一種用黃芩苷制備黃芩素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
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[0001]本發(fā)明涉及黃芩素的制備方法，具體地說是一種用黃芩苷制備黃芩素的方法。
【背景技術(shù)】
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[0002]黃芩苷和黃芩素為中藥黃芩的主要活性成分。目前大量藥物代謝研宄表明，黃芩苷經(jīng)口服后，在消化系統(tǒng)內(nèi)被腸道菌群轉(zhuǎn)化為苷元才能被吸收利用(Lai，et al., 2003),因此，黃芩苷的生物利用率較低，而黃芩素容易被吸收，生物利用度高(趙晶等，1998)。此外，大量體內(nèi)外藥理活性研宄表明，黃芩素的藥理活性也遠(yuǎn)高于黃芩苷，尤其是清除自由基及抗氧化(Gao, et al.，1999)、抗艾滋病毒(Wu, ea al.，2001)、抗血管生成(Liu, etal.,2003)作用等方面。由于黃芩素在黃芩藥材中含量低微，無直接提取價(jià)值，所以目前涉及黃芩素的制備主要有三種方式。第一是利用化工原料進(jìn)行有機(jī)合成制備(申請?zhí)?00410008987.8)，有機(jī)合成法的大量制備，可能成本較低，但由于使用大量有機(jī)溶劑，存在對環(huán)境污染較大的問題。第二是利用含黃芩自身酶或其它酶的水溶液提取黃芩藥材，在黃芩苷被提取出的同時(shí)又被黃芩自身酶或其它酶水解而轉(zhuǎn)化為黃芩素，然后再利用有機(jī)溶劑萃取、柱分離等方式進(jìn)一步純化獲得高純度的黃芩素(申請?zhí)?01110422999.5)。該方法雖然具有一定的優(yōu)勢，但由于含酶的水溶液對黃芩苷的溶解度較小，因而水解效率較低。此夕卜，因而后續(xù)處理較復(fù)雜。第三是采用酸水解(申請?zhí)?00410019726.6,200302129372.4)和含黃芩苷水解酶的水溶液直接水解黃芩苷制備黃芩素(申請?zhí)?00410020649.6)。酸水解法需要在100°C下水解16-20小時(shí)，反應(yīng)時(shí)間長，且如入強(qiáng)酸對黃芩苷破壞較大，環(huán)境污染嚴(yán)重。酶法水解黃芩苷葡萄糖醛酸基制備黃芩素的方法雖然克服了污染嚴(yán)重的缺點(diǎn)，但同樣由于含酶的水溶液對黃芩苷的溶解度較小，反應(yīng)時(shí)間長，水解效率較低。
[0003]低共熔溶劑是一類由天然物質(zhì)合成的、可再生的、易大量合成的新型綠色溶劑，它具有低于室溫的熔點(diǎn)，低的揮發(fā)性和高的熱穩(wěn)定性，更重要的是脂肪酶水解酶、糖苷水解酶等在低共熔溶劑中仍表現(xiàn)出良好的催化活性。例如，脂肪酶在低共熔溶劑中可較好的催化戊酸乙醋轉(zhuǎn)化為戊酸丁醋的醋交換反應(yīng)(Johnathan T.Gorke, Chem.Commun.，2008)。因此，低共熔溶劑在水解酶催化生物轉(zhuǎn)化方面具有廣泛的應(yīng)用前景。目前尚未見到關(guān)于以低共熔溶劑為溶劑，酶催化水解黃芩苷制備黃芩素的報(bào)導(dǎo)。

【發(fā)明內(nèi)容】

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[0004]本發(fā)明目的在于提供一種綠色環(huán)保、效率高、簡單易行的由黃芩苷制備黃芩素的方法。
[0005]本發(fā)明提供的一種由黃芩苷制備黃芩素的方法，包括如下步驟:
[0006](I)黃芩粗酶粉的制備:按質(zhì)量比1: 1.5?2.5取新鮮黃芩和pH為4?6的緩沖液，加入少量石英砂，研磨、離心過濾，得到黃芩粗酶液，粗酶液經(jīng)過濾，透析，真空冷凍干燥得黃萃粗酶粉；
[0007](2)酶水解黃芩苷:取含量至少80%的黃芩苷，用低共熔溶劑溶解，再依次加入pH為4?6的緩沖液、黃芩粗酶粉，混合均勻，加熱至40?50°C，保溫、攪拌反應(yīng)2.0?4.0小時(shí)，冷卻至室溫，過濾，回收沉淀物，濾液可再次用于水解黃芩苷；其中:黃芩苷、低共熔溶劑、緩沖液、黃芩粗酶粉的質(zhì)量比為1:40?60:150?250:0.025?0.1 ;
[0008](3)黃芩素純化:將上述得到的沉淀物用95%的乙醇溶解，過濾，棄去不溶物；濾液中加入5?6倍量去離子水(體積比)，攪拌均勻，靜置，析出黃芩素，過濾獲取沉淀，沉淀再用去離子水洗滌至少3次，過濾、干燥，得精制黃芩素。
[0009]步驟⑴中新鮮黃芩和緩沖液的質(zhì)量比優(yōu)選1:2。
[0010]步驟⑵中黃芩苷、低共熔溶劑、緩沖液、黃芩粗酶粉的質(zhì)量比優(yōu)選1:50:200:0.025 ?0.1。
[0011]步驟(2)中所述的低共熔溶劑為一種銨鹽和一種氫鍵給體化合物按1:0.5?2(摩爾比)的比例混合，在60?90°C條件下加熱、攪拌至形成均一透明液體。其中的銨鹽優(yōu)選氯化膽堿，氫鍵給體化合物優(yōu)選尿素。
[0012]所述的緩沖液可為乙酸-乙酸鹽緩沖液、檸檬酸-檸檬酸鹽緩沖液、磷酸-磷酸鹽緩沖液中的任一種緩沖液。
[0013]本發(fā)明利用黃芩苷含量為80%的原料制備黃芩素，黃芩苷的轉(zhuǎn)化率可達(dá)90%以上、黃芩素的純度可達(dá)75%以上。
[0014]與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn):
[0015](I)本發(fā)明的制備方法使用的低共熔溶劑水溶液對黃芩酶和黃芩苷均有較好的溶解度，因此，黃芩苷水解效率高，黃芩苷的轉(zhuǎn)化率可達(dá)90%以上、黃芩素的純度可達(dá)75%以上。
[0016](2)本發(fā)明使用溶劑為低共熔溶劑，具有低于室溫的熔點(diǎn)，低的揮發(fā)性，高的熱穩(wěn)定性和安全無毒，并可回收再利用，是一種綠色環(huán)保溶劑。
[0017](3)本發(fā)明的制備方法中未使用有機(jī)溶劑(除少量乙醇外)和酸堿，對環(huán)境無污染。
【附圖說明】
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[0018]圖1.本實(shí)驗(yàn)室制備的黃芩苷的HPLC圖譜
[0019]圖2.本發(fā)明實(shí)例3制備方法制備的黃芩素的HPLC圖譜
【具體實(shí)施方式】
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[0020]本發(fā)明通過以下實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)描述，應(yīng)理解的是，此處所描述的【具體實(shí)施方式】僅用于說明和理解本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。
[0021]實(shí)施例1
[0022]A.黃芩粗酶粉的制備:取黃芩新鮮藥材200g切碎，置于研缽中，加入少量石英砂和400mlpH值為4.0的乙酸-乙酸鹽緩沖液，研磨、過濾，濾液置透析袋內(nèi)，用去離子水透析，直到外液無色為止，取透析袋內(nèi)酶液、真空冷凍干燥，得到黃芩粗酶粉0.1Sgo
[0023]B.低共恪溶劑制備:取140g氯化膽堿和60g尿素，置于250ml的圓底燒瓶內(nèi)，在80 0C條件下加熱、攪拌至形成均一透明液體。
[0024]C.酶水解黃芩苷制備黃芩素:取黃芩苷(黃芩苷含量80% ) 2g,用10g低共熔溶劑溶解，再依次加入400mL pH值為pH值為4.0的乙酸-乙酸鹽緩沖液、黃芩粗酶粉lOOmg，混合均勻。將上述溶液加熱至45°C，保溫、攪拌反應(yīng)2.5小時(shí)，反應(yīng)完成后，冷卻至室溫，過濾，回收沉淀物(濾液可再次用于水解黃芩苷)。將上述得到的沉淀物用95%乙醇溶解，過濾，棄去不溶物。濾液中加入5倍量去離子水(體積比)，攪拌均勻，靜置，黃芩素析出，過濾獲取沉淀，沉淀再用去離子水洗滌3次，過濾、干燥，得黃芩素1.081g.經(jīng)HPLC檢測純度為80.2%,黃芩苷轉(zhuǎn)化率為90.3%。
[0025]實(shí)施例2
[0026]A.黃芩粗酶粉的制備:取黃芩新鮮藥材200g切碎，置于研缽中，加入少量石英砂和400mlpH值為4.5的檸檬酸-檸檬酸鹽緩沖液，研磨、過濾，濾液置透析袋內(nèi)，用去離子水透析，直到外液無色為止，取透析袋內(nèi)酶液、真空冷凍干燥，得到黃芩粗酶粉0.20go
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