（5°C )青貯環(huán)境 中，青貯前 3 天，蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QHl-255CCTCC NO :M 2015253 加快了 NDF含量降低，但青貯最終與對(duì)照的NDF含量沒(méi)有顯著差異（P > 0. 05)。
[0130] 表6低溫青貯（5°C )過(guò)程中燕麥的中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維的變化（％/鮮 重r
[0131]
[0132] 注：3平均值土標(biāo)準(zhǔn)差（η = 3) ;"NS"表示差異不顯著（P > 0. 05) 表示差異 顯著（P < 0. 05)。NDF為中性洗滌纖維；ADF為酸性洗滌纖維。
[0133] 五、低溫青貯過(guò)程中燕麥的粗灰分、粗蛋白和粗脂肪變化的測(cè)定
[0134] 1、粗灰分（Crude ash)的測(cè)定
[0135] (1)瓷坩堝在530°C馬弗爐中加熱2h后，取出放置于干燥器中Ih放涼，稱重，記為 Wlo
[0136] (2)通過(guò)分析天平稱量2g(W2)左右飼料樣品于瓷坩堝中，放置于電爐上進(jìn)行灰 化，直至煙散盡為止，用坩堝鉗取出瓷坩堝放置于530°C馬弗爐中加熱2h后，取出放置于干 燥器中Ih放涼，稱重，記為W3。
[0137] 粗灰分（％ ) = (W3-W1)/W2X100。
[0138] 實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié)果以平均值土標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示。
[0139] 2、粗蛋白的測(cè)定
[0140] 采用消煮定量法測(cè)定粗蛋白。
[0141] (1)通過(guò)分析天平稱取約Ig(Wl)飼料樣品，稱量紙包好以后放入消煮管中，加入 〇. 2g硫酸銅和6. Og硫酸鉀。
[0142] (2)輕輕加入20ml濃硫酸于消煮管中，輕輕震蕩，使樣品充分分布在濃硫酸中。
[0143] (3)將消煮管連接裝置放置于消煮管上，阻止硫酸的揮發(fā)。
[0144] (4)打開(kāi)循環(huán)水裝置，將消煮管放置在消煮裝置上，開(kāi)始加熱至420°C。
[0145] (5)等待消煮管內(nèi)液體變?yōu)榫G色透明后，繼續(xù)420°C消煮2h。
[0146] (6)消煮分解完成以后，關(guān)掉消煮裝置，取下消煮管放于隔熱板上放涼。
[0147] (7)冷卻后，將消化管放入凱氏定氮儀，開(kāi)始滴定（根據(jù)A0AC(0fficial Methods of Analysis[Μ]. 15th ed. Association of official analytical chemists. Arlington, VA. 1999)記述的方法進(jìn)行分析）。
[0148] 全氮量（％ ) = n(Vl-V2) XMX0· 014/W1 XlOO ;
[0149] 粗蛋白質(zhì)量（％ )=全氮量（％ ) Χ6· 25 ;
[0150] 其中，Vl :滴定量ml ;V2 :空白滴定量；M :滴定液HCl的濃度；Wl :樣品重量。
[0151] 實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié)果以平均值土標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示。
[0152] 3、粗脂肪的測(cè)定
[0153] 采用乙醚萃取法。飼料樣品在乙醚中3h萃取抽提粗脂肪，除了中性脂肪外，磷酸 脂質(zhì)、游離脂肪酸、脂溶性色素等也包含在內(nèi)。
[0154] (1)脂肪瓶放置于KKTC烘箱中干燥2h后，取出置于干燥器中放涼lh，稱重，記為 Wlo
[0155] (2)分析天平稱取lg(W2)左右飼料樣品置于濾紙上，包好后將濾紙塞進(jìn)脂肪桶 內(nèi)，用脫脂棉堵口。
[0156] (3)將裝有飼料樣品的脂肪桶放入脂肪抽出裝置內(nèi)，接上脂肪瓶，加入約50ml乙 醚于脂肪瓶瓶中，打開(kāi)冷卻水系統(tǒng)，開(kāi)始3h以上抽提。
[0157] (4)完成抽提以后，取出脂肪桶，將脂肪瓶置于KKTC烘箱中3h干燥后，取出放在 干燥器中冷卻30m，稱重，記為W3。
[0158] 粗脂肪（％ ) = (W3_W1)/W2X100。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié)果以平均值土標(biāo)準(zhǔn)差的形 式表不。
[0159] 結(jié)果如表7所示，可見(jiàn)：低溫（5°C)青貯條件下，青貯第3天，蒙氏腸球菌 (Enterococcus mundtii)QHl-255CCTCC NO :M 2015253 添加組青貯燕麥的粗灰分含量 顯著低于對(duì)照組（P< 0.05)，整個(gè)青IC過(guò)程中，蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii) QH1-255CCTCC NO :M 2015253添加組青貯燕麥的粗灰分含量均略低于對(duì)照組，表明低溫條 件下，蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QHl_255CCTCC NO :M 2015253 可以降低青燕 麥中的粗灰分含量。在青IC第7天，蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QHl_255CCTCC NO: M 2015253添加組的蛋白質(zhì)含量降低，其余低溫青貯青貯過(guò)程，對(duì)燕麥中的粗蛋白和粗纖 維含量沒(méi)有顯著影響（p> 0.05)，表明低溫條件下，蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii) QH1-255CCTCC NO :M 2015253可以較好的保留青貯燕麥中的粗脂肪和粗蛋白成分。
[0160] 表7低溫青貯（5°C )過(guò)程中燕麥的粗灰分，粗蛋白和粗脂肪含量變化（％/鮮重） a
[0161]
[0162] 注：3平均值土標(biāo)準(zhǔn)差（η = 3) ;"NS"表示差異不顯著（P > 0. 05) 表示差異 顯著（P < 0· 05)。
[0163] 綜上所述，可見(jiàn)蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QHl-255CCTCC NO :M2015253 在低溫青貯（5°C )過(guò)程中迅速繁殖并產(chǎn)酸降pH，有效的抑制有害雜菌的生長(zhǎng)或產(chǎn)生，粗蛋 白、粗脂肪、粗纖維等營(yíng)養(yǎng)成分有效保留，非營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如粗灰分成分降低，達(dá)到長(zhǎng)期保存青 貯飼料的效果。
【主權(quán)項(xiàng)】
1?蒙氏腸球菌（Enterococcusmundtii)QHl_255,其在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心的保 藏編號(hào)為CCTCCNO:M2015253。2. -種菌劑，其特征在于：所述菌劑的活性成分為權(quán)利要求1所述的蒙氏腸球菌 (Enterococcusmundtii)QHl-255〇3. -種青貯飼料添加劑，其特征在于：所述青貯飼料添加劑的活性成分為權(quán)利要求I 所述的蒙氏腸球菌（Enterococcusmundtii)QHl_255〇4. 一種青貯飼料，其特征在于：所述青貯飼料中含有權(quán)利要求3所述的青貯飼料添加 劑。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的青貯飼料，其特征在于：所述青貯飼料是按照權(quán)利要求9或 10所述的方法制備得到的。6. 權(quán)利要求1所述的蒙氏腸球菌（Enterococcusmundtii)QHl_255或權(quán)利要求2所述 的菌劑在如下任一中的應(yīng)用： (al)抑制細(xì)菌； (a2)制備細(xì)菌抑制劑； (a3)制備權(quán)利要求3所述的青貯飼料添加劑； (a4)制備權(quán)利要求4所述的青貯飼料； 在所述（al)和所述（a2)中，所述細(xì)菌具體為藤黃微球菌和/或沙門氏菌。7. 根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的應(yīng)用，其特征在于：所述蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QHl-255或所述菌劑對(duì)所述細(xì)菌的抑制為30°C條件下的抑制。8. 權(quán)利要求3所述的青貯飼料添加劑在制備權(quán)利要求4或5所述的青貯飼料中的應(yīng) 用。9. 制備權(quán)利要求4所述青貯飼料的方法，包括：將青貯原料與權(quán)利要求1所述的蒙氏 腸球菌（Enterococcusmundtii)QHl-255混合，進(jìn)行固體厭氧發(fā)酵，收集所有發(fā)酵產(chǎn)物，得 到所述青貯飼料； 所述青貯原料具體為燕麥全株。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于：所述方法中，所述燕麥全株和所述蒙氏 腸球菌（Enterococcusmundtii)QHl_255 的配比為100g:IO5Cfu;和 / 或 所述發(fā)酵為低溫發(fā)酵；所述低溫為5°C;和/或 所述發(fā)酵的時(shí)間為30天。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一株蒙氏腸球菌及其在低溫青貯中的應(yīng)用。本發(fā)明所提供的蒙氏腸球菌具體為蒙氏腸球菌(Enterococcus mundtii)QH1-255，其在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心保藏編號(hào)為CCTCC NO：M2015253。本發(fā)明所提供的蒙氏腸球菌(Enterococcus mundtii)QH1-255 CCTCC NO：M2015253具有耐低溫、耐鹽、耐酸堿等抗逆性，并在低溫青貯(5℃)過(guò)程中迅速繁殖并產(chǎn)酸降pH，有效的抑制有害雜菌的生長(zhǎng)或產(chǎn)生，粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗纖維等營(yíng)養(yǎng)成分有效保留，非營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如粗灰分成分降低，達(dá)到長(zhǎng)期保存青貯飼料的效果。CCTCC NO：M201525320150428
【IPC分類】A23K1/00, C12N1/20, C12R1/01
【公開(kāi)號(hào)】CN104911131
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510339993
【發(fā)明人】焦湞, 張蓓, 張淼, 李立, 盧娟, 孫巖巖, 王苗苗, 談重芳, 王雁萍
【申請(qǐng)人】鄭州大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年9月16日
【申請(qǐng)日】2015年6月18日