是未分選的、細(xì)胞將用于授精 的方法以及受精的雌性哺乳動(dòng)物。所有這些因素都會(huì)影響在貯存期內(nèi)仍保持存活力的精子 數(shù)目。例如，一般而言，細(xì)胞可能貯存的時(shí)間越長(zhǎng)，其可能貯存的溫度越低。溫度的降低可 使更大百分比的貯存細(xì)胞在長(zhǎng)時(shí)期內(nèi)保持存活。
[0089] 因此，可將細(xì)胞貯存于約_196°C至約30°C的溫度下。例如，細(xì)胞可貯存于"相對(duì) 低貯存溫度"下，即溫度范圍約-196°C至約-4°C ;在該實(shí)施方案中，溫度優(yōu)選為約-12°C至 約-4°C，更優(yōu)選為-KTC至約-4°C，最優(yōu)選為約-4°C?；蛘咭部蓪⒓?xì)胞貯存于"中間貯存溫 度"下，即溫度范圍約-4°C至約5°C ;在該實(shí)施方案中，溫度優(yōu)選為約-3°C至約5°C，更優(yōu)選 為約0°C至約5°C，而最優(yōu)選為5°C。此外，細(xì)胞可貯存于"稍高貯存溫度"下，即溫度范圍約 5°C至約30°C ;在該實(shí)施方案中，溫度優(yōu)選為約10°C至約25°C，更優(yōu)選為約12°C至約23°C， 更優(yōu)選為約15°C至約20°C，而最優(yōu)選為18°C。有利的是，已經(jīng)確定將細(xì)胞貯存于約18°C的 抑制性緩沖物中可以提供額外的益處，即存活和運(yùn)動(dòng)精子細(xì)胞的數(shù)目增多；因?yàn)樵谳^高溫 度或冰點(diǎn)溫度（即溫度低于〇°C )時(shí)貯存的困難都可對(duì)精子存活力造成有害影響。
[0090] C.貯存容器
[0091] 可將精子分散體系貯存于一系列不同的容器中。由于容器的大小不同，一般而言 合適的容器需能容納精子分散體系；也就是說，制成容器的材料一般不易因接觸液體，更具 體地為精子分散體系而發(fā)生滲漏或變質(zhì)，不管這一接觸發(fā)生于容器的內(nèi)部還是外部。合適 容器的實(shí)例包括如，燒瓶、燒杯、試管、安瓿，以及其他此類一般由玻璃、塑料或其他類似材 料制成的容器。在具體實(shí)施方案中，容器為一類用于授精雌性哺乳動(dòng)物的結(jié)構(gòu)物，例如細(xì)長(zhǎng) 容器。此類細(xì)長(zhǎng)容器的長(zhǎng)度與直徑之比一般為約1000:1至約100:1，優(yōu)選長(zhǎng)度與直徑之比 為約900:1至約200:1，更優(yōu)選長(zhǎng)度與直徑之比為約800:1至約300:1，更優(yōu)選長(zhǎng)度與直徑 之比為約700:1至約400:1，甚至更優(yōu)選長(zhǎng)度與直徑之比為約600:1至約400:1，更優(yōu)選長(zhǎng) 度與直徑之比為約500:1至約400:1，而在具體實(shí)施方案中，長(zhǎng)度與直徑之比為約450:1。此 類細(xì)長(zhǎng)容器的容量一般為約0.1 cc至約lOOcc，使用容器容量的選擇取決于獲得精子的哺 乳動(dòng)物種系。例如，此類細(xì)長(zhǎng)容器的容量可為約〇. I CC至約0. 7cc，優(yōu)選容量為約0. 2cc至 約0. 6cc，更優(yōu)選容量為約0. 23cc至約0. 5cc，而最優(yōu)選容量為約0. 3cc至約0. 4cc。在具 體實(shí)施方案中，人工授精行業(yè)內(nèi)常把該細(xì)長(zhǎng)容器稱為吸管，其容量為約〇. 23cc，且長(zhǎng)度與直 徑比例為約133:1。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，人工授精行業(yè)內(nèi)常把該細(xì)長(zhǎng)容器稱為吸管， 其容量為約〇.5cc，且長(zhǎng)度與直徑比為約67:1。一般而言，這些容量的容器可用于貯存牛精 子細(xì)胞。
[0092] 或細(xì)長(zhǎng)容器的容量可為Icc至約100cc，優(yōu)選容量為約IOcc至約75cc，更優(yōu)選容 量為約15cc至約50cc，更優(yōu)選容量為約20cc至約40cc，甚至更優(yōu)選容量為約25cc至約 30cc。在具體實(shí)施方案中，人工授精行業(yè)內(nèi)常把該細(xì)長(zhǎng)容器稱為吸管，其容量為約25cc，且 長(zhǎng)度與直徑比例為約445:1。一般而言，這一容量的容器可用于貯存豬精子細(xì)胞。
[0093] 將精子分散體系貯存于吸管中的優(yōu)勢(shì)在于，可一直將分散體系貯存其中直至其被 用于授精雌性哺乳動(dòng)物，彼時(shí)即可將吸管內(nèi)的內(nèi)容物置入雌性哺乳動(dòng)物的子宮中。因此，在 這種情況下，細(xì)胞可保留在吸管的運(yùn)動(dòng)性抑制劑內(nèi)（因此為不運(yùn)動(dòng)狀態(tài)），直至用該分散體 系授精雌性，到時(shí)子宮內(nèi)部的液體會(huì)稀釋運(yùn)動(dòng)性抑制劑，使不運(yùn)動(dòng)細(xì)胞恢復(fù)運(yùn)動(dòng)。
[0094] III.受精或授精
[0095] 本發(fā)明的另一方面主要是利用上述貯存精子的新方法，使卵受精或授精雌性哺乳 動(dòng)物。
[0096] -旦如上文"收集精子細(xì)胞樣品"中詳細(xì)討論的，形成了精子分散體系，該精子分 散體系即可用于授精雌性哺乳動(dòng)物?？梢愿鶕?jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的多種方法中的任意一 種實(shí)施授精。這些方法包括如人工授精（包括標(biāo)準(zhǔn)人工授精和深度子宮內(nèi)授精），以及其他 本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的方法。例如，包含不運(yùn)動(dòng)精子和誘導(dǎo)精子不運(yùn)動(dòng)的組合物的精子 分散體系，可通過如人工授精用于授精雌性哺乳動(dòng)物。在具體實(shí)施方案中，該精子分散體系 可在細(xì)長(zhǎng)容器中以用于授精雌性哺乳動(dòng)物，且該精子分散體系中的精子保持不動(dòng)直至使用 其對(duì)雌性哺乳動(dòng)物授精。在另一實(shí)施方案中，通過如上述方法使精子分散體系中的精子恢 復(fù)了運(yùn)動(dòng)或活性狀態(tài)，然后用于授精雌性哺乳動(dòng)物。
[0097] 或者也可通過如微注射（包括卵細(xì)胞質(zhì)內(nèi)單精子注入（intracytoplasmic sperm injection，ICSI))及其他本領(lǐng)域已知的方法，用該精子分散體系授精卵，更具體而言為體 外的卵。然后可通過多種本領(lǐng)域技術(shù)人員已知方法中的任意一種，將受精卵導(dǎo)入雌性哺乳 動(dòng)物的子宮內(nèi)，例如通過胚胎移植。
[0098] 利用精子分散體系授精雌性哺乳動(dòng)物或使體外卵細(xì)胞受精（隨后將受精卵導(dǎo)入 雌性子宮中），可在形成精子分散體系之后不久進(jìn)行，例如在約120小時(shí)之內(nèi)，優(yōu)選在約96 小時(shí)之內(nèi)，更優(yōu)選在約72小時(shí)之內(nèi)，更優(yōu)選在約48小時(shí)之內(nèi)，而在具體實(shí)施方案中，在形成 精子分散體系后的約24小時(shí)之內(nèi)。在這種情況下，一般在授精雌性哺乳動(dòng)物或使體外卵細(xì) 胞受精前，該分散體系可不需冷藏（即，分散體系是新鮮的或包含新鮮的精子細(xì)胞）；或者， 可將其保存于運(yùn)動(dòng)性抑制劑中，和/或在約4°C至約25°C溫度，更優(yōu)選為約KTC至約25°C， 進(jìn)一步優(yōu)選為約15°C至約20°C，而最優(yōu)選為約18°C下冷藏?；蛘?，可冷藏該分散體系，然 后在授精雌性哺乳動(dòng)物或使體外卵細(xì)胞受精之前解凍（即，分散體系為冷凍/解凍或包含 冷凍/解凍的精子細(xì)胞）。一般而言，在這種情況下，將于授精雌性哺乳動(dòng)物或使體外卵細(xì) 胞受精之前即刻解凍冷藏的分散體系，例如在約15分鐘內(nèi)?；蛘呖蓪⒗洳氐姆稚Ⅲw系于一 段時(shí)間內(nèi)解凍，或解凍后貯存一段時(shí)間，如少于約5天，更優(yōu)選少于約2天，更優(yōu)選少于約1 天，而最優(yōu)選少于約12小時(shí)。
[0099] IV.提供新鮮精子分散體系的方法
[0100] 本發(fā)明的另一個(gè)方面主要是利用上述精子分散體系，為授精雌性哺乳動(dòng)物提供新 鮮的精子分散體系。有利的是，運(yùn)動(dòng)性抑制劑可以保證從來源哺乳動(dòng)物精子收集至相應(yīng)抑 制劑中，并將精子分散體系運(yùn)達(dá)育種場(chǎng)所（即，授精雌性哺乳動(dòng)物的場(chǎng)所）而不需冷凍分散 體系。因此，這使得相對(duì)于冰凍/解凍分散體系，該分散體系中有更大百分比的精子保持存 活，其中冰凍及隨后解凍分散體系中細(xì)胞的困難增加了對(duì)細(xì)胞存活力不良影響的風(fēng)險(xiǎn)。運(yùn) 動(dòng)性抑制劑在精子分散體系中的應(yīng)用，以及任選于約4°C至約25°C的溫度，優(yōu)選于約KTC 至約20°C，更優(yōu)選于約15°C至約20°C，而最優(yōu)選為約18°C下貯存和/或運(yùn)輸分散體系，可 提高利用該精子分散體系授精雌性哺乳動(dòng)物的受孕率。運(yùn)動(dòng)性抑制劑在精子分散體系中的 應(yīng)用，以及任選在低溫下貯存和運(yùn)輸，也使可利用較低精子濃度授精雌性哺乳動(dòng)物，因?yàn)樵?分散體系中更大數(shù)量的細(xì)胞保持了存活力。
[0101] 一旦如上文"收集樣品"中詳細(xì)描述的，形成了精子分散體系，可將該分散體系 置于容器中運(yùn)輸?shù)竭b遠(yuǎn)地點(diǎn)，如距離獲得精子或形成精子分散體系的場(chǎng)所一或多英里遠(yuǎn) (1.69或更多千米）的農(nóng)場(chǎng)或其他育種場(chǎng)所。分散體系可置于任何能保護(hù)其免受運(yùn)輸?shù)钠D 難環(huán)境而導(dǎo)致的損傷的容器中?？梢詫⑷萜鞲魺嵋员３址稚Ⅲw系處于合適的溫度下，例如 在約4°C至約25°C間，更優(yōu)選約10°C至約25°C間，更優(yōu)選約15°C至約20°C間，而最優(yōu)選為 約18°C。此外，可將分散體系置于用于授精雌性哺乳動(dòng)物的容器中，然后將一個(gè)或多個(gè)該授 精容器置于另一容器中運(yùn)輸至遙遠(yuǎn)地點(diǎn)。例如，可將精子分散體系置于一個(gè)或多個(gè)吸管中， 將這些吸管置于冷卻器內(nèi)運(yùn)輸?shù)接N場(chǎng)所。
[0102] 可以通過許多已知的運(yùn)輸方法中的任意一種來運(yùn)輸容器，例如通過美國(guó)郵遞、多 種過夜運(yùn)輸服務(wù)中的任意一種，或通過快件服務(wù)。
[0103] 上文已經(jīng)詳細(xì)描述了本發(fā)明，顯而易見的是，在不脫離所附權(quán)利要求定義的發(fā)明 范圍內(nèi)可對(duì)其進(jìn)行修飾和改變。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 貯存未分選精子的方法，所述方法包括 a. 形成包含精子、誘導(dǎo)精子不運(yùn)動(dòng)的組合物以及抗生素的精子分散體系，且 b. 貯存所述精子分散體系。2. 貯存分選精子的方法，所述方法包括 a. 形成包含精子及誘導(dǎo)精子不運(yùn)動(dòng)的組合物的精子分散體系， b. 將該精子分散體系分選為分離群體，其中所述群體之一中的精子包含至少約65% 帶有X染色體的精子細(xì)胞或至少約65%帶有Y染色體的精子細(xì)胞，且 c. 于約-4°C至約30°C的溫度下貯存上述群體。3. 授精雌性哺乳動(dòng)物的方法，所述方法包括用精子分散體系授精雌性哺乳動(dòng)物，所述 精子分散體系包含不運(yùn)動(dòng)的精子和誘導(dǎo)精子不運(yùn)動(dòng)的組合物。4. 提供新鮮精子分散體系用于授精雌性哺乳動(dòng)物的方法，所述方法包括 a. 形成包含精子和誘導(dǎo)精子不運(yùn)動(dòng)的組合物的精子分散體系， b. 將該精子分散體系置于容器中用以進(jìn)行遠(yuǎn)距離運(yùn)輸，且 c. 在形成精子分散體系后的約24小時(shí)內(nèi)將所述容器內(nèi)的精子分散體系進(jìn)行遠(yuǎn)距離運(yùn) 輸。5. -種組合，其包括 a. 用于授精雌性哺乳動(dòng)物的細(xì)長(zhǎng)容器，及 b. 精子分散體系，所述精子分散體系包含不運(yùn)動(dòng)的精子和誘導(dǎo)精子不運(yùn)動(dòng)的組合物， 且其中所述精子分散體系含納于所述細(xì)長(zhǎng)容器內(nèi)。6. 包含不運(yùn)動(dòng)的精子、誘導(dǎo)精子不運(yùn)動(dòng)的組合物以及冷凍防腐劑的精子分散體系。7. 前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中的方法、組合或分散體系，其中所述精子分散體系貯存在 約-4°C至約30°C。8. 前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中的方法、組合或分散體系，其中所述精子分散體系貯存在 約-4°C至約5°C。9. 前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中的方法、組合或分散體系，其中所述精子分散體系貯存在 約-4°C至約0°C。10. 前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中的方法、組合或分散體系，其中所述精子分散體系貯存在約 0°C至約 5°C。11. 前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中的方法、組合或分散體系，其中所述精子分散體系貯存在約 5°C 至約 30°C。12. 前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中的方法、組合或分散體系，其中所述精子分散體系貯存至少 約24小時(shí)。13. 前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中的方法、組合或分散體系，其中所述精子分散體系貯存至少 約48小時(shí)。14. 前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中的方法、組合或分散體系，其中所述精子分散體系貯存至少 約72小時(shí)。15. 前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中的方法、組合或分散體系，其中所述精子分散體系貯存至少 約96小時(shí)。16. 前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中的方法、組合或分散體系，其中所述精子分散體系貯存至少 約1周。17. 前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中的方法、組合或分散體系，其中所述精子分散體系貯存至少 約2周。18. 前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中的方法、組合或分散體系，其中所述精子分散體系中精子的 濃度為至少約