一種用于內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)的新的三萜化合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從珍珠菜的干燥全草中分離得到的一種具有 內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用的三萜類(lèi)化合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 從天然產(chǎn)物中尋找結(jié)構(gòu)新穎或藥理作用獨(dú)特的生物活性物質(zhì)，并以此做為先導(dǎo)化 合物通過(guò)結(jié)構(gòu)改造等方法發(fā)現(xiàn)新藥已經(jīng)是公認(rèn)的新藥研發(fā)的重要手段之一。在1981-2010 年間批準(zhǔn)上市的1073種小分子藥物中，有50%來(lái)源于天然產(chǎn)物或者與天然的先導(dǎo)結(jié)構(gòu)有 關(guān)，其中6%為天然化合物的直接應(yīng)用。自上世紀(jì)開(kāi)始，許多在臨床上廣泛應(yīng)用的藥物均從 天然產(chǎn)物中發(fā)掘出來(lái)，例如青蒿素、紫杉醇等。
[0003] 我國(guó)運(yùn)用天然藥物具有悠久的歷史，并形成了自己獨(dú)特醫(yī)學(xué)理論，很多傳統(tǒng)的中 藥方劑至今還在臨床應(yīng)用中表現(xiàn)出良好的效果。與此同時(shí)，我國(guó)地域廣闊，各地氣象差異懸 殊，天然產(chǎn)物資源豐富，種類(lèi)繁多，中藥資源更是多達(dá)12000多種。因此，隨著天然藥物愈來(lái) 愈受到重視，從中草藥中提取活性化學(xué)成分，經(jīng)藥理、臨床試驗(yàn)確定其療效，然后制成各種 制劑供臨床使用，已經(jīng)成為我國(guó)加入WT0以后，發(fā)現(xiàn)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)新藥、壯大我國(guó)醫(yī)藥產(chǎn)業(yè) 的重要手段。
[0004] 珍珠菜LysimachiaclelhroidesDuby為報(bào)春花科珍珠菜屬植物，又名扯根菜，紅 根草等。全草入藥，廣泛分布于華北及長(zhǎng)江以南各省區(qū)，具有清熱解毒、活血調(diào)經(jīng)、利水消腫 等功效，在民間用于治療水腫、熱淋、黃疽、帶下、經(jīng)閉、跌打骨折、乳痛療拖、蛇咬傷等。現(xiàn)代 科學(xué)研宄證明珍珠菜屬主要化學(xué)成分為黃酮和三萜皂苷，還有苯駢內(nèi)酯、醌類(lèi)、酚酸、生物 堿、甾體皂苷及木脂素等，主要具有細(xì)胞毒、抗菌消炎、免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從珍珠菜的干燥全草中分離得到的一種具有內(nèi)皮細(xì)胞 保護(hù)作用的三萜類(lèi)化合物及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過(guò)下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0008]
[0009] 所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：(a)將珍珠菜的干燥全草粉 碎，用75~85 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和 水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟 (a)中乙酸乙酯萃取物用大孔樹(shù)脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用75%乙醇洗 脫10個(gè)柱體積，收集75 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得75 %乙醇洗脫物浸膏；（c)步驟（b)中 75 %乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1、45:1、25:1、12:1和1:1的二氯 甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟（c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用 體積比為20:1、12:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟（d)中組分 2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶液等度洗脫， 收集8~10個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I)。
[0010] 進(jìn)一步地，步驟（a)中，用80%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0011] 進(jìn)一步地，所述大孔樹(shù)脂為AB-8型大孔吸附樹(shù)脂。
[0012] 藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學(xué)上可接受的載體。
[0013] 所述的化合物（I)在制備內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 所述的藥物組合物在制備內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、 對(duì)人和動(dòng)物無(wú)毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過(guò)口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時(shí)，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無(wú)菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說(shuō)明】
[0018] 圖1為化合物（I)結(jié)構(gòu)式；
[0019] 圖2為化合物（I)理論E⑶值與實(shí)驗(yàn)E⑶值比較。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性?xún)?nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì) 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0021] 實(shí)施例1 :化合物（I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0022] 試劑來(lái)源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購(gòu)自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購(gòu)自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0023] 制備方法：(a)珍珠菜的干燥全草（10kg)粉碎，用80%乙醇熱回流提?。?5LX3 次），合并提取液，濃縮至無(wú)醇味（3L)，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和 水飽和的正丁醇（3LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（398g)和正丁 醇萃取物；(b)步驟（a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔樹(shù)脂除雜，先用10%乙醇洗脫8 個(gè)柱體積，再用75 %乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集75 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得75 %乙醇洗 脫物浸膏（163g) ;(c)步驟（b)中75%乙醇洗脫浸膏用200-300目正相硅膠分離，依次用體 積比為85:1 (8個(gè)柱體積）、45:1 (8個(gè)柱體積）、25:1 (8個(gè)柱體積）、12:1 (10個(gè)柱體積）和 1:1(5個(gè)柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；(d)步驟（c)中組分4(49g) 用200-300目正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1 (8個(gè)柱體積）、12:1 (10個(gè)柱體 積）和5:1 (5個(gè)柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟（d)中組分 2 (30g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠0DS-C18分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶 液等度洗脫，收集8~10個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I)(43mg)。
[0024]結(jié)構(gòu)確證：無(wú)色針狀結(jié)晶，易溶于丙酮和甲醇；HR-ES頂S顯示[M+Na]+為m/z 477. 3308,結(jié)合核磁特征可得分子式為C3QH4603，不飽和度為8。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ(ΡΡπι， DMS0-d6, 400MHz) :Η-1 (1. 46, m)，Η-1 (1. 77, m)，Η-2 (2. 23, ddd，J = 1. 7,6. 4,14. 0)， Η-2(2· 65, dt，J = 6. 4,14. 0)，H-5(L 64, m)，H-6(L 08, m)，H-6(L 99, m)，Η-7(0· 91，m)， H-7(1.48，m)，H-8(l· 51，m)，H-ll(l. 29，m)，H-ll(l. 52，m)，H-12(l. 26，m)，H-12(l. 33，m)， H-15(l. 54, m)，H-15(l. 66, m)，H-16(l. 27, m)，H-16(l. 88, m)，H-17(2. 14, m)，H-18(0. 91， s)，H-19 (0· 73, d，J = 4. 0)，H-19 (0· 55, d，J = 4. 0)，H-20 (1. 67, m)，H-21 (3. 32, dd，J =1L6,2.4)，H-21(3.87, d，J = 11.6)，H-22(1.44, m)，H-22(1.98, m)，H-23(3.84, m)， H-24(2. 82, d，J = 9. 2)，H-26(l. 23, s)，H-27(l. 19, s)，H-28(l. 01，s)，H-29(0. 93, s)， H-30(1.00, s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)Sc(ppm，DMS0-d6，100MHz) :33.0(CH2，1-C)，37.1(CH2， 2-C)，218. 6 (C，3-C)，49. 8 (C，4-C)，48. 2 (CH，5-C)，26. 3 (CH2, 6-C)，21. 1 (CH2, 7-C)， 48. 7 (CH，8-C)，20. 6 (C，9-C)，25. 5 (C，10-C)，25. 4 (CH2,11-C)，35. 1 (CH2,12-C)，44. 9 (C， 13-C)，47. 7(C，14-C)，31. 8(CH2,15-C)，27. 2(CH2,16-C)，43. 5(CH，17-C)，18. 3(CH3,18-C)， 29. 2 (CH2, 19-C)，37. 1 (CH，20-C)，69. 6 (CH2, 21-C)，36. 3 (CH2, 22-C)，64. 1 (CH，23-C)， 86. 0 (CH，24-C)，73. 7 (C，25-C)，28. 2 (CH3, 26-C)，23.