Mek抑制劑的制備和包含mek抑制劑的制劑的制作方法
【專利說明】MEK抑制劑的制備和包含MEK抑制劑的制劑
[0001] 相關申請的交叉引用
[0002] 本申請主張2012年10月19日提交的美國臨時申請61/716, 169號的優(yōu)先權，該 案的內容通過引用整體并入本文中。 發(fā)明領域
[0003] 本文提供用于制備6- (4-溴-2-氟苯基氨基）-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-甲 酸（2-羥基乙氧基）-酰胺的方法、用于制備結晶6-(4-溴-2-氟苯基氨基）-7-氟-3-甲 基-3H-苯并咪唑-5-甲酸（2-羥基乙氧基）-酰胺的方法以及適用于所述方法的中間體。 本文還提供包含此結晶化合物的藥物組合物。
[0004] 背景
[0005] 生長因子介導的增殖信號自細胞外環(huán)境經由若干路徑（包括RAS/RAF/MEK路徑） 傳輸至細胞核。RAS/RAF/MEK激酶信號轉導路徑經由酪氨酸受體激酶（RTK)與其相應的同 源配體的初始細胞外結合和由所述配體刺激來活化。在RTK細胞溶質域中的特定酪氨酸殘 基自體磷酸化時，Grb2-Sos復合物易位至質膜，且使無活性RAS ·⑶P轉化為活性RAS *GTP。 Grb2?？康鞍着c活化的激酶或磷酸化的受體相關蛋白之間的相互作用由識別特定磷酸酪 氨酸序列的信號傳導蛋白的Src同源（SH2)結構域介導。RAS在鳥苷5'-三磷酸（GTP)結 合后經歷構形變化且引起RAF-I募集至細胞質膜，在此處RAF-I由若干激酶磷酸化且同時 在關鍵殘基處由蛋白磷酸酶-2B二磷酸化?；罨腞AF磷酸化活化環(huán)中兩個絲氨酸殘基上 的促分裂原活化蛋白激酶激酶（MEK)，此導致此蛋白激酶活化。MEK接著使細胞外信號調節(jié) 激酶（ERK)磷酸化和活化，使得其易位至細胞核，在此處其磷酸化轉錄因子，從而使多種基 因表現(xiàn)。
[0006] RAS/RAF/MEK信號轉導路徑在大約1/3的人癌癥中通常因導致異位蛋 白活化的突變而失調。此失調又導致多種細胞變化，所述變化對于癌癥表型的病 因學和維持不可或缺，包括（但不限于）促進增殖和逃避細胞凋亡（Dhillon等 人，Oncogene, 2007, 26:3279-3290)。因此，開發(fā)RAS/RAF/MEK信號轉導路徑的關鍵成員的 小分子抑制劑已成為制藥工業(yè)和腫瘤學界內集中致力的主題。
[0007] MEK為RAS/RAF/MEK路徑中的主要蛋白，其針對細胞增殖和存活傳導信號，且經 常在RAS或RAF致癌基因中或生長受體酪氨酸激酶中具有突變的腫瘤中活化。MEK為 RAS/RAF/MEK路徑中的關鍵參與者，因為其在RAS和RAF下游。盡管MEKl和MEK2蛋白 在癌癥中僅很少突變（Murugan 等人，Cell Cycle, 2009, 8:2122-2124 ;Sasaki 等人，工 Thorac. Oncol.，2010, 5:597-600)，但還是因其中心位置在RAS/RAF/MEK信號轉導路徑信 號傳導級聯(lián)內而針對小分子抑制作用來開發(fā)其抑制劑（Fremin和Meloche, J. Hematol. Oncol.，2010, 3:8)。近來，強效MEK抑制劑無法在臨床試驗中在患有晚期非小細胞肺癌的 患者中證實功效（Haura等人，Clin. Cancer Res.，2010, 16:2450-2457)。在此試驗中失效 的原因尚不清楚。
[0008] 6-(4-溴-2-氟苯基氨基）-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-甲酸（2-羥基乙氧 基）_酰胺（在下文中，"化合物A"）為苯并咪唑化合物，其為已知的MEKl和MEK2蛋白的強 效選擇性抑制劑，且適用于治療哺乳動物的過度增殖性疾病，尤其癌癥。舉例而言，在近來 公開的罹患不可切除的局部晚期或轉移性膽管癌且已接受〈1種現(xiàn)有全身性療法的28名患 者的I期研宄中，口服化合物A治療（60mg，每日兩次）在至少6周治療后引起1例完全衰 退、1例部分衰退和11例穩(wěn)定疾病診斷（Finn等人，J. Clin. Oncol. 30, 2012 (增刊4, 2012 年胃腸癌研討會（2012Gastrointestinal Cancers Symposium),摘要號 220)?；衔顰也 被證實在治療患有BRAFV600或NRAS突變型黑素瘤的患者中有效（Ascierto等人，J. Clin. Oncol. 30, 2012(增刊，2012 年 ASCO 年會（2012ASC0 Annual Meeting),摘要號 8511)。
[0009] 所述化合物以及其制備方法公開于PCT公開案WO 03/077914號中。用于制備化 合物A的制造方法描述于該文獻的實施例18中。其中所述的制造方法盡管適合，仍被視為 不利于商業(yè)化生產。
[0010] 由于此苯并咪唑化合物尤其作為MEK抑制劑的高效力，需要改良的制造所述化合 物的方法。具體地講，需要提供滿足以下標準中的一者或多者的方法：與已知方法相比可規(guī) ?；⒏踩?、更簡單、產量更高且更經濟。
[0011] 還需要用于治療癌癥的新固體形式。
[0012] 本發(fā)明涉及適用于小規(guī)?；虼笠?guī)模制造的化合物A的改良制造方法以及其適用 的中間體。本發(fā)明還涉及用于制造結晶化合物A的方法，以及適用于施用此結晶化合物的 新藥物組合物。已驚奇地發(fā)現(xiàn)，根據本發(fā)明方法制備的結晶化合物A具有改良的純度分布 和改良的物理形態(tài)，其有利于制藥藥物開發(fā)和制造。 發(fā)明概要
[0013] 本文提供用于制備6- (4-溴-2-氟苯基氨基）-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-甲 酸（2-羥基乙氧基）-酰胺的方法、用于制備結晶6-(4-溴-2-氟苯基氨基）-7-氟-3-甲 基-3H-苯并咪唑-5-甲酸（2-羥基乙氧基）-酰胺的方法以及適用于所述方法的中間體。 本文還提供包含此結晶化合物的藥物組合物。
[0014] 在一個方面，本文提供一種用于制備化合物6-(4-溴-2-氟苯基氨 基）-7_氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-甲酸（2-羥基乙氧基）-酰胺（本文中稱為"化合物 A"）的方法：
[0015]
【主權項】
1. 一種用于制備6-(4-溴-2-氟苯基氨基）-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-甲酸 (2-羥基乙氧基）-酰胺的方法：
所述方法包括以下步驟： a) 使式（I)化合物與適合的堿反應以形成中間體： 和
b) 使所述中間體與式（II)化合物反應： 以提供式（ΠΙ)化合物：
或其水合物，其中P1為保護基； c) 將所述式（III)化合物或其水合物溶解于適合的溶劑或溶劑體系中；以及 d) 用適合的脫保護試劑使所述式（III)化合物或其水合物脫保護，以提供化合物A，其 中P1在每次出現(xiàn)時可相同或不同且為適合的保護基。
2. 根據權利要求1所述的方法，其中所述適合的保護基選自烷基；烯基；叔芳基-烷 基；產生縮醛的基團；和甲硅烷基。
3. 根據權利要求1所述的方法，其中所述適合的保護基為叔丁基。
4. 根據權利要求1所述的方法，其進一步包括分離所述中間體。
5. 根據權利要求4所述的方法，其中所述分離步驟包括使所述中間體結晶。
6. 根據權利要求4所述的方法，其中所述中間體為式（V)化合物：
7. 根據權利要求1所述的方法，其中所述中間體與式（II)化合物在偶合劑和質子源存 在下反應。
8. 根據權利要求1所述的方法，其中所述適合的溶劑或溶劑體系為極性非質子溶劑。
9. 根據權利要求8所述的方法，其中所述適合的溶劑或溶劑體系為乙腈。
10. 根據權利要求1所述的方法，其中所述適合的脫保護試劑為磷酸。
11. 根據權利要求1所述的方法，其中使所述式（ΠΙ)化合物或其水合物進一步與適合 的堿反應，以提供化合物A。
12. 根據權利要求1所述的方法，其進一步包括以下步驟： a) 將所述化合物A溶解于包含（i.)包含醚及任選地醇的溶劑體系和（ii.)水的溶液 中以提供溶液； b) 添加晶種懸浮液至所述溶液中以提供懸浮液混合物； c) 冷卻所述懸浮液混合物以提供經冷卻的懸浮液混合物； d) 添加水至所述經冷卻的懸浮液混合物中以提供經處理混合物；和 e) 冷卻所述經處理混合物，以提供結晶化合物A。
13. 根據權利要求12所述的方法，其中所述溶液包含（i.)包含醚和醇的溶劑體系，和 (ii.)