一種利用微生物制備氧化槐定堿的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于微生物技術(shù)與新醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種利用微生物催化制備抗癌 藥物氧化槐定堿（0巧so地oridine，CAS No. 54809-74-4)的方法。
【背景技術(shù)】
[000引槐定堿So地oridine (SR)是含苦參型的生物堿，為豆科植物苦豆子 (5b如caroi沁5 L.)中存在的含量較高生物堿之一。根據(jù)學(xué)者對其研究發(fā)現(xiàn)， 槐定堿可存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)、也血管、免疫系統(tǒng)，且具有抗腫瘤抗微生物和抗內(nèi)毒素等 作用?；倍▔A（及其制劑鹽酸槐定堿注射液（Sophoridine Hy化oehloride Injection) 已于2005年8月22日獲國家食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA)頒發(fā)的新藥證書（國藥證字 肥0051131，30)及藥品批準文號（國藥準字肥0051682, 81)，是我國研制、擁有自主知識產(chǎn) 權(quán)國家一類抗癌新藥。初步計算機輔助設(shè)計及構(gòu)效關(guān)系研究顯示SR經(jīng)氧化后生物活性發(fā) 生變化，同時其毒性明顯減弱。劉平等研究氧化槐定堿（Oxyso地oridine)對、肺癌、腸癌的 作用時，氧化槐定堿的凍干粉針、軟膠丸、滴丸、薄膜包片及控釋膠囊等多種劑型的抗癌活 性強于槐定堿，而毒副反應(yīng)少于槐定堿。
[0003] 氧化槐定堿傳統(tǒng)的制備工藝是從苦豆子提取分離，但其收率很低，僅為0. 015%左 右，過度采挖可能導(dǎo)致該物種瀬臨滅絕，該樣會造成植被和人類生存環(huán)境，W及生物多樣性 不可彌補的損失。此外，該提取工藝繁雜、成本高，難W實現(xiàn)大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。國外化學(xué) 合成方法使用了間氯過氧苯甲酸和二氯甲焼，工藝成本較高，反應(yīng)立體選擇性差，不利于工 業(yè)生產(chǎn)。而且二氯甲焼屬于二類溶劑，應(yīng)該限制使用。另有報道，SR與雙氧水反應(yīng)的路線 來制備氧化槐定堿，但是合成的氧化產(chǎn)物有兩種構(gòu)型。所W函待需求一種高效、經(jīng)濟制備氧 化槐定堿的新方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種高效、經(jīng)濟的微生物催化制備氧化槐定堿的方法。該微 生物菌株名稱為斬知W，保藏單位；中國典型培養(yǎng)物保藏中也，地址：武漢大學(xué)，保 藏日；2014年12月24日，保藏編號；CCTCC M 2014660。
[0005] 基于W上目的，本發(fā)明涉及的微生物菌種是從重慶的藥用植物蛇足石杉中分離純 化得到。使用的PDA培養(yǎng)基制備；去皮馬鈴墓切塊200 g，煮沸約20 min, 8層紗布過濾得 濾液，加入葡萄糖20 g，用自來水補足1以如果配固體培養(yǎng)基1L加入20 g瓊脂，放入高壓 滅菌鍋中12rC滅菌20 min。采用自然界中廉價易得、結(jié)構(gòu)類似的生物堿-槐定堿為底物， 利用上述微生物催化的方法制備氧化槐定堿。
[0006] 其底物槐定堿的濃度可W為0.0 l-lOmg/mL。
[0007] 其底物槐定堿的溶劑為：無水己醇、丙麗、甲醇、DMS0或它們的混合溶劑。
[0008] 其制備反應(yīng)時間為3-9天。
[0009] 其制備反應(yīng)溫度為22-3(TC。
[0010] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用微生物催化的方法制備氧化槐，通過氧化前體底物 槐定堿得到其氮氧化物的形式，只需一步即可制備目標化合物氧化槐定堿，優(yōu)點在于；（1) 成本低：選用自然界廉價易得的天然產(chǎn)物槐定堿為原料，一步反應(yīng)即可催化合成氧化槐定 堿，此外，克服了從植物中提取、分離、純化過程中使用大量的有機溶劑（2)選擇性高；選擇 微生物酶為催化劑，具有強的區(qū)域選擇性和立體選擇性；（3)環(huán)境友好：因為反應(yīng)過程溫 和，無高溫高壓等苛刻條件，也需要金屬試劑的催化，所W符合當今綠色化學(xué)的生產(chǎn)需求； (4)步驟簡單；從槐定堿到氧化槐定堿用化學(xué)方法需要幾步反應(yīng)，而微生物催化只需一步。 綜述所述，該方法采用的原料及催化劑便宜、易得，反應(yīng)條件溫和、易控，環(huán)境友好，能很好 地滿足綠色化學(xué)和可持續(xù)發(fā)展化學(xué)的發(fā)展，及其對現(xiàn)代環(huán)境保護和低碳經(jīng)濟的需求。
[0011]
【附圖說明】 圖1為本發(fā)明中微生物菌株的電子顯微鏡照片； 圖2為本發(fā)明中微生物菌株催化生成氧化槐定堿的情況； 圖3為本發(fā)明中微生物菌株的系統(tǒng)發(fā)育分析； 圖4為氧化槐定堿的分離流程； 圖5為本發(fā)明中目標化合物的"C-NMR ; 圖6為本發(fā)明中目標化合物的iH-NMR。
【具體實施方式】
[0012] W下實施方案便于更好地理解本發(fā)明。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊 說明，均為自常規(guī)生化試劑公司購買得到。
[0013] 本發(fā)明的菌種從重慶藥用植物蛇足石杉中分離純化得到，菌種名稱： 斬7aria7es. 5/7,保藏單位；中國典型培養(yǎng)物保藏中也，地址：武漢大學(xué)，保藏日；2014年12 月24日，保藏登記號；CCTCC M 2014660。反應(yīng)底物槐定堿為南京元寶峰醫(yī)藥科技有限公司 生產(chǎn)。
【主權(quán)項】
1. 一種利用微生物制備氧化槐定堿的方法，其特征是：所述微生物菌種名稱： 5/7,保藏單位：中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：武漢大學(xué)內(nèi)，保藏日：2014年 12月24日，保藏編號：CCTCC M 2014660 ;利用所述微生物菌種由槐定堿制備氧化槐定堿的 方法。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是：所述底物槐定堿的濃度為0.0 l-lOmg/mL。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是：所述底物槐定堿的溶劑為：無水乙醇、丙酮、 甲醇、DMSO或它們的混合溶劑。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是：所述制備反應(yīng)時間為3-9天。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是：所述制備反應(yīng)溫度為22-30°C。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是：所述制備反應(yīng)溫度為28°C。
【專利摘要】一種利用微生物菌種由槐定堿制備氧化槐定堿的方法，該微生物菌種名稱：Xylariales.sp，保藏單位：中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：武漢大學(xué)內(nèi)，保藏日：2014年12月24日，保藏編號：CCTCC M2014660。該微生物菌株催化化合物槐定堿只需一步得到其氮氧化物氧化槐定堿，具有成本低、選擇性高、環(huán)境友好、步驟簡單的優(yōu)點。CCTCC M201466020141224
【IPC分類】C12R1-645, C12P17-18
【公開號】CN104630304
【申請?zhí)枴緾N201510057554
【發(fā)明人】付少彬, 孟慶峰, 冉旭, 閆松, 張蕓
【申請人】遵義醫(yī)學(xué)院
【公開日】2015年5月20日
【申請日】2015年2月4日