(CH，11-C)，27. 0 (邸2,12-C)，33. 6 (C，13-C)，37. 9 (CH，14-C)，28. 2 (邸2， 15-C)，168. 7 (C，16-C)，82. 2 (CH，17-C)，22. 6 (邸3,18-C)，17. 1 (邸3,19-C)，120. 2 (C，20-C)， 140. 3 (CH，21-C)，108. 9 (CH，22-C)，143. 1 (CH，23-C)，23. 2 (邸3, 28-C)，20. 1 (邸3, 29-C)， 64. 2(CH，30-C)，164. 5(C，Γ-C)，121. 3(CH，2, -C)，148. 0(CH，3, -C)，17. 7(邸3,4, -C)， 52. 1(CH3,7-0CH3);碳原子標(biāo)記參見圖1。紅外光譜顯示該化合物含有徑基和幾基基團(tuán) (3446cm1和1736cm1)。"CNMR和DEPT譜共顯示31個碳信號，包括六個甲基（一個甲氧 基），Ξ個亞甲基，十一個次甲基（五個締控碳，Ξ個含氧碳），W及十一個季碳（四個幾基 碳，一個締控碳，Ξ個含氧碳）。電和"CNMR數(shù)據(jù)分析表明該化合物含有一個典型的β取 代巧喃環(huán)（δΗ7. 24,S;6. 12,m和 7. 32,t，J= 1. 7Ηζ;δC120. 2,140. 3,108. 9 和 143. 1)， 一個酬幾基（δC208. 1)和Ξ個醋幾基（δC173. 0,168. 7和164. 5)結(jié)構(gòu)。上述核磁數(shù)據(jù) 表明該化合物為巧樣苦素類化合物。HMBC譜中，&-19(5冊.91，S)和Η-30(δ冊.36,S) 與C-1 (δC208. 1)的相關(guān)性表明C-1為酬幾基。兩組含氧碳信號（δC77. 5, 2-C和64. 2， 30-C;SC61.7,9-C和 55. 9,11-0W及相應(yīng)質(zhì)子信號（δ冊.36，s，H-30 ;δ冊.16，m，H-ll) 表明該化合物含有一個30, 2-環(huán)氧基團(tuán)和9, 11-環(huán)氧基團(tuán)。此外，C-3(SC83.8)位上連有 一個 2-下締酸乙醋。HMBC譜中，Η-3(δ冊.07,S)，H-2'（δ冊.92,dq，J= 15. 5，1.7Hz) 和H-3'（δΗ7. 13,dq，J= 15. 5,7.OHz)與C-Γ(5C164. 5)的相關(guān)性驗證了上述推論。 H-2'和H-3'之間的禪合常數(shù)（J= 15.甜Z)表明2-下締酸乙醋片段為E構(gòu)型。HMBC譜 中，-0邸3(8 冊.65,S)與C-7(5C173. 0)，Η-6(δ肥.37,dd，J= 16. 5,5. 4Hz;2. 27,dd，J =16. 5, 7.細(xì)z)與C-5 (δC42. 3)和C-7的相關(guān)性表明C-6 (δC31. 1)連有一個甲氧幾基片 段。根據(jù)HMBC譜中Η-17與C-20,C-21和C-22的相關(guān)性，可推斷巧喃環(huán)位于C-17位上。 R犯SY譜中，H-5與H3-29，H-5與H-17,W及H-12 0與H-17表明運(yùn)些質(zhì)子為0-構(gòu)型；H-14 與&-18的交叉峰表明Me-18和H-14是α-構(gòu)型。綜合氨譜、碳譜、HMBC譜和R犯SY譜，W 及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如圖1所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD 試驗確定，理論值與實驗值基本一致（圖2)。
[0029] 實施例2 :化合物（I)藥理作用試驗
[0030] -、材料和儀器
[0031] 健康雌性SD大鼠由上海第二軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中屯、提供?；衔铮↖)制備方法 見實施例LHPLC歸一化純度大于98%。二甲基亞諷、銀杏提取物巧抓761，陽性藥）、MTT、 Aβ25-35、k多聚賴氨酸均購于美國SIGMA公司。DMEM高糖培養(yǎng)基、Neurobasal、B27購于 美國GIBC0公司。NSE購于英國ABC0M公司。Tunel購于武漢Boster公司。LDH試劑盒購 于南京建成生化試劑公司。 陽0扣]電子天平，北京賽多利斯。1815TCC〇2恒溫解育箱（美國化el-L油公司），TH-2C恒溫震蕩器（江蘇太倉實驗設(shè)備廠），解剖顯微鏡（日本OLYMPUS公司），臺式離屯、機(jī)（德 國Heraeus公司），酶標(biāo)儀（日本DynaTtech公司），J2-服全自動高速冷凍離屯、機(jī)（美國 Beckman公司）。 陽〇3引二、試驗方法
[0034] 1、海馬神經(jīng)細(xì)胞的原代培養(yǎng)
[0035] 1. 1海馬組織取材的具體過程
[0036] (1)將16-18d孕齡的健康雌性SD大鼠常規(guī)麻醉并消毒，解剖后取出胎鼠，放入 D-Hank'S平衡鹽溶液中。
[0037] (2)將其放置于解剖顯微鏡下緩慢剝離胎鼠的頭部皮膚與煩骨，然后看到暴露的 大腦雙側(cè)半球。
[0038] (3)于大腦半球外側(cè)面小屯、分離腦膜和大腦皮層，即可見海馬組織。
[0039] (4)用解剖綴小屯、夾取海馬組織，將其放于D-Hank'S平衡鹽溶液中反復(fù)漂洗Ξ 遍，徹底去除腦膜和表面血管。
[0040] (5)分離血絲和腦膜，即得海馬組織，用于海馬神經(jīng)細(xì)胞的原代培養(yǎng)。
[0041] 1. 2海馬神經(jīng)細(xì)胞原代培養(yǎng)的具體過程
[0042] (1)將所取得的海馬組織用眼科剪充分剪碎。
[0043] 似用濃度為0. 125%的膜酶消化25min，然后用含15%胎牛血清的DMEM高糖培 養(yǎng)基完全培養(yǎng)液終止消化。
[0044] (3)于離屯、機(jī)中W8〇0巧m的速度離屯、lOmin。
[0045] (4)棄去上清并加入培養(yǎng)基（NeurobasalMedium/B27)后，用尖端已被火焰拋光 的彎頭吸管緩慢的吹打，反復(fù)吹打直至吹打均勻后，靜置5min，所得的上液即為所需的海馬 神經(jīng)細(xì)胞懸液。
[0046] (5)用計數(shù)板計數(shù)，按所需細(xì)胞密度分別植入預(yù)先包被k多聚賴氨酸的96孔板或 6孔培養(yǎng)板中。其中96孔培養(yǎng)板中每孔約100μL，6孔培養(yǎng)板中每孔約1. 5mL。
[0047] (6)放入37°C的％解育箱中，培養(yǎng)3d后用于實驗。 W48] 2、化合物（I)最佳效應(yīng)時間和最佳作用濃度的篩選
[0049] 設(shè)計如下屯組分組灑10μg/血組；②20μg/血組；③40μg/血組；④60μg/mL 組；⑥80μg/血組；⑧100μg/血組；⑦0μg/血組（即空白對照組）。將化合物（I)各 劑量組分別作用2地，4化和72h，分別每孔加入二甲基亞諷100μ以充分溶解后，在波長為 570nm的全自動酶標(biāo)儀下觀察并測定其光密度值（0D值），取光密度最高處的藥物濃度及對 應(yīng)的作用時間作為本實驗篩選的化合物（I)的最佳作用條件。采用MTT比色法進(jìn)行最佳 作用條件的篩選。
[0050] 3、化合物（I)對Αβ25-35誘導(dǎo)損傷情況下海馬神經(jīng)元的影響
[0051] 采用已配制好在37°C下聚合7d的Αβ25-35建立海馬神經(jīng)細(xì)胞損傷的模型。實 驗分組如下：A:空白對照組Control組，Β:Αβ組，C:化合物（I)+Αβ組，D:化合物 (I)+I(inhibitor)+A0組（在化合物（I)+Αβ組基礎(chǔ)上加入抓NF的括抗劑K252a)， E:EGB+A0組，F(xiàn):化合物（I)組，G:EGB組；海馬神經(jīng)細(xì)胞原代培養(yǎng)3d后，在培養(yǎng)液中加 入25μg/mL的Aβ25-35,4h后再按照分組分別給藥。
[0052] 3. 1化合物（I)對Αβ25-35誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元細(xì)胞毒性的影響 陽05引 3. 1. 1ΜΤΤ比色法檢測海馬神經(jīng)細(xì)胞活力的步驟
[0054] (1)將海馬神經(jīng)細(xì)胞原代培養(yǎng)3d后，分別加入化合物（I) :40μg/mL，Ε抓761 : 150μg/mL及空白對照組什么都不加。4化后進(jìn)行MTT比色法。 陽〇5引 似分別在96孔板中每孔加入配制好的MTT10μL。
[0056] (3)將其置于37°C的C〇2培養(yǎng)箱中解育地。
[0057] (4)緩慢吸去上清后每孔加入100 μ L的二甲基亞諷作用lOmin，使之充分溶解。
[0058] (5)在波長為570nm的全自動酶標(biāo)儀下測定每孔的光密度值。
[0059] 3. 2化合物（I)對Aβ25-35誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)細(xì)胞調(diào)亡的影響
[0060] 3. 2. 1實驗分組
[0061] 通過檢測海馬神經(jīng)細(xì)胞調(diào)亡過程中的關(guān)鍵蛋白酶化spase-3的活性，觀察化合物 (I)對Αβ25-35誘導(dǎo)海馬神經(jīng)細(xì)胞調(diào)亡的影響。實驗共分為屯個組：A:Control組，B: Αβ組，C:化合物（I)+Αβ組，D:化合物（I)+Ι+Αβ組，E:EGB+A0組，F(xiàn):化合物（I) 組，G:EGB組。
[0062] 3. 2. 2實驗步驟 陽06引 （1)按