一個示例性構造中，可將加熱套放置于凹陷中，在所述第一元件中 形成加熱凹陷，所述第一元件中放置有酶的容器（例如藥瓶）?？赏ㄟ^至少一個約束裝置使 所述容器保持原位，所述約束裝置優(yōu)選圍繞所述容器上部的至少部分，從而避免所述容器 從所述裝置中意外釋放。在某些實施方式中，當所述設備旨在用于單次使用時，所述約束裝 置可形成所述第一元件的整體部分，因此除非所述第一元件被物理打斷或損壞，否則所述 容器不會被移開。
[0090] 所述設備中使用的加熱裝置可由電路控制，從而在需要時激活加熱元件。例如， 可按下位于例如所述第一元件表面的開始按鈕或通過觸屏用戶界面打開加熱裝置?；蛘?， 可通過使用足夠的力向下推動所述容器以激活位于所述設備基部的開關，從而激活加熱裝 置。本領域普通技術人員應理解，可使用多種電子裝置激活所述設備中提供的加熱單元。
[0091] 所述加熱單元還可操作地連接至計時器機制，適用于對酶溶液加熱預設的一段時 間。在某些實施方式中，當所述設備旨在用于多次使用時，可對計時器進行設置以在預設時 間屆滿時使加熱元件停止工作。隨后可激活警報器以告訴使用者時間已到。所述警報器可 以是可聽的或發(fā)光顯示的形式。
[0092] 在另一個優(yōu)選實施方式中，可使所述加熱裝置配備可調節(jié)的溫度控制。在需要調 節(jié)溫度時，可通過使用加熱控制電路以包括溫度控制機制或與其通信，使得加熱單元的溫 度在恒定范圍內不斷變化，或者其可具有一定范圍的所選溫度（所述溫度是加熱控制裝置 所設置的），從而實現(xiàn)這類調節(jié)。當所述裝置用于不同細胞類型的收獲和制備和/或當收獲 方法中使用了不同的酶（所述設備為此具有獨特應用）時，可在所述設備中包括溫度控制 裝置。
[0093] 在一些實施方式中，所述設備可設計為單次使用。在這類情況下，所述計時器機制 可以是控制加熱裝置的電路的一部分。一旦加熱裝置被激活，其對溶液加熱預設的一段時 間，隨后自毀。本領域技術人員應理解，這類設備可配備能夠顯示以下一種或多種指標的多 種監(jiān)控裝置：酶溶液已達到預設溫度；酶在溶液中的時間長度；和/或電路自毀前剩余的時 間長度。僅舉例來說，所述監(jiān)控裝置可由某些事件發(fā)生時激活的一系列LED組成。在一個 實施方式中，加熱元件在加熱模塊中保持最高45分鐘至1小時。
[0094] 可通過本領域已知的任何方式為加熱裝置供電。優(yōu)選地，通過電池/電池組提供 電源。在一個實施例中，所述電源是位于所述設備基部的一個電池或多個電池。
[0095] 在本發(fā)明的另一個實施方式中，所述設備可配備一個或多個裝置以促進本發(fā)明中 所用溶液（例如酶溶液）的混合。在這個方面，且僅舉例來說，所述設備可包括用于渦旋溶 液的裝置，如適于攪拌磁珠的電磁系統(tǒng)。當所述設備包括電磁混合系統(tǒng)時，可在所述設備中 儲存溶液的容器（例如藥瓶）中提供磁珠。或者，可在需要混合時將磁珠加入溶液中。
[0096] 在一個實施方式中，混合裝置可與加熱裝置以單個單元或獨立單元的形式聯(lián)用以 促進以均勻的方式對溶液進行恒定加熱。使用這類混合裝置可避免在加熱溶液時最靠近加 熱單元的溶液受到過度加熱。這類系統(tǒng)可以提供溶液的恒定加熱。用于混合溶液的替代性 裝置是本領域已知的且包括例如機械、物理、電子和電磁裝置。雖然任何混合裝置都可用于 所述設備，但優(yōu)選地，所述混合裝置經(jīng)選擇用于最小化所述設備的震動或者以最小化這類 震動的方式整合在所述設備中。在這一方面，所述混合裝置可置于一個或多個減震器上或 者所述設備可在其基部上包括一個或多個減震器。
[0097] 當混合裝置整合在所述設備中時，所述裝置可在加熱單元激活后自動激活，或者 可以有獨立的激活系統(tǒng)。此外，混合的速度可以是固定的或可變的。優(yōu)選地，存在用于混合 裝置的獨立激活系統(tǒng)。
[0098] 可在所述設備中整合過濾凹槽，所述過濾凹槽可以是促進細胞懸液過濾以除去或 收集大細胞聚集物（例如大于200 y m、大于150 y m或大于100 y m)的任何尺寸或形狀。此 外，所述凹槽可用于收集或容納至少一個管或藥瓶，細胞懸液被過濾至所述管或藥瓶中。所 述凹槽可具有錐形基部，使得在過濾后能夠容易地得到細胞懸液的整個體積。過濾裝置還 可以是同軸濾器（in-line filter)。
[0099] 在一些實施方式中，凹陷經(jīng)設計用于接收能夠除去或收集大于約100ym的細胞 聚集物的100 um細胞濾器。所述濾器的使用還可防止噴霧器/噴嘴被大聚集物堵塞。所 述凹槽可容納連接至錐形管的100 um細胞濾器。優(yōu)選地，所述管在側面標記有面積/體積 刻度。
[0100] 所述設備還可包括細胞收獲所需的工具組。本領域技術人員應理解，細胞收獲所 必需的任何工具都可包括在裝置中。優(yōu)選的，所述工具組是無菌的。作為示例，所述工具 組可包括玻璃管裝的分離酶；用于懸浮酶的無菌溶液；無菌營養(yǎng)液；解剖刀；鑷子；注射器； 醫(yī)用滴管；細胞濾器；傷口敷料和/或噴嘴。在一個實施方式中，所述工具組儲存于所述設 備的第一元件形成的隔室中，其在不使用時被第二元件所覆蓋。
[0101] 在一個實施方式中，所述設備用于收獲和制備細胞懸液，并進一步以任何合適的 方式將細胞懸液應用于受體位點。
[0102] 例如，可將無菌水的等分樣與一部分凍干的分離酶混合并置于加熱凹槽中。隨后 激活加熱元件，將容器中含有的物質（即酶溶液）加熱至約30至37°C的工作溫度，優(yōu)選約 33至37°C，或者例如在短時間（例如約5分鐘、約3分鐘、約2分鐘或約1分鐘）內加熱至 約37°C，并維持工作溫度足夠時間以進行酶消化（例如約30分鐘、約45分鐘、約0分鐘，或 更長或更短）。一旦達到操作溫度，則可將從供體位點取出的組織樣品置于酶溶液中并在工 作溫度下孵育。將組織樣品孵育足夠長的時間（例如5至60分鐘、10至45分鐘、20至30 分鐘，或更長或更短）。本領域技術人員應理解，實現(xiàn)組織樣品的層分離的時間取決于組織 樣品的厚度和尺寸以及孵育時間，并可通過常規(guī)實驗確定。一旦實現(xiàn)組織層的酶促分離，則 可將組織樣品移出，使用營養(yǎng)液清洗，并置于容器中，在其中使用手術器械（如鑷子）原位 固定組織層。
[0103] 隨后通過吸取的方式從流體容納孔中提取小心測量的第二溶液（如營養(yǎng)液）等分 樣至注射器中并隨后應用于層。使用解剖刀刮下來自全組織樣品（例如包括表皮、真皮和 真皮-表皮連接部）的細胞，并將其與營養(yǎng)液混合以進行懸浮。隨后收集細胞懸液，優(yōu)選使 用注射器和套管。
[0104] 隨后使收獲的細胞懸液通過位于過濾凹槽的細胞濾器以除去大細胞聚集物和其 他不需要的材料，并將過濾后的細胞懸液收集于過濾凹槽中。可選使用額外體積的第二溶 液清洗儲器，所得的額外細胞懸液也可過濾并收集在過濾凹槽中。
[0105] 隨后可選將過濾后細胞懸液吸入分散裝置（如注射器）中并直接應用于受體位 點。所述懸液也可體外或原位地間接應用于需要修復的區(qū)域，例如支架/基底或敷料。
[0106]在其他實施方式中，所述懸液的制備過程可以是自動的。自動裝置可包括能夠多 次使用的加工單元和單次使用的耗材。例如，可提供具有一次性筒的自動裝置。所述一次 性筒可具有含有水、酶和緩沖液的水泡。輥或壓板可用于產(chǎn)生壓力以沖破單向閥，使水泡的 成分導入含有活檢樣品的加工室中。酶孵育后，使用類似于研缽和研杵的方式加工活檢樣 品，其中基部可含有網(wǎng)或任何其他刮擦裝置以完成刮擦步驟。在一些實施方式中，所述裝置 可具有一個以上的一次性筒，因此可平行加工一塊以上的活檢樣品。
[0107] 熱激蛋白的伸用
[0108] 熱激蛋白（HSP)最初被發(fā)現(xiàn)為由熱激和其他化學（例如化合物）或物理應激顯著 誘導的蛋白。從那時起，其被視作分子伴侶，通過其內在能力指導和修飾蛋白結構以使其從 變性結構重折疊為天然結構。這些對于全天然功能蛋白的相互作用和平衡使得HSP具有豐 富含量。HSP通常根據(jù)其分子量分為數(shù)類。例如，Hsp27、40、70和110基因已進化為對應激 后或應激期間的物質合成特別有效，具有有力的轉錄激活、有效的信使RNA(mRNA)穩(wěn)定化 和選擇性mRNA翻譯。應激后，Hsp27、70、90和110水平上升為主要表達的蛋白。
[0109] 熱激蛋白在保護皮膚免遭環(huán)境應激方面發(fā)揮重要作用，并參與因處于光、熱、化學 損傷和其他創(chuàng)傷下而導致的損傷預防和修復。此外，UV-B輻射也可誘導熱激應答，其保護 人皮膚免遭細胞損傷并是暴露于陽光輻射后天然防御的一部分。然而，在生理傷口愈合中， 在任何特定時間幾乎沒有細胞受到應激，因此大多數(shù)細胞未被激活，或分泌HSP或增殖。
[0110] 因此，傷口愈合過程可受益于外源性導入熱激應答。例如，通過將本發(fā)明的細胞懸 液放置在應激條件下，細胞可表現(xiàn)出熱激應答。合適的應激條件包括但不限于缺氧、熱激、 pH變化、滲透壓和/或氣壓變化、化學化合物、輻射、機械外傷、營養(yǎng)缺乏和/或禁食或熱量 限制?？赏ㄟ^在缺乏足夠氧氣供應的環(huán)境中孵育細胞實現(xiàn)缺氧。此外，由于本發(fā)明的方法將 活檢樣品從其正常維管聯(lián)結中取走，活檢樣品中的細胞以及收獲自活檢樣品的細胞可經(jīng)歷 應激并由于維管聯(lián)結的減少或缺失表現(xiàn)出受應激和/或激活的狀態(tài)。熱激的過程可在C0 2 培養(yǎng)箱、〇2培養(yǎng)箱或熱水浴中完成。此外，可在制備和/或分散細胞懸液的整個過程中誘導 應激，例如從維管聯(lián)結中移除活檢樣品、使活檢樣品分解在細胞懸液中（例如通過酶促和/ 或機械方式）和/或霧化或其他分散細胞的過程中。在應激下，細胞可表現(xiàn)出應激誘導特 征，例如熱激蛋白表達水平升高。所述熱激蛋白可以是Hsp90和/或Hsp90 a。
[0111] Hsp90是HSP的多個類別之一，通常被合成以應答細胞應激或在一些情況下組成 型表達。這些應激類型很多，但包括熱激、金屬毒性、營養(yǎng)缺乏、氧化應激以及多種疾病狀 態(tài)。Hsp90是細胞中存在的最常見的伴侶蛋白之一其可占未應激細胞蛋白的1 _2%和 應激細胞中高達6%的蛋白。它能夠提供多組分復合體，已證明所述復合體包括p60/Hop、 p50Cdc37、Hsp40/HDJ2、p23、Hsp70 和多種親免素之一（如 FKBP51 和 FKBP52)。
[0112] Hsp90通常以兩種形式存在，Hsp90a和0。兩種蛋白都高度相關且似乎具有相 同的活性；然而，前者是可誘導的而后者是組成型表達的。Hsp90還是一種磷酸-蛋白且具 有每個單體具有兩個或三個結合的磷酸分子并以同源二聚體的形式存在。使其成為潛在藥 物革巴標的清晰差異之一是其客戶蛋白（client protein)中很大一部分是蛋白激酶的事實。 這些客戶蛋白包括 ErbB2/Her-2、EGFR、Hifl a、c-Met、Akt/PKB、Raf-l、Cdk-l 和 4、Aurora B、Askl、CHKl、CKII以及突變體p53。此外，由于調節(jié)細胞增殖和細胞死亡相關的相互作用 和復雜網(wǎng)絡的性質，鑒定一種特異性（藥物）靶標和對其阻斷或激活的方法可導致細胞簡 單地改變其調節(jié)以維持表型。
[0113] 最近發(fā)現(xiàn)HSP由細胞主動分泌并發(fā)揮重要的胞外功能，包括免疫細胞因子生成的 刺激、抗原呈遞細胞（APC)的激活和抗癌功能。缺氧導致表皮和真皮細胞中Hsp90 a分泌。 分泌的Hsp90 a轉而促進這些細胞的迀移。由于HSP蛋白在氨基端缺乏任意信號序列，這 些蛋白不能通過經(jīng)典的內質網(wǎng)/高爾基體輸送通路分泌。相反，這些蛋白通過被稱為外來 體的離散納米囊泡（直徑30-90nm)群體分泌至細胞外。因此，外來體分泌構成了細胞間通 信的潛在模式并開辟了新的處理和診斷策略。TGF a通過外來體途徑將Hsp90 a "推"出人 角質形成細胞，其轉而促進表皮和真皮細胞通過細胞表面受體CD91/LRP-1 ( "LRP"指LDL 受體相關蛋白-1)的迀移。
[0114] 因此，在某些實施方式中，可將本發(fā)明的細胞懸液（或其一部分）與熱激蛋白（或 其片段）共同給予至受體位點以促進傷口愈合或促進上皮相關過程中上皮組織的處理、再 生和表面重修。細胞懸液和HSP可以混合物的形式供應并分散至受體位點?；蛘?，細胞懸液 和HSP可分開應用于受體位點。還可使用多種細胞懸液和/或HSP的應用或分散以實現(xiàn)所 需的傷口愈合效果?？梢蕴幚碛行Я渴褂肏SP或其片段以促進傷口愈合。所述HSP可以是 Hsp90 和 / 或 Hsp90 a?？梢约s 〇? 1 y g/ y 1 至約 1〇〇 y g/ y 1、約 〇? 3 y g/ y 1 至約 50 y g/