甘松新酮類化合物及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及植物提取物及其制備方法與應(yīng)用，尤其是甘松新酮類化合物及其制備 方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 5-羥色胺轉(zhuǎn)運體（SERT)是一種對5-HT有高度親和力的跨膜轉(zhuǎn)運蛋白，約含630 個氨基酸殘基，其編碼基因（SLC6A4)分別位于7號和11號染色體上，由跨度約為35kb的 14個外顯子組成。SERT蛋白包含12-13個跨膜區(qū)，N端及C端位于胞質(zhì)中，靠近N端處有 cAMP依賴性蛋白激酶結(jié)合位點，在第三與第四跨膜區(qū)之間有一位于細(xì)胞外的環(huán)狀部分，是 N-連接的糖基化位點。
[0003] SERT屬于Na+/Cl依賴型轉(zhuǎn)運蛋白，主要位于5-HT能神經(jīng)元。SERT從神經(jīng)突觸 間隙中重新攝取5-HT進(jìn)入突觸前神經(jīng)元，直接影響突觸間隙5-HT濃度，改變突觸后受體介 導(dǎo)信號的量和作用持續(xù)時間。此外，發(fā)現(xiàn)SERT在胎盤組織、骨髓、腎、肺、心、腎上腺、肝、甲 狀旁腺、甲狀腺、胰腺和小腸等器官亦有分布，提示SERT參與多種生理功能。
[0004] SERT是轉(zhuǎn)運5-HT的重要分子，與情緒、食欲、睡眠、記憶、學(xué)習(xí)等許多生理心理功 能相關(guān)，SERT及5-HT表達(dá)改變可引起焦慮、抑郁、強迫癥、恐懼癥，甚至精神分裂癥，并與藥 物成癮性密切相關(guān)；此外，發(fā)現(xiàn)SERT在胃腸道功能性疾病中扮演了重要角色，如臨床上慢 傳輸性便秘、腸道易激綜合征、功能性腹脹等胃腸功能性疾病，采用針對SERT的抗抑郁藥、 抗焦慮藥物取得了療效。
[0005] 甘松（Nardostachys chinensis Batal.)是敗醬科甘松屬植物，具有理氣止痛， 開郁醒脾；外用祛濕消腫的功效，甘松已經(jīng)報道的生物活性包括（1)作用于神經(jīng)系統(tǒng)，如 抗抑郁、鎮(zhèn)靜和抗驚厥、抗帕金森和記憶恢復(fù)；（2)作用于心血管系統(tǒng)，如降血壓、抗心律失 常、抗心肌缺血、抗心血管損傷；（3)作用于呼吸系統(tǒng)，如增強耐缺氧能力；(4)抑菌；（5)抗 肝損傷等。甘松主要成分之一甘松新酮，也是甘松特有的化學(xué)成分，具有降血壓、抗癲癇、中 樞抑制作用、抗抑郁、促神經(jīng)生長和抗腫瘤等多種生物活性。甘松中存在一系列甘松新酮衍 生物，包括環(huán)氧化產(chǎn)物、過氧五元環(huán)開環(huán)產(chǎn)物等，特別是少量或微量成分鮮有報道，生物活 性及相關(guān)機制還有待進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供甘松新酮類化合物一一甘松新酮及其衍生 物，具體為：甘松新酮、1 (10)-環(huán)氧甘松新酮、甘松新酮二醇、甘松雙酮A和甘松過氧酮A。
[0007] 本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問題在于提供上述甘松新酮及其衍生物的制備方法。
[0008] 本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問題在于提供上述甘松新酮及其衍生物的應(yīng)用。
[0009] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是：
[0010] 甘松新酮及其衍生物，為甘松新酮、1 (10)-環(huán)氧甘松新酮、甘松新酮二醇、甘松雙 酮A和甘松過氧酮A，具有下述結(jié)構(gòu)式（I)式：
[0012] 其中，A:甘松新酮[I (10)-en_9-0x0-7 β，ll-cycloperoxo-] ;B: I (10)-環(huán) 氧甘松新酮[I(10)-epoxy-9-0x0-7β， 11-cycloperoxo-] ;C:甘松新酮二醇 [1(10)111-9-0叉0-7 0，11-(1;[01-];〇:甘松雙酮4[1(10)-611-7,9-(1;[0叉0-11-01-]出：甘松 過氧酮 A[1 (10)，8 (9) -diene-7-0x0-9-hydroperoxy-ll-0l-] 〇
[0013] 優(yōu)選的，上述甘松新酮及其衍生物，其物理化學(xué)和波譜性質(zhì)為：
[0014] 甘松新酮（nardosinone，A)，無色結(jié)晶（乙酸乙酯）。UV(MeOH) λΜχ: 197、216、251、 288、334nm;CD(c 0.05, MeOH) λ (Δ ε) :211(-0. 57)、240(+0. 56)、280(-0. 36)、343(+0. 18) nmjH-NMlUCDClh^OMHzhSH 7.03(lH，dd，J = 2.8,4.8Hz，H-l)，2.22,2.31(2H，m，eac h，H-2)，I. 53 (2H，m，H-3)，I. 93 (1H，m，H-4)，2. 92 (1H，d，J = 9. 6Hz，H-6)，4. 89 (1H，m，H-7 )，2. 87 (1H，dd，J = 7. 6, 18. 4Hz，H-8 a )，2. 63 (1H，dd，J = I. 6, 18. 8Hz，H-8 β )，I. 37 (3 H，s, 12-CH3)，I. 17 (3H, s, 13-CH3)，I. 12 (3H, s, H-CH3)，I. 01 (3H, d, J = 6. 8Hz, 15-CH3); 13C-NMR(O)Cl3, 100MHz) : δ c 137. 8 (C-I)，25. 9 (C-2)，25. 8 (C-3)，33. I (C-4)，38. 5 (C-5)，59 ? 7 (C-6)，78. I (C-7)，40. 0 (C-8)，196. 5 (C-9)，140.1 (C-IO)，85. I (C-Il)，22. 2 (C-12)，23. 9 (C-13)，26. 9 (C-14)，16. 20 (C-15)。
[0015] I (10) -環(huán)氧甘松新酮[I (lO)-epoxynardosinone，B]，無色結(jié)晶（乙酸乙 酯）。UV(MeOH) λ隨：197.0nm; [a]f +1.27 (c 1.0, MeOH) ;CD(c 0.05, MeOH) λ (Δ ε )： 196. 5 (-1. 33) ^ 2 15. 5(-2. 42) nm ；(-)-ESI-MS :m/z 265. 25 [Μ-Η]、 (+)-ESI-MS:m/z 267. 33[Μ+Η]+;氫譜、碳譜核磁數(shù)據(jù)見【具體實施方式】部分表1和表2。
[0016] 甘松新酮二醇（nardosinonediol, C)，無色結(jié)晶（二氯甲燒）。UV(MeOH) λΜΧ: 197、239、333nm ;CD(c 0· 05，Me0H) λ (Δ ε ) :233(-0. 29)、241(-0. 27)、282(-0· 80)、 SSTH-IDnm51H-NMR(DMSO-C^eOOMHz)=SH 6.60 (lH，d，J = 9·1Ηz，Η-1) ,1.46 (lH，t，J =15.7,8. 3Hz，H-2) ,2.16 (lH，dd，J = 12.1,3. 9Hz，H-3) ,2.21 (lH，m，H-4) ,2.21 (lH，d ，J = 12.8Hz，H-6)，4.44(1? m，H-7)，2.64(1? d，J = 12.1Hz，H-8)，0.90(3? s，H-12)， 1.22(3H，s，H-13)，0.92(3H，s，H-14)，1.31(3H，d，J = 4.8Hz，H-15) ;13C-NMR(DMS0-d6，10 0MHz) : δ c 135. 2 (C-I)，26. 0 (C-2)，25. 0 (C-3)，32. I (C-4)，39. 9 (C-5)，52. 7 (C-6)，66. 4 ( C-7)，45. 6 (C-8)，199. 3 (C-9)，142. 3 (C-10)，77. 5 (C-Il)，16. 2 (C-12)，30. 2 (C-13)，25. 6 (C-14)，35. 2 (C-15)〇
[0017] 甘松雙酮A (nardosinodione A, D)，無色油狀物（乙酸乙酯）。UV (MeOH) λ nax: 198. 0、295. 5nm ; [ α ] +4. 67 (c 0.1 , MeOH) ；CD (c 0.05, MeOH) λ (Δ ε ) :203. 0(-0· 67)、209(-0· 78)、225· 0(-0· 14)、245· 0(-0· 39)、293· 5(+1. 57)、 329.0(-1.51)nm;(-)-ESI-MS m/z 249·25[Μ-Η]、（+)-ESI-MS:m/z 251·37[Μ+Η] + ;氫譜、碳 譜核磁數(shù)據(jù)見【具體實施方式】部分表1和表2。
[0018] 甘松過氧酮A (9-hydroperoxynardostachone A, E)，淡黃色油狀物（乙酸乙 酯）〇 UV(MeOH) λ_:197·5、269·5ηπι ; [α]$ +55.33 (c 0.3，Me0H) ;CD(c 0.05，Me0H) λ (Δ ε ):279. 5(+1. 13)、326. 5(-0. 91)nm;(-)-ESI-MSm/z 265. 19[M-H]、（+)-ESI-MS m/ z 267. 36[M+H]+;氫譜、碳譜核磁數(shù)據(jù)見【具體實施方式】部分表1和表2。
[0019] 上述甘松新酮及其衍生物，歸屬于nardosinone-型倍半砲，母核上7,11-位形成 五元過氧環(huán)，1，10-位形成雙鍵或發(fā)生環(huán)氧化（A和B);或者五元環(huán)打開，11位羥基取代， 7位羥基或酮羰基取代，1，10-位形成雙鍵，9位酮羰基或烯醇過氧羥基取代（C、D和E)，其 中，7、11-位羥基可被取代基酰化、酚醚化、酰胺化成酯、酚醚或含氮化合物；9-位過氧羥基 具有有機過氧酸的性質(zhì)。其化學(xué)結(jié)構(gòu)特點是：土青木香烷型倍半萜母核上7,11-位形成五 元過氧環(huán)，1，10-位形成雙鍵或發(fā)生環(huán)氧化；或者11位羥基取代，7位羥基或酮羰基取代，1， 10-位形成雙鍵，9位酮羰基或烯醇羥基取代。
[0020] 上述甘松新酮及其衍生物的制備方法，具體步驟如下：
[0021] (1)甘松根莖每20kg用70% (v/v)乙醇浸提3次，每次48小時，合并提取液，減 壓濃縮，得粗提物浸膏；然后用70% (v/v)乙醇熱提上述藥渣3次，每次2小時，合并提取 液，減壓濃縮，再次得粗提物浸膏；合并兩次粗提物得總浸膏；
[0022] (2)所得粗提物總浸膏，經(jīng)水分散后，分別用等體積的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇 依次萃取，分別得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水層；
[0023] (3)將石油醚部位經(jīng)硅膠柱色譜（100-200目拌樣硅膠與200-300目柱硅膠重量比 為4:33)，石油醚：乙酸乙酯（體積比）=100:0(100:0指100%石油醚洗脫情況）-100:50 溶劑系統(tǒng)梯度洗脫，得22個流份Fr