溶 液；采用實(shí)施例1相同的方法測量本實(shí)施例最終得到的芬苯達(dá)唑微晶體成品的平均粒徑為 2000±20 nm。
[0026] 實(shí)施例6 本實(shí)施例提供一種芬苯達(dá)唑微晶體的制備方法。本實(shí)施例提供的芬苯達(dá)唑微晶體的制 備方法與實(shí)施例5提供的芬苯達(dá)唑微晶體的制備方法基本相同，不同之處在于：在析晶過 程中，在20°C下，以1200 r/min的轉(zhuǎn)速磁力攪拌所述芬苯達(dá)挫過飽和溶液；采用實(shí)施例1相 同的方法測量本實(shí)施例最終得到的芬苯達(dá)唑微晶體成品的平均粒徑為1700±40 nm。
[0027] 實(shí)施例7 本實(shí)施例提供一種芬苯達(dá)唑微晶體的制備方法。本實(shí)施例提供的芬苯達(dá)唑微晶體的制 備方法與實(shí)施例1提供的芬苯達(dá)唑微晶體的制備方法基本相同，不同之處在于：所述芬苯 達(dá)唑乙醇混合液中的芬苯達(dá)唑的濃度為30 mg/mL ;所述羥丙甲基纖維素水溶液中的羥丙甲 基纖維素的濃度為10 mg/mL;在析晶過程中，所述芬苯達(dá)唑乙醇溶液和所述羥丙甲基纖維 素水溶液按照1 :2的體積比混合形成所述芬苯達(dá)唑過飽和溶液，在20°C下，磁力攪拌所述 芬苯達(dá)唑過飽和溶液10 min ;采用實(shí)施例1相同的方法測量本實(shí)施例最終得到的芬苯達(dá)唑 微晶體成品的平均粒徑為1600±50 nm。
[0028] 性能試驗(yàn) 下面采用上述實(shí)施例2中的磁力攪拌器的攪拌速度為900 r/min時制備的芬苯達(dá)唑微 晶體進(jìn)行溶解度、溶出度以及藥物動力學(xué)試驗(yàn)。
[0029] (1)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線 精密稱取芬苯達(dá)唑原料藥50. 2 mg置于100 mL棕色容量瓶中，加入乙醇溶解并稀釋至 刻度，搖勻，即得到濃度為500 μ g/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，避光置于4°C冰箱中保存?zhèn)溆?，再?別精密量取1、2、3、4、6、8、10 mL上述儲備液于100 mL容量瓶中，用水定容，得濃度分別為 5、10、15、20、30、40、50 yg/mL的芬苯達(dá)唑溶液。在295 nm處分別測量其紫外吸光度，以 濃度（C)為橫坐標(biāo)，吸光度（A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，如圖1所示，在芬苯達(dá)唑濃度 為5~50 yg/mL時，線性關(guān)系良好，擬合得到回歸方程：C = 0. 0117A + 0. 251，線性關(guān)系 r 為 0· 9992。
[0030] (2)溶解度試驗(yàn) 在25°C條件下，以水作為溶出介質(zhì)，分別將加入過量上述芬苯達(dá)唑微晶體和所述芬苯 達(dá)唑原料，以50 r/min的轉(zhuǎn)速攪拌24 h得到的飽和溶液，過濾，取濾液I mL，各以蒸餾水 適當(dāng)稀釋后作為供試溶液，在295 nm處測定其紫外吸光度A值，依據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計(jì) 算出芬苯達(dá)唑微晶體的溶解度約為38. 53 μ g/mL，所述芬苯達(dá)唑原料在水中的溶解度約為 12.47 μ g/mL。由此可見，本發(fā)明實(shí)施例提供的芬苯達(dá)唑微晶體的溶解度可以達(dá)到芬苯達(dá) 唑原料的溶解度的3倍。
[0031] (3)溶出度試驗(yàn) 試驗(yàn)組：稱取6份5 g芬苯達(dá)唑微晶體，以900 mL水為溶出介質(zhì)，按照《中華人民共 和國獸藥典》2010版第一部附錄98頁的溶出度測定法第二法進(jìn)行測定，釋放介質(zhì)溫度 37°〇±0.5°〇，轉(zhuǎn)漿轉(zhuǎn)速50 1'/11^11。分別在10、15、30、45、60、90、120 1^11分別進(jìn)行采樣， 每個時間點(diǎn)從各個溶出杯中取樣5 mL，同時立即向取樣的溶出杯中補(bǔ)充溶出介質(zhì)5 mL，經(jīng) 0.22 μ m微孔濾膜過濾，取濾液I mL，適當(dāng)稀釋后在295 nm處測定其紫外吸光度A值，計(jì) 算出各個時間點(diǎn)采集的樣品濃度和相對累計(jì)溶出量。
[0032] 對照組：同時稱取6份芬苯達(dá)唑原料I g，于上述試驗(yàn)組相同試驗(yàn)條件下采樣作為 對照，計(jì)算出各個時間點(diǎn)采集的樣品濃度和相對累計(jì)溶出量。
[0033] 上述試驗(yàn)組和對照組分別從各個采樣點(diǎn)取樣，檢測溶出介質(zhì)中的藥物濃度，并計(jì) 算累計(jì)釋藥百分比，結(jié)果如圖2所示。結(jié)果表明，芬苯達(dá)唑微晶體的溶出速率和溶出度均顯 著優(yōu)于芬苯達(dá)唑原料。這是由于超細(xì)顆粒粒徑較小，增加了藥物與溶出介質(zhì)有效接觸面積， 且超細(xì)粉體產(chǎn)品中藥物結(jié)晶度的降低及水溶性藥物輔料的存在，均有利于藥物的溶出。
[0034] (4)藥物動力學(xué)試驗(yàn) 試驗(yàn)對象：健康大仔豬20頭，體重32±2 kg。試驗(yàn)開始前飼養(yǎng)一周，使其適應(yīng)環(huán)境。飼 料：試驗(yàn)期間按常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲水和采食，飼料為不含抗菌藥物的全價飼料。將每頭豬稱 重后，隨機(jī)分為芬苯達(dá)唑原料組和芬苯達(dá)唑微晶體組，每組10頭，其中，分為芬苯達(dá)唑原料 組的10頭豬要灌服芬苯達(dá)唑原料，分為芬苯達(dá)唑微晶體組的10頭豬要灌服芬苯達(dá)唑微晶 體。樣品采集前，每組動物分別以10 mgAkg · bw)的劑量于灌服給藥。
[0035] 試驗(yàn)方法：將豬仰臥保定，從前腔靜脈采血，每頭豬給藥前采集空白血樣，給藥后 于0. 083、0. 15、0. 5、l、2、4、6、8、12、24、48、72、120h時分別對每頭豬進(jìn)行采血，每次采血量 約5 mL，采集完畢立即轉(zhuǎn)至加有抗凝劑的5 mL離心管中，3000 r/min離心10 min，分離血 衆(zhòng)，于-20°C保存，待測。從冰箱中取出血漿樣品，室溫下自然解凍。準(zhǔn)確吸取I mL血漿于 15 mL離心管中，加入0. 25 mL氨溶液（0.1 mol/L，pH=10)，混勻1分鐘，將SPE柱置于固相 萃取真空歧管裝置上，分別用5 mL甲醇活化和5 mL三蒸水平衡SPE柱，隨后加入上述處理 過的血漿樣品，用5 mL濃度為5% NH3 ·Η20洗脫，棄洗脫液，然后用2. 5 mL甲酸甲醇溶液洗 脫。收集洗脫液，在45°C水浴中用氮?dú)獯蹈?，?50 PL流動相溶解，漩渦10秒鐘，靜置15 min，取20 μL進(jìn)樣分析。其中，色譜條件：色譜柱！Agilent SB-C18柱（250 _X4. 6 _，5 Mm)，保護(hù)柱（4.6 mmX 12. 5 mm);流動相：乙腈-0.02 mol磷酸（體積比=40:60);紫外檢 測波長：295 nm ;流速：1. 0 mL/min ;柱溫：35°C ;進(jìn)樣量：20 μL。
[0036] 給豬以10 mgAkg*bw)(均以芬苯達(dá)唑計(jì))的劑量口服給藥后，芬苯達(dá)唑微晶體組 和芬苯達(dá)唑原料組各時間點(diǎn)血漿中芬苯達(dá)唑的濃度如圖3所示；經(jīng)3p97藥動學(xué)軟件房室模 型的模擬，其中有吸收二室模型的AIC和WSS最小。芬苯達(dá)唑原料組和芬苯達(dá)唑微晶體組 的主要藥物動力學(xué)參數(shù)為：吸收半衰期（Tl/2 α )分別為1. 65 h和1. 07 h ;達(dá)峰時間（Tp) 分別為5. 96 h和4. 65 h ;峰濃度（Cp )分別為0. 81 μ g/mL和1. 01 μ g/mL ;消除半衰期 (Τ1/2β )分別為28. 28 h和33. 92 h ;藥時曲線下面積（AUC)分別為29. 09 yg · h/mL和 41. 12 μ g ·ν!Λ。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得知，芬苯達(dá)唑原料組和芬苯達(dá)唑微晶體組的Tl/2 α、Tp、 Τ1/2 β、AUC均具有顯著性差異（ρ < 0. 05)。通過主要藥物動力學(xué)參數(shù)對比顯示，芬苯達(dá)唑 微晶體能夠改變芬苯達(dá)唑在動物體內(nèi)的藥動學(xué)特征，提高芬苯達(dá)唑的吸收速度和生物利用 度，延長藥物在體內(nèi)的有效作用時間，芬苯達(dá)唑微晶體與芬苯達(dá)唑原料相比，具有較大的優(yōu) 越性。
[0037] 最后應(yīng)當(dāng)說明的是：以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非對其限制；盡 管參照較佳實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：依然 可以對本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行修改或者對部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而不脫離本發(fā) 明技術(shù)方案的精神，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明請求保護(hù)的技術(shù)方案范圍當(dāng)中。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種芬苯達(dá)唑微晶體的制備方法，包括以下步驟： 將芬苯達(dá)唑原料溶解在乙醇溶液中，配制芬苯達(dá)唑乙醇混合液； 將羥丙甲基纖維素溶解在水中，形成羥丙甲基纖維素水溶液； 在O~50°C下，混合所述芬苯達(dá)唑乙醇混合液和所述羥丙甲基纖維素水溶液，制得芬 苯達(dá)唑過飽和溶液，攪拌所述芬苯達(dá)唑過飽和溶液析出晶體，形成芬苯達(dá)唑微晶懸浮液； 對所述芬苯達(dá)唑微晶懸浮液進(jìn)行分離干燥處理，得到芬苯達(dá)唑微晶體成品。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：制得所述芬苯達(dá)唑過飽和溶液的步 驟包括在0~50°C下，將濃度為15~60mg/mL的所述芬苯達(dá)唑乙醇混合液和濃度為2. 5~ 10mg/mL的所述羥丙甲基纖維素水溶液按照1 :1~10的體積比混合。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于：形成所述芬苯達(dá)唑微晶懸浮液 的步驟包括在0~50°C下，以500~1200r/min的速度攪拌所述芬苯達(dá)唑過飽和溶液5~ 25min，析出芬苯達(dá)唑微晶并形成所述芬苯達(dá)唑微晶懸浮液。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于：得到所述芬苯達(dá)唑微晶體成品的步 驟包括抽濾分離所述芬苯達(dá)唑微晶懸浮液，制得芬苯達(dá)唑微晶體半成品；干燥所述芬苯達(dá) 唑微晶體半成品制備出芬苯達(dá)唑微晶體成品。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于：制得所述芬苯達(dá)唑微晶體半成品的 步驟進(jìn)一步包括回收所述芬苯達(dá)唑微晶懸浮液經(jīng)過抽濾分離后產(chǎn)生的濾液。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種芬苯達(dá)唑微晶體的制備方法，包括以下步驟：將芬苯達(dá)唑原料溶解在乙醇溶液中，配制芬苯達(dá)唑乙醇混合液；將羥丙甲基纖維素溶解在水中，形成羥丙甲基纖維素水溶液；在0～50℃下，混合所述芬苯達(dá)唑乙醇混合液和所述羥丙甲基纖維素水溶液，制得芬苯達(dá)唑過飽和溶液，攪拌所述芬苯達(dá)唑過飽和溶液析出晶體，形成芬苯達(dá)唑微晶懸浮液；對所述芬苯達(dá)唑微晶懸浮液進(jìn)行分離干燥處理，得到芬苯達(dá)唑微晶體成品。因此，上述制備方法比較簡單，易于工業(yè)化生產(chǎn)；由上述方法制備出的芬苯達(dá)唑微晶體能夠提高芬苯達(dá)唑在動物體內(nèi)的吸收速度和生物利用度，延長藥物在體內(nèi)的有效作用時間。
【IPC分類】C07D235/32
【公開號】CN104892524
【申請?zhí)枴緾N201510339859
【發(fā)明人】左春生, 張紅超, 張廣強(qiáng), 吳海港, 羅婧, 劉英麗, 徐光科, 田超, 吳繪麗, 龍金鳳, 王銳
【申請人】信陽農(nóng)林學(xué)院
【公開日】2015年9月9日
【申請日】2015年6月18日