p://blast.ncbi. nlm.nih.gov/Blast. cgi)同源性比對(duì)，確定菌種類(lèi)別。
[0056] 根據(jù)上述形態(tài)、生理生化特征分析和16s rDNA序列同源性分析結(jié)果，將步驟一所 得的菌株QH1-255鑒定為蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)，并于2015年4月28日保 藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心（簡(jiǎn)稱(chēng)CCTCC，地址為：湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號(hào)武 漢大學(xué)校內(nèi)，武漢大學(xué)保藏中心，郵編430072)，保藏號(hào)為CCTCC NO :M 2015253,其分類(lèi)命 名為蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QHl_255〇
[0057] 實(shí)施例2、蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii) QH1-255在不同溫度、pH及鹽濃度 下的生長(zhǎng)
[0058] 1、不同溫度下蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QH1-255的生長(zhǎng)
[0059] 將活化的蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QH1-255CCTCC NO :M 2015253接種 于MRS液體培養(yǎng)基，分別在5、10、45和50°C溫度下恒溫培養(yǎng)24h，用分光光度計(jì)測(cè)定600nm 處光吸收值（0D600)，以觀(guān)察不同溫度下蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QHl_255的 生長(zhǎng)情況。
[0060] 其中，MRS液體培養(yǎng)基的溶劑為水，溶質(zhì)及其濃度如下：蛋白胨10g/L，牛肉膏IOg/ L，酵母膏5g/L，葡萄糖20g/L，三水合乙酸鈉5g/L，吐溫801g/L，磷酸氫二鉀2g/L，檸檬酸銨 2g/L，硫酸鎂 2g/L，硫酸錳(λ 25g/L ;ρΗ6· 8。
[0061] 結(jié)果如表 2 所不，可見(jiàn)蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QH1-255CCTCC NO :Μ 2015253在5-45°C均長(zhǎng)勢(shì)良好，50°C生長(zhǎng)微弱，表明該菌株有良好的耐低溫性，耐高溫性相 對(duì)稍差。
[0062] 2、不同 pH 下蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QH1-255 的生長(zhǎng)
[0063] 用lmol/L的鹽酸和lmol/L的氫氧化鈉將MRS液體培養(yǎng)基（配方同上）的起始 pH分別調(diào)至3. 0、3. 5、4. 0、4. 5、5. 0、5. 5、6. 0、9. 0和10. 0,30°C恒溫靜置培養(yǎng)蒙氏腸球菌 (Enterococcus mundtii)QHl-255CCTCC NO :M 2015253,培養(yǎng) 24h，培養(yǎng)過(guò)程中不調(diào)酸，用 分光光度計(jì)測(cè)定600nm處光吸收值（0D600)，以觀(guān)察不同pH下蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QH1-255 的生長(zhǎng)情況。
[0064] 結(jié)果如表 2 所不，可見(jiàn)蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QH1-255CCTCC NO :M 2015253能夠在pH4. 5-10. 0的培養(yǎng)環(huán)境中生長(zhǎng)均良好，在pH3. 0-4. 0時(shí)生長(zhǎng)微弱，表明其耐 堿性能較好，耐酸性相對(duì)稍差。
[0065] 3、不同鹽濃度下蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QH1-255的生長(zhǎng)
[0066] 將活化的蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QHl-255CCTCC NO :M 2015253分別 接種于含有NaCl的質(zhì)量百分含量為3%和6. 5%的MRS液體培養(yǎng)基（配方同上，pH6. 8)，于 30°C恒溫靜置培養(yǎng)24h，用分光光度計(jì)測(cè)定600nm處光吸收值（0D600)，以觀(guān)察不同鹽濃度 下蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QHl_255的生長(zhǎng)情況。
[0067] 結(jié)果如表 2 所不，可見(jiàn)蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QH1-255CCTCC NO :M 2015253在3%的NaCl濃度下生長(zhǎng)良好，在6. 5%的NaCl濃度下生長(zhǎng)微弱，表明其具有一定 的耐鹽性。
[0068] 表2菌株QH1-255在不同環(huán)境下的生長(zhǎng)特征
[0069]
[0070] 注：" + "表示生長(zhǎng)良好；"w"表示生長(zhǎng)微弱（0D600大于0.3視為生長(zhǎng)良好，大于 〇. 2小于等于0. 3為生長(zhǎng)微弱）。
[0071] 根據(jù)以上結(jié)果，可知蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QH1-255CCTCC NO :M 2015253的生長(zhǎng)適應(yīng)能力很強(qiáng)，可耐極端環(huán)境存活繁殖。
[0072] 實(shí)施例3、蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QH1-255的抑菌活性測(cè)定
[0073] 供試細(xì)菌：藤黃微球菌，藤黃微球菌，沙門(mén)氏菌和大腸桿菌。
[0074] 1、將活化的蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QH1-255CCTCC NO :M 2015253接 種于MRS液體培養(yǎng)基（配方同上，pH6. 8)中，30°C培養(yǎng)48h，發(fā)酵液經(jīng)1000 Orpm離心5min， 取上清液用于測(cè)定。
[0075] 2、采用牛津杯雙層平板法測(cè)定其抑菌活性，將已滅菌的瓊脂培養(yǎng)基加熱到完全融 化，倒在培養(yǎng)皿內(nèi)，每皿15ml (下層），待其凝固。此外，將融化的PDA培養(yǎng)基冷卻到50°C 左右混入供試細(xì)菌，將混有菌的培養(yǎng)基5ml加到已凝固的培養(yǎng)基上待凝固（上層）。以無(wú) 菌操作在培養(yǎng)基表面直接垂直放上牛津杯（內(nèi)徑6_、外徑8_、高IOmm的圓形小管），輕 輕加壓，使其與培養(yǎng)基接觸無(wú)空隙，在杯中加入步驟1獲得的蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii) QH1-255CCTCC NO :M 2015253發(fā)酵液。加滿(mǎn)后置37°C培養(yǎng)16-18小時(shí)，觀(guān)察結(jié)果， 抑菌圈用尺量。以MRS液體培養(yǎng)基取代發(fā)酵液作為對(duì)照。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié)果以平均值表 不O
[0076] 結(jié)果如表3所示，可見(jiàn)：在30°C培養(yǎng)條件下，蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii) QH1-255CCTCC NO :M 2015253對(duì)藤黃微球菌和沙門(mén)氏菌有較好的抑制作用。
[0077] 表3菌株QH1-255的抑菌活性
[0078]
[0079] 注：抑菌圈直徑包含牛津杯外徑（7. 8mm) 表示無(wú)抑菌圈。
[0080] 實(shí)施例 4、蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QH1-255 青燕麥
[0081] 青貯原料：乳熟期燕麥全株，水分含量82. 97%，切割成l-2cm小段。
[0082] -、制備燕麥青貯飼料
[0083] I、以蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QHl-255CCTCC NO :M 2015253作為飼料 添加劑制備燕麥青IC飼料
[0084] (1)蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QHl-255CCTCC NO :M 2015253 菌懸液的 制備
[0085] 無(wú)菌條件下，取蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii) QH1-255CCTCC NO :M2015253 接種于MRS液體培養(yǎng)基中30 °C培養(yǎng)過(guò)夜，得到蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii) QH1-255CCTCC NO :M 2015253 菌懸液，菌懸液中蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii) QH1-255CCTCC NO :M 2015253 的含量為 106cfu/ml。
[0086] 其中，MRS液體培養(yǎng)基的溶劑為水，溶質(zhì)及其濃度如下：蛋白胨10g/L，牛肉膏IOg/ L，酵母膏5g/L，葡萄糖20g/L，三水合乙酸鈉5g/L，吐溫801g/L，磷酸氫二鉀2g/L，檸檬酸銨 2g/L，硫酸鎂 2g/L，硫酸錳(λ 25g/L ;ρΗ6· 8。
[0087] (2)以蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii) QH1-255CCTCC NO :Μ 2015253 作為飼 料添加劑制備燕麥青IC飼料
[0088] 將乳熟期燕麥全株收割后用鍘刀切成l_2cm左右長(zhǎng)短（水分含量82. 97% )，取 100g放入青IC袋中，將步驟（1)獲得的蒙氏腸球菌（Enterococcus mundtii)QHl_255CCTCC NO :M 2015253菌懸液每袋100 μ 1分別加入青貯袋中，混勻，利用真空包裝機(jī)抽真空后密 封，放入5 °C冰柜內(nèi)。
[0089] 2、對(duì)照燕麥青貯飼料
[0090] 將乳熟期燕麥全株收割后用鍘刀切成l_2cm左右長(zhǎng)短（水分含量82. 97% )，取 100g放入青貯袋中，將無(wú)菌水每袋100 μ 1分別加入青貯袋中，混勻，利用真空包裝機(jī)抽真 空后密封，放入5°C冰柜內(nèi)。
[0091] 二、低溫青貯過(guò)程中燕麥的微生物變化測(cè)定
[0092] 采用平板稀釋法測(cè)定微生物變化。將飼料樣品IOg加入到90ml無(wú)菌蒸餾水中， 利用漩渦振蕩器震蕩30s，10倍梯度稀釋?zhuān)缓蠓謩e取10'ΚΓ 3和KT5倍樣品稀釋液各 2