液至少包括PBS緩沖液、FACS緩沖液中的任意一種或幾種。
[0037] 在本發(fā)明第三個方面的一種優(yōu)選實施例中，所述試劑盒還包括anti-⑶8抗體、和 /或突光標(biāo)記的anti-⑶8抗體。
[0038] 本發(fā)明提供了一種能夠識別CMVTCR的MHCclassI分子/CMV特異多肽的氨基酸 及其多聚體，用以檢測病人外周血中CMV特異CD8+T細(xì)胞的數(shù)量，從而用以測定中國病人外 周血中具有保護(hù)性CMV特異CD8+T細(xì)胞數(shù)量的臨床界限，監(jiān)測評估機體內(nèi)感染的CMV再激 活及致病的可能。
【附圖說明】
[0039] 圖1為本發(fā)明SEQIDNo. 1序列多聚體與外周血單個核細(xì)胞共培養(yǎng)48小時后，反 應(yīng)陽性的細(xì)胞增殖增加。
[0040] 圖2為本發(fā)明SEQIDNo. 1序列多聚體檢測外周血中CMV特異⑶8+T細(xì)胞的結(jié)果。
【具體實施方式】
[0041] 研究發(fā)現(xiàn)，CMV特異性CD8+T細(xì)胞在抑制CMV再激活中起著非常關(guān)鍵的作用，在健 康成人體內(nèi)，病毒再激活和CMV特異CD8+T細(xì)胞的抗病毒免疫控制處于一種平衡狀態(tài)，當(dāng)此 特異性T細(xì)胞數(shù)量減少或功能降低時，此平衡被打破，病毒就重新再激活，人體就可能會發(fā) 病出現(xiàn)臨床癥狀。在CMV感染人群中，潛伏的CMV重新再激活是最主要的一種感染方式，所 以機體抗CMV的細(xì)胞免疫狀況是監(jiān)控CMV是否會致病的一項重要指標(biāo)。
[0042] 基于此，本發(fā)明設(shè)計合成了一種多肽序列，可用于測定病人外周血中具有保護(hù)性 CMV特異CD8+T細(xì)胞數(shù)量的臨床界限，監(jiān)測評估機體內(nèi)感染的CMV再激活及致病的可能。
[0043] 實施例1，在細(xì)胞水平上驗證T細(xì)胞對SEQIDNo. 1序列的反應(yīng)性
[0044] 采集CMV患者外周靜脈血，分離外周血單個核細(xì)胞。
[0045] 給予多肽刺激，SEQIDNo. 1多肽序列與細(xì)胞共培養(yǎng)48h后，檢測細(xì)胞增殖改變情 況。同時，以TK-10、YK-10、NA-10、SK-10-1、YV-10、KV-10、AR-10、CK-10、MF-10、QF-10、 LL-10作為對照。結(jié)果見圖1。
[0046] 從圖1可以看出，本發(fā)明SEQIDNo. 1序列（SK-10-2序列）與細(xì)胞共培養(yǎng)48小時 后，反應(yīng)陽性細(xì)胞增殖明顯。
[0047] 實施例2,檢測外周血中CMV特異⑶8+T細(xì)胞的數(shù)量
[0048] 將SEQIDNo. 1序列（SK-10-2序列）和HLA基因型合成熒光標(biāo)記的多聚體，用流 式細(xì)胞分析儀來測定CMV特異CD8+T細(xì)胞的數(shù)量。步驟如下：
[0049] 1)加入100UL全血在12x75mm試管中。
[0050] 2)加10iiL多聚體后混勻，避光室溫孵育IOmin。
[0051] 3)加入適量的熒光標(biāo)記的anti-CD8抗體（如DakocloneDK25)后混勻。避光 2-8°C，孵育IOmin。
[0052]4)加入 2mLEasyLyse?workingsolution(DakocodeS2364)，孵育 10min。
[0053] 5)加入 2mL0.Olmol/LPBS，并離心 5 分鐘（300xg)，棄去上清。
[0054] 6)重細(xì)胞懸于FACS緩沖液，如0. 4mLPBS，上機分析。結(jié)果見圖2。
[0055] 從圖2中可以看出，相比于空白對照組，對本發(fā)明反應(yīng)陽性的外周血單個核細(xì)胞 中CMV特異⑶8+T細(xì)胞比例增加。
[0056] 可以看出，本發(fā)明所述的SEQIDNo. 1序列及其多聚體能夠有效的檢測外周血單個 核細(xì)胞中CMV特異CD8+T細(xì)胞，從而為測定中國病人外周血中具有保護(hù)性CMV特異CD8+T 細(xì)胞數(shù)量的臨床界限、監(jiān)測評估機體內(nèi)感染的CMV再激活及致病可能性提供了一種高敏感 度、高效率的試劑和方法。
[0057] 以上對本發(fā)明的具體實施例進(jìn)行了詳細(xì)描述，但其只是作為范例，本發(fā)明并不限 制于以上描述的具體實施例。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，任何對本發(fā)明進(jìn)行的等同修改和 替代也都在本發(fā)明的范疇之中。因此，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下所作的均等變換和 修改，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種多肽序列，其特征在于，所述多肽序列包括SEQ ID No. 1所示序列： SEQ ID No. I ：Ser Thr His Pro Met Val Thr Arg Ser Lys〇2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽序列，其特征在于，所述多肽序列為SEQ ID No. 1所示序 列、及其多聚體中的任意一種或幾種。3. -種多肽序列在制備檢測巨細(xì)胞病毒試劑中的應(yīng)用，其特征在于，所述多肽序列包 括SEQ ID No. 1所示序列。4. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述多肽序列為SEQ ID No. 1所示序列、 及其多聚體中的任意一種或幾種。5. -種檢測巨細(xì)胞病毒的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括一種多肽序列，所述多 肽序列包括SEQ ID No. 1所示序列。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括熒光標(biāo)記。7. 根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括HLA基因表位多 肽、及其多聚體中的任意一種或幾種。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述多肽序列為SEQ IDNo. 1所示序列、 及其多聚體中的任意一種或幾種。9. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括緩沖液，所述緩沖液 至少包括PBS緩沖液、FACS緩沖液中的任意一種或幾種。10. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括anti-CD8抗體、和 /或突光標(biāo)記的anti-⑶8抗體。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種多肽序列及其應(yīng)用。本發(fā)明設(shè)計合成了一種用于檢測巨細(xì)胞病毒的氨基酸序列，所述氨基酸序列包括SEQ？ID？No.1所示序列。本發(fā)明所提供的氨基酸專利可用于測定病人外周血中具有保護(hù)性CMV特異CD8+T細(xì)胞數(shù)量的臨床界限，監(jiān)測評估機體內(nèi)感染的CMV再激活及致病的可能。
【IPC分類】G01N33/68, G01N33/569, G01N33/533, C07K7/06
【公開號】CN105085615
【申請?zhí)枴緾N201410222380
【發(fā)明人】康向東, 吳蓉, 許健, 孔倩倩, 相芬芬
【申請人】上海市普陀區(qū)中心醫(yī)院, 上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬普陀醫(yī)院
【公開日】2015年11月25日
【申請日】2014年5月23日