度為5?15ml/s。
[0032] 上述的從丹參地上莖葉中制備丹參酚酸類成分的方法中，制得的總丹參酚酸提取 物純度為80?95%。
[0033] 有益效果：本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0034] 本發(fā)明利用丹參植物一定生長期或采挖丹參藥材時(shí)割取的地上部分的丹參莖葉 為原料（現(xiàn)有技術(shù)中一般作為廢料丟棄），采用優(yōu)選的光合細(xì)菌生物轉(zhuǎn)化技術(shù)和色譜技術(shù) 相結(jié)合工藝，高效制備一種高純度的總丹參酚酸提取物，該技術(shù)可促使莖葉中丹酚酸類成 分升高，尤其是活性成分丹酚酸B含量可為丹參根藥材中含量的3?4倍，迷迭香酸則高 于丹參藥材數(shù)10倍；再經(jīng)大孔吸附樹脂柱分離純化，可高效獲得高含量的丹參酚酸B、丹參 素、迷迭香酸、阿魏酸、咖啡酸等酚酸類成分，本發(fā)明可實(shí)現(xiàn)丹參地上部分的資源化利用，提 升中藥資源生產(chǎn)過程的資源利用效率，增加產(chǎn)業(yè)經(jīng)濟(jì)效益，減少環(huán)境污染，產(chǎn)生良好的生態(tài) 效益。
【具體實(shí)施方式】
[0035] 根據(jù)下述實(shí)施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實(shí) 施例所描述的具體的物料配比、工藝條件及其結(jié)果僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會(huì)限 制權(quán)利要求書中所詳細(xì)描述的本發(fā)明。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明 的范圍。
[0036] 實(shí)施例1
[0037] 從丹參地上莖葉中制備丹參酚酸類成分的方法中，它包括以下步驟：
[0038] (1)取50g丹參地上莖葉的干燥粉末，置于IOOOml的錐形瓶中，精密加入500ml 的純水，精密稱定，浸泡16h后在30°C、IOOKHz下超聲30min，稱量補(bǔ)足失重，過濾，重復(fù)提 取三次，合并濾液，將溶液濃縮至干燥粉末。取適量的干燥粉末，用水溶解至一定的體積， 過0. 22 μ m膜，定容至一定體積，無菌條件下，接種1/20體積的球形紅細(xì)菌菌液后培養(yǎng)3? 5d，得球形紅細(xì)菌轉(zhuǎn)化丹參培養(yǎng)液。
[0039] (2)將球形紅細(xì)菌轉(zhuǎn)化丹參培養(yǎng)液3000r/min離心，上清液過DlOl大孔吸附樹 脂柱，采用水、10 %、30 %、50 %、70 %、90 %乙醇進(jìn)行洗脫，收集30 %?70 %乙醇洗脫液，經(jīng) 減壓濃縮，噴霧干燥即得總丹參酚酸提取物粉末，高效液相檢測(cè)結(jié)果表明總丹參酚酸純度 為90. 5%，其中丹酷酸B重量百分含量為20. 35%，丹參素重量百分含量為4. 93%，迷迭香 酸重量百分含量為45. 75%，阿魏酸重量百分含量為達(dá)5. 11 %，咖啡酸重量百分含量為達(dá) 12. 56%〇
[0040] 實(shí)施例2
[0041] 從丹參地上莖葉中制備丹參酚酸類成分的方法中，它包括以下步驟：
[0042] (1)取IOOg丹參地上莖葉的干燥粉末，置于IOOOml的錐形瓶中，精密加入500ml 的純水，精密稱定，浸泡IOh后在30°C、IOOKHz下超聲30min，稱量補(bǔ)足失重，過濾，重復(fù)提 取三次，合并濾液，將溶液濃縮至干燥粉末。取適量的干燥粉末，用水溶解至一定的體積， 過0. 22 μ m膜，定容至一定體積，無菌條件下，接種1/10體積的球形紅細(xì)菌菌液后培養(yǎng)3? 5d，得球形紅細(xì)菌轉(zhuǎn)化丹參培養(yǎng)液。
[0043] (2)將球形紅細(xì)菌轉(zhuǎn)化丹參培養(yǎng)液2000r/min離心，上清液過DlOl大孔吸附樹脂 柱，采用水、10 %、30 %、50 %、70 %、90 %乙醇進(jìn)行洗脫，收集50 %?70 %乙醇洗脫液，經(jīng)減 壓濃縮，噴霧干燥即得總丹參酚酸提取物粉末，高效液相檢測(cè)結(jié)果表明總丹參酚酸純度為 91. 23%，其中丹酷酸B重量百分含量為21. 35%，丹參素重量百分含量為4. 56%，迷迭香 酸重量百分含量為44. 68%，阿魏酸重量百分含量為達(dá)6. 24%，咖啡酸重量百分含量為達(dá) 13. 21%〇
[0044] 實(shí)施例3
[0045] 從丹參地上莖葉中制備丹參酚酸類成分的方法中，它包括以下步驟：
[0046] (1)取50g丹參地上莖葉的干燥粉末，置于IOOOml的錐形瓶中，精密加入500ml 的純水，精密稱定，浸泡15h后在30°C、IOOKHz下超聲30min，稱量補(bǔ)足失重，過濾，重復(fù)提 取三次，合并濾液，將溶液濃縮至干燥粉末。取適量的干燥粉末，用水溶解至一定的體積， 過0. 22 μ m膜，定容至一定體積，無菌條件下，接種1/20體積的沼澤紅假單胞菌菌液后培養(yǎng) 3?5d，得沼澤紅假單胞菌轉(zhuǎn)化丹參培養(yǎng)液。
[0047] (2)將沼澤紅假單胞菌轉(zhuǎn)化丹參培養(yǎng)液2000r/min離心，上清液過DlOl大孔吸附 樹脂柱，采用水、10 %、30 %、50 %、70 %、90 %乙醇進(jìn)行洗脫，收集50 %?70 %乙醇洗脫液， 經(jīng)減壓濃縮，噴霧干燥即得總丹參酚酸提取物粉末，高效液相檢測(cè)結(jié)果表明總丹參酚酸純 度為95. 78%，其中丹酷酸B重量百分含量為23. 98%，丹參素重量百分含量為6. 16%，迷迭 香酸重量百分含量為47. 45%，阿魏酸重量百分含量為達(dá)5. 34%，咖啡酸重量百分含量為 達(dá) 13. 17%〇
[0048] 實(shí)施例4
[0049] 從丹參地上莖葉中制備丹參酚酸類成分的方法中，它包括以下步驟：
[0050] (1)取IOOg丹參地上莖葉的干燥粉末，置于IOOOml的錐形瓶中，精密加入500ml 的純水，精密稱定，浸泡IOh后在30°C、IOOKHz下超聲30min，稱量補(bǔ)足失重，過濾，重復(fù)提 取三次，合并濾液，將溶液濃縮至干燥粉末。取適量的干燥粉末，用水溶解至一定的體積， 過0. 22 μ m膜，定容至一定體積，無菌條件下，接種1/15體積的綠硫紅假單胞菌菌液后培養(yǎng) 3?5d，得綠硫紅假單胞菌轉(zhuǎn)化丹參培養(yǎng)液。
[0051] (2)將綠硫紅假單胞菌轉(zhuǎn)化丹參培養(yǎng)液2000r/min離心，上清液過DlOl大孔吸附 樹脂柱，采用水、10 %、30 %、50 %、70 %、90 %乙醇進(jìn)行洗脫，收集30 %?70 %乙醇洗脫液， 經(jīng)減壓濃縮，噴霧干燥即得總丹參酚酸提取物粉末，高效液相檢測(cè)結(jié)果表明總丹參酚酸純 度為90. 67%，其中丹酷酸B重量百分含量為20. 12%，丹參素重量百分含量為5. 32%，迷迭 香酸重量百分含量為43. 09%，阿魏酸重量百分含量為達(dá)6. 08%，咖啡酸重量百分含量為 達(dá) 12. 19%〇
[0052] 實(shí)施例5
[0053] 從丹參地上莖葉中制備丹參酚酸類成分的方法中，它包括以下步驟：
[0054] (1)取50g丹參地上莖葉的干燥粉末，置于IOOOml的錐形瓶中，精密加入500ml 的純水，精密稱定，浸泡IOh后在30°C、IOOKHz下超聲30min，稱量補(bǔ)足失重，過濾，重復(fù)提 取三次，合并濾液，將溶液濃縮至干燥粉末。取適量的干燥粉末，用水溶解至一定的體積， 過0. 22 μ m膜，定容至一定體積，無菌條件下，接種1/15體積的沼澤紅假單胞菌菌液后培養(yǎng) 3?5d，得沼澤紅假單胞菌轉(zhuǎn)化丹參培養(yǎng)液。
[0055] (2)將沼澤紅假單胞菌轉(zhuǎn)化丹參培養(yǎng)液3000r/min離心，上清液過AB-8大孔吸附 樹脂柱，采用水、10 %、30 %、50 %、70 %、90 %乙醇進(jìn)行洗脫，收集30 %?70 %乙醇洗脫液， 經(jīng)減壓濃縮，噴霧干燥即得總丹參酚酸提取物粉末，高效液相檢測(cè)結(jié)果表明總丹參酚酸純 度為86. 78%，其中丹酷酸B重量百分含量為20. 21%，丹參素重量百分含量為3. 21%，迷迭 香酸重量百分含量為42. 40%，阿魏酸重量百分含量為達(dá)5. 37%，咖啡酸重量百分含量為 達(dá)12. 78%。實(shí)施例6
[0056] 從丹參地上莖葉中制備丹參酚酸類成分的方法中，它包括以下步驟：
[0057] (1)取50g丹參地上莖葉的干燥粉末，置于IOOOml的錐形瓶中，精密加入500ml 的純水，精密稱定，浸泡12h后在35°C、200KHz下超聲60min，稱量補(bǔ)足失重，過濾，重復(fù)提 取三次，合并濾液，將溶液濃縮至干燥粉末。取適量的干燥粉末，用水溶解至一定的體積，過 0. 22 μ m膜，定容至一定體積，無菌條件下，接種1/10體積的莢膜紅細(xì)菌菌液后培養(yǎng)5d，得 莢膜紅細(xì)菌轉(zhuǎn)化丹參培養(yǎng)液。
[0058] (2)將莢膜紅細(xì)菌轉(zhuǎn)化丹參培養(yǎng)液3000r/min離心，上清液過AB-8大孔吸附樹脂 柱，采用水、10 %、30 %、50 %、70 %、90 %乙醇進(jìn)行洗脫，收集30 %?70 %乙醇洗脫液，經(jīng)減 壓濃縮，噴霧干燥即得總丹參酚酸提取物粉末，高效液相檢測(cè)結(jié)果表明總丹參酚酸純度為 90. 21%，其中丹酷酸B重量百分含量為21. 11%，丹參素重量百分含量為3. 35%，迷迭香 酸重量百分含量為43. 26%，阿魏酸重量百分含量為達(dá)5. 65%，咖啡酸重量百分含量為達(dá) 12. 78%〇
[0059] 實(shí)施例7抗氧化效應(yīng)研宄
[0060] 1實(shí)驗(yàn)試劑
[0061] FeS04 · 7H20、水楊酸、H2O2購買