的化合物：Val-Tyr-Val-Cit-Phe_W(Cit = 瓜氨酸）。
[0072] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含下式的化合物的藥物組合物和載體：
[0074] 其中：i)η是氨基酸殘基的數(shù)量，其是在范圍3-8中的整數(shù)；ii)組成氨基酸是獨(dú) 立選擇的天然或非天然氨基酸的單一對(duì)映體；iii)R2和R3獨(dú)立地選自氫、低級(jí)烷基、支鏈 烷基、羥烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)、芳基、雜芳基、酰基、取代或未取代的苯甲酰基、烷基或芳基磺 ?；ɡ缂谆酋；蚣妆交酋；┖桶被柞；ɡ鏐0C) ;iV) Rl選自-OH和-NR4-R5 ; v)R4和R5獨(dú)立地選自氫、低級(jí)烷基、芳基、環(huán)烷基、芳族雜環(huán)、吡啶、四唑；可選擇地，R4和 R5被連接作為雜環(huán)例如哌啶；吡咯烷；嗎啉；哌嗪；經(jīng)取代的雜環(huán)例如4-甲基哌嗪；或稠雜 環(huán)例如二氫喹啉或二氫吲哚。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物還包含帶負(fù)電的極性基團(tuán)。在 一個(gè)實(shí)施方案中，所述帶負(fù)電的極性基團(tuán)選自摻入側(cè)鏈Sl、S2或S3中的O-磷酸鹽、O-硫 酸鹽、5-0-和5-N-四唑的至少一種。在一個(gè)實(shí)施方案中，側(cè)鏈SI、S2或S3包含磷酸絲氨 酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，側(cè)鏈Sl包括-CH2-NH-四唑。在一個(gè)實(shí)施方案中，C-末端包含甘 氨酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物還包含他汀類(lèi)藥物。在一個(gè)實(shí)施方案中，他汀類(lèi)藥物 包括但不限于阿托伐他汀、羅蘇伐他汀和/或辛伐他汀。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物包 含抗糖尿病藥物。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物包含心血管藥物。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥 物組合物包含依折麥布（Zetia(K:),在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物包含抗高血壓藥，其 包括但不限于苯磺酸氨氯地平》。.在一個(gè)實(shí)施方案中，抗糖尿病藥物包括但不 限于西他列汀（Jamivia? )和/或二甲雙胍。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物包含約3-8 個(gè)之間的氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物是六個(gè)氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述 化合物小于l，300Da。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物在約466-1067Da之間。在一個(gè)實(shí)施 方案中，所述化合物在約175-1，OOODa之間。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物包含合成肽。
[0075] 定義
[0076] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"化合物"或"配體"是指包含能夠相互作用（即，例如附著、結(jié) 合等）于結(jié)合配偶體從而改變?cè)摻Y(jié)合配偶體的生物學(xué)功能的天然氨基酸的任何外源分子。 化合物/配體可包括但不限于，包含至少兩個(gè)肽鍵的氨基酸鏈、抗體、蛋白、肽和/或三肽。 這樣的化合物/配體可通過(guò)取代基來(lái)衍生化，所述取代基包括但不限于羥基、硫、胺、酰胺、 醚、酯、脂肪鏈、芳環(huán)、脂族環(huán)、經(jīng)取代的芳環(huán)和/或經(jīng)取代的脂族環(huán)。這樣的化合物/配體 可以是抑制劑化合物/配體，或增強(qiáng)劑化合物/配體?；衔?配體還可包括"藥物"，從而 指的是能夠被施用的實(shí)現(xiàn)期望效應(yīng)的任何藥理活性物質(zhì)。藥物或化合物/配體可以是合成 的或天然存在的。
[0077] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"合成配體"，是指包含氨基酸的分子，所述分子是配體，并且被 離體設(shè)計(jì)和隨后使用體外、體內(nèi)或體外和體內(nèi)組合的手段來(lái)合成，以產(chǎn)生具有預(yù)先指定的 特征（例如電荷、形狀、分子量）的分子，并且其與另一天然存在的生物分子結(jié)合以形成復(fù) 合物。優(yōu)選地，這些合成配體比靶天然生物分子更小，更優(yōu)選這些合成配體小于1，300Da，并 且更優(yōu)選是介于350和1，250Da之間。
[0078] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"合成肽"是指約3-8個(gè)氨基酸并且范圍在約350-1，500Da之間 的非天然氨基酸序列。優(yōu)選是約4-5個(gè)氨基酸并且范圍在約550-1，OOODa之間的非天然氨 基酸序列。例如，合成肽是六個(gè)氨基酸并且小于l，300Da，例如，在約466-1067Da之間。優(yōu) 選地，合成肽按照實(shí)施例V制備。
[0079] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"變構(gòu)位點(diǎn)"是指不是天然化學(xué)活性/受體結(jié)合位點(diǎn)的配體結(jié) 合位點(diǎn)，其在結(jié)合于外源性配體時(shí)，改變蛋白（作為酶）的形狀和活性。例如，"變構(gòu)增強(qiáng)劑 肽"是指結(jié)合至變構(gòu)位點(diǎn)從而可增加蛋白的天然活性和/或各自親和力的配體（例如PCSK9 變構(gòu)增強(qiáng)劑肽）。可選擇地，"變構(gòu)抑制劑肽"是指結(jié)合至變構(gòu)位點(diǎn)從而可降低蛋白的天然 活性和/或各自親和力的配體（例如PCSK9變構(gòu)抑制劑肽）。例如，結(jié)合位點(diǎn)包括PCSK9蛋 白的 His417, Lys421，Pro446, Trp453, Gln454, Glu628, Gly629, Asn652和 Thr 653。
[0080] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"正構(gòu)位點(diǎn)"是指配體（例如肽）對(duì)于受體、結(jié)合和/或催化位 點(diǎn)的原始的未經(jīng)調(diào)節(jié)的結(jié)合位點(diǎn)。
[0081 ] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"構(gòu)象"是指氨基酸序列的三維立體化學(xué)構(gòu)型。例如，任何特定 的構(gòu)象由氨基酸序列中個(gè)體氨基酸之間的空間相互作用、疏水相互作用、氫鍵合、電化學(xué)鍵 合和/或鹽橋相互作用之間的熱力學(xué)平衡導(dǎo)致。
[0082] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"構(gòu)象轉(zhuǎn)變"是指可將第一熱力學(xué)平衡（構(gòu)象1)改變成第二熱 力學(xué)平衡（構(gòu)象2)或增強(qiáng)單獨(dú)蛋白和/或蛋白-配體復(fù)合物和/或蛋白-蛋白復(fù)合物內(nèi)的 亞穩(wěn)折疊狀態(tài)的動(dòng)態(tài)范圍和/或類(lèi)型和/或數(shù)量的外源力或分子（例如，抑制劑肽）的引 入。此外，構(gòu)象轉(zhuǎn)變可主要在某些特定的外部條件（PH、溫度等）下和/或在單獨(dú)蛋白或多 部分復(fù)合物的壽命內(nèi)的特定期間（包括但不限于優(yōu)先用于分子識(shí)別、初始結(jié)合相互作用、 誘導(dǎo)契合相互作用，功能活性和/或解離的條件）表現(xiàn)出來(lái)。
[0083] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"EGFA"是指低密度脂蛋白受體的最氨基EGF樣結(jié)構(gòu)域。例如， EGF樣結(jié)構(gòu)域可包括LDLR受體的胞外部分。
[0084] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"LDL-R"和"LDLR"是指低密度脂蛋白受體的縮寫(xiě)。該縮寫(xiě)可 以是關(guān)于整個(gè)LDL-R受體蛋白或其任何部分。LDL-R駐留在細(xì)胞表面上并且可結(jié)合低密度 脂蛋白，使得LDL-R/LDL復(fù)合物內(nèi)化在細(xì)胞（即，例如肝細(xì)胞）內(nèi)，在其中LDL被釋放并且 LDL-R再循環(huán)回到細(xì)胞表面。
[0085] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"結(jié)合界面"是指至少兩種不同的分子的官能團(tuán)（即，例如羥 基、酰胺、胺、羧基、脒、胍、烴、磺?；龋┲g的吸引相互作用（即，例如氫鍵合、靜電相互 作用、疏水相互作用等）的任何集合。吸引力的集合形成穩(wěn)定的分子平面從而在至少兩個(gè) 分子之間形成"結(jié)合界面"。
[0086] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"誘導(dǎo)契合"是指需要受體構(gòu)象改變的肽的任何接受。這樣的 構(gòu)象可通過(guò)氨基酸側(cè)鏈和柔性環(huán)的平移/旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)促進(jìn)，從而重新排列靜電和/或疏水結(jié) 構(gòu)域。
[0087] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"復(fù)合物"或"組成物"是指通常由弱靜電鍵而不是通過(guò)共價(jià)鍵 連接的兩個(gè)或更多個(gè)離子或分子的任何化學(xué)締合。例如，復(fù)合物或組成物可在如本文所述 的肽和PCSK9氨基酸序列之間形成，從而產(chǎn)生肽/PCSK9氨基酸序列復(fù)合物或組合物。任選 地，這樣的復(fù)合物或組成物還可包括但不限于LDLR氨基酸序列或其任何部分，包括但不限 于EGFA區(qū)。
[0088] 如本文所使用的術(shù)語(yǔ)"氫鍵"，一個(gè)極性分子中（如水的）的氫原子與同一或不同 極性物質(zhì)的通常另一分子中的小電負(fù)性原子（如氧、氮或氟的）之間的靜電吸引。
[0089] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"鹽橋"是指相互作用例如氫鍵合和/或靜電相互作用的任何 交互或組合，其以使帶電荷部分重疊的方式排列陽(yáng)離子和陰離子化學(xué)結(jié)構(gòu)。
[0090] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"相互作用"是指一個(gè)分子和/或官能團(tuán)可對(duì)另一分子和/或 官能團(tuán)具有的任何效應(yīng)。這樣的效應(yīng)可包括但不限于，空間（即，例如物理的）、靜電（即， 例如電吸引或排斥）、電磁、親水或疏水效應(yīng)。
[0091] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"重疊"是指分子以一個(gè)分子的電子結(jié)構(gòu)在另一分子的頂部并 延伸通過(guò)該分子的邊緣的方式的任何定位，或被以這種方式定位。
[0092] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"高膽固醇血癥"是指其中血液膽固醇水平升高在臨床推薦的 水平之上的任何醫(yī)學(xué)病狀。例如，如果膽固醇用低密度脂蛋白（LDL)進(jìn)行測(cè)量，高膽固醇血 癥可在所測(cè)量的LDL水平高于例如約70mg/dl時(shí)存在?；蛘?，如果膽固醇用游離血漿膽固醇 進(jìn)行測(cè)量，高膽固醇血癥可在所測(cè)量的游離膽固醇水平高于例如約200-220mg/dl時(shí)存在。 [0093] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"處于…的風(fēng)險(xiǎn)"是指由患者表現(xiàn)出的可使患者易患特定疾病 或痛苦的醫(yī)學(xué)病狀或一組醫(yī)學(xué)病狀。例如，這些病狀可由包括但不限于行為、情緒、化學(xué)、生 化或環(huán)境影響的影響導(dǎo)致。
[0094] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"有效量"是指包含實(shí)現(xiàn)臨床有益結(jié)果（即，例如癥狀的減少） 的治療劑的藥物組合物的特定量。這樣的組合物的毒性和治療功效可通過(guò)在細(xì)胞培養(yǎng)物或 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中的標(biāo)準(zhǔn)制藥程序（例如，用于測(cè)定LD 5。（對(duì)50%的群體致死的劑量）和ED5。（在 50%的群體中治療有效的劑量））測(cè)定。毒性和治療效應(yīng)之間的劑量比是治療指數(shù)，其可表 示為比率LD avED5。。表現(xiàn)出高治療指數(shù)的化合物是優(yōu)選的。從這些細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定和附加動(dòng) 物研究獲得的數(shù)據(jù)可用于配制一系列劑量的供人類(lèi)使用。這類(lèi)化合物的劑量?jī)?yōu)選處于包括 具有很少或沒(méi)有毒性的Η) 5。的循環(huán)濃度范圍內(nèi)。所述劑量在此范圍內(nèi)取決于所用的劑型、 患者的敏感性和施用途徑而變化。
[0095] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"癥狀"是指由患者觀察到的疾病或身體障礙的任何主觀或客 觀證據(jù)。例如，主觀證據(jù)通?；诨颊咦晕覉?bào)告，并且可包括但不限于疼痛、頭痛、視力障 礙、惡心和/或嘔吐?？蛇x擇地，客觀證據(jù)通常是醫(yī)療測(cè)試的結(jié)果，包括但不限于體溫、全血 計(jì)數(shù)、脂質(zhì)面板、甲狀腺面板、血壓、心率、心電圖、組織和/或身體成像掃描。
[0096] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"疾病"和/或"病癥"是指活的動(dòng)物或植物體或其部分之一的 正常狀態(tài)的任何損害，其打斷或改變重要功能的執(zhí)行。通常通過(guò)辨別體征和癥狀來(lái)顯示，其 通常是對(duì)下列的應(yīng)答：i)環(huán)境因素（如營(yíng)養(yǎng)不良、工業(yè)危害或氣候）；ii)特定傳染源（如 蟲(chóng)、細(xì)菌或病毒）；iii)生物體的先天缺陷（如遺傳異常）；和/或iv)這些因素的組合。 [0097] 術(shù)語(yǔ)"減少"、"抑制"、"減小"、"抑制"、"降低"、"防止"及語(yǔ)法等同體（包括"更低"、 "更小"等）在關(guān)于未治療的受試者相對(duì)于經(jīng)治療的受試者中任何癥狀的表述時(shí)，意指經(jīng)治 療的受試者中癥狀的數(shù)量和/或大小比在未治療的受試者中在由任何醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)人員認(rèn)可 為臨床相關(guān)的任何量上更低。在一個(gè)實(shí)施方案中，經(jīng)治療受試者中癥狀的數(shù)量和/或大小 至少10%低于、至少25%低于、至少50%低于、至少75%低于和/或至少90%低于未治療 受試者中癥狀的數(shù)量和/或大小。
[0098] 術(shù)語(yǔ)"增加"、"增強(qiáng)"、"升高"及語(yǔ)法等同體（包括"更高"、"更大"等）在關(guān)于未 治療的受試者相對(duì)于經(jīng)治療的受試者中任何癥狀的表述時(shí)，意指經(jīng)治療的受試者中癥狀的 數(shù)量和/或大小比在未治療的受試者中在由任何醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)人員認(rèn)可為臨床相關(guān)的任何量 上更高。經(jīng)治療受試者中癥狀的數(shù)量和/或大小至少10%高于、至少25%高于、至少50% 高于、至少75%高于和/或至少90%高于未治療受試者中癥狀的數(shù)量和/或大小。
[0099] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"附著"是指介質(zhì)（或載體）和藥物之間的任何相互作用。附 著可以是可逆或不可逆的。這樣的附著包括但不限于共價(jià)鍵合、離子鍵合、范德華力或摩擦 等。如果藥物被浸漬、摻入、涂覆、在懸浮液中、在乳劑中、在溶液中、混合于等，則藥物是附 著至介質(zhì)（或載體）的。
[0100] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"被施用"或"施用"是指提供組合物給患者以使得該組合物具 有對(duì)患者的預(yù)期效應(yīng)的任何方法。施用的示例性方法是通過(guò)直接的機(jī)制例如局部組織施用 (即，例如血管外放置）、口服、透皮貼劑、局部、吸入、栓劑等。
[0101] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"患者"或"受試者"是人或動(dòng)物并且不需要是住院的。例如， 門(mén)診病人、休養(yǎng)所中的人是"患者"?；颊呖砂魏文挲g的人或非人動(dòng)物，并因此包括成人 和青少年（即，兒童）。并非意欲的是，術(shù)語(yǔ)"患者"意味著需要醫(yī)學(xué)治療，因此，患者可自愿 或不自愿成為試驗(yàn)的一部分，無(wú)論是臨床還是支持基礎(chǔ)科學(xué)研究。
[0102] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"親和力"是指兩個(gè)或多個(gè)分子組裝以形成多部分復(fù)合物和保 持組裝在該復(fù)合物中的熱力學(xué)趨勢(shì)的測(cè)量。例如，SRX55配體對(duì)PCSK9有高親和力并且在 熱力學(xué)上有利于形成復(fù)合物。所理解的是，條件（例如，在受體內(nèi)化過(guò)程中的pH)的變化， 例如，LDL對(duì)LDLR的親和力的降低和兩個(gè)分子可彼此解離或分離。
[0103] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"來(lái)源于"是指化合物或氨基酸序列的來(lái)源。在一個(gè)方面，化合 物或氨基酸序列可來(lái)源于生物體或特定的物種。在另一個(gè)方面，化合物或氨基酸序列可來(lái) 源于更大的復(fù)合物或序列。在另一個(gè)方面，化合物或序列可來(lái)源于在自然界中發(fā)現(xiàn)的氨基 酸序列的部分或全部的化學(xué)修飾。
[0104] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"蛋白"是指任何的眾多天然存在的極其復(fù)雜的物質(zhì)（如酶或 抗體），其由通過(guò)肽鍵連接的氨基酸殘基組成，包含元素碳、氫、氮、氧、通常地硫。一般而言， 蛋白包含具有數(shù)百范圍內(nèi)量級(jí)的氨基酸。
[0105] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"肽"是指由一個(gè)酸的氨基與另一個(gè)的羧基的組合而來(lái)源于三 個(gè)或更多個(gè)氨基酸并且通常由蛋白的部分水解獲得的任何的各種酰胺。一般而言，肽包含 具有數(shù)十或更小的范圍內(nèi)量級(jí)的氨基酸。
[0106] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)上"或"藥理學(xué)上可接受的"是指當(dāng)施用于動(dòng)物或人時(shí)不 產(chǎn)生不利的、過(guò)敏的或其它的不良反應(yīng)的分子實(shí)體和組合物。
[0107] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)上可接受的載體"包括任何和所有的溶劑或分散介質(zhì)，包 括但不限于水、乙醇、多元醇（例如，甘油、丙二醇，、和液體聚乙二醇等）、其合適的混合物 以及二甲基亞砜、植物油、包衣、等滲劑和吸收延遲劑、脂質(zhì)體、商購(gòu)可得的清潔劑等。補(bǔ)充 的生物活性成分也可被摻入至這些載體中。
[0108] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"純化的"或"分離的"可指已經(jīng)歷處理（即，例如分餾）以除 去各種其它組分的肽組合物，并且該組合物基本上保留其表達(dá)的生物學(xué)活性。
[0109] 當(dāng)使用術(shù)語(yǔ)"基本上純化的"時(shí)，該指稱(chēng)將指其中蛋白或肽形成組合物的主要成 分的組合物，例如構(gòu)成組合物的約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、約95%或更多 (即，例如重量/重量和/或重量/體積）。術(shù)語(yǔ)"純化至均質(zhì)"用于包括已被純化至"表觀 均質(zhì)性"以使得存在單一蛋白種類(lèi)（即，例如基于SDS-PAGE或HPLC分析）的組合物。純化 的組合物不意欲指可殘留一些微量雜質(zhì)。
[0110] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"基本上純化的"是指從它們的天然環(huán)境中移出、隔離或分離，并 且至少60%、優(yōu)選75%、更優(yōu)選90%不含與它們天然伴隨的其它組分的分子例如氨基酸序 列。因此"分離的多肽"是基本上純化的多肽。
[0111] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"生物相容的"是指任何材料不引起宿主中的實(shí)質(zhì)有害應(yīng)答。當(dāng) 異物被引入到活體中時(shí)，總會(huì)擔(dān)心該物質(zhì)會(huì)誘導(dǎo)免疫應(yīng)答例如炎性反應(yīng)，其將對(duì)宿主有負(fù) 面效應(yīng)。在本發(fā)明的上下文中，生物相容性根據(jù)針對(duì)其設(shè)計(jì)的應(yīng)用進(jìn)行評(píng)估：例如；繃帶被 認(rèn)為是與皮膚生物相容的，而植入的醫(yī)療設(shè)備被認(rèn)為是與身體的內(nèi)部組織生物相容的。優(yōu) 選地，生物相容性材料包括但不限于可生物降解的和生物穩(wěn)定的材料。
[0112] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"氨基酸序列"和"多肽序列"可互換使用并指氨基酸的序列。
[0113] 蛋白的"變體"被定義為在一個(gè)或多個(gè)氨基酸上不同于多肽序列或多肽序列的任 何同源物的氨基酸序列。變體可具有"保守"改變，其中取代的氨基酸具有相似的結(jié)構(gòu)或化 學(xué)性質(zhì)，例如，異亮氨酸對(duì)亮氨酸的置換。較少見(jiàn)地，變體可具有"非保守"改變，例如，用色 氨酸置換甘氨酸。類(lèi)似的微小變化還可包括氨基酸缺失或插入（即添加）或兩者。
[0114] "缺失"被定義為其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基分別不存在的氨基酸序列的改變。
[0115] "插入"或"添加"是已導(dǎo)致一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的添加的氨基酸序列的變化。
[0116] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"衍生物"是指氨基酸的任何化學(xué)修飾。這樣的修飾的示例會(huì) 包括但不限于烷基、芳基、羥基、巰基、亞砜基（sulfoxyl)、磺酰基、?；⒘柞；?、烷氧基、氨 基或氨基雜環(huán)基團(tuán)對(duì)氫的置換。例如，酪氨酸是苯丙氨酸的4-羥基氨基酸衍生物，并且磷 酸絲氨酸是絲氨酸的0-磷酸衍生物。其他可能的化學(xué)修飾可包括但不限于C-末端酰胺和 ?；蚧酋；鵑末端修飾。
[0117] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"結(jié)合"包括任何物理附著或緊密締合，其可以是永久的或暫時(shí) 的。通常，氫鍵合、疏水力、范德華力、共價(jià)和離子鍵合等的相互作用促進(jìn)所測(cè)量/影響的目 標(biāo)分子和分析物/靶之間的物理附著。"結(jié)合"相互作用可以是簡(jiǎn)述為其中結(jié)合引起化學(xué)反 應(yīng)發(fā)生的情形。這在結(jié)合成分是酶并且分析物/靶是酶的底物時(shí)是典型的。結(jié)合劑和分析 物/靶之間的接觸引起的反應(yīng)也在用于本發(fā)明目的的結(jié)合的定義范圍內(nèi)。
[0118] 附圖簡(jiǎn)述
[0119] 圖1示出如通過(guò)FACS在HuH7細(xì)胞中測(cè)量的WT PCSK9抑制的示例性數(shù)據(jù)。HuH7 細(xì)胞在單獨(dú)的或與100 μ M的各種SRX肽混合的0. 75 μ g/ml PCSK9-WT蛋白（WT)的不存在 (Cnt)或存在下溫育18小時(shí)。細(xì)胞表面上LDLR的水平通過(guò)使用抗人LDLR Ab和用Alexa647 標(biāo)記的合適的第二Ab的FACS來(lái)測(cè)量。相對(duì)于Cnt報(bào)告細(xì)胞表面LDLR。活性的％抑制計(jì)算 為[SRX-WT]/[Cnt-WT]X100。
[0120] 圖2示出眾多PCSK9變構(gòu)調(diào)節(jié)肽對(duì)WT PCSK9活性的示例性數(shù)據(jù)。HuH7細(xì)胞在單 獨(dú)的或與IOOuM的各種SRX肽混合的1 μ g/ml PCSK9-WT蛋白（WT)的不存在（Cnt)或存 在下接種于96孔板中進(jìn)行總共20小時(shí)。16小時(shí)后，將dil-LDL(5ug/ml)加入到溫育混合 物中。4小時(shí)后，測(cè)量熒光（Ex :520nm/Em:575nm;截?cái)啵?50nm)。dil-LDL吸收被計(jì)算為針 對(duì)細(xì)胞數(shù)量校正過(guò)的RFU。
[0121] 圖3示出眾多PCSK9變構(gòu)調(diào)節(jié)肽對(duì)突變PCSK9蛋白（"功能獲得"（G0F)-D374Y) 調(diào)節(jié)的示例性數(shù)據(jù)。HuH7細(xì)胞在單獨(dú)的或與IOOuM的各種SRX肽混合的0. 5μg/ml PCSK9-D374Y蛋白（DY)的不存在（Cnt)或存在下接種于96孔板中進(jìn)行總共20小時(shí)。16小 時(shí)后，將dil-LDL(5ug/ml)加入到溫育混合物中。4小時(shí)后，測(cè)量熒光（Ex :520nm/Em:575nm ; 截?cái)啵?50nm)。dil-LDL吸收被計(jì)算為針對(duì)細(xì)胞數(shù)量校正過(guò)的RFU。
[0122] 圖4示出顯示受SRX55的劑量依賴(lài)性抑制的突變PCSK9蛋白（"功能獲 得"G0F-D374Y)調(diào)節(jié)的示例性數(shù)據(jù)，如由HuH7細(xì)胞中的dil-LDL吸收所測(cè)量的。HuH7細(xì)胞 在單獨(dú)的或與遞增濃度的各種SRX肽混合的0. 5μg/ml PCSK9G0F-D374Y蛋白（DY)的不存 在（Cnt)或存在下接種于96孔板中進(jìn)行總共20小時(shí)。16小時(shí)后，將dil-LDL(5ug/ml)加 入到溫育混合物中。4小時(shí)后，測(cè)量熒光（Ex :520nm/Em:575nm;截?cái)啵?50nm)。dil-LDL吸 收被計(jì)算為針對(duì)細(xì)胞數(shù)量校正過(guò)的RFU。
[0123] 圖5示出顯示受SRX55的劑量依賴(lài)性抑制的突變PCSK9蛋白（"功能獲 得"G0F-D374Y)調(diào)節(jié)的示例性數(shù)據(jù)，如由H印G2細(xì)胞中的dil-LDL吸收所測(cè)量的。！fepG2細(xì) 胞在單獨(dú)的或與遞增濃度的各種SRX55肽混合的2μg/ml PCSK9G0F-D374Y蛋白（DY)的不 存在（Cnt)或存在下接種于96孔板中進(jìn)行總共20小時(shí)。16小時(shí)后，將dil-LDL(5ug/ml) 加入到溫育混合物中。4小時(shí)后，測(cè)量熒光（Ex :520nm/Em:575nm;截?cái)啵?50nm)。dil-LDL 吸收被計(jì)算為針對(duì)細(xì)胞數(shù)量