一種新的三萜化合物、制備方法和用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從天葵塊根中分離得到的一種新的三萜化合 物，含其的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 天葵(Semiaguilegia adoxoides)為毛茛科植物，屬天葵被子植物門，高15~40厘 米，塊根灰黑色，略呈紡錘形或橢圓形，生于海拔100-1050米間的疏林下、路旁或山谷地的 較陰處，3-4月開花，4-5月結(jié)果。在中國分布于四川、貴州、廣西北部、江西、江蘇、安徽等地， 在日本也有分布。其根入藥稱為天葵子，為《中國藥典》收載的中藥品種，味甘、苦，性寒，有 小毒，有清熱解毒、消腫止痛、利尿等作用，治乳腺炎、扁桃體炎、癰腫、瘰疬、小便不利等癥； 全草又作土農(nóng)藥。
[0003] 現(xiàn)代藥理實驗表明，天葵具有良好的抗腫瘤作用。牛鋒等采用MTT法對天葵子部分 化學(xué)成分的細(xì)胞毒活性進(jìn)行實驗，結(jié)果表明天葵子素A對于宮頸癌、胃癌和乳腺癌三個腫瘤 細(xì)胞株的細(xì)胞毒活性都要優(yōu)于紫杉醇，且對白血病和肝癌腫瘤細(xì)胞株也有明顯的細(xì)胞毒活 性；藍(lán)華英等研究表明天葵中的2-(0-〇8111〇〇卩5^&]1〇871〇叉5〇-4-117(11'〇叉7-匕61^61163661：011；[1：1'；[16具有抗腫瘤活性，其105()為9.43以8/1111^關(guān)頻等對天葵中生物堿成分的 抗腫瘤活性進(jìn)行了研究，其中的唐松草酚定在高劑量組(1000mg/kg)有較好的抗腫瘤作用， 抑瘤率為37.1 % ;另外，S. P.Duan等研究顯示天葵乙醇提取物對人肝癌HepG-2和SMMC-7721 細(xì)胞具有抑制作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種從天葵塊根中分離得到的一種新的三萜化合物，其制 備方法及醫(yī)藥用途。
[0005] 上述目的是通過如下技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：
[0006]具有下述結(jié)構(gòu)式的三萜化合物I:
[0007]
[0008] 所述的化合物I的制備方法，包含以下操作步驟：（a)天葵塊根粉碎，用75%乙醇熱 回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分 別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用 大孔樹脂除雜，依次用15 %乙醇和70%乙醇洗脫，收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗 脫濃縮物；（C)步驟(b)中70 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為30:1、20: 1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一 步分離，依次用體積比為7:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟 (d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為65 %的甲醇水溶液等 度洗脫，收集8-10個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物I。
[0009]進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。
[0010]藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物I和藥學(xué)上可接受的載體。
[0011] 所述的化合物I在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0012] 所述的藥物組合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0013] 本發(fā)明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0014] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物I，其余為藥物學(xué)上可接受的、對人 和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0015] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
[0016] 說明書附圖
[0017] 圖1為化合物I結(jié)構(gòu)式；
[0018] 圖2為化合物I二維HSQC譜；
[0019] 圖3為化合物I二維1H-1!! COSY譜；
[0020] 圖4為化合物I二維HMBC譜；
[0021] 圖5為化合物I二維N0ESY譜；
[0022] 圖6為化合物I計算E⑶和實驗E⑶圖。
【具體實施方式】
[0023]下面結(jié)合實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和范圍。
[0024]實施例1:化合物I分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0025] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0026]制備方法：（a)天葵塊根（10kg)粉碎，用75 %乙醇熱回流提取(30L X 3次），合并提 取液，濃縮至無醇味(8L)，依次用石油醚(8L X 3次）、乙酸乙酯(8L X 3次)和水飽和的正丁醇 (8LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(360g)和正丁醇萃取物；（b)步驟 (a)中乙酸乙酯萃取物用D101大孔樹脂除雜，依次用15%乙醇(6L)和70%乙醇（10L)洗脫， 收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物（130g);(c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃 縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為30:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得 到4個組分；（d)步驟(c)中組分4(25g)用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為7:1、5:1和 2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2(18g)用十八烷基硅烷鍵 合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為65 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-10個柱體積洗 脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物I(32mg)。
[0027] 結(jié)構(gòu)確證:淡黃色針狀結(jié)晶，易溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮和甲醇;HR-ESMS顯示[Μ +Na]+為m/z 489.6542，結(jié)合核磁特征可得分子式為(：3()!142〇4，不飽和度為10。紅外11?顯示在 3442，1732和1715〇^ 1有吸收，提示存在羥基和羰基。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)6(1(卯111，？74(^1^-d5,400MHz):H-l(5.54，br，s)，H-2(2.52，m)，H-2(2.27，m)，H-3(3.78，dd，J=6.6,9.5)，H-5 (2.36，m)，H-6(2.64，m)，H-6(2.38，m)，H-7(5.46，t，J = 6.5)，H-ll(5.38，br，d，J = 5.3)，H-12(2.31，br，d，J=17.4)，Η-12(2· 16，dd，J=17.4,6.0)，H-15(2.41，d，J=17.8)，H-15 (2.10，d，J=17.8)，H-17(2.39，d，J = 8.4)，H-18(0.765，s)，H-19(3.22，d，J=13.5)，H-19 (3.13，d，J=13.5)，H-20(2.72，m)，H-21(l.ll，d，J = 6.7)，H-22(3.81)，H-22(3.42，dd，J = 18.5,8.9)，H-24(4.50，s)，H-26(1.67，s)，H-27(1.55，s)，H-28(1.03，s)，H-29(1.30，s)，H-30(0.95,8);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)3。( ？?1!1，？74(^1^-(15，10010^):120.7(01，1-〇,33.2(01 2， 2-C)，73.6(CH，3-C)，39.0(C，4-C)，51.1(CH，5-C)，25.3(CH2,6-C)，125.6(CH，7-C)，142.5 (C，8-C)，137.9(C，9-C)，139.0(C，10-C)，121.1(CH，n-C)，36.6(CH2，12-C)，43.4(C，13-C)，45.8(C，14-C)，47.9(CH2，15-C)，218.2(C，16-C)，60.0(CH，17-C)，16.7(CH 3，18-C)，43.8 (CH2，19-C)，27.5(CH，20-C)，20.6(CH3,21-C)，47.6(CH2,22-C)，213.7(C，23-C)，84.0(CH， 24-C)，72·5(C，25-C)，28·1(CH 3，26-C)，25·7(CH3，27-C)，25·1(CH3，28-C)，25·1(CH 3，29-C)，14.6(CH3,30-C);碳原子標(biāo)記參見圖1。通過DEPT譜可知，30個碳中有7個甲基、6個亞甲 基、8個次甲基和9個季碳。氫譜中典型的δΗ 0.75、1.67、1.55、1.03、1.30、0.95六個連接在 季碳上的甲基信號和? l.ll(d，J = 6.7)的連在叔碳上的甲基信號提示該化合物可能為9， 19-cyclolanostane triterpenoid。氫譜中稀氫δΗ 5 · 38( lH，d, J = 5 · 3Hz，H_11)，5 · 46( 1H， ^ = 6.5他，!1-7)和5.54(1!1，8，!1-1)對應(yīng)于碳譜中三對烯碳5(：，8卩120.7((：-1)和139.0((：-10)，125.6(〇7)和142.5(〇8)，121.1((：-11)和137.9((：-9)。碳譜中兩個羰基碳5〇218.2 (C-16)、213.7(C-23)和三個連氧碳SC 73.6(〇3)、84.0(〇24)、72.5((：-25)提示該化合物 為高度氧化的四環(huán)9,10-sec〇-9,19-cyclolanostane三砲。該化合物的平面結(jié)構(gòu)可以通過 HSQC(圖2)、COSY(圖3)和HMBC(圖4)二維譜確定。HMBC譜中，H3-29/30與C-3、C-4、C-5 相關(guān)，可確定羥基位于 C-3 上;H-1 與 C-2、C-3、C-5 相關(guān)，H-7 與 C-5、C-6、C-9、C-l#g*，H-ll 與〇8、〇13相關(guān)，!12-19與(：-1、(：-8、(：-9、(：-10、(：-11相關(guān)，綜合