一種應(yīng)用于含油泥砂中的耐鹽芘降解菌劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于環(huán)境修復(fù)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種應(yīng)用于含油泥砂中的耐鹽芘降解菌劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 含油泥砂主要來(lái)源于油田正常生產(chǎn)過(guò)程中排出的含油泥沙以及各種原因造成的 落地原油與泥土形成的含油污泥，是一種高含油的固體廢棄物。含油泥砂主要通過(guò)4條渠 道產(chǎn)生：①鉆井等施工作業(yè)過(guò)程中產(chǎn)生的落地油；②采油過(guò)程中產(chǎn)生的泥砂；③儲(chǔ)油罐底 部積累的底泥；④原油輸送過(guò)程中管道泄漏污染的泥土。石油工業(yè)的飛速發(fā)展產(chǎn)生了大量 的含油泥砂，部分典型含油泥砂的含油量可達(dá)60%以上，環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)極大。特別是其中的芘等 多環(huán)芳徑（PolycyclicAromaticHydrocarbons，PAHs)難以自然降解，對(duì)生態(tài)環(huán)境造成了 嚴(yán)重威脅。此外，多環(huán)芳烴具有致癌致畸致突變的"三致"效應(yīng)，嚴(yán)重威脅生態(tài)系統(tǒng)健康，因 而被多個(gè)國(guó)家和地區(qū)列入優(yōu)先控制污染物，急需治理。
[0003] 目前，對(duì)于土壤和水體等低鹽環(huán)境中多環(huán)芳烴芘的微生物治理方法研宄較多，并 開(kāi)發(fā)了一系列微生物菌劑。例如：中國(guó)專(zhuān)利（2014105385123)公開(kāi)了一種多環(huán)芳徑降解微 生物菌劑及其制備方法和應(yīng)用，可將菜園土壤中所含的高濃度（50mg/kg)多環(huán)芳烴芘去除 90%以上。中國(guó)專(zhuān)利（2011100481686)公開(kāi)了一種鞘氨醇單胞菌菌株，能夠以多環(huán)芳烴菲、 芘為唯一碳源和能源生長(zhǎng)繁殖，能將自然水體中2mg/L多環(huán)芳烴菲、芘降解95%以上。
[0004] 但是，隨著我國(guó)海洋石油勘探開(kāi)發(fā)力度的不斷增加，產(chǎn)生了大量鹽濃度較高的含 油泥砂，如何降解高含鹽含油泥砂中的芘成為亟待解決的重要任務(wù)。土壤和水體等低鹽環(huán) 境中分離得到的芘降解菌無(wú)法在高鹽環(huán)境中生存，更難以降解其中的多環(huán)芳烴污染物。采 用含油泥砂中分離得到的耐鹽芘降解菌治理該環(huán)境中的多環(huán)芳烴芘污染是解決此難題的 有效策略。但是國(guó)內(nèi)外至今仍沒(méi)有針對(duì)含油泥砂中耐鹽芘降解菌劑的相關(guān)專(zhuān)利。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是，針對(duì)目前高鹽含油泥砂中的芘難以生物降解的問(wèn) 題，提供一種應(yīng)用于含油泥砂中的耐鹽芘降解菌劑。
[0006] 為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種應(yīng)用于含油泥砂中的耐 鹽花降解菌劑，包括副球菌（Paracoccussp. )PH205和載體，所述副球菌（Paracoccussp.) PH205于2014年5月16日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編 號(hào)CGMCCNo. 9174。
[0007] 所述載體為硅藻土、超細(xì)碳酸鈣和海藻酸鈉中的一種或幾種。
[0008] 所述副球菌（Paracoccussp. )PH205和載體的質(zhì)量比為（1~5) : (1~100)。
[0009] 所述鹽的質(zhì)量濃度為0.1%~5%，鹽為NaCl和/或Na2S04。
[0010] 本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明以石油微生物學(xué)為理論依據(jù)，綜合環(huán)境微生物學(xué)、環(huán) 境工程學(xué)和發(fā)酵工程的相關(guān)理論知識(shí)，針對(duì)高鹽含油泥砂中的芘難以生物降解的問(wèn)題，設(shè) 計(jì)應(yīng)用于含油泥砂中的耐鹽芘降解菌劑配方。通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，本發(fā)明提供的一種應(yīng)用于含 油泥砂中的耐鹽芘降解菌劑對(duì)多環(huán)芳烴芘降解速度快；對(duì)鹽度適應(yīng)范圍廣泛，最高可用于 5%NaCl的高鹽環(huán)境。
【具體實(shí)施方式】
[0011] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明：
[0012] 本發(fā)明使用的菌株由發(fā)明人從高鹽含油泥砂中分離篩選得到，具有多環(huán)芳烴芘降 解特征和耐鹽特征。
[0013] 菌PH205,分類(lèi)命名：副球菌（Paracoccussp.)于2014年5月16日保藏于中國(guó) 微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址：北京市朝陽(yáng)區(qū)大屯路，中國(guó)科學(xué)院微生 物研宄所，郵編：100101，保藏編號(hào)為CGMCCNo. 9174,并已存活。
[0014] 菌PH205(Paracoccussp.)具有以下微生物學(xué)特性：
[0015] 1?形態(tài)學(xué)特性
[0016] 在顯微鏡下觀(guān)察，為橢球狀、短桿狀，直徑為0. 5-0. 8ym;菌205在牛肉膏蛋白胨 培養(yǎng)基上形成橙黃色菌落。
[0017] 2?培養(yǎng)學(xué)特性
[0018] 在35°C下，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，菌205具有以下特性。
[0019] 表面較光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊規(guī)則，菌落圓形，表面呈橙黃色。
[0020] 3?生理特性
[0021] 好氧條件下可利用多環(huán)芳烴芘生長(zhǎng)的革蘭氏陰性細(xì)菌，接觸酶陽(yáng)性、脲酶陰性、氧 化酶陽(yáng)性、水解淀粉、液化明膠、生長(zhǎng)pH值為6~9,生長(zhǎng)溫度25~40°C。
[0023] 根據(jù)上述微生物學(xué)特性，本發(fā)明的菌株命名為PH205,分類(lèi)命名為副球菌 (Paracoccussp. ) 〇
[0024] 以下通過(guò)具體實(shí)施例闡述本發(fā)明，目的在于幫助本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠更好地理 解本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)，但不作為對(duì)本發(fā)明實(shí)施范圍的進(jìn)行任何限定。
[0025] 實(shí)施例1
[0026] 將菌205接入牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（牛肉膏5g、蛋白胨10g、NaCl5g、水1000ml， pH7. 0 (也可以是7. 1或7. 2)，121°C滅菌20分鐘），30°C恒溫?fù)u床150r/min培養(yǎng)48小時(shí)。 5000r/min高速離心10分鐘，棄上清，取下層菌體沉淀，pH7. 0 (也可以是7. 1、7. 2、7. 3、7. 4 或7. 5)磷酸鹽緩沖液洗滌2次。將所得到的菌體沉淀按表1的配方進(jìn)行混合，得到一種應(yīng) 用于含油泥砂中的耐鹽芘降解菌劑。
[0027]表1、配方的組成及比例（各組份為重量份數(shù)）

[0030] 實(shí)施例2
[0031] 實(shí)驗(yàn)組：用配方1制備得到的lg-種應(yīng)用于含油泥砂中的耐鹽芘降解菌劑與10g 含鹽含油泥砂混合均勻，加入營(yíng)養(yǎng)液10ml(氯化銨lg、磷酸氫二鉀lg、磷酸二氫鉀lg溶于 1L蒸餾水）；
[0032] 對(duì)照組：取10g與實(shí)驗(yàn)組相同的含鹽含油泥砂，加入營(yíng)養(yǎng)液10ml;
[0033] 上述含鹽含油泥砂的含鹽質(zhì)量濃度為0.5% (經(jīng)檢測(cè)，其中含有NaCl0.36% Na2S040. 07% ) ;25°C60rpm搖床培養(yǎng)20天，實(shí)驗(yàn)組芘含量由63. 2mg/kg降至40. 7mg/g，芘 降解率達(dá)35. 6%，而對(duì)照組芘降解率為8. 7%。
[0034] 實(shí)施例3
[0035] 實(shí)驗(yàn)組：用配方12制備得到的lg-種應(yīng)用于含油泥砂中的耐鹽芘降解菌劑與 l〇g含鹽含油泥砂混合均勻，加入營(yíng)養(yǎng)液l〇ml(氯化銨lg、磷酸氫二鉀lg、磷酸二氫鉀lg溶 于1L蒸餾水）；
[0036] 對(duì)照組：取10g與實(shí)驗(yàn)組相同的含鹽含油泥砂，加入營(yíng)養(yǎng)液10ml;
[0037] 上述含鹽含油泥砂的含鹽質(zhì)量濃度為2.6% (經(jīng)檢測(cè)，其中含有NaCl1.9% Na2S040. 4% ) ;30°ClOOrpm搖床培養(yǎng)30天，實(shí)驗(yàn)組芘含量由67. 8mg/kg降至54. 4mg/g，芘 降解率達(dá)19. 8%，而對(duì)照組芘降解率為6. 9%。
[0038] 實(shí)施例4
[0039] 實(shí)驗(yàn)組：用配方5制備得到的5g-種應(yīng)用于含油泥砂中的耐鹽芘降解菌劑與10g 含鹽含油泥砂混合均勻，加入營(yíng)養(yǎng)液10ml(氯化銨lg、磷酸氫二鉀lg、磷酸二氫鉀lg溶于 1L蒸餾水）；
[0040] 對(duì)照組：取10g與實(shí)驗(yàn)組相同的含鹽含油泥砂，加入營(yíng)養(yǎng)液10ml;
[0041] 上述含鹽含油泥砂的含鹽質(zhì)量濃度為5 % (經(jīng)檢測(cè)，其中含有NaCl4. 1 % Na2S040. 6% ) ;32°C120rpm搖床培養(yǎng)90天，實(shí)驗(yàn)組芘含量由58. 3mg/kg降至40. 6mg/g，芘 降解率達(dá)30. 4%，而對(duì)照組芘降解率為5. 5%。
[0042] 經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，配方2、3、4、6、7、8、9、10、11的一種應(yīng)用于含油泥砂中的耐鹽芘降解 菌劑對(duì)含鹽含油泥砂中多環(huán)芳烴芘進(jìn)行降解，其降解率均明顯高于各自對(duì)照組的降解率。[0043] 以上所述的實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)思想及特點(diǎn)，其目的在于使本領(lǐng)域內(nèi) 的技術(shù)人員能夠理解本發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)以實(shí)施，不能僅以本實(shí)施例來(lái)限定本發(fā)明的專(zhuān)利范 圍，即凡本發(fā)明所揭示的精神所作的同等變化或修飾，仍落在本發(fā)明的專(zhuān)利范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種應(yīng)用于含油泥砂中的耐鹽芘降解菌劑，其特征在于，包括副球菌（Paracoccus sp. )PH205和載體，所述副球菌（Paracoccus sp. )PH205于2014年5月16日保藏于中國(guó)微 生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)CGMCC No. 9174。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用于含油泥砂中的耐鹽芘降解菌劑，其特征在于，所述載 體為硅藻土、超細(xì)碳酸鈣和海藻酸鈉中的一種或幾種。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用于含油泥砂中的耐鹽芘降解菌劑，其特征在于，所述 副球菌（Paracoccus sp. )PH205和載體的質(zhì)量比為（1~5) : (1~100)。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用于含油泥砂中的耐鹽芘降解菌劑，其特征在于，所述鹽 的質(zhì)量濃度為〇. 1 %~5 %，鹽為NaCl和/或Na2SO4。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種應(yīng)用于含油泥砂中的耐鹽芘降解菌劑，其特征在于，包括副球菌(Paracoccus sp.)PH205和載體，所述副球菌(Paracoccus sp.)PH205于2014年5月16日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)CGMCC No.9174。該菌可以快速降解含鹽含油污泥中的多環(huán)芳烴芘。實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的菌劑芘降解速度快、鹽度適應(yīng)范圍廣，最高可用于5％鹽度的含油污泥，可有效地降低含油污泥中的多環(huán)芳烴芘含量。CGMCC No.917420140516
【IPC分類(lèi)】C02F11/00, C12N11/14, C12N11/04
【公開(kāi)號(hào)】CN104962545
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510341779
【發(fā)明人】王新新, 石烜, 陳宇, 白鶴, 馬蒸釗, 曹興濤
【申請(qǐng)人】中海石油環(huán)保服務(wù)（天津）有限公司
【公開(kāi)日】2015年10月7日
【申請(qǐng)日】2015年6月18日