酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε抑制劑的制作方法
【專利說明】酪蛋白激酶1 δ及酪蛋白激酶1 ε抑制劑
[0001] 本申請是申請?zhí)枮?01180039427. 7、申請日為2011年8月8日、發(fā)明名稱為"酪 蛋白激酶IS及酪蛋白激酶1ε抑制劑"的發(fā)明申請的分案申請。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及含有》悉唑酮衍生物或其鹽、或它們的溶劑化物或它們的水合物作為 有效成分的酪蛋白激酶IS及酪蛋白激酶1ε抑制劑。本發(fā)明涉及用于治療酪蛋白激酶 IS或者酪蛋白激酶1ε的酶的活化與其疾病狀態(tài)相關(guān)聯(lián)的疾病的醫(yī)藥。本發(fā)明涉及含有 在酪蛋白激酶IS或者酪蛋白激酶1ε的酶活化與其疾病狀態(tài)相關(guān)聯(lián)的疾病中尤其是對于 治療和/或預(yù)防晝夜節(jié)律周期障礙（包括睡眠障礙）、中樞神經(jīng)退行性疾病、癌有用的酪蛋 白激酶I S及酪蛋白激酶1 ε抑制劑的醫(yī)藥。
【背景技術(shù)】
[0003] 酪蛋白激酶1屬于絲氨酸/蘇氨酸激酶（在某種情況下也將酪氨酸殘基磷酸化）， 作為哺乳類中的其亞型（isoforms)，已知有α、β、γ?、γ 2、γ 3、δ及ε這7種。已知 這些亞型通過將各種不同的底物蛋白質(zhì)磷酸化，使該蛋白質(zhì)的功能活化或者失活或者穩(wěn)定 化或者不穩(wěn)定化，從而參與各種不同的生物體功能的調(diào)節(jié)。就哺乳類的酪蛋白激酶IS或 者酪蛋白激酶1 ε而言，作為其結(jié)構(gòu)，具有與其它亞型類似的激酶結(jié)構(gòu)域，但是在N端及C 端結(jié)構(gòu)域與其它亞型不同。即，認(rèn)為在C端結(jié)構(gòu)域中具有多個自磷酸化部位而參與自身 酶活性的調(diào)節(jié)。另外，在激酶結(jié)構(gòu)域中，存在被認(rèn)為與核內(nèi)移行相關(guān)的序列（NLSmuclear location signal)和驅(qū)動蛋白樣結(jié)構(gòu)域（KHD:kinesin homology domain)。
[0004] 已知酪蛋白激酶1 δ及酪蛋白激酶1 ε與晝夜節(jié)律周期障礙相關(guān)，另外，酪蛋白激 酶IS及酪蛋白激酶1ε與中樞神經(jīng)退行性疾病相關(guān)，另外，酪蛋白激酶1 δ及酪蛋白激酶 1ε與癌相關(guān)，在針對與對應(yīng)的酪蛋白激酶1 δ及酪蛋白激酶?ε發(fā)生底物蛋白質(zhì)等相互 作用的對象蛋白質(zhì)與酪蛋白激酶1 δ及酪蛋白激酶1 ε的相互作用的研宄中，與這些疾病 狀態(tài)相關(guān)的詳細(xì)情況逐漸變成已知的事情。具體而言，作為酪蛋白激酶IS及酪蛋白激酶 1ε進(jìn)行磷酸化的底物蛋白質(zhì)，如果進(jìn)行例示，則可列舉出節(jié)律蛋白（Per)、Tau蛋白（tau)、 ρ53、β-連環(huán)蛋白（β-catenin)等。
[0005] 作為晝夜節(jié)律發(fā)生核心裝置（central generator of the circadian rhythm)的 核心體內(nèi)生物鐘（the core of the biological clock)，如今被認(rèn)為由大約10種所謂被稱 為生物鐘基因 （clock genes)的基因的相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)成。在上述10種基因組中，Perl、 2>3 (Period 1、2、3)及Cryl、2 (cryptochrome 1，2)及Bmall (brain and muscle ARNT-Iike 1)及 Clock (circadian locomotor output cycles kaput)編碼轉(zhuǎn)錄因子，另外，CKl δ、ε 編碼將這些轉(zhuǎn)錄因子磷酸化的酪蛋白激酶1 δ及酪蛋白激酶1ε。已知這些生物鐘基因的 功能異常對包括人類在內(nèi)的各種動物的晝夜節(jié)律表現(xiàn)型造成影響。該體內(nèi)生物鐘的分子機(jī) 制超越物種而得到保存，因此對于人類中的晝夜節(jié)律表現(xiàn)型的異常，具有在體外試驗中也 能夠進(jìn)行生物鐘基因的研宄的優(yōu)點。Clock在體內(nèi)生物鐘相互作用網(wǎng)絡(luò)中負(fù)責(zé)發(fā)出活化信 號的程序，將PerXry其它下游靶基因進(jìn)行活化。另一方面，負(fù)責(zé)發(fā)出調(diào)節(jié)性信號的程序的 Per及Cry以抑制Clock活性的方式起作用。酪蛋白激酶1 δ及酪蛋白激酶1 ε通過將Per 及Cry磷酸化而促進(jìn)Per的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)分解。另外，這些磷酸化的結(jié)果與這些轉(zhuǎn)錄因子的核 內(nèi)移行及核內(nèi)的穩(wěn)定性的控制相關(guān)。這樣，認(rèn)為負(fù)責(zé)生物體內(nèi)的內(nèi)源性分子振動節(jié)律。哺 乳類中的中樞體內(nèi)生物鐘位于視交叉上核（SCN:suprachiasmatic nucleus)，但是該SCN 體內(nèi)生物鐘與SCN以外的中樞及末梢組織的基因表達(dá)體內(nèi)生物鐘聯(lián)動。
[0006] 已知Per為生物體內(nèi)的晝夜節(jié)律調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)。Per的mRNA及蛋白質(zhì)水平對晝夜 節(jié)律響應(yīng)而振動，與體內(nèi)生物鐘的控制密切相關(guān)。例如在具有人類Per2磷酸化部位變異 (S662G)的基因疾病中，已知與酪蛋白激酶1 ε或者酪蛋白激酶1 δ所致的磷酸化下降相 伴成為家族性睡眠期提前綜合癥（FASPS:familial advanced sleep phase syndrome)，這 顯示出Per對睡眠調(diào)節(jié)發(fā)揮重要的作用。已知Per的細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)量的變化被酪蛋白激酶 1ε或者酪蛋白激酶1 δ所致的磷酸化控制。即，若Per被這些激酶磷酸化，則蛋白質(zhì)的穩(wěn) 定性顯著下降。
[0007] 由Xu，Y.等進(jìn)行了如下報告：在人類Per2磷酸化部位變異（S662G)轉(zhuǎn)基因小 鼠中確認(rèn)了與在人類中確認(rèn)的FASPS同樣的表現(xiàn)型，但是該研宄人等進(jìn)一步對該轉(zhuǎn)基因 小鼠與酪蛋白激酶1 δ WT (WT :wild type，野生型）及酪蛋白激酶1 δ +/-(heterozygous knockout)小鼠的雜交小鼠的酪蛋白激酶1 δ表達(dá)量的變化所造成的影響進(jìn)行了研宄，結(jié) 果報告了該表現(xiàn)型受到影響，在野生型中確認(rèn)的晝夜節(jié)律表現(xiàn)型的異常在+/_小鼠中被糾 正，顯示出Per2的磷酸化狀況與參與磷酸化的酪蛋白激酶1 δ的參與的重要性（非專利 文獻(xiàn)5)。另外，Badula，Loi等報告如下：通過將酪蛋白激酶1 ε抑制化合物4-[3_環(huán)己 基-5-(4-氟-苯基）-3Η-咪唑-4-基]-嘧啶-2-基胺（PF-670462)對大鼠進(jìn)行皮下給 藥，能夠顯著地延遲晝夜節(jié)律的相位（非專利文獻(xiàn)4)。這樣Per的磷酸化的狀況與晝夜節(jié) 律相關(guān)，酪蛋白激酶IS或者酪蛋白激酶1ε的抑制劑提供了調(diào)整晝夜節(jié)律的新方法?？?期待通過轉(zhuǎn)移或者重設(shè)晝夜節(jié)律的相位，從而有助于各種各樣的包括睡眠障礙的晝夜節(jié)律 障礙的治療。然而，以PF-670462為代表的以往抑制劑對于有可能表達(dá)副作用的激酶（例 如ρ38α等）也顯示出抑制作用，因此作為醫(yī)藥品而言尚未完成。
[0008] 在現(xiàn)有技術(shù)中，幾乎未聽說以直接治療晝夜節(jié)律障礙為目的的醫(yī)藥，另外，作為現(xiàn) 有技術(shù)中的睡眠障礙治療藥，開發(fā)了睡眠導(dǎo)入劑而在臨床上投入使用。另一方面，尚未完成 改善晝夜節(jié)律性睡眠障礙（輪班睡眠障礙、時差綜合癥、睡眠相提前綜合癥及睡眠相延遲 綜合癥）等的藥物。另外，對于以將其它睡眠障礙（失眠癥、睡眠相關(guān)呼吸障礙、中樞性過 度睡眠癥、睡眠期間相關(guān)疾病、睡眠相關(guān)運動障礙）中的晝夜節(jié)律的相位轉(zhuǎn)移或重設(shè)為基 礎(chǔ)的藥物治療也尚未完成。
[0009] 以下，對于酪蛋白激酶1 δ或者酪蛋白激酶1 ε與中樞神經(jīng)退行性疾病、特別是阿 爾茨海默氏病的關(guān)聯(lián)性進(jìn)行敘述。
[0010] 熟知阿爾茨海默氏病病變部位中的Tau蛋白質(zhì)的凝集是疾病狀態(tài)的重要標(biāo)記。而 且，還熟知該Tau蛋白質(zhì)的過度磷酸化對凝集發(fā)揮重要的參與作用。因此，作為將該Tau蛋 白質(zhì)磷酸化的候選激酶，可考慮屬于在該病變部位過度表達(dá)的酶的酪蛋白激酶1族，因此， 其中，對于酪蛋白激酶I S，Li，Guibon等進(jìn)行了使用ΗΕΚ-293細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的研宄。其 結(jié)果是，使用非選擇性酪蛋白激酶1抑制化合物3-[(2,3,6_三甲氧基苯基）次甲基]-吲 哚-2-酮（IC261)而顯示出：首先，酪蛋白激酶1 δ與Tau蛋白質(zhì)在原位締合，酪蛋白激酶 1 δ直接將Tau蛋白質(zhì)磷酸化，然后，通過酪蛋白激酶1 δ的過度表達(dá)，Tau蛋白質(zhì)的與體 外磷酸化的部位相同的部位的磷酸化增加等（非專利文獻(xiàn)6)。另一方面，Hanger，Diane P.等將由阿爾茨海默氏病患者的病變部位得到的極度磷酸化而凝集的所謂不溶性Tau即 PHF_tau(paired helical filaments-tau)及正常人類的Tau的磷酸化部位利用質(zhì)量分 析進(jìn)行比較，鑒定在阿爾茨海默氏病患者的病變部位所特有的磷酸化部位，并且由該磷酸 化部位的特征啟示：作為對象候選激酶，酪蛋白激酶1 δ與糖原合成酶激酶3 β (glycogen synthase kinase 3β) -起參與病變發(fā)生過程的可能性高（非專利文獻(xiàn)7)。
[0011] 以下，對于酪蛋白激酶I S或者酪蛋白激酶1 ε與中樞神經(jīng)退行性疾病、特別是阿 爾茨海默氏病的關(guān)聯(lián)性進(jìn)行進(jìn)一步敘述。
[0012] 在阿爾茨海默氏病中，認(rèn)為對神經(jīng)細(xì)胞顯示出毒性的β淀粉樣蛋白 (amyloid-β :Αβ)的蓄積與其病變相關(guān)。另一方面，同時已知在阿爾茨海默氏病患者的病 變部位酪蛋白激酶1的表達(dá)增加的事實?？紤]到Αβ是APP(amyloid precursor protein) 被 β 分泌酶（aspartyl protease β -secretase)及 γ 分泌酶（presenin-dependent protease γ-secretase)切斷而形成的，因此Flajolet，Marc等研宄了被利用in silico解 析而認(rèn)為在這些ΑΡΡ、β分泌酶、γ分泌酶的亞單位的序列中存在的酪蛋白激酶1共同磷酸 化的部位。接著，參考這些結(jié)果報告了，對穩(wěn)定地表達(dá)APP的Ν2Α細(xì)胞（N2A-APP695cell S)， 過度表達(dá)了持續(xù)穩(wěn)定活性的（constitutively active)酪蛋白激酶1 ε，結(jié)果Αβ 40及 A β 42的量與對照相比，分別成為約2倍與2. 5倍。進(jìn)而，報告了在該系統(tǒng)中，在添加非選擇 性酪蛋白激酶1抑制化合物IC261之際Αβ 40及Αβ 42的量下降，進(jìn)而，利用另外兩種非選 擇性酪蛋白激酶1抑制化合物CKI-7及D4476也可得到同樣的結(jié)果（非專利文獻(xiàn)8)。
[0013] 上述報告（非專利文獻(xiàn)6、7及8)很大地啟示了酪蛋白激酶1、特別是酪蛋白激酶 IS或者酪蛋白激酶1ε與阿爾茨海默氏病的發(fā)病相關(guān)，可通過抑制該酶活性來進(jìn)行阿爾 茨海默氏病的治療。
[0014] 另外，從假定存在阿爾茨海默氏病的致病基因的第21染色體在唐氏綜合癥患者 的體細(xì)胞中成為3倍體等出發(fā)，考慮唐氏綜合癥能夠成為阿爾茨海默氏病的遺傳背景或者 發(fā)病研宄等的模型。特別是，在兩者中共同發(fā)現(xiàn)的特定蛋白質(zhì)的異常蓄積被認(rèn)為是與其發(fā) 病機(jī)制相關(guān)的重要的病理學(xué)、生化學(xué)指標(biāo)之一而被進(jìn)行研宄。實際上，已知唐氏綜合癥患者 中，中年期（35歲左右）以后，阿爾茨海默氏癥樣腦病變多發(fā)。這些事實很大地啟示了關(guān) 于以唐氏綜合癥為背景的神經(jīng)退行性疾病，也可通過抑制酪蛋白激酶1、特別是酪蛋白激酶 IS或者酪蛋白激酶1ε的酶活性來治療以唐氏綜合癥為背景的神經(jīng)退行性疾病。
[0015] 在現(xiàn)有技術(shù)中，完全不知道以直接的Tau蛋白質(zhì)或者β淀粉樣蛋白的凝集抑制為 作用點并以包括阿爾茨海默氏病在內(nèi)的中樞神經(jīng)退行性疾病的治療為目的的醫(yī)藥，另外， 在現(xiàn)有技術(shù)中，對于阻礙基于本機(jī)制的中樞神經(jīng)退行性疾病的發(fā)展的藥物治療也尚未完 成。
[0016] 以下，對于酪蛋白激酶1 δ或者酪蛋白激酶1 ε與癌、特別是胰腺癌的關(guān)聯(lián)性進(jìn)行 敘述。
[0017] 酪蛋白激酶1族參與細(xì)胞內(nèi)的各種各樣的重要生理活性的調(diào)整，其磷酸化的底物 蛋白質(zhì)涉及很多方面。例如，癌抑制因子Ρ53及癌基因mdm