8. 98, 74. 96, 85. 01, 87. 48, 90. 29, 151. 85, 15 7. 08, 158. 18, 161. 99, 165. 46。
[0048]UV(H20):人nax(e) :227 (10398) ;289 (1817)。
[0049]HRMS(ESI)calculatedfor(M+Na+) /z: 334. 0764,found: 334. 0766〇
[0050] 實(shí)施例2、化合物1通過自組裝形成納米顆粒結(jié)構(gòu)
[0051] 將一定量的化合物1溶于水中，加熱至沸騰，冷卻，在室溫下靜置24h;掃描電鏡 (SEM)、動(dòng)態(tài)激光光散射（DLS)結(jié)果表明，化合物1在水溶液中能夠通過自組裝形成粒徑均 一（~150nm)的顆粒狀納米結(jié)構(gòu)，如圖1所示。
[0052] 實(shí)施例3、化合物1自組裝形成的納米顆粒用于包裹藥物5-氟尿嘧啶
[0053] 將一定量的化合物1溶于PBS中，加熱至100°C左右，冷卻至室溫，靜置24h，加入 一定量5-氟尿嘧啶，然后再靜置24h;藥物包裹后的掃描電鏡、動(dòng)態(tài)激光光散射結(jié)果表明， 本發(fā)明化合物1能夠有效的包裹5-氟尿嘧啶，形成粒徑均一的顆粒狀結(jié)構(gòu)，如圖2所示。
[0054] 為了說明本發(fā)明的有益效果，本發(fā)明提供以下試驗(yàn)例。
[0055] 試驗(yàn)例1、MTT細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物試驗(yàn)
[0056] 1、MTT細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)：
[0057] 通過檢測HSC-3、SCC-9、H0K及N0K-SI四株細(xì)胞的細(xì)胞生存率評價(jià) SNNP(Self-assembledNucleosideNanoparticle，化合物1自組裝單核苷納米顆粒）材料 在體外對腫瘤細(xì)胞及正常細(xì)胞的細(xì)胞毒性。分別收集生長良好的細(xì)胞，配制成細(xì)胞懸液，同 時(shí)調(diào)整其細(xì)胞密度接種于96孔板中，等待4~6h細(xì)胞貼壁后加入100y1不同濃度的SNNP 材料（100、200、300、400、500yg?ml3，37°C孵育 24h、48h、72h后加入 20y1MTT，孵育 4h 加入DMSO(二甲基亞砜）150y1，檢測570nm波長的吸光度值。
[0058] 在體外檢測SNNP對細(xì)胞的毒性，結(jié)果如圖3所示；SNNP對正常細(xì)胞HOK、N0K-SI 和鱗癌細(xì)胞HSC-3、SCC-9的毒性很小，具有良好的生物安全性，特別是，SNNP濃度為 100yg?ml1孵育72h后細(xì)胞生存率基本不受SNNP藥載系統(tǒng)的影響。
[0059] 2、動(dòng)物試驗(yàn)：
[0060] 40只雌性BALB/c小鼠被隨機(jī)分為5組，隨后腹腔注射100y1生理鹽水、不同濃度SNNP(0. 5mg?kg\2. 5mg?kg\5rng?kg^，每周1次，每隔3~4天測量動(dòng)物體重，2周后 終止實(shí)驗(yàn)，小鼠眼球取血，進(jìn)行血常規(guī)及生化指標(biāo)的分析，并取其心、肝、脾、肺、腎等重要器 官，運(yùn)用HE染色進(jìn)行組織學(xué)分析。
[0061] 圖4表示動(dòng)物實(shí)驗(yàn)取出的小鼠心、肝、脾、肺、腎等臟器運(yùn)用HE染色進(jìn)行的組織學(xué) 分析，用以評價(jià)該SNNP藥載系統(tǒng)在體內(nèi)對組織的損傷作用；橫標(biāo)分別代表空白對照、生理 鹽水對照，以及SNNP不同濃度實(shí)驗(yàn)組（0. 5mg?kg\2. 5mg?kg\5rng?kg3。
[0062] 結(jié)果表明，本發(fā)明不同濃度（0? 5mg?kgi、2. 5mg?kg\5rng?kg3的SNNP藥物 載體系統(tǒng)對小鼠的心、肝、脾、肺、腎臟器無明顯的損傷作用，其染色結(jié)果與空白對照組及 生理鹽水對照組是一致的；本發(fā)明化合物1的SNNP在體外和體內(nèi)生物安全濃度分別為 100yg?ml1和5mg?kg\表現(xiàn)出低毒性，具有良好的生物安全性，非常適合用作藥物載體。
[0063] 試驗(yàn)例2、
[0064] 收集對數(shù)生長期的口腔鱗狀細(xì)胞癌HSC-3細(xì)胞，無血清培養(yǎng)基DMEM洗滌3次后重 懸，按2X106cell/只的細(xì)胞量，皮下接種于裸鼠的右側(cè)脅肋部，構(gòu)建口腔鱗癌細(xì)胞HSC-3 移植瘤模型。接種5天后可以捫及腫瘤結(jié)節(jié)，將其裸鼠隨機(jī)分組（n> = 6只/組），包括生 理鹽水組、SNNP組（0. 5mg?kg4、5-FU組及5-FU-SNNP組，并且通過瘤內(nèi)注射及腹腔注射 給予相應(yīng)的治療；每隔3~4天測量腫瘤體積，如圖5所示，A:75mg*kgS-FU與SNNP包裹 75mg?kgS-FU對小鼠瘤內(nèi)用藥后小鼠腫瘤隨時(shí)間變化比較；B:150mg?kgS-FU與SNNP 包裹150mg?kgS-FU對小鼠瘤內(nèi)用藥后小鼠腫瘤隨時(shí)間變化比較；C:300mg?kgS-FU與 SNNP包裹300mg?kgS-FU對小鼠瘤內(nèi)用藥后小鼠腫瘤隨時(shí)間變化比較；D:不同濃度5-FU 與SNNP包裹不同濃度5-FU對小鼠瘤內(nèi)給藥后小鼠體重隨時(shí)間變化比較，觀察動(dòng)物的毛發(fā)、 體重及行為等有無異常。腫瘤的體積計(jì)算公式為：腫瘤體積（V) =n/6X最大徑X(最小 徑）2。2~3周后終止實(shí)驗(yàn)，取腫瘤組織，稱重（如圖5中E所示）并進(jìn)行相關(guān)的組織學(xué)分 析；F表示取出腫瘤組織的直觀圖。
[0065] 以生理鹽水組及SNNP(0? 5mg?kg4組為對照，治療口腔鱗癌移植瘤的5-FU濃度 為75mg?kg\ 150mg?kg\300mg?kg\在瘤內(nèi)注射的給藥方式下，比較了SNNP包裹不同 濃度的5-FU和游離的5-FU對HSC-3 口腔鱗癌移植瘤皮下模型的治療效果。
[0066] 如圖5中A-C、F所示，在體內(nèi)，與生理鹽水組類似，SNNP組對皮下HSC-3 口腔鱗癌 沒有治療效果，表明SNNP本身并沒有抗腫瘤的效果；本發(fā)明化合物1的SNNP作為5-氟尿 嘧啶的載體，顯著提高了5-氟尿嘧啶的治療效果：與游離的5-FU相比，SNNP包裹的5-FU 能夠更有效的抑制皮下HSC-3口腔鱗癌的生長，腫瘤的體積明顯減小，且隨著濃度的增大， 其腫瘤生長抑制更明顯（P〈〇. 05)，腫瘤的重量也明顯減小，如圖5中E所示。
[0067] 所有組的裸鼠體重均未見明顯的變化（如圖5中D所示），也進(jìn)一步表明本發(fā)明化 合物1的SNNP具有良好的生物安全性，非常適合用作藥物載體。
[0068] 在口腔鱗癌細(xì)胞HSC-3裸鼠移植瘤模型中，游離5-FU的t1/2zS3. 64±2. 2h(5-FU 濃度 150mg?kg3，SNNP包裹的 5-FU的七1/2,為 6. 43±5. 94h(5-FU濃度 150mg?kg\SNNP 濃度0. 5mg?kg^，表明本發(fā)明化合物1的SNNP作為5-氟尿嘧啶的載體，可以在更長的時(shí) 間內(nèi)保持較高的藥物濃度，具有良好的緩釋作用，增強(qiáng)5-氟尿嘧啶對于腫瘤的治療效果， 降低藥物用量和給藥頻次，減輕5-氟尿嘧啶的毒副作用。
[0069]藥物消除半衰期（halflife，t1/2z)是血漿藥物濃度下降一半所需要的時(shí)間，其長 短可反映體內(nèi)藥物消除速度。
[0070]綜上所述，本發(fā)明化合物1自組裝形成粒徑均一的納米顆粒SNNP，具有良好的藥 物包裹能力，體內(nèi)外毒性低，具有良好的生物相容性及安全性，非常適合用作藥物載體；本 發(fā)明化合物1的SNNP作為藥物載體，顯著提高了單體類核苷類藥物和/或寡聚核苷酸類藥 物的治療效果，具有良好的緩釋作用，增強(qiáng)藥物的治療效果，降低藥物用量和給藥頻次，提 高藥物的生物利用度，減輕藥物的毒副作用，具有良好的臨床應(yīng)用價(jià)值；同時(shí)，本發(fā)明的制 備方法，具有收率高、純度高、能耗低、步驟少、操作簡便、成本低、環(huán)保、安全等優(yōu)點(diǎn)，非常適 合產(chǎn)業(yè)上的應(yīng)用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 式I所示的化合物或其晶型、鹽：其中，R1選自氫、鹵素、CC6烷基、CC6烷氧基、氨基或取代的氨基，R2~R4分別 或同時(shí)選自氫、堿金屬、Ci~C6烷基。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其晶型、鹽，其特征在于：Ri選自氨基或CC6烷 基取代的氨基，R2~R4分別或同時(shí)選自氫、鋰、鈉、鉀。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其晶型、鹽，其特征在于：所述的化合物為：4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物或其晶型、鹽，其特征在于：所述的化合物為 1-(0-1-呋喃核糖）-5-氨基-嘧啶并[4,5-(1]嘧啶-2,4(111，311)-二酮。5. 式I所示化合物的制備方法，其特征在于：所述的制備方法包括以下步驟： a、l-(2'，3'，5'-O-乙酰基-f3-L-呋喃核糖）-5-氨基-嘧啶并[4,5-d]嘧 啶-2, 4 (1H，3H)-二酮與M0R5/R50H溶液，于70 °C~80 °C反應(yīng)20分鐘~30分鐘，得到反應(yīng) 液； 其中，M選自裡、納、鐘、働、艷或紡；1?5選自甲基、乙基、丙基、丁基或戊基； 1-(2'，3'，5' -0-乙?；?f3-L-呋喃核糖）-5-氨基-嘧啶并[4,5-d]嘧 啶-2, 4 (1H，3H)-二酮與MOR5的摩爾比1 :3~5 ;M0R 5/R50H溶液的濃度為0? IM~0? 5M ; b、 對步驟a所得反應(yīng)液進(jìn)行分離、純化，得到1-(0 -L-咲喃核糖）-5-氨基-啼啶并 [4, 5-d]嘧啶-2, 4 (1H，3H)-二酮。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于：步驟b中，對步驟a所得反應(yīng)液進(jìn)行 分離、純化的方法為：將步驟a所得反應(yīng)液冷卻至室溫，加入冰醋酸，過濾，得到固體，洗滌， 干燥，即得I-W-L-呋喃核糖）-5-氨基-嘧啶并[4, 5-d]嘧啶-2, 4 (1H，3H)_二酮。7. 權(quán)利要求1~4任意一項(xiàng)所述的化合物或其晶型、鹽作為藥物載體的應(yīng)用。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于：所述的藥物為單體類核苷類藥物或寡聚 核苷酸類藥物。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于：所述的單體類核苷類藥物選自5-氟尿嘧 啶、硫鳥嘌呤、奈拉濱、氯法他濱、替加氟、阿糖胞苷、地西他濱、齊多夫定、扎西他濱、阿昔洛 韋、阿德福韋酯中的任意一種或兩種以上；所述的寡聚核苷酸類藥物選自siRNA、反義寡聚 核苷酸中的任意一種或兩種。10. -種藥物組合物，其特征在于：所述的藥物組合物是以權(quán)利要求1~4任意一項(xiàng)所 述的化合物或其晶型、鹽為載體，加上藥物、藥學(xué)上常用的輔料或輔助性成分制備得到的制 劑。11. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的藥物組合物，其特征在于：所述的藥物為單體類核苷類藥 物或寡聚核苷酸類藥物。12. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的藥物組合物，其特征在于：所述的單體類核苷類藥物選 自5-氟尿嘧啶、硫鳥嘌呤、奈拉濱、氯法他濱、替加氟、阿糖胞苷、地西他濱、齊多夫定、扎 西他濱、阿昔洛韋、阿德福韋酯中的任意一種或兩種以上；所述的寡聚核苷酸類藥物選自 siRNA、反義寡聚核苷酸中的任意一種或兩種。
【專利摘要】一種嘧啶衍生物及其制備方法與用途。本發(fā)明公開了式Ⅰ所示的化合物或其晶型、鹽：其中，R1選自氫、鹵素、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、氨基或取代的氨基，R2～R4分別或同時(shí)選自氫、堿金屬、C1～C6烷基。本發(fā)明化合物1的SNNP作為藥物載體，顯著提高了單體類核苷類藥物和/或寡聚核苷酸類藥物的治療效果，具有良好的緩釋作用，增強(qiáng)藥物的治療效果，降低藥物用量和給藥頻次，提高藥物的生物利用度，減輕藥物的毒副作用，具有良好的臨床應(yīng)用價(jià)值；同時(shí)，本發(fā)明的制備方法，具有收率高、純度高、能耗低、步驟少、操作簡便、成本低、環(huán)保、安全等優(yōu)點(diǎn)，非常適合產(chǎn)業(yè)上的應(yīng)用。
【IPC分類】A61K47/26, C07H19/23, C07H1/00
【公開號】CN105131066
【申請?zhí)枴緾N201510467490
【發(fā)明人】趙行, 江潞, 馮慧, 何楊, 劉江, 曾昕, 陳謙明
【申請人】四川大學(xué)
【公開日】2015年12月9日
【申請日】2015年7月31日