一種沼澤紅假單胞菌同步化濃縮的方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生態(tài)制劑的技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種沼澤紅假單胞菌同步化濃縮的 方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 沼澤紅假單胞菌（Rhodopseudanonaspalustris)屬于光合細(xì)菌的一種，屬于紅 螺菌科，紅假單胞菌屬，細(xì)胞短或長桿狀，弧形或螺旋形；以二分裂或芽殖方式繁殖。本菌含 有細(xì)菌葉綠素a或b和類群1，2, 4的類胡蘿卜素，以及尚未包括在上述類群中的一些類胡 蘿卜素?？勺鳛橐环N水質(zhì)凈化劑，由于沼澤紅假單胞菌光能異養(yǎng)，兼性好養(yǎng)，在光照厭氧或 黑暗微好氧的條件下都能生長，對于降低氨氮、亞硝酸鹽、COD含量，以及提高溶解氧有顯著 效果；作為一種飼料添加劑，菌體富含菌體蛋白和B族維生素，適口性好，營養(yǎng)豐富，在水產(chǎn) 養(yǎng)殖業(yè)上有廣闊的應(yīng)用前景。
[0003]目前，市售光合細(xì)菌種類繁多，性狀大多是液體。常規(guī)培養(yǎng)出的沼澤紅假單胞菌有 如下缺點(diǎn)：1、菌體不同生長階段混雜，生長速度難以控制；2、菌體易沉降分層，影響產(chǎn)品性 狀；3、復(fù)活率低，在培養(yǎng)后期，培養(yǎng)基耗竭導(dǎo)致菌體大量死亡，次級(jí)代謝產(chǎn)物(如硫）積累，毒 害菌體細(xì)胞。有鑒于此，本發(fā)明人研宄和設(shè)計(jì)了一種沼澤紅假單胞菌同步化濃縮的方法及 應(yīng)用，本案由此產(chǎn)生。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種沼澤紅假單胞菌同步化濃縮的方法及應(yīng)用，本發(fā)明通 過對沼澤紅假單胞菌的生長周期進(jìn)行紅-藍(lán)光照調(diào)整，減緩菌體代謝活動(dòng)，促使所有菌體 細(xì)胞形態(tài)一致，通過添加大分子吸附材料促進(jìn)菌-液分離，以獲得高濃縮菌泥，再加入載體 及干燥劑使之充分分散，最終制成高質(zhì)量的粉劑形態(tài)。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明解決其技術(shù)問題的技術(shù)方案是： 一種沼澤紅假單胞菌同步化濃縮的方法，包括以下步驟： 步驟一、沼澤紅假單胞菌培養(yǎng) 三角瓶培養(yǎng)，稱取乙酸鈉8g/l，氯化銨2g/l，酵母膏3g/l，鹽鹵5ml/l，氯化鈣0. 5g/l， 黃腐酸鉀0. 8g/l，磷酸氫二鉀lg/1，以上試劑溶解后用濃度為3%雙氧水消毒30分鐘；滅菌 完畢加入碳酸氫鈉2g/l溶解，裝入1L三角瓶中；或者， 大規(guī)模培養(yǎng)，稱取乙酸鈉8kg/t，氯化按2kg/t，酵母膏3kg/t，鹽鹵5L/t，氯化媽0. 5kg/t，黃腐酸鉀0.8kg/t，磷酸氫二鉀1kg/t，以上試劑溶解后用濃度為3%雙氧水消毒30 分鐘；滅菌完畢加入碳酸氫鈉2kg/t溶解，加入到塑料袋中； 步驟二、接種培養(yǎng) 按20%接種量接種沼澤紅假單胞菌菌液，32°C，3000-53001X白熾燈光照條件下培養(yǎng) 72h-96h，將培養(yǎng)液稀釋100倍，在660nm處測定0D值達(dá)到1. 8以上；接種所使用的器具均 滅菌處理，接種過程無菌操作； 步驟三、菌體同步化處理 將培養(yǎng)液置于黑暗條件下，不接觸自然光，按紅光：藍(lán)光比例為4 :1~1 :1進(jìn)行搭配照 射，照射3~5h;目的是使沼澤紅假單胞菌代謝活動(dòng)逐步減慢，形態(tài)逐漸趨于一致； 步驟四、物理濃縮處理 向上述同步化處理后的培養(yǎng)液中加入聚丙烯酰胺陽離子、羧甲基纖維素鈉、瓜爾豆膠、 黃原膠、殼聚糖的一種或幾種，比例為0. 5%~1. 5%，避光處保存3. 5-5小時(shí)，去掉上清液，即 可得超濃縮沼澤紅假單胞菌，細(xì)胞數(shù)目可達(dá)7. 3X1012個(gè)/g。
[0006] 一種沼澤紅假單胞菌同步化濃縮的應(yīng)用，取上述經(jīng)物理濃縮后的沼澤紅假單胞菌 一份，向其中加入保護(hù)劑聚乙二醇400、海藻糖、甘油、谷氨酸鈉、吐溫80的一種或幾種，添 加量為8%~35%，混合均勻，即得沼澤紅假單胞菌超濃縮活菌制劑；本品性狀為液體，有效 沼澤紅假單胞菌數(shù)目可達(dá)7X1011個(gè)/ml。
[0007] -種沼澤紅假單胞菌同步化濃縮的應(yīng)用，取上述物理濃縮后的沼澤紅假單胞菌一 份，向其中加入二氧化硅、硫酸鈉、氧化鈣、玉米芯粉及硫酸鎂中的一份或幾份，低溫噴霧干 燥處理，粉劑晾干后加入酵母粉一份到三份；制得沼澤紅假單胞菌濃縮菌粉；按此方法做 成的粉劑產(chǎn)品中沼澤紅假單胞菌細(xì)胞數(shù)目可達(dá)5.OX109個(gè)/g。
[0008] 本發(fā)明利用沼澤紅假單胞菌吸收利用紅藍(lán)光譜波長的不同（紅光主要波長范圍 610nm~720nm，藍(lán)光主要波長范圍400nm~520nm)，通過對沼澤紅假單胞菌的生長周期 進(jìn)行紅-藍(lán)光照調(diào)整，減緩菌體代謝活動(dòng)，促使所有菌體細(xì)胞形態(tài)一致；通過添加大分子吸 附材料促進(jìn)菌_液分離，以獲得高濃縮菌泥。向上述濃縮后的沼澤紅假單胞菌菌液中加入 載體和適量干燥劑使之充分分散，做成粉劑形態(tài)。
【具體實(shí)施方式】
[0009] 實(shí)施例1 一種沼澤紅假單胞菌同步化濃縮的方法，包括以下步驟： 步驟一、沼澤紅假單胞菌培養(yǎng) 三角瓶培養(yǎng)，稱取乙酸鈉8g/l，氯化銨2g/l，酵母膏3g/l，鹽鹵5ml/l，氯化鈣0. 5g/l， 黃腐酸鉀0. 8g/l，磷酸氫二鉀lg/1，以上試劑溶解后用濃度為3%雙氧水消毒30分鐘；滅菌 完畢加入碳酸氫鈉2g/l溶解，裝入1L三角瓶中；或者， 大規(guī)模培養(yǎng)，稱取乙酸鈉8kg/t，氯化按2kg/t，酵母膏3kg/t，鹽鹵5L/t，氯化媽0. 5kg/t，黃腐酸鉀0.8kg/t，磷酸氫二鉀1kg/t，以上試劑溶解后用濃度為3%雙氧水消毒30 分鐘；滅菌完畢加入碳酸氫鈉2kg/t溶解，加入到塑料袋中； 步驟二、接種培養(yǎng) 按20%接種量接種沼澤紅假單胞菌菌液，32°C，3000-53001X白熾燈光照條件下培養(yǎng) 72h-96h，將培養(yǎng)液稀釋100倍，在660nm處測定OD值達(dá)到1. 8以上；接種所使用的器具均 滅菌處理，接種過程無菌操作； 步驟三、菌體同步化處理 將培養(yǎng)液置于黑暗條件下，不接觸自然光，按紅光：藍(lán)光比例為4 :1~1 :1進(jìn)行搭配照 射，照射3~5h;目的是使沼澤紅假單胞菌代謝活動(dòng)逐步減慢，形態(tài)逐漸趨于一致； 步驟四、物理濃縮處理 向上述同步化處理后的培養(yǎng)液中加入聚丙烯酰胺陽離子、羧甲基纖維素鈉、瓜爾豆膠、 黃原膠、