從低醇皂刺中提取新環(huán)烯醚萜化合物和其他化合物的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物提取分離技術(shù)領(lǐng)域，主要涉及一種從低醇皂刺中提取新環(huán)烯 醚萜化合物和其他化合物的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 皂刺，又名皂角刺（分Wet/iteiae)是雙子葉豆科皂角屬植物皂莢 s/neasisLam.)的干燥棘刺。多年生灌木，為我國民間傳統(tǒng)的中藥材，藥書《本 草綱目》記載皂角刺具有消腫解毒、化膿殺蟲的功效，廣泛分布在我國江蘇、湖北、河南、河 北、四川及東北等地區(qū)，一直以來皂角刺在中國、日本和韓國等東南亞地區(qū)，廣泛用于治療 中風(fēng)、頭疼、哮喘和疥瘡等各種疾病?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)皂角刺還具有一定的抗菌、抗癌的 功效。據(jù)文獻(xiàn)報道皂角刺中主要化學(xué)成分為黃酮、皂苷、酚類、三萜、氨基酸、木質(zhì)素及糖類 等。盡管如此，皂角刺藥用物質(zhì)基礎(chǔ)的研究仍然有待深入的研究，尤其隨著現(xiàn)代分離手段和 分析測試技術(shù)的快速發(fā)展，一些微量的活性物質(zhì)和成份仍在不斷地被探索和揭示。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種從低醇皂刺中提取新環(huán)烯醚萜化合物和其 他化合物的方法，該方法能夠保證皂角刺中的醚和內(nèi)酯等化學(xué)不穩(wěn)定活性成分被有效的提 取分離出來，不會發(fā)生化學(xué)鍵斷裂或結(jié)構(gòu)的變化。
[0004] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種從低醇皂刺中提取新環(huán)烯醚萜化合物和其他化 合物的方法，包括以下步驟： 步驟一、取皂刺原材料，在室溫下陰干后粉碎，得到皂刺粉末，備用； 步驟二、將步驟一得到的皂刺粉末加入到體積百分比為50-65%的乙醇溶液中，室溫下 浸泡3-5d，浸泡結(jié)束后分離得到提取液，再重復(fù)浸泡和分離操作2-3次，合并提取液，備用； 然后將提取液在0-4°C條件下靜置18-26h，靜置結(jié)束后過濾，并將濾液減壓濃縮，得到低醇 浸膏，備用； 步驟三、向步驟二得到的低醇浸膏中加入其重量7-10倍的水，攪拌使低醇浸膏溶解完 全，得到混合溶液，備用；然后依次用石油醚、乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到剩余水相，再將剩余 水相減壓濃縮，得到上料樣品，備用；將上料樣品采用大孔樹脂柱色譜法進(jìn)行分離，上樣后 采用不同濃度的乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集洗脫劑為體積百分比為50-60%乙醇溶液的 餾分，并將該餾分濃縮，得到濃縮浸膏，備用； 步驟四、將步驟三得到的濃縮浸膏采用硅膠柱色譜法進(jìn)行分離純化，上樣、梯度洗脫， 洗脫得到的餾分經(jīng)TLC檢測、合并，得到餾分段1-30,備用； 步驟五、將步驟四得到的餾分段2采用硅膠柱色譜法進(jìn)行分離純化，上樣后依次用體 積比為30:1、20:1、10:1、5:1和1 :1的乙酸乙酯-甲醇溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫劑的體積比 為10:1的餾分段，濃縮得到黃色膠狀透明物，即為化合物I; 步驟六、步驟四得到的餾分段13-15,均有固體析出，合并、過濾，得到的固體進(jìn)一步采 用凝膠色譜法進(jìn)行等度洗脫純化，純化的流動相為體積比為1:1的三氯甲烷-甲醇溶液，流 速為6-7滴/min，得到的餾分經(jīng)減壓濃縮，得到淡黃色粉末，即化合物II; 步驟七、步驟四得到的餾分段9有固體析出，過濾后進(jìn)行重結(jié)晶，得到淺黃色固體，即 化合物III ; 所述化合I、II和III的結(jié)構(gòu)式依次為：
[0005] 進(jìn)一步優(yōu)化，步驟三所述的大孔樹脂柱色譜法依次采用體積百分比為10%、20%、 30%、40%、50%和60%的乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫。
[0006] 進(jìn)一步優(yōu)化，步驟四所述的硅膠柱色譜法上樣后依次用體積比為1:0、10:1、9:1、 5:1、2:1、1:1、1:2、1:5和0:1的乙酸乙酯-甲醇溶液以及體積比為7:3的甲醇水溶液進(jìn)行 洗脫。
[0007] 進(jìn)一步優(yōu)化，步驟五的硅膠柱色譜法中，拌樣硅膠粒徑為100-200目，裝柱硅膠粒 徑為200-300目。
[0008] 進(jìn)一步優(yōu)化，步驟七過濾得到的固體采用氯仿和甲醇溶劑進(jìn)行重結(jié)晶。
[0009] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明至少具有下述優(yōu)點(diǎn)及有益效果： 本發(fā)明提供的方法首次從皂角刺中提取出新的環(huán)烯醚萜化合物即化合物I，并首次發(fā) 現(xiàn)并提取了化合物II和III，基于化學(xué)結(jié)構(gòu)，這三種成分屬于醚類、內(nèi)酯類和氧苷類，都具有 相對的化學(xué)不穩(wěn)定性，尤其是在空氣中就可能分解。本發(fā)明采用50-65%的低醇在室溫提取 的方法，能夠保證皂角刺中含氧化合物如醚類、酮類和內(nèi)酯類化合物不發(fā)生分解。本發(fā)明用 低醇冷浸提取，結(jié)合色譜法以及其中特定比例的溶劑和參數(shù)，使所分離得到的皂角刺中的 環(huán)烯醚萜類和香豆素內(nèi)酯結(jié)構(gòu)等不穩(wěn)定活性成分被有效的提取分離出來，不會因提取方法 的影響發(fā)生化學(xué)鍵斷裂或結(jié)構(gòu)的變化。本發(fā)明研究聚焦在皂角刺低醇提取物的有效成分的 分離與純化，為將來系統(tǒng)篩選并深入研究皂角刺中化學(xué)成分的生物活性提供極具科學(xué)理論 的研究基礎(chǔ)和重要開發(fā)前景。
【具體實施方式】
[0010] -種從低醇皂刺中提取新環(huán)烯醚萜化合物和其他化合物的方法，包括以下步驟： 步驟一、取皂刺原材料，在室溫下陰干后粉碎，得到皂刺粉末，備用； 步驟二、將步驟一得到的皂刺粉末加入到體積百分比為50-65%的乙醇溶液中，室溫下 浸泡3-5d，浸泡結(jié)束后分離得到提取液，再重復(fù)浸泡和分離操作2-3次，合并提取液，備用； 然后將提取液在0-4°C條件下靜置18-26h，靜置結(jié)束后過濾，并將濾液減壓濃縮，得到低醇 浸膏，備用； 步驟三、向步驟二得到的低醇浸膏中加入其重量7-10倍的水，攪拌使低醇浸膏溶解完 全，得到混合溶液，備用；然后依次用石油醚、乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到剩余水相，再將剩余 水相減壓濃縮，得到上料樣品，備用；將上料樣品采用大孔樹脂柱色譜法進(jìn)行分離，上樣后 依次采用體積百分比為10%、20%、30%、40%、50%和60%的乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集洗脫 劑為體積百分比為50-60%乙醇溶液的餾分，并將該餾分濃縮，得到濃縮浸膏，備用； 步驟四、將步驟三得到的濃縮浸膏采用硅膠柱色譜法進(jìn)行分離純化，上樣后依次用體 積比為1:0、10:1、9:1、5:1、2:1、1:1、1 :2、1:5和0:1的乙酸乙酯-甲醇溶液以及體積比為 7:3的甲醇水溶液進(jìn)行洗脫，洗脫得到的餾分經(jīng)TLC檢測、合并，得到餾分段1-30，備用； 步驟五、將步驟四得到的餾分段2采用硅膠柱色譜法進(jìn)行分離純化，其中拌樣硅膠粒 徑為100-200目，裝柱硅膠粒徑為200-300目，上樣后依次用體積比為30:1、20:1、10:1、5:1 和1 :1的乙酸乙酯-甲醇溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫劑的體積比為10:1的餾分段，濃縮得到 黃色膠狀透明物，即為化合物I; 步驟六、步驟四得到的餾分段13-15,均有固體析出，合并、過濾，得到的固體進(jìn)一步采 用凝膠色譜法進(jìn)行等度洗脫純化，純化的流動相為體積比為1:1的三氯甲烷-甲醇溶液，流 速為6-7滴/min，得到的餾分經(jīng)減壓濃縮，得到淡黃色粉末，即化合物II; 步驟七、步驟四得到的餾分段9有固體析出，過濾后采用氯仿和甲醇溶劑進(jìn)行重結(jié)晶， 得到淺黃色固體，即化合物III; 所述化合I、II和III的結(jié)構(gòu)式依次為：
[0011]本發(fā)明分離得到的化合I、II和III的結(jié)構(gòu)鑒定 本發(fā)明分離的3個化合物經(jīng)過2DNMR分析和化學(xué)分析鑒定，并對比相關(guān)參考文獻(xiàn)進(jìn)行 結(jié)構(gòu)鑒定和表征，上述3個化合物的NMR數(shù)據(jù)詳細(xì)歸屬分別如下： 化合物I:黃色膠狀透明物。1H-NMR(400MHz，DMS0)數(shù)據(jù)顯示：羅：0.83(d，6H)， 0.87(d, 6H), 1.03-1.05(m,mH), 2.02 (s, 3H), 2.04(s, 1H,H-5 ), 2.52 (m, 1H,H-6 ), 2. 14 (m, 1H,H-9) ?其中 13C-NMR(DEPT) (100MHz，DMS0)數(shù)據(jù)歸屬如表 1所示，該化合物被推斷為7, 8-[雙二環(huán)單貼]-4-羧-1，6-二羥環(huán)烯醚單萜，是首次從 阜角刺中分離得到的新的環(huán)稀醚砲類化合物(數(shù)據(jù)歸屬參考文獻(xiàn)QuangDN,Hashimoto T,TanakaM.etal.Phytochmistry, 2002, 60, 505. )〇
[0012] 表1.化合物I的1HNMR和13CNMR數(shù)據(jù)歸屬
化合物II:淡黃色粉末（DMSO)。其 1H-NMR(400MHz,DMS0)和 13C-NMR(100MHz，DMS0)數(shù)據(jù)歸屬如表2所示，以下數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（ZhouLG,LiD,GouJ，etal. AntibacterialphenoliccompoundsfromthespinesofGleditsiasinensisLam. [J].Naturalproductresearch, 2007，21 : 283-291)報道基本一致，故鑒定化合物為 8-0-葡萄糖基-5, 4、7-三羥基黃酮，該化合物為活性黃酮苷化合物，也是首次從皂角刺植 物中提取的化合物。
[0013] 表2.化合物II的1HNMR和13CNMR數(shù)據(jù)鑒定歸屬*
化合物III:淺黃色固體（MeOHXiH-NMR(400MHz,MeOD):導(dǎo)：7.86 (1H,d,J=9.44, H-3), 6.20 (1H,d,J=9.44,H-4), 7.11 (1H,s,H-5), 6.77 (1H,s,H-3'），3.89 (3H,s, -0CH3), 3.85 (1H,s, -OH); 13C-NMR(100MHz,MeOD) 161.1 (C-2), 112.9 (C-3), 147.8 (C-4), 116.6 (C-5), 110.1 (C-6) , 151.2 (C-7), 145.9 (C-8), 152.1 (C-9), 105.2 (C-10), 148.0 (C-2'），112.0 (C-3'），56.4 (-0CH3)。以上數(shù)據(jù) 與文南犬（HarkerS,RazdanTK,ffaightE.Setal.Steroids,chromoneandcoumarins fromangelicaofficinalis,Phytochemistry,1984,23(2): 419-426.)中報道的基本 一致，故鑒定化合物III為2'-羥基-8-甲氧基呋喃香豆素，也是首次從皂角刺植物中提取的 化合物。
[0014] 為使本發(fā)明的內(nèi)容更明顯易懂，以下結(jié)合具體實施例，對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。
[0015] 實施例1: 一種從低醇皂刺中提取新環(huán)烯醚萜化合物和其他化合物的方法，包括以下步驟：