一種高純度阿維菌素B2a的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及一種生物農(nóng)藥的制備方法，尤其涉及一種采用環(huán)保型結(jié)晶溶劑提取高 純度阿維菌素B2a的制備方法，屬于農(nóng)藥制備技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】：
[0002] 阿維菌素是由鏈霉菌中發(fā)酵產(chǎn)物分離提取得到的一組結(jié)構(gòu)類似的十六元大環(huán)內(nèi) 酯類抗生素，由一組結(jié)構(gòu)相近的8個(gè)同系物組成，B1和B2是該同系物中的兩大組分。阿維 菌素B類組分對(duì)線蟲，昆蟲，螨類具有極高的生物殺蟲活性，但對(duì)不同靶標(biāo)的殺蟲能力Bla 和B2a又有顯著的區(qū)別。阿維菌素B2a對(duì)根結(jié)線蟲有很好的效果，據(jù)Putter等1981年報(bào) 道，在阿維菌素8個(gè)組分中，Bla和B2a是最有效的農(nóng)用活性物質(zhì)，其中B2a對(duì)植物根結(jié)線 蟲活性最高，其在土壤中的持效期長(zhǎng)達(dá)2個(gè)月。Vecent等試驗(yàn)證明，阿維菌素B2a在土壤中 持效期長(zhǎng)的原因是，其通過土壤微生物代謝為阿維菌素B2a-2, 3-酮，該物質(zhì)對(duì)根結(jié)線蟲的 活性比阿維菌素B2a更高。
[0003] 中國(guó)專利文獻(xiàn)CN102977168A公開了一種阿維菌素B2a的提取制備方法，其為首先 將阿維菌素Bla結(jié)晶母液濃縮至油膏狀，再向油膏中加入萃取劑甲苯進(jìn)行萃取，加入適量 助濾劑攪拌均勻后降溫至10-0°C進(jìn)行B2a粗結(jié)晶，然后將B2a晶體粗品用5~7倍的甲苯 進(jìn)行重結(jié)晶，抽濾，干燥，獲得純度大于90%的阿維菌素B2a晶體精品。該方法雖然提供了 一種生產(chǎn)成本相對(duì)較低，且易于工業(yè)化生產(chǎn)阿維菌素B2a的提取制備方法，但該方法采用 致癌物質(zhì)甲苯作為結(jié)晶和重結(jié)晶溶劑，生產(chǎn)操作過程中對(duì)現(xiàn)場(chǎng)員工身體造成危害性較大， 且對(duì)環(huán)境也會(huì)造成污染。另外，該工藝通過兩遍重結(jié)晶得到的B2a晶體純度較低，純度僅為 90%〇
[0004] 中國(guó)專利文獻(xiàn)CN103333214A公開了 一種阿維菌素B2a精粉的制備方法，采用 0. 25-0. 6%的四丁基溴化銨水溶液對(duì)乙酸仲丁酯萃取液進(jìn)行洗滌，使得阿維菌素純度提高 至93%以上，在該專利中，雖然在一定程度上提高了阿維菌素的純度，但該工藝采用致癌物 質(zhì)芳香烴作為結(jié)晶和重結(jié)晶溶劑，生產(chǎn)操作過程中對(duì)現(xiàn)場(chǎng)員存在危險(xiǎn)性，且工藝中先采用 乙酸仲丁酯萃取，水洗后將乙酸仲丁酯真空蒸餾出后再用芳香烴進(jìn)行結(jié)晶，工藝較為復(fù)雜， 生產(chǎn)成本較高。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0005] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種采用環(huán)保型結(jié)晶溶劑提取高純度阿維菌素 B2a的制備方法。
[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0007] 一種高純度阿維菌素B2a的制備方法，包括步驟如下：
[0008] (1)將阿維菌素Bla結(jié)晶母液于真空條件下濃縮至無餾分，得油膏稠料；
[0009] (2)向步驟（1)所得的油膏稠料中加入萃取劑進(jìn)行萃取，得到萃取液，然后采用飽 和食鹽水洗滌萃取液2~3次，去除水相后得到乙酸正丁酯溶液；所述的萃取劑為乙酸正丁 酯，乙酸正丁酯的加入量與油膏稠料質(zhì)量比為（1~3) :1 ;
[0010] (3)將得到的乙酸正丁酯溶液降溫至0~5°C，析出大量晶體后，養(yǎng)晶，抽濾，得到 阿維菌素B2a粗結(jié)晶；
[0011] (4)向阿維菌素B2a粗結(jié)晶中加入乙酸正丁酯進(jìn)行重結(jié)晶，重結(jié)晶乙酸正丁酯的 用量與粗結(jié)晶的質(zhì)量比為（1~3) :1，抽濾，干燥，得到高純度阿維菌素B2a精粉。
[0012] 本發(fā)明優(yōu)選的，阿維菌素Bla結(jié)晶母液為阿維菌素Bla生產(chǎn)過程中結(jié)晶分離阿維 菌素Bla后剩余的液體，阿維菌素Bla生產(chǎn)過程包括如下步驟：
[0013] a、阿維菌素發(fā)酵液經(jīng)壓濾、烘干后制成干菌絲體；b、干菌絲體與甲醇按照質(zhì)量比 為1:8~9的比例加入甲醇進(jìn)行浸提、過濾，得浸提液；c、將浸提液濃縮至膏狀，水洗后，補(bǔ) 入油膏質(zhì)量0.6~0.8倍的甲醇進(jìn)行升溫溶解，降溫至常溫后，經(jīng)抽濾、干燥，得到的固體即 為阿維菌素Bla精粉，濾液即為阿維菌素Bla結(jié)晶母液，阿維菌素Bla結(jié)晶母液中阿維菌素 Bla和阿維菌素B2a純度分別為25 %~30 %和55 %~60%。
[0014] 本發(fā)明優(yōu)選的，步驟（1)中阿維菌素Bla結(jié)晶母液的濃縮為將阿維菌素Bla結(jié)晶 母液升溫至60~80°C，保持該溫度蒸餾出絕大部餾分，直至得到油膏狀物料，濃縮時(shí)的真 空度為〇? 05~0? 07Mpa。
[0015] 本發(fā)明優(yōu)選的，步驟（2)中的萃取為向油膏稠料中加入萃取劑乙酸正丁酯，升溫 至60~70°C，攪拌0. 5~1小時(shí)至油膏稠料完全溶解，乙酸正丁酯的加入量與油膏稠料質(zhì) 量比為（2~2. 5) :1。
[0016] 本發(fā)明優(yōu)選的，步驟（2)中的洗滌為加入萃取液質(zhì)量20~30 %的飽和食鹽水，在 80~90°C攪拌1~2小時(shí)，然后靜置10~15分鐘進(jìn)行分層，去除水相，得乙酸正丁酯溶液。
[0017] 本發(fā)明優(yōu)選的，步驟（3)中的降溫分兩步進(jìn)行，先用水浴將乙酸正丁酯溶液快速 降溫至15~20°C，然后調(diào)節(jié)攪拌速度至10~20r/min，并以每小時(shí)2~3°C的降溫速率降 溫至0~5°C。
[0018] 本發(fā)明優(yōu)選的，步驟（3)中的養(yǎng)晶為于0~5°C下保溫1~2小時(shí)進(jìn)行養(yǎng)晶。
[0019] 本發(fā)明優(yōu)選的，步驟（4)中重結(jié)晶為向阿維菌素B2a粗結(jié)晶中加入乙酸正丁酯，加 入活性炭，攪拌升溫至80~90°C，待阿維菌素B2a粗結(jié)晶完全溶解后，保溫0. 5~lh，進(jìn)行 抽濾，回收濾液至結(jié)晶罐，按照步驟（3)的降溫方式進(jìn)行結(jié)晶、養(yǎng)晶，然后抽濾，干燥，得到 阿維菌素B2a精粉。
[0020] 本發(fā)明優(yōu)選的，步驟（4)中重結(jié)晶時(shí)，乙酸正丁酯的加入量與阿維菌素B2a粗結(jié)晶 的質(zhì)量比為（2~2. 5) :1，活性炭的用量為阿維菌素B2a粗結(jié)晶質(zhì)量的0. 5%~1%。
[0021] 本發(fā)明優(yōu)選的一個(gè)技術(shù)方案，一種高純度阿維菌素B2a的制備方法，包括步驟如 下：
[0022] (1)將阿維菌素Bla生產(chǎn)過程中結(jié)晶分離阿維菌素Bla后的阿維菌素Bla結(jié)晶母 液升溫至60~80°C，保持該溫度真空條件下蒸餾出絕大部餾分，直至得到油膏稠料，濃縮 時(shí)的真空度為〇? 05~0? 07Mpa
[0023] (2)向油膏稠料中加入萃取劑乙酸正丁酯，升溫至60~70°C，攪拌0. 5~1小時(shí) 至油膏稠料完全溶解，乙酸正丁酯的加入量與油膏稠料質(zhì)量比為（2~2.5) :1，得萃取液， 加入萃取液質(zhì)量20~30%的飽和食鹽水，在80~90°C攪拌1~2小時(shí)，然后靜置10~15 分鐘進(jìn)行分層，去除水相，重復(fù)洗滌2~3次后得乙酸正丁酯溶液；
[0024] (3)先用水浴將乙酸正丁酯溶液快速降溫至15~20°C，然后調(diào)節(jié)攪拌速度至 10~20r/min，并以每小時(shí)2~3°C的降溫速率進(jìn)行降溫，降溫至0~5°C保溫1~2小時(shí) 進(jìn)行養(yǎng)晶，抽濾得到阿維菌素B2a粗結(jié)晶；
[0025] (4)向阿維菌素B2a粗結(jié)晶中加入乙酸正丁酯，加入活性炭，攪拌升溫至80~ 90°C，待阿維菌素B2a粗結(jié)晶完全溶解后，保溫0. 5~lh，進(jìn)行抽濾，回收濾液至結(jié)晶罐，按 照步驟（3)的降溫方式進(jìn)行結(jié)晶、養(yǎng)晶，然后抽濾，干燥，得到阿維菌素B2a精粉，乙酸正丁 酯的加入量與粗結(jié)晶的質(zhì)量比為2 :1~2. 5 :1 ;活性炭用量為粗結(jié)晶質(zhì)量分?jǐn)?shù)的0. 5%~
[0026] 本發(fā)明的有益效果：
[0027] 1、生產(chǎn)操作過程中對(duì)現(xiàn)場(chǎng)員工身體造成危害性小，且對(duì)環(huán)境造成的污染也相對(duì)較 小。這是因?yàn)楸景l(fā)明的制備方法采用環(huán)保型溶劑乙酸正丁酯作為結(jié)晶溶劑，相對(duì)于傳統(tǒng)采 用芳香烴溶劑毒害性小。
[0028] 2、可以得到純度更高的阿維菌素B2a結(jié)晶產(chǎn)品。這是因?yàn)橐宜嵴□ピ诘蜏貤l件 下，對(duì)Bla溶解度依舊較高，所以其在低溫條件下對(duì)一次結(jié)晶母液中B2a與Bla能夠?qū)崿F(xiàn)較 好的拆分，B2a結(jié)晶中Bla含量相對(duì)較低；另外，芳香烴溶劑在用于對(duì)B2a的結(jié)晶時(shí)，由于其 爆發(fā)性結(jié)晶，所析出的B2a結(jié)晶包裹雜質(zhì)較多，造成純度低，而采用乙酸正丁酯作為B2a的 結(jié)晶溶劑時(shí)，由于其結(jié)晶溫度較寬，采用梯度緩慢降溫，可以控制晶種生成的數(shù)量，得到較 大較均勻的晶體，使得B2a結(jié)晶純度相對(duì)較高，晶型相對(duì)較好。
[0029] 3、節(jié)約生產(chǎn)時(shí)間，降低生產(chǎn)成本。此阿維菌素B2a的結(jié)晶工藝處理量是甲苯結(jié)晶 的2~3倍，要達(dá)到一定的精品純度所需的結(jié)晶次數(shù)少，綜合收率高，節(jié)約了生產(chǎn)時(shí)間和成 本，是一種較傳統(tǒng)B2a生產(chǎn)制備方法廉價(jià)，高效的方法。
【附圖說明】
[0030] 圖1為實(shí)施例1制得的高純度阿維菌素B2a組分的液相色譜圖（乙酸正丁酯為溶 劑）
[0031] 圖2為對(duì)比例1制得的阿維菌素B2a組分的液相色譜圖（甲苯為溶劑）
【具體實(shí)施方式】：
[0032] 下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說明，但不限于此。
[0033] 實(shí)施例所用的設(shè)備均為常規(guī)現(xiàn)有設(shè)備。
[0034] 實(shí)施例中阿維菌素Bla結(jié)晶母液為阿維菌素Bla生產(chǎn)過程中結(jié)晶分離阿維菌素 Bla后剩余的液體，阿維菌素Bla生產(chǎn)過程包括如下步驟：
[0035] a、阿維菌素發(fā)酵液經(jīng)壓濾、烘干后制成干菌絲體；b、干菌絲體與甲醇按照質(zhì)量比 為1:8的比例加入甲醇進(jìn)行浸提、過濾，得浸提液；c、將浸提液濃縮至膏狀，水洗后，補(bǔ)入 油膏質(zhì)量〇. 7倍的甲醇進(jìn)行升溫溶解，降溫至常溫后，經(jīng)抽濾、干燥，得到的固體即為阿維 菌素Bla精粉，濾液即為阿維菌素Bla結(jié)晶母液，阿維菌素Bla結(jié)晶母液中阿維菌素B2a純 度為56. 5%。
[0036] 實(shí)施例1 :
[0037] 一種高純度阿維菌素B2a的制備方法，包括步驟如下：
[0038] 1、取1500ml阿維菌素Bla生產(chǎn)過程中結(jié)晶分離阿維菌素Bla后的阿維菌素Bla 結(jié)晶母液升溫至70°C，保持該溫度真空條件下蒸餾出絕大部餾分，直至得到油膏稠料，真空 條件的真空度為〇.〇6Mpa;
[0039] 2、取步驟1得到的油膏稠料450g，加入1125ml乙酸正丁酯，升溫至70°C，攪拌0. 5 小時(shí)至油膏稠料完全溶解，得萃取液，加入350ml飽和食鹽水，在80°C攪拌2小時(shí)，然后靜置 15分鐘進(jìn)行分層，去除水相，重復(fù)洗滌2次后得乙酸正丁酯溶液；
[0040] 3、先用水浴將乙酸正丁酯溶液快速降溫至20°C，然后調(diào)節(jié)攪拌速度至10~20r/ min，并以每小時(shí)2°C的降溫速率進(jìn)行降溫，降溫至0°C保溫2小時(shí)進(jìn)行養(yǎng)晶，抽濾得到阿維 菌素B2a粗結(jié)晶195g;