一種晾曬煙中異丁烯基黃酮的制備及其抗煙草花葉病毒的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種源于云南地方晾曬煙中異丁烯基黃 酮類化合物及其制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 云南地方晾曬煙是煙草的云南特有變種，煙草從明萬(wàn)歷末年進(jìn)入云南，至清乾隆 年間成為當(dāng)?shù)爻Ｒ?jiàn)的農(nóng)作物。云南自然條件好，溫暖的河谷，冷涼的半山區(qū)、山區(qū)都適應(yīng)煙 草的生長(zhǎng)。而且云南多樣的氣候、地理環(huán)境，煙草在多年的栽培過(guò)程中形成了很多個(gè)具有地 方特色的晾曬煙品種，其中著名的有：羅平八大河煙、師宗五洛河煙、會(huì)澤樂(lè)業(yè)煙、蒙自新安 所煙、富源大河煙、大姚趙戶沖煙、云龍?zhí)斓菬煛①e川白塔煙、巍山南門煙、南澗樂(lè)居煙、騰沖 綺羅生煙等。這些晾曬煙在當(dāng)?shù)爻Ｊa(chǎn)不衰；但其次生代謝產(chǎn)物的研究還從未見(jiàn)報(bào)道過(guò)。
[0003] 黃酮（flavone)，是黃酮類化合物的總稱，泛指兩個(gè)具有酚羥基的苯環(huán)（A-與 B-環(huán)）通過(guò)中央三碳原子相互連結(jié)而成的一系列化合物。研究表明，黃酮類化合物具有心 血管系統(tǒng)活性、抗菌及抗病毒活性、抗腫瘤活性、抗氧化自由基活性、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗變態(tài)等 多種藥理活性。同時(shí)已有研究證實(shí)，其藥理作用與化學(xué)結(jié)構(gòu)密切相關(guān)，為了研究這類化合物 的構(gòu)效關(guān)系，可進(jìn)一步研究和開(kāi)發(fā)更多的黃酮類化合物，從中尋找有效的先導(dǎo)化合物和活 性基團(tuán)。本發(fā)明從云南地方晾曬煙中分離得到了一種新的異丁烯基黃酮類化合物，該化合 物至今尚未見(jiàn)到相關(guān)報(bào)道，值得一提的是該化合物具有顯著的抗煙草花葉病病毒活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的第一方面在于提供一種結(jié)構(gòu)新穎的異丁烯基黃酮類化合物，該化合物從 云南地方晾曬煙中分離得到，其分子式為C21HmO6，經(jīng)過(guò)分析化學(xué)鑒定，其具有下述結(jié)構(gòu)：
[0005]
[0006] 該化合物為橘黃色粉末，按IUPAC系統(tǒng)命名法將其命名為：4'，7_二甲氧基_6_輕 基-8-氧化異丁烯基黃酮。
[0007] 本發(fā)明人將其英文名命名為 4'，7-dimethoxy-6_hydroxy-8- [ (E) -3-hydroxy-2_m ethylprop-1-enyl]-flavone。
[0008] 本發(fā)明的第二方面提供了上述第一方面所述的黃酮類化合物的制備方法，該方法 包括如下步驟：
[0009] a.制備晾曬煙提取物浸膏：以晾曬煙葉片為原料，將其粉碎并用第一溶劑浸泡并 提取所述煙草2~4次，每次12h~72h，將提取液合并、過(guò)濾并濃縮后得到所述煙草提取物 浸膏；其中所述第一溶劑是選自乙醇、甲醇或丙酮的有機(jī)溶劑與水的混合物，其中有機(jī)溶劑 占該第一溶劑的60被％~100被％，且第一溶劑：煙草=1.5~4:1，重量比；
[0010] b.硅膠柱層析：將上述煙草提取物浸膏用選自純甲醇、純乙醇或純丙酮的第二溶 劑溶解后與為晾曬煙提取物浸膏的1~1. 6重量倍的60~120目硅膠拌樣，將拌樣后的混 合物再與為晾曬煙提取物浸膏的2~5重量倍的160~300目硅膠混合后干法裝柱，然后 用體積比依次為10:0、9:1、8:2、7:3、6:4和5:5的一系列氯仿-甲醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，收 集其中用體積比為9:1的氯仿-甲醇溶液洗脫時(shí)得到的洗脫液，稱為第一洗脫液；將上述第 一洗脫液用硅膠層析柱繼續(xù)分離，用體積比依次為15:1、12:1、10:1、8:2、7:3和2:1的一系 列氯仿-丙酮溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集其中用體積比為7:3的氯仿-丙酮溶液洗脫時(shí)得到 的洗脫液，稱為第二洗脫液；
[0011] C.高壓液相色譜分離：將上述7:3洗脫部分通入高壓液相色譜進(jìn)行分離純化，該 高壓液相色譜采用21. 2mmX 250mm，5 μ m的C18色譜柱，流動(dòng)相為48wt%的甲醇水溶液，流 動(dòng)相流速為12mL/min，紫外檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)為364nm，第二洗脫液液每次進(jìn)樣60~150 μ L， 收集每次進(jìn)樣后色譜峰保留時(shí)間為20. 6min時(shí)所對(duì)應(yīng)的洗脫液，蒸干溶劑后即得所述黃酮 類化合物。
[0012] 前述高壓是指使用時(shí)壓力在5_15MPa的反相制備色譜。
[0013] 在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明還包括以下進(jìn)一步提純的步驟：將在所述高壓液相 色譜分離之后得到的所述黃酮類化合物再次溶于甲醇溶液，并以甲醇溶液的為流動(dòng)相，通 過(guò)凝膠柱進(jìn)行層析分離，提到進(jìn)一步提純的所述黃酮類化合物。
[0014] 本發(fā)明的第三方面提供了第一方面所述的黃酮類化合物在制備抗煙草花葉病毒 藥物中的應(yīng)用。
【附圖說(shuō)明】
[0015] 圖1為本發(fā)明的新型黃酮類化合物的核磁共振碳譜。
[0016] 圖2為本發(fā)明的新型黃酮類化合物的核磁共振氫譜。
[0017] 圖3為本發(fā)明的新黃酮類化合物的主要HMBC相關(guān)圖示。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 本發(fā)明所制備的新型黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)是通過(guò)以下方法測(cè)定出來(lái)的：本發(fā) 明化合物為橘黃色粉末；紫外光譜（溶劑為甲醇），λ _ (log ε ) 210 (4. 22)、254 (3. 69)、 364(3.58)nm;紅外光譜（溴化鉀壓片）vnax 3438、2932、2875、1652、1605、1574、1527、 1462、1358、1241、1156、1038、962、826 和 768cm S 高分辨質(zhì)譜（HRES頂S)391. 1153 給出準(zhǔn) 分子離子峰m/z[M+Na] + (計(jì)算值391. 1158)。結(jié)合1H和13C NMR譜給出分子式C21H2qO6，不飽 和度為12。核磁共振數(shù)據(jù)（表1)表明，該化合物可能是一個(gè)黃酮類化合物。1H NMR和13C NMR譜（表1)顯示顯示21個(gè)碳原子和20個(gè)質(zhì)子信號(hào)（表-1)，包括：一個(gè)1，4-二取代的苯 環(huán)信號(hào)、一個(gè)1，2, 3, 4, 5-五取代的苯環(huán)信號(hào)、一個(gè)異丁烯基、二個(gè)甲氧基、一個(gè)酚羥基、一 個(gè)羰基和一組雙鍵；其中兩個(gè)苯（C-5~C-IO和C-I'~C-6')、羰基（C-4)和雙鍵（C-2 和C-3)構(gòu)成了黃酮的骨架。黃酮的母體骨架確定后，剩余的信號(hào)：一個(gè)異丁烯基、二個(gè)甲氧 基、一個(gè)酚羥基則為黃酮的取代基。根據(jù)兩甲氧基氫信號(hào)分別與C-7和C-4'的HMBC相關(guān) (圖-3)可證實(shí)兩甲氧基分別取代在黃酮骨架的C-7和C-4'位，根據(jù)H-1"和C-7、C-8和 C-9的HMBC相關(guān)可證實(shí)異丁烯基取代在C-8位；根據(jù)酚羥基信號(hào)與C-5, C-6和C-7的HMBC 相關(guān)，可證實(shí)酚羥基信號(hào)取代在C-6位。至此，化合物的結(jié)構(gòu)得以確定。命名為4'，7_二甲 氧基-6-羥基 _8_ 氧化異丁烯基黃酮（4,，7-dimethoxy-6_hydroxy-8-[ (E) -3_hydroxy-2- methylprop-1-enyl]-flavone)〇 [0019] 表-I化合物的核磁共振數(shù)據(jù)
[0021] 本發(fā)明化合物是首次被分離出來(lái)的，通過(guò)核磁共振和質(zhì)譜測(cè)定方法確定了為異 丁烯基黃酮類化合物，并表征了其具體結(jié)構(gòu)。經(jīng)對(duì)抗煙草花葉病毒的實(shí)驗(yàn)，其相對(duì)抑制率 達(dá)到38. 6%，具有很好的抗煙草花葉病毒活性，超過(guò)陽(yáng)性對(duì)照品南寧霉素的相對(duì)抑制率 (31. 5% )。以上結(jié)果揭示了本發(fā)明的化合物在制備抗煙草花葉病毒藥物中有良好的應(yīng)用前 景。本發(fā)明化合物結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單活性好，可作為抗煙草花葉病毒藥物的先導(dǎo)性化合物。
[0022] 下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，但不以任何方式對(duì)本發(fā)明加以 限制，基于本發(fā)明教導(dǎo)所作的任何變換或改進(jìn)，均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0023] 本發(fā)明所用原料不受地區(qū)和品種限制，任何來(lái)源的地方晾曬煙均可以實(shí)現(xiàn)本發(fā) 明，下面以來(lái)源于云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司的煙草原料對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。除非另 有說(shuō)明，本發(fā)明中所采用的百分?jǐn)?shù)均為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)。
[0024] 實(shí)施例1
[0025] 所用地方晾曬煙為云南大理云龍?zhí)斓菬?。將晾曬煙取?. Okg粉碎以70%的丙 酮/水提取3次，每次提取24h，提取液合并，過(guò)濾，減壓濃縮成浸膏，得浸膏150g。浸膏用 重量比ISOg的純甲醇溶解后用200g的80目粗硅膠拌樣，1.0 kg的160目硅膠裝柱進(jìn)行硅 膠柱層析，用體積配比為10:0、9:1、8:2、7:3、6 :4、5:5的氯仿-甲醇梯度洗脫，將其中體積 配比為9:1的氯仿-甲醇洗脫部分進(jìn)一步用15:1-2:1的一系列氯仿-丙酮溶液進(jìn)行梯度 洗脫，將其先后劃分成6個(gè)部分，其中7:3洗脫部分用安捷侖1100半制備