丹參莖葉的質(zhì)量控制方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種丹參莖葉的質(zhì)量控制方法，包括步驟:A、鮮莖葉外觀鑒定，B、鑒別：鮮丹參莖葉干燥處理，對丹參莖葉的干品進行粉碎得到粉末狀丹參莖葉樣品，醇提取后濃縮，采用薄層色譜展開，在紫外燈下檢視，與標準品對照，對樣品進行鑒別；C、水分和灰分測定：對丹參莖葉的干品進行水分和灰分測定；D、浸出物測定：采用冷浸方法對丹參莖葉進行浸泡，得水溶性浸出物，測出水溶性浸出物的含量；E、活性成分測定：對丹參莖葉的干品進行提取處理，檢測提取物中活性成分的含量；F、將測定結(jié)果與質(zhì)量標準進行對比，分析判斷該樣品是否達到質(zhì)量要求。本發(fā)明解決了目前丹參莖葉尚無系統(tǒng)控制產(chǎn)品質(zhì)量的標準難題，并能保證藥材質(zhì)量的穩(wěn)定、均一。
【專利說明】丹參蓮葉的質(zhì)量控制方法
【技術(shù)領域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領域】，涉及一種藥物質(zhì)量控制方法，尤其涉及一種丹參莖葉 的質(zhì)量控制方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 丹參莖葉為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的地上莖及葉部位，文獻 報道，其主要成份含黃酮、丹酚酸B等水溶性成份，但不含有丹參酮等脂溶性成分，丹參莖 葉具有抗缺氧、抗氧化，可降低膽固醇、高血壓，預防腦血栓及冠心病等作用，丹參莖葉重 量占總植株重量為2/3,但在藥材采收時多作雜質(zhì)棄去，近年來，人們逐漸重視丹參莖葉的 利用開發(fā)，但尚未建立完整的丹參莖葉質(zhì)量標準以控制其質(zhì)量，僅散見其成份分離及部份 定性及定量研究。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于，針對現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種能對丹參莖葉質(zhì) 量進行控制的方法。
[0004] 本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：
[0005] -種丹參莖葉的質(zhì)量控制方法，包括以下步驟：
[0006] A、鮮莖葉外觀鑒定：采集鮮莖葉樣品，根據(jù)丹參莖葉外觀形狀特性進行初步判斷 樣品是否為丹參莖葉；
[0007] B、鑒別：將鮮丹參莖葉進行干燥處理，然后對丹參莖葉的干品進行粉碎得到粉末 狀丹參莖葉樣品，在醇提取后濃縮，采用薄層色譜展開，在紫外燈下檢視，并與標準品對照， 對樣品進行鑒別；
[0008] C、水分和灰分測定：對丹參莖葉樣品進行水分和灰分測定；
[0009] D、浸出物測定：采用冷浸的方法對丹參莖葉樣品進行浸泡，得到水溶性浸出物，測 量出水溶性浸出物的含量；
[0010] E、活性成分測定：對丹參莖葉樣品進行提取處理，檢測提取物中活性成分的含 量；
[0011] F、將上述測定結(jié)果與質(zhì)量標準進行對比，分析判斷該樣品是否達到質(zhì)量要求。
[0012] 優(yōu)選地，所述的丹參莖葉的質(zhì)量控制方法中，優(yōu)選在步驟B中，所述鑒別包括以下 子步驟：
[0013] B1、制備硅膠G薄層板和硅膠GF254薄層板；
[0014] B2、取粉末狀丹參莖葉樣品加入乙醚振搖，放置后濾過，濾液揮發(fā)完的殘渣加乙酸 乙酯溶解，作為脫脂供試品溶液；
[0015] 取粉末狀丹參莖葉樣品加入乙酸乙酯振搖，超聲處理并過濾，取濾液作為供試品 溶液；
[0016] 另取丹參對照藥材，加入乙酸乙酯振搖，超聲處理并過濾，取濾液制成對照藥材溶 液；
[0017] 再取丹參麗IIA對照品，加乙酸乙醋制成對照品溶液；
[0018] 分別吸取上述三種溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯為展 開劑展開，展開后取出瞭干；
[0019] B3、取粉末狀丹參莖葉樣品加75%甲醇加熱回流，濾過，濾液濃縮，作為供試品溶 液；
[0020] 另取丹酚酸B對照品，加75%甲醇制成對照品溶液，作為對照品溶液；
[0021] 分別吸取上述兩種溶液，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯-三氯甲 烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑進行展開，取出晾干，置紫外光燈下檢視。
[0022] 優(yōu)選地，所述的丹參莖葉的質(zhì)量控制方法中，優(yōu)選在步驟C中，所述水分測定步驟 為：取粉末狀丹參莖葉樣品平鋪于干燥至恒重的容器中，精密稱定，敞口在1〇〇?l〇5°C干 燥4-6小時，封閉容器移置干燥器中，冷卻，精密稱定重量，再在上述溫度下干燥0. 5-2小 時，冷卻，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止；根據(jù)減失的重量，計算供試品中含 有水分的百分數(shù)。
[0023] 優(yōu)選地，所述的丹參莖葉的質(zhì)量控制方法中，優(yōu)選在步驟C中，所述灰分測定步驟 為：樣品粉碎，過篩混合均勻后，取篩下物，置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量，緩緩熾熱，至 完全炭化時，逐漸升高溫度至500?60(TC，使完全灰化并至恒重；根據(jù)殘渣重量，計算供試 品中含總灰分的百分數(shù)。
[0024] 優(yōu)選地，所述的丹參莖葉的質(zhì)量控制方法中，優(yōu)選在步驟D中，所述冷浸的步驟 為：取樣品稱定重量，置容器中精密加入水，封閉后冷浸，前4-8小時內(nèi)時時振搖，再靜置 10-20小時，濾過后精密量取濾液，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，再于 100-1KTC干燥3小時，移置干燥器中，冷卻20-50分鐘，迅速精密稱定重量，以干燥品計算 樣品中含水溶性浸出物的重量百分含量。
[0025] 優(yōu)選地，所述的丹參莖葉的質(zhì)量控制方法中，優(yōu)選步驟E具體為：
[0026] E1、取粉末狀丹參莖葉樣品加入提取劑，提取得濾液，即為供試品溶液；
[0027] E2、取丹酚酸B加提取劑制成對照品溶液，作為丹酚酸B對照品溶液；
[0028] 取迷迭香酸加提取劑制成對照品溶液，作為迷迭香酸對照品溶液；
[0029] E3、將供試品溶液、迷迭香酸對照品溶液和丹酚酸B對照品溶液進行高效液相色 譜檢測，檢測條件為：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-乙腈-甲酸-水為流動相； 檢測波長為286nm ;流速為lml/min ;柱溫為室溫；
[0030] E4、分析高效液相色譜的譜圖，分析得到活性成分含量。
[0031] 優(yōu)選地，所述的丹參莖葉的質(zhì)量控制方法中，優(yōu)選在所述步驟El中，所述的提取 為加熱回流提取，具體步驟為：取粉末狀丹參莖葉樣品稱定重量，加入提取劑，稱定重量， 加熱回流40min-l. 5小時，冷卻再稱定重量，用提取劑補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾 液，得到供試品溶液。
[0032] 優(yōu)選地，所述的丹參莖葉的質(zhì)量控制方法中，優(yōu)選在所述步驟El中，所述的提取 為超聲提取，具體步驟為：
[0033] 取過篩后的粉末狀丹參莖葉樣品，精密稱定，置密封容器中，精密加入75%甲醇， 稱定重量，超聲處理，放冷，再稱定重量，用75%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾 液，即得。
[0034] 優(yōu)選地，所述的丹參莖葉的質(zhì)量控制方法中，優(yōu)選在所述步驟El中，所述提取劑 為水、50%甲醇或75%甲醇。
[0035] 本發(fā)明中從外觀到活性成分、從鮮莖葉到干品進行了全面鑒定分析，建立了丹參 莖葉的質(zhì)量標準。本發(fā)明對丹參莖葉質(zhì)量標準進行了明確，建立了其定性和定量測定項目， 并按照相關技術(shù)要求和指導原則建立了丹參莖葉的質(zhì)量標準，此標準的建立，解決了目前 丹參莖葉尚無系統(tǒng)控制產(chǎn)品質(zhì)量的標準難題，并能保證藥材質(zhì)量的穩(wěn)定、均一。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0036] 下面將結(jié)合附圖及實施例對本發(fā)明作進一步說明，附圖中：
[0037] 圖1為硅膠G薄層板上展開譜圖；
[0038] 圖2為硅膠G薄層板上展開譜圖在紫外365nm處檢視結(jié)果；
[0039] 圖3為硅膠GF254薄層板上展開譜圖在紫外254nm處檢視結(jié)果。
【具體實施方式】
[0040] 為了對本發(fā)明的技術(shù)特征、目的和效果有更加清楚的理解，現(xiàn)對照附圖詳細說明 本發(fā)明的【具體實施方式】。
[0041] 一種丹參莖葉的質(zhì)量控制方法，包括以下步驟：
[0042] A、鮮莖葉外觀鑒定：根據(jù)丹參莖葉外觀形狀特性進行初步判斷樣品是否為丹參的 莖葉；
[0043] B、鑒別：參照《中國藥典》2010版一部丹參項下相關標準進行薄層色譜鑒別。
[0044] 將鮮丹參莖葉進行干燥處理，然后對丹參莖葉的干品進行粉碎得到粉末狀丹參莖 葉樣品，醇提取后濃縮，采用薄層色譜展開，在紫外燈下檢視，并與標準品對照，對樣品進行 鑒別；
[0045] C、水分和灰分測定：對丹參莖葉的干品進行水分和灰分測定；其中水分不大于 12%為合格，總灰分不大于10%為合格。
[0046] D、浸出物測定：采用冷浸的方法對丹參莖葉進行浸泡，得到水溶性浸出物，測量出 水溶性浸出物的含量；水溶性浸出物的含量不少于10 %為合格。
[0047] E、活性成分測定：對丹參莖葉的干品進行提取處理，檢測提取物中活性成分的含 量；以干燥品計，含迷迭香酸不低于〇. 2%，含丹酚酸B不低于0. 045 %為合格。
[0048] F、將上述測定結(jié)果與質(zhì)量標準進行對比，分析判斷該樣品是否達到質(zhì)量要求。
[0049] 其中，步驟A首先對新鮮樣品是否是鮮丹參莖葉進行判斷。
[0050] 丹參莖葉是唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的地上莖及葉部位，在 9_12月份均可米收。
[0051] 丹參莖葉的性狀：莖直立，四棱形，具多級分枝，被長柔毛。葉對生，為奇數(shù)羽狀復 葉；葉片闊卵形或類圓形，邊緣有鋸齒；小葉3或5,較小，長3. 3?6. 5cm，寬3?4. 5cm，總 葉柄長4. 5?11cm。輪傘花序組成頂生或腋生的假總狀花序；花萼鐘狀，紫色；花冠藍紫色， 唇形。
[0052] 依據(jù)上述性狀特點對樣品進行外觀鑒定，初步判斷樣品是否為丹參莖葉。
[0053] 在初步鑒定后，要對該樣品進一步進行鑒別。該鑒別采用薄層色譜法，通過與標準 品對照，得出鑒別結(jié)論。
[0054] 優(yōu)選在步驟B中，所述鑒別包括以下子步驟：
[0055] B1、制備硅膠G薄層板和硅膠GF254薄層板；
[0056] B2、取粉末狀丹參莖葉樣品加入乙醚振搖，放置后濾過，濾液揮發(fā)完的殘渣加乙酸 乙酯溶解，作為脫脂供試品溶液；
[0057] 取粉末狀丹參莖葉樣品加入乙酸乙酯振搖，超聲處理并過濾，取濾液作為供試品 溶液；
[0058] 另取丹參對照藥材，加入乙酸乙酯振搖，超聲處理并過濾，取濾液制成對照藥材溶 液；
[0059] 再取丹參酮IIA對照品，加乙酸乙酯制成對照品溶液；
[0060] 分別吸取上述三種溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯為展 開劑展開，展開后取出瞭干；
[0061] B3、取粉末狀丹參莖葉樣品加75%甲醇加熱回流，濾過，濾液濃縮，作為供試品溶 液；
[0062] 另取丹酚酸B對照品，加75%甲醇制成對照品溶液，作為對照品溶液；
[0063] 分別吸取上述兩種溶液，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯-三氯甲 烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑進行展開，取出晾干，置紫外光燈下檢視。
[0064] 優(yōu)選地，所述的丹參莖葉的質(zhì)量控制方法中，優(yōu)選在步驟C中，所述水分測定步驟 為：取粉末狀丹參莖葉樣品平鋪于干燥至恒重的容器中，精密稱定，敞口在1〇〇?105°c干 燥4-6小時，封閉容器移置干燥器中，冷卻，精密稱定重量，再在上述溫度下干燥0. 5-2小 時，冷卻，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止；根據(jù)減失的重量，計算供試品中含 有水分的百分數(shù)。
[0065] 優(yōu)選地，所述的丹參莖葉的質(zhì)量控制方法中，優(yōu)選在步驟C中，所述灰分測定步驟 為：樣品粉碎，過篩混合均勻后，取篩下物，置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量，緩緩熾熱，至 完全炭化時，逐漸升高溫度至500?60(TC，使完全灰化并至恒重；根據(jù)殘渣重量，計算供試 品中含總灰分的百分數(shù)。
[0066] 優(yōu)選地，所述的丹參莖葉的質(zhì)量控制方法中，優(yōu)選在步驟D中，所述冷浸的步驟 為：取樣品稱定重量，置容器中精密加入水，封閉后冷浸，前4-8小時內(nèi)時時振搖，再靜 置10-20小時，濾過后密量取濾液，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，再于 100-1KTC干燥3小時，移置干燥器中，冷卻20-50分鐘，迅速精密稱定重量，以干燥品計算 樣品中含水溶性浸出物的重量百分含量。
[0067] 優(yōu)選地，所述的丹參莖葉的質(zhì)量控制方法中，優(yōu)選步驟E具體為：
[0068] E1、取粉末狀丹參莖葉樣品加入提取劑，提取得濾液，即為供試品溶液；
[0069] E2、取丹酚酸B加提取劑制成對照品溶液，作為丹酚酸B對照品溶液；
[0070] 取迷迭香酸加提取劑制成對照品溶液，作為迷迭香酸對照品溶液；
[0071] E3、將供試品溶液、迷迭香酸對照品溶液和丹酚酸B對照品溶液進行高效液相色 譜檢測，檢測條件為：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-乙腈-甲酸-水為流動相； 檢測波長為286nm ;流速為lml/min ;柱溫為室溫；
[0072] E4、分析高效液相色譜的譜圖，分析得到活性成分含量。
[0073] 優(yōu)選地，所述的丹參莖葉的質(zhì)量控制方法中，優(yōu)選在所述步驟El中，所述的提取 為加熱回流提取，具體步驟為：取粉末狀丹參莖葉樣品稱定重量，加入提取劑，稱定重量， 加熱回流40min-l. 5小時，冷卻再稱定重量，用提取劑補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾 液，得到供試品溶液。
[0074] 優(yōu)選地，所述的丹參莖葉的質(zhì)量控制方法中，優(yōu)選在所述步驟El中，所述的提取 為超聲提取，具體步驟為：
[0075] 取過篩后的粉末狀丹參莖葉樣品，精密稱定，置密封容器中，精密加入75%甲醇， 稱定重量，超聲處理，放冷，再稱定重量，用75%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾 液，即得。
[0076] 優(yōu)選地，所述的丹參莖葉的質(zhì)量控制方法中，優(yōu)選在所述步驟El中，所述提取劑 為水、50%甲醇或75%甲醇。
[0077] 以下通過具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明：
[0078] 實施例
[0079] A、鮮莖葉外觀鑒定：任意選取多片樣品莖葉，對照丹參莖葉的性狀，進行判別，經(jīng) 對比，該樣品中符合莖直立，四棱形，具多級分枝，被長柔毛。葉對生，為奇數(shù)羽狀復葉；葉片 闊卵形或類圓形，邊緣有鋸齒；小葉長3. 4cm，寬4cm，總?cè)~柄長5cm。因此，初步判斷該鮮莖 葉為丹參莖葉。
[0080] B、鑒別：丹參莖葉樣品采自中江石泉鄉(xiāng)，批號20140703,乙腈、甲醇為色譜純，其 余試劑為分析純，購自成都市科龍化工試劑廠；丹參酮IIA對照品：購自中國食品藥品檢定 研究所，批號20140717 ;丹酚酸B對照品：購自中國食品藥品檢定研究所，批號20140716 ; 超聲波清洗器=KQ-IOO型；電子天平：BS-6KH型；分析電子天平：FA2004型；HPLC :P2302II 型（大連伊力特）。
[0081] 實驗步驟：
[0082] 鋪制娃膠G薄層板：取一份娃膠G粉和3份CMC-Na溶液在研缽中按同一方向研磨 混合，去除表面氣泡后，取適量均勻涂布在玻璃板上，置水平臺上于室內(nèi)晾干。使用前置于 烘箱中110烘30min，冷卻備用。
[0083] 鋪制硅膠GF254 :與1步驟相同。
[0084] 取粉末狀丹參莖葉樣品lg，精密稱定I. 0112g，加乙醚5ml，振搖，放置1小時，濾 過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作為脫脂供試品溶液。取丹參莖葉粉末lg，精密 稱定（I. 0431g)，加乙酸乙酯lml，超聲，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。另取丹參對照藥 材Ig(實際I. 〇969g)，加乙酸乙酯lml，超聲，濾過，取續(xù)濾液，制成對照藥材溶液。再取丹 參酮IIA對照品，加乙酸乙酯制成每ImL含2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試 驗，吸取上述四種溶液各5uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60?90°C )_乙酸 乙酯（4:1)為展開劑，展開，取出，瞭干。
[0085] 取粉末狀丹參莖葉樣品0. 2g，加75%甲醇25mL，加熱回流1小時，濾過，濾液濃縮 至lml，作為供試品溶液。另取丹酚酸B對照品，加75%甲醇制成每Iml含2mg的溶液，作 為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5uL，分別點于同一硅膠GF254薄 層板上，以甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（2:3:4:0.5:2)為展開劑，展開，取出， 晾干，置紫外光燈（254nm)下檢視。
[0086] 如圖1所示，為硅膠G薄層板上展開譜圖，供試品色譜中，標號1為對照品溶液、標 號2為對照藥材溶液、標號3為脫脂供試品溶液、標號4為供試品溶液，在與對照藥材色譜 相應的位置上，不顯相同顏色的斑點；在與對照品色譜相應的位置上，不顯相同的暗紅色斑 點，說明樣品中不含有脂溶性成分。
[0087] 圖2為硅膠G薄層板上展開譜圖在紫外365nm處檢視結(jié)果，標號1為對照品，標號 2為對照藥材，標號3為丹參莖葉樣品。圖中顯示在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏 色的斑點。
[0088] 圖3為硅膠GF254薄層板上展開譜圖在紫外254nm處檢視結(jié)果，標號1、2為對照 品，標號3、4為丹參莖葉樣品。圖中顯示在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑 點。結(jié)論：該樣品為丹參莖葉。
[0089] C、水分和灰分測定：對丹參莖葉的干品進行水分和灰分測定；
[0090] 所述水分測定步驟為：取粉末狀丹參莖葉樣品平鋪于干燥至恒重的扁形稱瓶中， 厚度不超過5_，疏松樣品不超過10mm，精密稱定，打開瓶蓋在100?105°C干燥4-6小時， 優(yōu)選5小時，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，冷卻30分鐘，精密稱定重量，再在上述溫度干燥 0. 5-2小時，優(yōu)選1小時，冷卻，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止。根據(jù)減失的 重量，計算供試品中含有水分的百分數(shù)。本樣品含水量為8%，符合標準要求。
[0091] 所述灰分測定步驟為：取樣品粉碎，使能通過二號篩，混合均勻后，取供試品2? 3g (如須測定酸不溶性灰分，可取供試品3?5g)，置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量（準確 至〇. Olg)，緩緩熾熱，注意避免燃燒，至完全炭化時，逐漸升高溫度至500?60(TC，使完全 灰化并至恒重。根據(jù)殘渣重量，計算供試品中含總灰分的百分數(shù)。本樣品的總灰分為10%， 符合標準要求。
[0092] D、浸出物測定：采用冷浸的方法對丹參莖葉進行浸泡，得到水溶性浸出物，測量出 水溶性浸出物的含量；
[0093] 取供試品約4g，稱定重量（準確至0? Olg)，置250?300ml的錐形瓶中，精密加入 水100ml，塞緊，冷浸，前4-8小時內(nèi)時時振搖，優(yōu)選6小時，再靜置10-20小時，優(yōu)選18小 時，用干燥濾器迅速濾過，精密量取濾液20ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干 后，于100-1KTC下，優(yōu)選105°C干燥3小時，移置干燥器中，冷卻30分鐘，迅速精密稱定重 量，除另有規(guī)定外，以干燥品計算供試品中含水溶性浸出物的百分數(shù)。本實施例中，水溶性 浸出物含量為18%，符合標準要求。
[0094] E、活性成分測定：對丹參莖葉的干品進行提取處理，檢測提取物中活性成分的含 量；
[0095] 活性成分丹參酮IIA考察
[0096] 實驗材料：丹參莖葉樣品采自中江石泉鄉(xiāng)，批號20140703,乙腈、甲醇為色譜純， 其余試劑為分析純，購自成都市科龍化工試劑廠；丹參酮IIA對照品：購自中國食品藥品檢 定研究所，批號20140717 ;超聲波清洗器：KQ-100型；電子天平：BS-6KH型；分析電子天平： FA2004 型；HPLC :P2302II 型。
[0097] 實驗步驟：
[0098] 1、對照品溶液的制備
[0099] 取丹參酮IIA對照品適量，精密稱定為I. 70mg置于25ml棕色量瓶中，在取隱丹參 酮對照品適量，精密稱定2. 64mg，置于同一棕色量瓶中，加入甲醇定容。（丹參酮IIA對照 品0? 068mg/ml隱丹參酮對照品0? 1056mg/ml)
[0100] 2、供試品溶液的制備
[0101] 1)無花丹參莖葉
[0102] 取無花粉末狀丹參莖葉樣品（過三號篩）約〇.3g，精密稱定0.3039g，置具塞錐形 瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失 的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0103] 2)有花丹參莖葉
[0104] 取無花粉末狀丹參莖葉樣品（過三號篩）約〇.3g，精密稱定0.3040g，置具塞錐形 瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失 的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0105] 色譜條件：以甲醇-水（75 :25)為流動相；檢測波長為270nm ;流速為lml/min ;柱 溫為室溫。
[0106] 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10yl，注入液相色譜儀，測定，即得。
[0107] 實驗結(jié)果
[0108]
【權(quán)利要求】
1. 一種丹參莖葉的質(zhì)量控制方法，其特征在于，包括以下步驟： A、 鮮莖葉外觀鑒定：采集鮮莖葉樣品，根據(jù)丹參莖葉外觀形狀特性初步判斷樣品是否 為丹參莖葉； B、 鑒別：將鮮丹參莖葉進行干燥處理，然后對丹參莖葉的干品進行粉碎得到粉末狀丹 參莖葉樣品，在醇提取后濃縮，采用薄層色譜展開，在紫外燈下檢視，并與標準品對照對樣 品進行鑒別； C、 水分和灰分測定：對丹參莖葉樣品進行水分和灰分測定； D、 浸出物測定：采用冷浸的方法對丹參莖葉樣品進行浸泡，得到水溶性浸出物，測量出 水溶性浸出物的含量； E、 活性成分測定：對丹參莖葉樣品進行提取處理，檢測提取物中活性成分的含量； F、 將上述測定結(jié)果與質(zhì)量標準進行對比，分析判斷該樣品是否達到質(zhì)量要求。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹參莖葉的質(zhì)量控制方法，其特征在于，在步驟B中，所述鑒 別包括以下子步驟： B1、制備硅膠G薄層板和硅膠GF254薄層板； B2、取粉末狀丹參莖葉樣品加入乙醚振搖，放置后濾過，濾液揮發(fā)完的殘渣加乙酸乙酯 溶解，作為脫脂供試品溶液； 取粉末狀丹參莖葉樣品加入乙酸乙酯振搖，超聲處理并過濾，取濾液作為供試品溶 液； 另取丹參對照藥材，加入乙酸乙酯振搖，超聲處理并過濾，取濾液制成對照藥材溶液； 再取丹參麗IIA對照品，加乙酸乙醋制成對照品溶液； 分別吸取上述三種溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯為展開劑 展開，展開后取出晚干； B3、取粉末狀丹參莖葉樣品加75%甲醇加熱回流，濾過，濾液濃縮，作為供試品溶液； 另取丹酚酸B對照品，加75%甲醇制成對照品溶液，作為對照品溶液；分別吸取上述兩 種溶液，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸為 展開劑進行展開，取出晾干，置紫外光燈下檢視。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹參莖葉的質(zhì)量控制方法，其特征在于，在步驟C中，所述 水分測定步驟為：取粉末狀丹參莖葉樣品平鋪于干燥至恒重的容器中，精密稱定，敞口在 100?105°C干燥4-6小時，封閉容器移置干燥器中，冷卻，精密稱定重量，再在上述溫度下 干燥0. 5-2小時，冷卻，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止；根據(jù)減失的重量，計 算供試品中含有水分的百分數(shù)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹參莖葉的質(zhì)量控制方法，其特征在于，在步驟C中，所述灰 分測定步驟為：樣品粉碎，過篩混合均勻后，取篩下物，置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量， 緩緩熾熱，至完全炭化時，逐漸升高溫度至500?60(TC，使完全灰化并至恒重；根據(jù)殘渣重 量，計算供試品中含總灰分的百分數(shù)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹參莖葉的質(zhì)量控制方法，其特征在于，在步驟D中，所述冷 浸的步驟為：取樣品稱定重量，置容器中精密加入水，封閉后冷浸，前4-8小時內(nèi)時時振搖， 再靜置10-20小時，濾過后精密量取濾液，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后， 再于100-1KTC下干燥3小時，移置干燥器中，冷卻20-50分鐘，迅速精密稱定重量，以干燥 品計算樣品中含水溶性浸出物的重量百分含量。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹參莖葉的質(zhì)量控制方法，其特征在于，步驟E具體為： E1、取粉末狀丹參莖葉樣品加入提取劑，提取得濾液，即為供試品溶液； E2、取丹酚酸B加提取劑制成對照品溶液，作為丹酚酸B對照品溶液；取迷迭香酸加提 取劑制成對照品溶液，作為迷迭香酸對照品溶液； E3、將供試品溶液、迷迭香酸對照品溶液和丹酚酸B對照品溶液進行高效液相色譜檢 測，檢測條件為：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-乙腈-甲酸-水為流動相；檢測 波長為286nm ;流速為lml/min ;柱溫為室溫； E4、分析高效液相色譜的譜圖，分析得到活性成分含量。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的丹參莖葉的質(zhì)量控制方法，其特征在于，在所述步驟E1中， 所述的提取為加熱回流提取，具體步驟為：取粉末狀丹參莖葉樣品稱定重量，加入提取劑， 稱定重量，加熱回流40min-l. 5小時，冷卻再稱定重量，用提取劑補足減失的重量，搖勻，濾 過，取續(xù)濾液，得到供試品溶液。
8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的丹參莖葉的質(zhì)量控制方法，其特征在于，在所述步驟E1中，所 述的提取為超聲提取，具體步驟為： 取過篩后的粉末狀丹參莖葉樣品，精密稱定，置密封容器中，精密加入75%甲醇，稱定 重量，超聲處理，放冷，再稱定重量，用75 %甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即 得。
9. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的丹參莖葉的質(zhì)量控制方法，其特征在于，在所述步驟E1中，所 述提取劑為水、50%甲醇或75%甲醇。
【文檔編號】G01N30/02GK104374862SQ201410707585
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2014年11月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月27日
【發(fā)明者】徐玉玲, 李青苗, 劉濤, 梁悅, 譚磊, 伍月, 馮晶晶, 聶忠莉 申請人:成都大學