一種高純度紅景天苷的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥有效成分提取方法技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及到一種高純度紅景天苷的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]紅景天為景天科紅景天屬多年生草本植物或亞灌木野生植物，植物資源豐富，品種眾多，全世界約有96種，我國有73種。紅景天中的紅景天苷是該種植物所特有的有效成分，具有扶正固本、調(diào)和陰陽、滋補強(qiáng)身等作用，現(xiàn)代藥理研究證明，紅景天苷具有預(yù)防和抗癡呆作用、抗缺氧作用、延緩衰老作用和抑制快速型室性心率失常的作用，臨床上用來治療冠心病、高原低血壓癥、高原性紅細(xì)胞增多癥。毒性試驗表明，紅景天苷毒性甚小:紅景天苷lg/Kg小鼠皮下注射，未見毒性反應(yīng)。近年來，隨著人們生活水平的提高，加上人口結(jié)構(gòu)的老齡化，心血管疾病的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，開發(fā)治療效果較好的心腦血管疾病的藥物已經(jīng)成為當(dāng)今藥物研究的熱點，臨床研究報道顯示:高純度單一成分的紅景天苷在治療心腦血管方面具有良好的應(yīng)用前景。
[0003]紅景天苷，英文名salidroside，化學(xué)名“對羥苯乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷(p-hydroxyphenethyl-β-D-glucoside) ”，系統(tǒng)命名:1-(4-輕基)苯乙基-β-D-卩比喃葡萄糖苷，主要從高原藥用植物“紅景天”(Rhod1la sachalinensis)和常用中藥“女貞子”(LigUStrUm lucidum)中提取獲得。藥理實驗表明，紅景天提取物紅景天苷有良好的心血管系統(tǒng)作用；在腦缺血、缺氧，神經(jīng)元細(xì)胞凋亡方面均有一定的保護(hù)作用。
[0004]國家知識產(chǎn)權(quán)局于2006.6.14公開了一件申請?zhí)枮?00510111859.0，名稱為“一種制備紅景天苷的方法”的發(fā)明專利，該專利是一種以女貞子為原料、采用大孔吸附樹脂純化技術(shù)制備紅景天苷粗品的方法，本發(fā)明改變了主要用藏藥植物紅景天制備紅景天苷的現(xiàn)狀，從而原料來源廣，降低了成本，提取效果好。本發(fā)明方法為:用60-80%乙醇浸提粉碎女貞子得紅景天苷提取液，將其經(jīng)弱極性AB-8型大孔樹脂吸附，先以純凈水沖洗，再經(jīng)25-35%乙醇洗脫，收集洗脫液回收乙醇并濃縮后再經(jīng)弱極性AB-8型大孔樹脂吸附，經(jīng)純凈水沖洗，25°/『35%乙醇洗脫，回收乙醇濃縮即得紅景天苷粗品。
[0005]由此可見，目前國內(nèi)外對高純度紅景天甙的制備多采用傳統(tǒng)方法，缺少能夠工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)高純度紅景天甙的工藝。傳統(tǒng)方法采用多步溶劑萃取并結(jié)合硅膠柱和聚酰胺柱層析，具有浪費有機(jī)溶劑、高的能量消耗、分離效率低、有機(jī)溶劑殘留和高勞動強(qiáng)度的缺點。雖然高速逆流色譜(HSCCC)可以用來制備高純度的紅景天苷，但該法也具有高成本、有機(jī)溶劑殘留和不適合工業(yè)化實際的缺點。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種從中藥材中提取紅景天苷的方法，該方法具有可以獲得高純度的紅景天苷。
[0007]為達(dá)上述目的，本發(fā)明的一個實施例中提供了一種高純度紅景天苷的制備方法，包括以下步驟:
(1 )、將紅景天原材料粉碎成粗粉，在粗粉中加入1倍粗粉重量的95%乙醇溶液浸泡；浸泡完畢后加入65%~75%乙醇溶液浸漬20h~30h進(jìn)行滲濾；收集滲濾液后濃縮，靜置10h以上，得到滲濾液；
(2)、吸取滲濾液靜置后的上清液，使用弱極性的大孔樹脂吸附去除多糖和蛋白質(zhì)；上樣后使用純化水沖洗至無色，再依次使用洗脫液10%乙醇、15%乙醇、20%乙醇、25%乙醇和30%乙醇進(jìn)行梯度洗脫，分別收集各梯度洗脫液并濃縮得到五組紅景天苷粗品A1~A5 ;
(3)、將紅景天苷粗品A1~A5分別采用高效反相液相色譜柱進(jìn)行分離，均以甲醇水溶液作為流動相進(jìn)行梯度洗脫；當(dāng)目標(biāo)物峰出現(xiàn)時分段收集洗脫液；
(4)、將紅景天苷純度高于98%的洗脫液進(jìn)行冷凍干燥，得到高純度的紅景天苷。
[0008]本發(fā)明的優(yōu)化實施例中，浸泡時間為lh ;浸漬時間為24h。
[0009]本發(fā)明的優(yōu)化實施例中，大孔樹脂為AB-8型大孔樹脂。
[0010]本發(fā)明的優(yōu)化實施例中，多糖為鼠李糖和阿拉伯糖。
[0011 ] 本發(fā)明的優(yōu)化實施例中，純化水的體積為1倍柱體積，流速為2ml/min。
[0012]本發(fā)明的優(yōu)化實施例中，步驟(2)中梯度洗脫的洗脫液流速為2ml/min。
[0013]本發(fā)明的優(yōu)化實施例中，步驟(3)中洗脫液甲醇水溶液的洗脫梯度依次為95%、90%、85%、80%、70%。
[0014]本發(fā)明的優(yōu)化實施例中，步驟(3)中包括將純度低于98%的洗脫液重新洗脫進(jìn)行精制的過程。
[0015]本發(fā)明的優(yōu)化實施例中，高效反相液相色譜柱的填料為C18。
[0016]綜上所述，本發(fā)明具有以下優(yōu)點:
本發(fā)明通過滲濾、大孔樹脂吸附去除包括糖類和蛋白質(zhì)的雜質(zhì)得到紅景天苷粗品，去除糖類和蛋白質(zhì)雜質(zhì)后有利于提高高效反相液相色譜的純化度，并通過合理的梯度洗脫和洗脫液，進(jìn)一步提高產(chǎn)品的純度和收率；
本發(fā)明的未采用柱層析中使用的大量有機(jī)溶劑，使用的有機(jī)溶劑僅為乙醇，產(chǎn)品無有機(jī)溶劑殘留，安全性高；并且可以重復(fù)利用大孔樹脂，在保證分離效果的同時，提高了資源利用率。
【具體實施方式】
[0017]實施例1
預(yù)處理:取狹葉紅景天飲片，將其粉碎成粗粉；參照流浸劑與浸膏劑的滲濾法使用與粗粉等重量的95%乙醇(質(zhì)量分?jǐn)?shù))攪拌均勻浸泡lh ;
粗提:將65%乙醇溶液加入浸泡中的粗粉內(nèi)，使粗粉完全浸漬在乙醇溶液中，浸漬24h后滲濾，收集滲濾液后低溫真空濃縮，回收溶劑乙醇，濃縮液為滲濾液。
[0018]大孔樹脂純化:吸取滲濾液靜置后的上清液，使用弱極性的AB-8型大孔樹脂吸附去除多糖和蛋白質(zhì)。去除多糖和蛋白質(zhì)的具體步驟為:上清液上樣后使用純化水沖洗至無色，純化水的體積為1倍柱體積，流速為2ml/min。再依次使用洗脫液10%乙醇、15%乙醇、20%乙醇、25%乙醇和30%乙醇進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液流速為2ml/min。分別收集各梯度洗脫液并濃縮得到五組紅景天苷粗品；即使用10%乙醇溶液洗脫后得到粗品A1、使用15%乙醇溶液洗脫后得到粗品A2、使用20%乙醇溶液洗脫后得到粗品A3、使用25%乙醇溶液洗脫后得到粗品A4、使用30%乙醇溶液洗脫后得到粗品A5。
[0019]高效反相液相色譜純化:將紅景天苷粗品A1~A5分別采用高效反相液相色譜柱進(jìn)行分離，均以甲醇水溶液作為流動相進(jìn)行梯度洗脫；高效反相液相色譜柱的填料為C18 ;洗脫液甲醇水溶液的洗脫梯度依次為95%、90%、85%、80%、70%。當(dāng)目標(biāo)物峰出現(xiàn)時分段收集洗脫液；并檢測各組各分段中洗脫液中紅景天苷的純度；
冷凍干燥:將紅景天苷純度高于98%的洗脫液進(jìn)行冷凍干燥，得到高純度的紅景天苷；將純度低于98%的洗脫液再次使用高效反相液相色譜純化直至純度高于98%。
[0020]實施例2
預(yù)處理:取狹葉紅景天飲片，將其粉碎成粗粉；參照流浸劑與浸膏劑的滲濾法使用與粗粉等重量的95%乙醇(質(zhì)量分?jǐn)?shù))攪拌均勻浸泡lh ;
粗提:將65%乙醇溶液加入浸泡中的粗粉內(nèi)，使粗粉完全浸漬在乙醇溶液中，浸漬24h后滲濾，收集滲濾液后低溫真空濃縮，回收溶劑乙醇，濃縮液為滲濾液。
[0021]大孔樹脂純化:吸取滲濾液靜置后的上清液，使用弱極性的AB-8型大孔樹脂吸附去除多糖和蛋白質(zhì)。去除多糖和蛋白質(zhì)的具體步驟為:上清液上樣后使用純化水沖洗至無色，純化水的體積為1倍柱體積，流速為2ml/min。再依次使用洗脫液10%乙醇、15%乙醇、20%乙醇、25%乙醇和30%乙醇進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液流速為2ml/min，洗脫液的pH值為6.5。分別收集各梯度洗脫液并濃縮得到五組紅景天苷粗品；即使用10%乙醇溶液洗脫后得到粗品A1、使用15%乙醇溶液洗脫后得到粗品A2、使用20%乙醇溶液洗脫后得到粗品A3、使用2