:未誘導的（無氯高鐵血紅素（hemin)，無丙酸鹽，無阿拉伯糖）
[0030]
【主權項】
1. 一種宿主細胞，包含兩個或更多個類型的表達構建體， 其中各類型的所述表達構建體包含誘導型啟動子和編碼由所述誘導型啟動子轉錄的 基因產物的多核苷酸序列；和 至少一個所述誘導型啟動子對于與另一個所述誘導型啟動子的誘導劑不同的誘導劑 有反應；且 至少一個所述基因產物與另一個所述基因產物形成多聚體。
2. -種宿主細胞，包含兩個或更多個類型的表達構建體， 其中各類型的所述表達構建體包含誘導型啟動子和編碼由所述誘導型啟動子轉錄的 基因產物的多核苷酸序列；和 至少一個所述基因產物選自以下： (a) 缺乏信號肽并形成至少三個二硫鍵的多肽； (b) 選自利用阿拉伯糖和利用木糖的酶的多肽；和 (c) 選自木質素降解過氧化物酶的多肽。
3. 權利要求1或2的宿主細胞，其中至少一個誘導型啟動子是L-阿拉伯糖誘導啟動 子。
4. 權利要求1或2的宿主細胞，其中至少一個誘導型啟動子是丙酸鹽誘導啟動子。
5. 權利要求1或2的宿主細胞，其中至少一個誘導型啟動子選自araBAD啟動子、 prpBCDE啟動子、rhaSR啟動子和xlyA啟動子。
6. 權利要求1或2的宿主細胞，其中各誘導型啟動子不是乳糖誘導啟動子。
7. 權利要求1或2的宿主細胞，其中至少一個表達構建體進一步包含編碼與誘導型啟 動子結合的轉錄調節(jié)子的多核苷酸序列。
8. 權利要求7的宿主細胞，其中所述編碼轉錄調節(jié)子的多核苷酸序列及所述轉錄調節(jié) 子與其結合的誘導型啟動子在相同的表達構建體中。
9. 權利要求7的宿主細胞，其中所述轉錄調節(jié)子選自AraC、PrpR、RhaR和XylR。
10. 權利要求1或2的宿主細胞，其中至少一個表達構建體通過包括將多核苷酸序 列插入選自PBAD18、pBAD18-Cm、pBAD18-Kan、pBAD24、pBAD28、pBAD30、pBAD33、pPR018、 pPR018-Cm、pPR018-Kan、pPR024、pPR030 和pPR033 的質粒中的步驟的方法產生。
11. 權利要求1的宿主細胞，其中至少一個基因產物是多肽。
12. 權利要求1或2的宿主細胞，其中至少一個基因產物選自：(a)免疫球蛋白重鏈； (b)免疫球蛋白輕鏈；和（c) (a)-(b)中任一的片段。
13. 權利要求12的宿主細胞，其中所述基因產物是免疫球蛋白輕鏈。
14. 權利要求12的宿主細胞，其中所述基因產物是免疫球蛋白重鏈。
15. 權利要求1或2的宿主細胞，其中至少一個基因產物是缺乏信號肽并形成至少三個 二硫鍵的多肽。
16. 權利要求15的宿主細胞，其中所述多肽形成選自以下的多個二硫鍵：（a)至少三個 和少于十七個二硫鍵；和（b)至少十八個和少于一百個二硫鍵。
17. 權利要求15的宿主細胞，其中所述多肽形成至少三個和少于十個二硫鍵。
18. 權利要求15的宿主細胞，其中所述多肽形成至少三個和少于八個二硫鍵。
19. 權利要求15的宿主細胞，其中所述多肽選自：(a)免疫球蛋白重鏈；(b)免疫球蛋 白輕鏈；（C)錳過氧化物酶；和（d) (a)-(C)中任一的片段。
20. 權利要求2的宿主細胞，其中至少一個基因產物是選自利用阿拉伯糖和利用木糖 的酶的多肽。
21. 權利要求20的宿主細胞，其中所述多肽是木糖異構酶。
22. 權利要求2的宿主細胞，其中至少一個基因產物是選自木質素降解過氧化物酶的 多肽。
23. 權利要求22的宿主細胞，其中所述多肽是錳過氧化物酶。
24. 權利要求22的宿主細胞，其中至少一個另外的基因產物是蛋白質二硫鍵異構酶。
25. 權利要求22的宿主細胞，其中所述多肽是多能過氧化物酶。
26. 權利要求1或2的宿主細胞，其中所述宿主細胞包含兩個類型的表達構建體。
27. 權利要求26的宿主細胞，其中一個類型的表達構建體通過包括將多核苷酸序列插 入PBAD24質粒中的步驟的方法產生，和另一類型的表達構建體通過包括將多核苷酸序列 插入PPR033質粒中的步驟的方法產生。
28. 權利要求1或2的宿主細胞，其中所述宿主細胞具有至少一個基因的基因功能的改 變，所述至少一個基因編碼用于至少一個所述誘導型啟動子的誘導劑的轉運蛋白。
29. 權利要求28的宿主細胞，其中所述編碼轉運蛋白的基因選自araE、araF、araG、 araH、rhaT、xylF、xylG和xylH〇
30. 權利要求1或2的宿主細胞，其中所述宿主細胞至少一個基因的基因功能水平降 低，所述至少一個基因編碼代謝至少一個所述誘導型啟動子的誘導劑的蛋白質。
31. 權利要求30的宿主細胞，其中所述編碼代謝至少一個所述誘導型啟動子的誘導劑 的蛋白質的基因選自araA、araB、araD、prpB、prpD、rhaA、rhaB、rhaD、xylA和xylB〇
32. 權利要求1或2的宿主細胞，其中所述宿主細胞至少一個基因的基因功能水平降 低，所述至少一個基因編碼參與至少一個所述誘導型啟動子的誘導劑的生物合成的蛋白 質。
33. 權利要求32的宿主細胞，其中所述編碼參與至少一個所述誘導型啟動子的誘導劑 的生物合成的蛋白質的基因選自scpA/sbm、argK/ygfD、scpB/ygfG、scpC/ygfH、rmlA、rmlB、 rmlC和rmlD〇
34. 權利要求1或2的宿主細胞，其中所述宿主細胞是原核細胞。
35. 權利要求34的宿主細胞，其中所述宿主細胞是大腸桿菌。
36. 權利要求1或2的宿主細胞，其中所述宿主細胞影響宿主細胞細胞質的還原/氧化 環(huán)境的基因的基因功能發(fā)生改變。
37. 權利要求36的宿主細胞，其中所述影響宿主細胞細胞質的還原/氧化環(huán)境的基因 選自gor和gshB。
38. 權利要求1或2的宿主細胞，其中所述宿主細胞編碼還原酶的基因基因功能水平降 低。
39. 權利要求38的宿主細胞，其中所述編碼還原酶的基因是trxB。
40. 權利要求1或2的宿主細胞，其中所述宿主細胞包含編碼至少一種二硫鍵異構酶蛋 白的至少一個表達構建體。
41. 權利要求40的宿主細胞，其中至少一個表達構建體編碼二硫鍵異構酶蛋白DsbC。
42. 權利要求1或2的宿主細胞，其中所述宿主細胞包含編碼缺乏信號肽的DsbC形式 的至少一個多核苷酸。
43. 權利要求1或2的宿主細胞，其中所述宿主細胞包含編碼Ervlp的至少一個多核苷 酸。
44. 權利要求1或2的宿主細胞，其中所述各個類型的表達構建體包含與各其它類型的 表達構建體的誘導型啟動子不同的誘導型啟動子。
45. 權利要求1或2的宿主細胞，其中所述各個類型的表達構建體包含與各其它類型的 表達構建體的復制起點不同的復制起點。
46. -種大腸桿菌宿主細胞，包含兩個類型的表達構建體，其中一個類型的表達構建 體通過包括將多核苷酸序列插入PBAD24質粒中的步驟的方法產生，和另一類型的表達 構建體通過包括將多核苷酸序列插入PPR033質粒中的步驟的方法產生；且進一步包含 以下的兩種或更多種：（a)araBAD基因的刪除；(b)araE和araFGH基因的基因功能的改 變；（c)lacY(A177C)基因；（d)prpB和prpD基因的基因功能的降低；（e)sbm/scpA-ygfD/ argK-ygfGH/scpBC基因的基因功能的降低，優(yōu)選不影響ygfl基因的表達；（f)gor和trxB 基因的基因功能的降低；（g)AscG基因的基因功能的降低；(h)編碼缺乏信號肽的DsbC形 式的多核苷酸；（i)編碼Ervlp的多核苷酸；（j)編碼蛋白質二硫鍵異構酶的多核苷酸；（j) 編碼ChuA的多核苷酸；和（1)編碼伴侶蛋白的多核苷酸。
47. 權利要求46的宿主細胞，其中至少一個表達構建體進一步包含編碼由誘導型啟動 子轉錄的基因產物的多核苷酸序列。
48. 權利要求47的宿主細胞，其中所述基因產物選自：(a)免疫球蛋白重鏈；(b)免疫 球蛋白輕鏈；和（c)(a)-(b)中任一的片段。
49. 一種產生基因產物的方法，該方法包括培養(yǎng)權利要求1或2的宿主細胞的培養(yǎng)物并 添加至少一個誘導型啟動子的誘導劑到所述培養(yǎng)物中。
50. -種通過權利要求49的方法產生的基因產物。
51. 權利要求50的基因產物，其中所述基因產物是多聚產物。
52. 權利要求51的多聚產物，其中所述多聚產物是抗體。
53. 權利要求52的多聚產物，其中所述多聚產物是非糖基化的抗體。
54. 權利要求52的多聚產物，其中所述多聚產物是人抗體。
55. -種包含權利要求1或2的宿主細胞的試劑盒。
56. -種包含權利要求50的基因產物的試劑盒。
57. -種包含權利要求51的多聚產物的試劑盒。
【專利摘要】本發(fā)明是能夠受控誘導各基因產物的表達的可誘導共表達系統(tǒng)。
【IPC分類】C12N15-70
【公開號】CN104603274
【申請?zhí)枴緾N201380041522
【發(fā)明人】S·麥克萊恩, M·瓦拉塞克
【申請人】Absci有限責任公司
【公開日】2015年5月6日
【申請日】2013年8月5日
【公告號】CA2880285A1, EP2880168A1, US20150225731, WO2014025663A1