射顯影技術(shù)進行檢測。2)用點樣法固定在玻璃板上的DNA探針 陣列，通過與熒光標(biāo)記的靶基因雜交進行檢測。3)在玻璃等硬質(zhì)表面上直接合成的寡核苷 酸探針陣列，與熒光標(biāo)記的靶基因雜交進行檢測?；蛐酒鳛橐环N先進的、大規(guī)模、高通 量檢測技術(shù)，應(yīng)用于疾病的診斷，其優(yōu)點有以下幾個方面：一是高度的靈敏性和準(zhǔn)確性；二 是快速簡便；二是可同時檢測多種疾病。
[0011] 用于熒光定量PCR方法檢測口腔癌中MY0Z1基因的產(chǎn)品含有一對特異性擴增 MY0Z1基因的引物；基因芯片包括與MY0Z1基因的核酸序列雜交的探針。
[0012]用于熒光定量PCR方法檢測口腔癌中MY0Z1基因的產(chǎn)品可以檢測癌組織與癌旁組 織中MY0Z1基因的表達(dá)，也可以檢測癌組織與正常組織中MY0Z1基因的表達(dá)。
[0013] 本發(fā)明的目的在于提供MY0Z1基因表達(dá)產(chǎn)物在制備口腔癌診斷制劑中的應(yīng)用。進 一步，口腔癌的診斷制劑包括用免疫方法檢測MY0Z1蛋白的表達(dá)。優(yōu)選免疫檢測方法檢測 口腔癌中MY0Z1蛋白表達(dá)的為western blot和/或ELISA和/膠體金檢測方法。
[0014] 酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA)即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標(biāo) 記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進行的技術(shù)。該技術(shù)可用于檢測大分子抗原和特異性抗體 等，具有快速、靈敏、簡便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點。ELISA檢測試劑盒根據(jù)檢測目的和操作 步驟可分為間接法、雙抗夾心法、競爭法、雙位點一步法、捕獲法測IgM抗體、應(yīng)用親和素和 生物素的ELISA。ELISA檢測試劑盒中生色底物可選擇辣根過氧化物酶（HRP)或者堿性磷 酸酶（AP)。
[0015]常用的免疫膠體金檢測技術(shù)：（1)免疫膠體金光鏡染色法細(xì)胞懸液涂片或外周血 切片，可用膠體金標(biāo)記的抗體進行染色，也可在膠體金標(biāo)記的基礎(chǔ)上，以銀顯影液增強標(biāo) 記，使被還原的銀原子沉積于已標(biāo)記的金顆粒表面，可明顯增強膠體金標(biāo)記的敏感性。（2) 免疫膠體金電鏡染色法可用膠體金標(biāo)記的抗體或抗抗體與負(fù)染病毒樣本或外周血超薄切 片結(jié)合，然后進行負(fù)染?？捎糜诓《拘螒B(tài)的觀察和病毒檢測。（3)斑點免疫金滲濾法應(yīng)用微 孔濾膜作載體，先將抗原或抗體點于膜上，封閉后加待檢樣本，洗滌后用膠體金標(biāo)記的抗體 檢測相應(yīng)的抗原或抗體。（4)膠體金免疫層析法將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜 上，膠體金標(biāo)記試劑（抗體或單克隆抗體）吸附在結(jié)合墊上，當(dāng)待檢樣本加到試紙條一端的 樣本墊上后，通過毛細(xì)作用向前移動，溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)，當(dāng)移動 至固定的抗原或抗體的區(qū)域時，待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截 留，聚集在檢測帶上，可通過肉眼觀察到顯色結(jié)果。該法現(xiàn)已發(fā)展成為診斷試紙條，使用十 分方便。
[0016] 進一步，檢測MY0Z1蛋白的ELISA法為使用ELISA檢測試劑盒。試劑盒中的抗體可 采用市售的MY0Z1單克隆抗體。進一步，試劑盒包括：包被MY0Z1單克隆抗體的固相載體， 酶標(biāo)二抗，酶的底物，蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，陰性對照品，稀釋液，洗滌液，酶反應(yīng)終止液等。
[0017] 進一步，檢測MY0Z1蛋白的膠體金法為使用檢測試劑盒，抗體可采用市售的MY0Z1 單克隆抗體。進一步，膠體金檢測試劑盒采用膠體金免疫層析技術(shù)或膠體金滲濾法。進一 步，膠體金檢測試劑盒硝酸纖維素膜上的檢測區(qū)（T)噴點有抗MY0Z1單克隆抗體、質(zhì)控區(qū) (C)噴點有免疫球蛋白IgG。
[0018] 本發(fā)明的目的在于提供一種檢測口腔癌的熒光定量PCR試劑盒，試劑盒檢測基因 MY0Z1，采用特異的上游引物和下游引物，上游引物序列為SEQIDN0. 1，下游引物序列為 SEQIDN0. 2。
[0019] 進一步，該PCR試劑盒適合于目前存在市場上的所有類型熒光定量基因擴增儀， 靈敏度高，定量快速準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好，具有良好的應(yīng)用前景。
[0020] 進一步，上述熒光定量PCR試劑盒組分包括：特異性引物、內(nèi)參引物、熒光定量PCR 反應(yīng)液。其中特異性引物包括上游引物和下游引物，上游引物序列為SEQIDN0. 1，下游引 物序列為SEQIDNO. 2。內(nèi)參引物為β-actin內(nèi)參引物，上游引物序列為SEQIDNO. 3,下 游引物序列為SEQIDNO. 4。
[0021] 本發(fā)明目的是提供了一種口腔癌檢測試劑盒，檢測試劑盒檢測MY0Z1蛋白。進一 步的，試劑盒還包括其他檢測試劑。
[0022] 本發(fā)明目的是提供了一種檢測口腔癌的基因芯片，基因芯片包括與MY0Z1基因的 核酸序列雜交的探針。
[0023] 本發(fā)明目的在于提供一種治療口腔癌制劑，治療口腔癌制劑促進MY0Z1基因的表 達(dá)。
[0024] 本發(fā)明目的在于提供促進MY0Z1基因和/或MY0Z1蛋白表達(dá)的試劑在制備口腔癌 治療制劑中的應(yīng)用。
[0025] 進一步，口腔癌治療制劑中含有促進MY0Z1基因表達(dá)的載體。
[0026] 進一步，口腔癌治療制劑是指可以促進MY0Z1基因的表達(dá)的制劑。本領(lǐng)域人員熟 知促進基因的表達(dá)通常可以采用下述方法中的一種和/或幾種：