一種多肽序列及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種多肽序列，尤其涉及一種用于檢測(cè)巨細(xì)胞病毒的多肽序列、以及 所述多肽序列的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 人巨細(xì)胞病毒（humancytomegalovirus，HCMV)屬于孢瘆病毒科，是人類皰瘆病毒 組中最大的一種病毒，可引起人類巨細(xì)胞病毒感染。HCMV在人群中普遍易感，成人對(duì)HCMV 的感染率高達(dá)90%以上，通常無明顯癥狀，潛伏在宿主細(xì)胞中，為隱性感染，而在免疫功能 低下或缺陷時(shí)，如妊娠、多次輸血、移植受者（HCMV病毒感染也是器官移植失敗的主要原因 之一）、艾滋病患者等，常呈激發(fā)感染（顯性感染），病毒可侵襲多個(gè)器官和系統(tǒng)，引起嚴(yán)重 疾病，嚴(yán)重者可致死亡。因此，早期監(jiān)測(cè)HCMV潛伏、激活感染狀態(tài)，對(duì)于免疫功能低下患者 至關(guān)重要。
[0003] 然而由于HCMV病毒在人體內(nèi)感染的普遍存在，通常潛伏在宿主細(xì)胞中不引起明 顯癥狀，給HCMV激活感染的診斷帶來很大困難。目前HCMV感染診斷方法主要有：
[0004] 1)、分尚培養(yǎng)
[0005] 用臨床標(biāo)本進(jìn)行體外分離培養(yǎng)，是目前診斷HCMV感染最可靠的方法，被認(rèn)為是檢 測(cè)HCMV感染狀態(tài)的金標(biāo)準(zhǔn)。該方法將檢測(cè)標(biāo)本（血液、尿液、唾液、腹水、臍血、腦脊液、氣 管灌洗液等）接種于成纖維細(xì)胞，出現(xiàn)細(xì)胞病變即為陽(yáng)性。但是由于HCMV病毒體外增殖緩 慢，初次分離至少需一個(gè)月才能使檢測(cè)細(xì)胞出現(xiàn)病變，實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)、易污染，且無法與其他 病毒感染區(qū)分、對(duì)于經(jīng)藥物治療后的標(biāo)本病毒分離常為陰性結(jié)果，因而臨床應(yīng)用受限，現(xiàn)主 要應(yīng)用于科研。
[0006] 2)血清檢測(cè)抗原、抗體
[0007] 目前主要應(yīng)用的是pp65抗原血癥檢測(cè)法，當(dāng)HCMV激活感染時(shí)，PP65抗原于6~ 24小時(shí)內(nèi)表達(dá)于外周血淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、多形核白細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞中，是HCMV活 動(dòng)性感染的早期診斷診斷標(biāo)志物，但是由于存在假陽(yáng)性、假陰性結(jié)果，該方法目前還存在爭(zhēng) 議。
[0008] 3)血清學(xué)檢測(cè)抗體
[0009]特異性抗體檢測(cè)主要是檢測(cè)HCMV感染后刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗巨細(xì)胞病毒IgM和IgG抗體?？笻CMVIgG抗體多份血清檢測(cè)可用于HCMV臨床診斷，血清IgG抗體陽(yáng)性轉(zhuǎn)化表明是 原發(fā)感染，而連續(xù)監(jiān)測(cè)IgG滴度急劇升高表明存在HCMV活動(dòng)性感染，但是HCMV成人感染率 極高，IgG大多數(shù)人為陽(yáng)性，檢測(cè)意義不大；血清抗HCMV特異性IgM抗體檢測(cè)，因其抗體存 在時(shí)間短，診出陽(yáng)性率較低，另外Bendiksen等人研究發(fā)現(xiàn)，IgM水平與病毒復(fù)制無關(guān)，因此 IgM也不能潛伏、激發(fā)感染診斷的良好指標(biāo)。
[0010] 4)核酸雜交、原位雜交檢測(cè)
[0011] 目前對(duì)于HCMV的測(cè)序已經(jīng)完成，大大促進(jìn)了核酸雜交技術(shù)在HCMV診斷中的應(yīng)用。 采用該方法能直接在感染組織中發(fā)現(xiàn)包涵體，較傳統(tǒng)的免疫組織化學(xué)方法更為靈敏、特異。 但是由于方法學(xué)上的特殊性，完成全過程受諸多因素的影響，包括：標(biāo)本處理時(shí)間，固定劑 的選擇，單克隆抗體細(xì)胞株的特異性等，另外該方法對(duì)鏡檢人員技術(shù)要求較高，方法上難以 實(shí)現(xiàn)高通量檢測(cè)，抗污染能力不強(qiáng)，成本過高，目前難以普及。
[0012] 5)PCR方法
[0013] PCR方法檢測(cè)HCMV，靈敏度為0. 15fg，敏感度和特異度較高，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)病毒檢測(cè) 的量化，在檢測(cè)病毒活動(dòng)性、評(píng)價(jià)抗病毒療效等方面具有重要的意義。
[0014] 從目前PCR檢測(cè)結(jié)果來看，單用一對(duì)PCR引物可引起假陰性，主要原因可能是臨床 標(biāo)本中HCMV病毒株的不同、或者病毒基因組中極小變異、以及病毒拷貝數(shù)太低所致。此外， 引物設(shè)計(jì)序列針對(duì)HCMV同一基因的不同部位，PCR結(jié)果也有明顯差異，方法還需標(biāo)準(zhǔn)化，目 前市場(chǎng)上還沒有商品化的HCMV的PCR診斷試劑盒。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0015] 本發(fā)明設(shè)計(jì)合成了一種多肽序列，可用于測(cè)定病人外周血中具有保護(hù)性CMV特異 CD8+T細(xì)胞數(shù)量的臨床界限，監(jiān)測(cè)評(píng)估機(jī)體內(nèi)感染的CMV再激活及致病的可能。
[0016] 應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明下文中，多肽或多肽序列與氨基酸序列具有相同的含義。
[0017] 本發(fā)明的第一個(gè)方面提供了一種多肽序列，所述多肽序列包括SEQIDNo. 1所示序 列。
[0018] SEQIDNo.I:SerThrHisProMetValThrArgSerLys。
[0019] 下文中，SEQIDNo. 1 也可以簡(jiǎn)寫為：STHPMVTRSK。
[0020] 本發(fā)明上述內(nèi)容中，所述多肽序列優(yōu)選為SEQIDNo. 1所示序列、及其多聚體中的 任意一種或幾種。
[0021] 其中，所述多聚體優(yōu)選地可以是二聚體、三聚體、四聚體或更多聚體。
[0022] 本發(fā)明第二個(gè)方面是提供一種多肽序列在制備檢測(cè)巨細(xì)胞病毒試劑中的應(yīng)用，所 述多肽序列包括SEQIDNo. 1所示序列。
[0023] 本發(fā)明上述內(nèi)容中，所述多肽序列優(yōu)選為SEQIDNo. 1所示序列、及其多聚體中的 任意一種或幾種。
[0024] 其中，所述多聚體優(yōu)選地可以是二聚體、三聚體、四聚體或更多聚體。
[0025] 本發(fā)明第三個(gè)方面是提供一種檢測(cè)巨細(xì)胞病毒的試劑盒，所述試劑盒包括一種多 肽序列，所述多肽序列包括SEQIDNo. 1所示序列。
[0026] 本發(fā)明上述內(nèi)容中，所述多肽序列優(yōu)選為SEQIDNo. 1所示序列、及其多聚體中的 任意一種或幾種。
[0027] 其中，所述多聚體優(yōu)選地可以是二聚體、三聚體、四聚體或更多聚體。
[0028] 在本發(fā)明第三個(gè)方面的一種優(yōu)選實(shí)施例中，所述試劑盒還可以包括熒光標(biāo)記。
[0029] 其中，所述熒光標(biāo)記可以是熒光素、放射性核素、酶、化學(xué)發(fā)光物質(zhì)、金屬顆粒中的 任意一種或幾種。
[0030] 所述熒光素的例子包括FITC、RB200、TRITC中的任意一種或幾種。
[0031] 所述放射性核素的例子包括3H、14C、32P、125I、131I中的任意一種或幾種。
[0032] 所述酶的例子包括HRP、AP中的任意一種或幾種。
[0033] 更優(yōu)選地，所述熒光標(biāo)記為熒光素。
[0034] 在本發(fā)明第三個(gè)方面的一種優(yōu)選實(shí)施例中，所述試劑盒還可以包括HLA基因表位 多肽、及其多聚體中的任意一種或幾種。
[0035] 在本發(fā)明第三個(gè)方面的一種優(yōu)選實(shí)施例中，所述試劑盒還可以包括緩沖液。
[0036] 其中，所述緩沖